一超“猪无名高热综合征”的诊断与防治

℃恒 温箱 中培 养 ２ ， 察抑 菌 圈直 径 。 ４ 观 ｈ １ ２ ３ ６ 动物 致 病性试 验 ．． ．
１ １１ 病料 ．．
猪场采集的病猪脏器 、 血液。
Ｅ 全 自动 核酸 提 取工 作 Ｚ１
１ １２ 主 要仪 器和 试 剂 ．．
站 ； 氏荧 光定 量 Ｐ Ｒ仪 ；哥伦 比亚 琼 脂 培养 基 、 罗 Ｃ 巧 克 力 色 琼 脂 培 养 基 （ 于上 海 科 兴 生 物 科 技 有 限 公 购
中国动物检疫 ２ １ 年 第 ２ 卷第 ｌ 期 ０１ ８ ２
— ７— — — ６
一
超‘ 猪无名高热综合征 ＂ 的诊断与防
郭延 敏
（ 菏泽学院制药工程 系， 山东菏泽 ２ ４ １ ） ７０ ５
摘 要 ：菏泽某猪 场 出现 了一种 以无名 高热为主要 特征的猪病 ， 对发 病猪场进行 实地走访 并采集典型发 病猪病料 。 用染 色镜 采
基金项 目： 菏泽 学院科研基金（ Ｙ Ｊ Ｊ ） Ｘ Ｊ ＿ Ｋ ８
将菌液肉汤按 ０ Ｌ 只腹腔接种试验组小 白鼠， ．ｍ ／ ３ 将 过滤后无菌的肉汤按 ０ Ｌ 只尾静脉注射对照组小 ．ｍ ／ ３ 白鼠， 隔离饲养， 观察小 白鼠发病死亡情况 。 将试验组
—
—
６— ８—
中国动物检疫 ２ １ 年 第 ２ ０１ ８卷第 １ ２期
１２３ ３ 细 菌 的纯 化 与 保存 用 无 菌 环 挑 取在 麦 康 ．． ．
凯琼脂平板上 培养 ２ ４ ｈ的表 面光滑、 边缘整齐 的菌
落， 接种 到 普通 营养 琼脂 斜面 上 ，３ ７℃培 养 ２ ， ４ｈ后 室 温保存 ， 用 。 备 １２３４ 生化 试验 ．． ． １２３５ 药敏 试验 ．． ． 取 经 分 离纯 化 的菌株 进 行糖 发 用 灭 菌环 取 大肠 杆 菌纯 培养 物
关键词 ： 猪无名 高热综合征 ； 断；实时荧光 Ｐ Ｒ； 诊 Ｃ 防治 中图分类号：￥ ５ ．８ 文献标识码 ：Ｂ 文章编号 ：１ ０．４ Ｘ （ ０ １ ２０ ６ ．３ ８８ ２ ０ ５９４ ２ １ ）１．０ ７０
ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
２１ ０ １年 ８月 ， 菏泽 周 边 某 猪 场 暴 发 猪 无 名 高 热 病 ， 长 育成 猪和 部 分母 猪 、 育猪 出现 无名 高 热 ， 生 保 发 病 率在 ２ ％ 以上 ， 亡 率 高达 ８ ％， 猪场 和 养猪 户 ０ 死 ０ 给 造 成 了严 重 的经济 损 失 。 无 名 高热 综合 征是 一种 发 猪 病 率和 死 亡率 均较 高 的疾 病 ， 原主要 为 多种 病毒 和 病 细 菌 、 生 虫 的混合 感 染 和 继 发 感 染 ， 括猪 瘟 病 毒 寄 包 （ Ｓ ｖ） 猪 繁 殖 与 呼 吸 综 合 征 病 毒（ Ｒ Ｓ 、 流 ＣＦ 、 Ｐ Ｒ ｖ） 猪 感病 毒 （ Ⅳ ）伪狂 犬 病病 毒 （Ｒ 、 圆 环病 毒 ２型 Ｓ 、 Ｐ ｖ）猪
取 工作 站分别 进行 病毒 核酸 的提取 。
１２ ４ ３ 实 时 荧光 Ｐ Ｒ检 测 ．． ． Ｃ
按 照 １１ ．． 的五 种 ２中
实 时荧 光 Ｐ Ｒ 检 测 试 剂 盒 或 国标 的要 求 ， 过 罗 氏 Ｃ 通
荧光 定 量 Ｐ Ｒ仪 对 Ｃ Ｆ Ｃ Ｓ Ｖ、Ｐ ＲＳ Ｒ Ｖ、ＳＶ 和 Ｐ Ｖ、 Ｉ Ｒ
检和 细菌培养等方 法鉴 定， 果从发 病猪体 内分 离到 大肠杆 菌， 结 药敏 试验表 明该 菌株对 氟苯尼考、 头孢 呋肟、 先锋噻肟 、 氨苄 西林 钠 高敏 ， 阿米卡 星、 大霉素 、 对 庆 四环素 中敏 ， 而对链霉 素、 妥布霉素 、 复方新诺 明不敏 感； 过对 病猪料进行 实时荧光 Ｐ Ｒ检测 ， 通 Ｃ 结果显 示猪 瘟病毒和猪繁 殖与呼吸综合征 病毒 为 阳性 ， 明该猪 场暴发 的无名 高热综合 征是 由猪瘟 病毒 和猪繁殖与呼吸综合征 表 病毒及 大肠杆菌混合感染 引起 。
落 特 点， 发现 疑似 大肠杆 菌 菌落 。
２型 （ ＳＩ）副 猪 嗜血杆 菌 病（ Ｐ ）多 杀性 巴氏杆 菌 Ｓ— 、 Ｉ Ｈ ｓ、 （ Ｍ）猪 支 原体 肺 炎 （ Ｐ 、 ＭＨ） 弓形 体 、 、 附红 细 胞 体 、 猪 霍乱 沙 门 氏菌 （Ｃ） 细菌 的混合 感染 。 Ｓ 等
检结 果一致 ， 基本确 定是接 种菌 致使小 白鼠死亡 。 故 ２７ 病毒 学检测 ．
检 测 结 果 显 示 ：猪 流 感 病 毒 （ Ｉ 为 阴 性 ， 瘟 ＳＶ） 猪 病 毒（ Ｓ Ｖ） 猪 繁殖 与 呼 吸综 合 征 病 毒 （ Ｒ Ｖ） ＣＦ 、 Ｐ ＲＳ 为 阳 性 ，Ｃ 值 分 别为 ３ ．９和 ３ ．１（ １ ；猪伪 狂 犬 ｔ ０ ４ ５１ 图 ）
Ｐ ＶＩ 别 进行 病 毒 的 检测 ， Ｃ－ １分 并做 阴阳 性对 照 。 检 将 测 结果 保存 于 电脑 中。
１２４ ４ 结 果 判 定 标 准 ．．． 检 测 样 本 Ｃ 值 小 于 等 于 ｔ ３ ．， 曲线有 明显 的指 数 增 长期 ， 定结 果有 效 ， ００ 且 测 可
Ｐ ＲＳ Ｒ Ｖ、ＳＶ 为 Ｒ Ｉ ＮＡ 病 毒 ，Ｐ Ｖ、Ｐ Ｖ Ｉ Ｒ Ｃ－ Ｉ为 Ｄ ＮＡ
由表 １ 可知， 分离菌株与大肠杆菌生化特性相符， 可基本确定此次分离到的株菌均为大肠杆菌 。
２５ 药敏 试 验 ． 药 敏试 验 结 果 表 明， 菌 株 对 氟 苯 该 尼 考 、 孢 呋肟 、 头 先锋 噻肟 、 苄 西 林 钠 高 敏 ， 阿 米 氨 对 卡 星 、 大 霉素 、 庆 四环素 中敏 ， 对 链霉 素 、 而 妥布 霉 素 、
２ １ 临床观 察 ． ２ ６ 致 病 力试验 ．
注：ｄ ２ ｍｍ，高度敏 感；１ｒｍ＜ ＜ ０ ￣ ＞０ ５ａ ｄ ２ ｍｍ，中度敏感 ；ｄ １ｍｍ， 不敏感。 ＜５
小 鼠接 种 后 ５ｈ ，２只小 鼠开始 发 病 ， 神 沉 郁 ， 精 腹泻拉 稀 ，４ ８ｈ内全部 死亡 ， 对 照小 鼠正 常 ， 而 对死 亡 小 鼠肝 组 织培 养 物镜 检 结果 为 中等 大 小 、 端 钝 圆 的 两
病病 毒（ Ｒ 和 猪 圆环 病毒 ２ （ Ｃ ＿ ） Ｐ Ｖ） 型 Ｐ ＶＩ 阴性（ ２ 。 Ｉ 图 ）
死 亡 小 白 鼠肝 组织 接 种 于普 通 琼脂 平 板 上 ，３ ７℃培
观 察 检样 在 麦康 凯平 板 上培 养 出 的菌落 呈 圆 形 ， 扁平 ， 光滑 湿润 ， 砖红 色 ； 在伊 红 美兰平 板 上 的菌落 呈
紫黑 色 ， 圆形 ， 缘整 齐 ， 边 表面 光 滑湿 润 ， 金属 光 泽 。 有
Ｐ Ｒ检测试剂盒和伪狂犬病病毒（ Ｒ ） Ｃ Ｐ Ｖ 和猪 圆环病 毒 ２型（ ｃ ＿ ） Ｐ ＶＩ 实时荧光 Ｐ Ｒ检测试剂盒（ Ｉ Ｃ 购于深圳
太太基 因工 程有 限 公司 ） 。 １ ２ 方法 ．
１２ １ 临 床 观 察 ．．
观 察 发 病 猪 场 的病 猪 的发 病 症
状： 包括精神状况、 观察皮肤、 测量体温、 眼结膜颜色 及粪便性质等。
直接 报 告样 本 阳性 ； 测样 本 Ｃ 值大 于 ３ ． 小 于 检 ｔ ００且 ４ ， 复 一 次 ， 果 Ｃ 值 仍小 于 ４ ， 曲线 有 明 显 的 ０重 如 ｔ ０且 指 数增 长 期 ， 可报 告 样本 阳性 ， 否则 报告 样本 阴性 ； 检 测 不到 样本 Ｃ 值或 Ｃ 值为 ４ ， 告样本 阴性 。 ｔ ｔ ０报 ２ 结 果
司） ；ＱＩ Ｅ 核 酸 抽 提 试 剂 盒 （ 于 上 海 凯 杰 企 业 ＡＧ Ｎ 购
管理 有 限公 司 ） 瘟病 毒 （ Ｓ ｖ）猪 繁 殖 与呼 吸 综 ；猪 ＣＦ 、 合 征 病 毒 （ Ｒ Ｖ）猪 流 感 病 毒 （Ｉ 实 时 荧 光 Ｒ － Ｐ ＲＳ 、 ＳＶ） Ｔ
１２ ３６ １ 菌 液 肉 汤和 无 菌 肉 汤 的制 备 ： 鉴 定 的 ．． ．． 将 分 离 菌接 种 于 营养 肉汤 ，３ ７℃培 养 ２ 。 后 ， 增 ４ｈ 然 将 菌 后 的营 养 肉汤 在 无 菌条 件 下用 ０２ ｔ 孔 径 的滤 ． １ ２． ｍ 膜 过滤 ， 经无 菌检验 后 ４ ℃保 存 备用 。 １２３６ ２ 动物 致病 性试 验 ： １ 昆 白系 小 白 鼠 ．．． ． 将 ０只 随记分 成 ２组 ：１ 试验 组和 １ 对照 组 ， 个 个 每组 ５只 。
革兰 氏阴性 无芽孢 短杆菌 ， 与上 文去病 样涂 片 、 色镜 染
发 病 初期 个 别猪 只 发烧 ， 后迅 速 蔓延 至大 部分 随 猪 群 。 猪 体 温升 高 至 ４～ ２５℃， 神 沉郁 ， 食 量 病 ０４． 精 采 下降， 眼结膜 潮 红 ， 流泪 ， 镜干 燥 ， 吸 困难 ， 鼻 呼 卧地 不 起 ， 身 皮肤 发 红 ， 全 耳后 缘发 绀 ， 下和 四肢 等处 皮肤 腹 有 出血点 ， 部分 猪群 轻度 腹泻 ， 拉黄 色 或黄绿 色稀 粪 ； 个 别 病猪 出现 突然 死亡 。 据病 猪 的临 床症 状和 病 理 根 剖 解 ， 步 诊断 为猪 无名 高热综 合征 。 初 ２ ２ 剖检 变化 ．
养 ２ 后， ４ ｈ 涂片、 革兰 氏染色镜检， 观察是否为接种菌
株。
１２４ 病 毒学检 测 ．． １２４ １ 病 料 的前 处 理 ．． ． 取 各 脏 器 的少 量 组 织 于
研 钵 中 ， 碎 并加 入 少 量 Ｐ Ｓ或 生 理盐 剪 Ｂ
初 步认 定为 大肠 杆菌 的菌落 特征 。
（ Ｃ － ） 猪胸 膜 肺 炎 放 线 杆 菌 （ Ｐ 、 链 球 菌 属 Ｐ ＶＩ 和 Ｉ ＡＰ ）猪
１２２ 剖 检 ．．
取 病 猪 和死 亡 时 间 不超 过 ６ｈ的病 猪
剖检 ， 察 其病理 变化 。 观 １２３ 细 菌学检 查 ．． １２３ １ 病料 采集 ．． ． 无 菌取 病猪 的心、 、 、 、 肝 脾 肺 肾 和 淋 巴结等 组织病 料 。 １２３２ 病 原 菌 的 分 离 培 养 将 上 述 病 料 无 菌 ．． ． 接 种 于 伊 红 美 蓝 琼 脂 （ ＭＢ） 板 、 康 凯 琼 脂 Ｅ 平 麦 （ ｃｏ ｋｙ 平 板上 ，３ Ｍａｃｎ ｅ ） ７℃培 养 ２ 观 察细 菌 菌 ４ｈ后
复方 新 诺明不 敏感 。 具体 结果 见表 ２ 。
表 ２ 药敏试验结果
病 毒 ， 病 毒 提 取 和 检 测 方 法 均 不 同。Ｒ 故 ＮＡ 病 毒 类 样 本 采 用 Ｔｉ ｌ 剂 法 或 柱 提 取 法 提 取 病 毒 核 酸 ； ｒｏ 试 ｚ Ｄ ＮＡ病 毒 类 采 用 裂 解法 。 具体 方 法 按 照 Ｑ Ａ Ｎ 核 Ｉ ＧＥ 酸抽 提 试剂 盒 中说 明书要 求 。 过 Ｅ １ 自动 核酸 提 通 Ｚ 全
２ ４ 生化 试验 ．
表 １ 分离菌株的生化试验结果
水进 行 研磨 ， 将 其移 至离 心 管 中 ６００ 再 ０ ｒ ｎ离 心 ２ ｎ 取 上清 ２０ｌ ／ ｍｉ ， ｍｉ ０ Ｌ备 用 。 ａ １２４ ２ ． ． ． 病 毒 的 提 取 Ｃ Ｆ Ｓ Ｖ、 注：“ ’ 。’ 表示产酸产气； “ ” 表示阳性反应： “ 表示阴 一” 性反应。
本实验通过对猪场现场调查和实验室检测 ， 以确
定 该猪场 暴发 无名 高热病 的具体病 因 。
１ 材 料 与方法
１ １ 材 料 ． 。
酵及生化试验（ 按参考文献 ［介绍方法进行） 】 。
置 于 ２ｍＬ灭菌 生理 盐水 中 ， 灭菌 玻棒 充分 混匀 ， 用 之 后 用 玻棒 蘸取 稀释 液 均匀 涂布 于 普通 平板 ， 无 菌镊 用 子 把选 定 药敏 试纸 等 距离 贴在 培 养基 表 面 ， 个平 板 每 贴 上 ４种 药 敏试 纸 片 ， 后将 平 皿 底 部 向上 ， 于 ３ 最 置 ７