如何快速高效的建立稳定细胞株

合集下载
相关主题
  1. 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性,平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
  2. 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
  3. 3、如文档侵犯您的权益,请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间:9:00-18:30)。

如何快速高效的建立稳定细胞株

稳定转染,即进入细胞的质粒整合入细胞基因组中,并能随细胞分裂稳定传递下去。这是相对瞬时转染而言的。

瞬时转染的表达时间短暂,外源基因导入整合基因组的几率非常低,绝大部分以游离形式存在,不能随细胞分裂而一同复制,导致最后拷贝数被稀释,无法达到持续表达外源基因的目的。一般用转染试剂进行质粒转染,多为瞬时转染。

一般如下情况需要构建稳定株:

1) 长期在目的细胞中研究基因功能,通过构建稳定株,可以大大降低频繁转染或者病毒包装的成本,也极大方便实验研究;

2)部分蛋白半衰期极长,瞬时RNA只能干扰表达,无法去除已经表达的目的蛋白,通过构建稳定株可以实现更好的基因干扰效果;

3)瞬转往往会引入极高拷贝数的表达,导致因为人为因素造成实验结果的不精确,构建稳定株可以帮助筛选拷贝数适量的细胞进行实验研究;

4)需要用诱导表达系统的,主要是一些致死基因或者是需要时空表达的;

5)需要用细胞做动物实验的,比如裸鼠成瘤等,往往需要构建成稳转株。

构建稳定株的方法:

其实用脂质体转染、磷酸钙转染法等理论上是可以构建稳定株的,但这些方法整合入基因组

的效率极低,很难成功。而慢病毒可以携带外源基因随机整合进基因组,效率很高,是建立稳定株的最优方式。

构建稳定株的注意点:

稳定株构建是个长期过程,从质粒构建到慢病毒包装,再到细胞感染及后期的筛选,每一步都至关重要,所以建立稳转株花个半年时间,也是常有的事,而且要承担病毒包装不成功,细胞感染效率低等风险。

所以,想要短期内高效构建出稳定细胞株,我们提供的“三严”稳转株构建服务,是您的最佳选择

汉恒生物“三严”稳转株:

⚫种子优良--严选低代数细胞来源,无支原体无黑胶虫;

汉恒生物所有的细胞均从中科院细胞库购买,代数低无污染,可提供STR检测报告

⚫性状稳定--严酷的筛选及靶基因表达验证体系;

汉恒生物所有的稳转株都采用RT-qPCR验证,保证表达水平

⚫活力无损--严格的建系后连续3代细胞增殖活力评价

相关文档
最新文档