葡萄籽原花青素的梯度分离及其抗氧活性研究
原花青素的提取、分离及抗氧化性、稳定性的研究
原花青素的提取、分离及抗氧化性、稳定性的研究本文以葡萄籽、葡萄叶子为原料，对其原花青素的提取工艺进行了研究。
在提取葡萄籽中的原花青素时采用50％乙醇，料液比1／40，于60℃下热回流浸提2个小时，提取2～3次最优提取工艺，此工艺提取得到的原花青素提取物得率为22.01％，产品纯度为51.17％；提取葡萄叶子时采用70％乙醇，料液比1／50，于80℃下热回流浸提3个小时，提取1～2次的最优提取工艺，此工艺得到的原花青素得率为34.14％，纯度为13.66％。
对上述提取物进一步纯化，葡萄籽提取物选用AB-8大孔吸附树脂，50％乙醇为洗脱剂，流速控制在4mL／min左右，葡萄籽原花青素总的提取得率为9.09％，产品纯度能达到94～95％；葡萄叶子提取物选用D-101大孔吸附树脂，70％乙醇为洗脱剂，流速控制在4mL／min左右，其原花青素提取得率为18.21％，纯度为25.63％。
采用超滤法对大孔吸附后的葡萄籽精提物进行低聚体的提纯，其过膜后的单体儿茶素含量有明显增加，P5000约为过膜前的6.6倍，P1000为过膜前的7.7倍。
其中压力对超滤通量的影响较大，而温度影响较小，一般选择20～30psig，室温下操作即可，避免在操作过程中长时间将过滤液暴露于强光及空气中。
利用Sephadex LH20将P5000样继续分离，使含量较高的一种二聚体得到了富集。
原花青素的抗氧化(FRAP)、清除DPPH自由基实验表明，葡萄叶子原花青素抗氧化、清除自由基活性均强于抗坏血酸，稍强于葡萄叶子提取物，而与原花青素的低聚体、高聚体相差不大。
原花青素在不同温度、光照、氧气的条件下1～2天内具有较好的稳定性。
经长期(10天)紫外光照射不稳定，含量下降甚至消失，溶液颜色逐渐加深，但其抗氧化、清除自由基能力无显著性变化(p＞0.05)。
抗坏血酸对紫外照射引起的原花青素不稳定能起到保护作用，并且存在剂量依赖效应。
类似于口服液等的原花青素溶液产品较适用微波法灭菌。
葡萄籽提取物原花青素磷脂复合物抗氧化功能的实验研究
量、 超 氧 化 物 歧 化 酶 和 谷 胱 甘 肽 过 氧 化 物 酶 活 性 及 还 原 性 谷 胱甘 肽 含 量 的变 化 ， 观 察 葡 萄 籽 提 取 物 原 花 青 素 磷 脂 复 合 物 的 抗 氧 化 作 用 。结 果 原 花青 素磷 脂 复合 物 各 剂 量 组 的大 鼠体 重 与 模 型 组 及 空 白对 照 组 比 较 ， 均 无 统计 学 差 异 （ Ｐ＞０ ． ０ ５ ） 。原 花
葡萄 籽 提取 物原 花 青 素磷脂 复合 物抗 氧化 功 能 的实验 研 究
苗智如 ， 袁 夏 ， 廖 丽娜 ， 侯 中海 ， 蒋 国军 （ １ ． 杭州市萧山区第一人民医院药剂科， 浙江 杭州 ３ １ １ ２ ０ ０ ； ２ ． 浙江萧山医
院 药 剂科 ， 浙江 杭州 ３ １ １ ２ ０ １ ）
［ Ａ ｂ ｓ ｔ ｒ ａ ｃ ｔ ］ ｏ ｂ ｊ ｅ ｃ ｔ ｉ ｖ ｅ Ｔ ｏ ｓ ｔ ｕ ｄ ｙ ｔ ｈ ｅ ａ ｎ ｔ ｉ ｏ ｘ ｉ ｄ ａ ｎ ｔ ｅ ｆ ｆ ｅ ｃ ｔ ｓ ｏ ｆ ｇ ｒ ａ ｐ ｅ ｓ ｅ ｅ ｄ ｐ ｒ ０ ａ ｎ ｔ ｈ ｏ 。 ｙ ａ ｎ ｉ ｄ ｉ ｎ ｓ ｐ ｈ ｏ ｓ ｐ ｈ ｏ ｌ ｉ ｐ ｉ ｄ ｃ ｏ ｍ ｐ ｌ ｅ ｘ （ Ｇ Ｓ Ｐ Ｐ Ｃ ） ．Ｍｅ ｔ ｈ －
［ 摘要 ］ 目的
探 讨 葡 萄 籽 提 取 物 原 花青 素磷 脂 复 合 物 的抗 氧 化 作 用 。 方 法
取 大鼠 ８ Ｏ只 ， 随 机 分 为 ８组 ： 空 白对 照
葡萄籽低聚原花青素化学成分及抗氧化研究
（ ０ ８ ０ ０ １ ２０４２２ ）
研究表 明 ， 葡萄籽原花青素是迄今 为止所发 现的最有 效 的 自由基 清除剂之一 ， 特别是低 聚花青 素可 以清 除 体 内的 自由基和活性氧 ， 能预防因人体血 液 中低密度
葡 萄籽原花 青素 由不 同数 目的黄烷 醇一 茶素 、 儿
表儿茶 素聚合而成 ，通 常将 二一 四聚体称为低 聚原 花 青素 （ｒｃａｉｏ ｃ ｌ ｏ ｅ， Ｐ ， ｐｏｙｎｄｌ ｉ ｍ ｒＯ Ｃ）五聚体 以上 的称 为 ｉｏｇ 高聚体 （ｒｃａｉｏ ｃ ｏ ｍ ｒ，Ｐ ）对于葡萄籽原 花 ｐｏｙｎｄｌ ｌ ｅｓＰ Ｃ ， ｉｐ ｙ 青素抗 氧化性 的研究报 道很 多Ｉ ｌ ｌ， ＿ 既包括动物体 内抗 ５ 氧化试 验 ，又包括体外 细胞 培养及用化 学方法测定 。
和ｏｃ 对 Ｄ Ｐ 自由基 和羟 自由基都 具有较好的清除活性。对 Ｄ Ｐ 自由基的清除作 用与 ｖ 相 ３，其 Ｉ 分别为 ｐ Ｓ ＰＨ ＰＨ ＂ － ｃ １ ０ｔ ／ Ｌ和 １ ９ Ｉ ／ Ｌ ． ｇｍ ２ ｘ ． ￣ ｍ ，明显 强 于 Ｖ 和 Ｔｏ ｘ ３ ｇ ｃ ｒｏ ；原花青 素 Ｂ 和 ｏｃｓ ｌ ２ ｐ 对羟 自由基 的抑制 率明显 高于 Ｖ 、 Ｅ ｃＶ 和 Ｔｏｏ。ｐ 经过层析分离纯化后得 到的原花青素 Ｂ 清除 Ｄ Ｐ 自由基 的效果有所提 高，但 对于羟 自由基的清除活 ｒ ｘｏｃ ｌ ｓ ＰＨ
ａ ｄ ＲＰ ｎ —ＨＰ ＬＣ． ｅａ ｔｏ ｉａ ｔａ ｔ ｉ ｆｐ ｏ ｎ ｈ ｃ ａ ｉ ｉ ， ｅ ｖ ｒｔｏ ， ｎ ｘｒｃ ｓ ａ ｐｅ ｐ ｌｐ ｅ ｏ ， ， Ｔｈ ｎ ｉｘｄ ｎ ｃ ｉ ｔ ｏ ｒ ａ ｔｏ ｙ ｎ ｄｎ Ｂ２ｒ ｓ ｅ ａｒ ｌｗｉｅｅ ｔａ ｔ， ｐ ｌ ｏｙ ｈ ｎ ｌ Ｖｃ ｖｙ ＶＥａ ｄ Ｔｒｌｘ ｗｅ ｅ ｄ ｔｒ ｉｅ ｙｓ ａ ｅ ｇｎ ＰＨ ａ ｉａ ｎ ｙ ｒ ｘ ｌｒｄ ｃ １ Ｈｏ ｖ ｒ ｐ ｏ ｎ ｈ ｃ ａ ｉ ｉ ｎ ｏｏ ｒ ｅｅｍ ｎ ｄ ｂ ｃ ｖ ｎ ｉ ｇ ＤＰ ｒ ｄ ｃ ｌａ ｄ ｈ ｄ ｏ ｙ ａ ｉ ａ． ｗｅ ｅ ， ｒ ａ ｔ ｏ ｙ ｎ ｄ ｎ Ｂ ｎ ｏ ｃＳ ｈ ｗｅ ｍｏ ｅ ｆ ｃｉｅ ｔ ｃ ｖ ｎ ｉｇ ２ ａ ｄ ｐ ｓ ｏ ｄ ｒ ｅｆ ｔｖ ａ ｓ ａ ｅ ｇｎ ＤＰ ｅ ＰＨ ・ ｗｉｈ Ｃ５ ｖ ｌ ｅ ｏ １２ ａ ｄ ．９ ￣ｍｏ／ ｔ Ｉ ０ ａｕ ｓ ｆ ．０ ｎ １３ ｌＬ．
葡萄原花青素提取与纯化技术的研究及应用研究总结报告
（2）在相同的条件下，选择水、石油醚、乙醇三种不同溶剂对原花青素提取效果进行实验对比，取相同量的提取液定容，于500nm波长下测定吸光值，石油醚提取液的吸光值0.002，水提取液的吸光值0.413，乙醇提取液的吸光值0.523。
通过3种不同溶剂对原花青素提取效果影响的研究，选择了乙醇作为提取原花青素的溶剂。
自2022年11月成立以来，建立了天然植物活性成分多功能提取纯化研究、加工生产基地，对枸杞多糖、葡萄原花青素、番茄红素产品进行了开发，其中番茄红素获国家发明专利，并获得自治区科技进步二等奖；枸杞多糖通过了自治区科技成果鉴定，番茄红素粉、葡萄原花青素产品通过了自治区新产品鉴定，技术达到国内先进水平。
公司现有一套工业化生产设备，具有年产2吨植物活性产品的生产能力，产品有天然番茄红素、枸杞多糖、葡萄原花青素和叶黄素产品，产品已进入国际市场。2022年，实现销售收入810万元，公司资产由创业初期的30万元，增加到了2205万元，新增就业30人。因2022年新疆“七.五”事件的影响，企业的国外市场受到毁灭性打击，效益严重下滑，经过公司努力，现已逐步改变了市场形势。
葡萄原花青素提取与纯化技术的研究及应用研究总结报告
Masquelier通过对葡萄籽的提取物中OPC的深入研究发现，OPC是当今医学界发现的最安全高效的纯天然抗氧化剂，其抗氧化能力是维生素E的50倍、维生素C的20倍，它能有效清除体内多余的自由基，保护人体细胞组织免受自由基的氧化损伤，同时，还具有改善人体微血管的通透性，使严重静脉曲张病人的静脉增加弹性，提高皮肤抗氧化技能，加强和保护人体活性组织、稳定细胞膜以及抗酶活性（组胺脱羧酶）等生物特性。
葡萄籽原花青素的制备及活性研究
注： “＋”表示有显色反应呈阳性， “－ ”表示显色反应呈阴性。
２．３ 葡萄籽原花青素含量 在酸性条件下，原花青素环的化学活性较高，
其结构中的间苯二酚或间苯三酚可与香草醛缩合， 产物在浓盐酸作用下形成有色的正碳离子，采用吸 光度法测其吸光度，根据原花青素标准曲线（图 １）， 即可得到原花青素含量（表 ３）。原花青素在索氏提 取各组分中的含量进行比较：乙酸乙酯＞丙酮＞乙 醇＞乙醚＞二氯甲烷＞石油醚，原花青素主要存在于 乙酸乙酯、丙酮、乙醇和乙醚组分中。
Ｄｅ ｔｅ ｃｔｉｏｎ ＆ Ａｎａ ｌｙｓ ｉｓ
检测与分析
葡萄籽原花青素的制备及活性研究
荆晓艳，马庆一，王玲玲 （郑州轻工业学院食品与生物工程学院，河南郑州 ４５０００２）
摘要：选用多种有机溶剂，经过梯度分离，从葡萄籽中得到葡萄籽原花青素提取物，并采用邻苯三酚和 ＤＰＰＨ 方法研究 提取物的清除自由基活性。实验结果表明：通过显色反应，可初步判断各溶剂提取物中含有黄酮类和多酚类物质；利用 邻苯三酚和 ＤＰＰＨ 检测方法，证明各提取物具有清除超氧阴离子自由基和 １，１－ 二苯基－ ２－ 苦肼基的活性，其中乙酸乙 酯提取物清除自由基的效果最好。 关键词：葡萄籽；原花青素；邻苯三酚法；ＤＰＰＨ 法 中图分类号：Ｏ６５７．３１ 文献标识码：Ａ
超声提取葡萄籽原花青素工艺的优化及其抗氧化活性研究
（ Ａｎ ａ ｌ ｙ ｓ ｉ ｓ ａ ｎ ｄ Ｔｅ ｓ ｔ ｉ ｎ ｇ Ｃｅ ｎ ｔ ｅ ｒ ｏ ｆ Ｊ ｉ ｌ ｉ ｎ Ｉ ｎ ｓ ｔ ｉ ｔ ｕ ｔ ｅ ｏ ｆ Ｃ ｈ ｅ ｍｉ ｃ ａ ｌ Ｔｅ ｃ ｈ ｎ ｏ ｌ ｏ ｇ ｙ， Ｊ ｉ ｌ ｉ ｎ １ ３ ２ ０ ２ ２， Ｃｈ ｉ ｎ ａ ） Ａｂ ｓ ｔ ｒ ａ ｃ ｔ ：Ｒｅ ｓ ｐ ｏ ｎ ｓ ｅ ｓ ｕ ｒ ｆ ａ ｃ ｅ ｍｅ ｔ ｈ ｏ ｄ ｏ ｌ ｏ ｇ ｙ（ Ｒ Ｓ Ｍ）ｉ ｓ ｕ ｓ ｅ ｄ ｔ ｏ ｏ ｐ ｔ ｉ ｍｉ ｚ ｅ ｔ ｈ ｅ ｕ ｌ ｔ ｒ ａ ｓ ｏ ｎ ｉ ｃ ｅ ｘ ｔ ｒ ａ ｃ ｔ ｉ ｏ ｎ ｔ ｅ ｃ ｈ ｎ ｏ ｌ ｏ ｇ ｙ ｏ ｆ
ｃ ｏ ｎ ｃ ｅ ｎ ｔ ｒ ａ ｔ ｉ ｏ ｎ ａ ｎ ｄ ｕ ｌ ｔ ｒ ａ ｓ ｏ ｎ ｉ ｃ ｔ ｉ ｍｅ ｏ ｎ ｔ ｈ ｅ ｙ ｉ ｅ ｌ ｄ ｏ ｆ ｐ ｒ ｏ ｃ ｙ ａ ｎ ｉ ｄ ｉ ｎ ｓ ．Ｔｈ ｅ ｎ ａ ｒ ｅ ｇ ｒ ｅ ｓ ｓ ｉ ｏ ｎ ｍｏ ｄ ｅ ｌ ｉ ｓ ｅ ｓ ｔ ａ ｂ ｌ ｉ ｓ ｈ ｅ ｄ ．
籽原花 青素的提取率 为 ２ ． ４ ８ ２ ， 与回 归模型预测值 的相 对偏 差为 ０ ． ３ ６ ９ ， ６ 。 同时进行 了提取 物的抗氧化性
检验 ， 结 的清除能力 ， 且呈剂量相 关性 。
关键 词 ： 葡 萄籽 原花 青素 （ ＧＰ Ａ） ； 超 声提 取 ； 响应 曲面 ； 抗 氧化 中图分类 号 ： ＴＳ ２ ０ ２ ． ３ 文献 标志 码 ： Ａ ｄ ｏ ｉ ： １ ０ ． ３ ９ ６ ９ ／ ｊ ． ｉ ｓ ｓ ｎ ． １ ０ ０ ０ － ９ ９ ７ ３ ． ２ ０ １ ４ ． ０ ４ ． ０ ２ ６
葡萄籽中分离提取原花青素的研究
葡萄籽中分离提取原花青素的研究花青素是一类多酚类化合物，其具有高效的清除自由基的功能，是一种新型、高效、低毒的天然抗氧化剂。
本实验通过浸提的方法从葡萄籽中提取原花青素，考察了不同溶剂、浸提时间、浸提温度、乙醇体积分数和料液比等单因素对浸提效果的影响，确定了最佳的单因素水平。
研究结果表明：本项目产品投资费用少，操作费用低，产品附加值高；原料为废物利用，变废为宝符合国家相关产业政策；几乎没有“三废”排放，使用的溶剂全部回收利用，废渣可以作为造纸或者饲料综合利用。
标签：花青素；葡萄籽；提取；正交实验1 概述原花青素是广泛存在于植物中的一类天然多酚类化合物，多以糖苷的形式存在，也称花色苷。
属于缩合鞣质或黄烷醇类。
最早而最丰富的花青素是从红葡萄渣中提取的葡萄皮红。
它于1879年在意大利上市。
由于原花青素的多种功效，由葡萄籽提取的原花青素已被我国卫生部批准为保健原料。
目前对原花青素的提取研究及保健作用研究已非常成熟。
已经将其应用到工业化产业，开发出多种原花青素的保健产品和化妆产品。
原花青素的产品已被广大消费者普遍接受。
2 葡萄籽中花青素的提取本实验通过浸提的方法从葡萄籽中提取原花青素，考察了不同溶剂、浸提时间、浸提温度、乙醇体积分数和料液比等单因素对浸提效果的影响，确定了最佳的单因素水平。
并通过设计正交实验，得出原花青素提取最佳工艺条件。
2.1 实验方法2.1.1 葡萄籽中原花青素的提取本实验采用甘肃紫轩酒业葡萄酒厂生产葡萄酒产生的葡萄籽下脚料作为本实验的原材料。
在生产葡萄酒压榨葡萄汁的糟粕和葡萄酒生产前和发酵后压榨的榨粕，所得的这些榨渣中，以换成干品计，约有50%的葡萄皮，45%的葡萄籽和少量的梗等，将该榨渣经粗选分离出葡萄籽，作为提取的原料。
所得的葡萄籽用粉碎机粉碎后，过20目筛，于磨口三角瓶中，经石油醚脱脂脱水份，得脱脂葡萄籽粉，用一浸提液在50℃的恒温水浴中回流浸提，离心后取上清液，反复提取若干次，最后洗涤残渣，将上清液和洗涤液合并，加入固体无水硫酸钠脱水，倾出上层溶液，在真空度为0.095MPa，温度为40℃的条件下真空浓缩，浓缩液冷却至室温，得到原花青素粗提液，干燥，制得粗提物。
葡萄籽原花青素的分离纯化及其抗氧化活性研究
吸附量 ＝（初始浓度 － 平衡浓度）×溶液体积 树脂重量
解吸率＝ 洗脱液中原花青素总量 树脂吸附原花青素总量
× １００％
２．３．２ ＡＤＳ－８ 树脂的吸附流出曲线与解吸曲线的绘制 处理后的Ａ Ｄ Ｓ － ８ 树脂于水中湿法装柱，玻璃柱
Ｏ１ １ ． ９ ×４２ｃｍ，其中树脂装填高度３２ｃｍ ，床体积约 ９０ｍｌ。将葡萄籽原花青素粗提物用水稀释至原花青素 浓度分别为５．８、１５．０ｍｇ／ｍｌ，以２ｍｌ／ｍｉｎ流速上样分 步收集流出液（１０ｍｌ／管），测定其中原花青素浓度。 以流出液体积（ＢＶ ）为横坐标、流出液中原花青素浓 度Ｃ与进样原花青素浓度Ｃ０之比（Ｃ／Ｃ０）为纵坐标，绘 制吸附透过曲线。
青素提供参考。
１ 实验材料
１．１ 实验仪器 Ｗａｔｅｒｓ公司高压液相色谱仪，ＨＨＳ型电热恒温水浴
锅，ＳＨＺ－８２水浴恒温振荡器，ＵＶ－２１００紫外／可见分光 光度仪，Ｚ Ｆ Ｑ － ８ ５ Ａ旋转蒸发仪，Ｔ Ｄ ５ Ａ － Ｗ Ｓ台式低速离 心机。 １．２ 实验材料
ＡＢ－８、ＡＤＳ－８和Ｓ－８型大孔树脂，购于南开大学化 工厂；原花青素标准品（浓度≥９５％），购自天津尖峰 天然产物有限公司；葡萄籽是新疆葡萄酒厂下脚料；亚 油酸（不含抗氧化剂，含量≥９０％）由本实验室用红花 油提取；工业级乙醇、Ｔｒｉｓ（三羟甲基氨基甲烷）及所 用其他化学试剂均为分析纯。
洗脱液原花青素浓度（ｍｇ／ｍｌ）
１２０ １００ ８０ ６０ ４０ ２０
０ ０
２０％ 乙醇 ４０％ 乙醇 ５０％ 乙醇
１
２
３
４
５
６
图 ２ ＡＤＳ－８树脂解吸曲线
洗脱液体积（Ｂ Ｖ ）
朱靖蓉等：葡萄籽原花青素的分离纯化及其抗氧化活性研究
葡萄籽低聚原花青素体外抗氧化活性研究
葡萄籽低聚原花青素体外抗氧化活性研究梁红敏;高德艳;胡文效【摘要】Using grape seed oligomeric procyanidins isolated and purified from laboratory as research object,vitamin E and vitamin C as control,the effect of grape seed oligomeric proanthocyanidins on the scavenging capacity of DPPH free radical,ABTS free radical,superoxide anion free radical and ferric ion reducing antioxidant power (FRAP) was investigated.The results showed that grape seed oligomeric procyanidins had higher scavenging capacity against DPPH free radical,ABTS free radical and superoxide anion radical,with IC50 value of 23.52 μg/ml,51.38 μg/ml and 684.46 μg/ml,respectively,and they were all higher than vitaminparing with vitamin C,the scavenging capacity of ABTS free radical and reducing power of procyanidins was better than that of vitamin C,and the scavenging capacity of DPPH free radical were equivalent.At very low concentration (0.05-1.00 μg/ml),procyanidins and vitamin E had scavenging ability against superoxide anion radicals,and the scavenging rate was 30％-40％.With the increase of concentration,the scavenging capacity of vitamin C against superoxide anion free radical was better than that of grape seed oligomeric procyanidins.%以实验室分离纯化得到的葡萄籽低聚原花青素为研究对象,水溶性维生素E和维生素C为对照,分别考察葡萄籽低聚原花青素对DPPH自由基、ABTS自由基、超氧阴离子自由基(O2-·)的清除能力以及铁离子还原能力(FRAP).结果表明,葡萄籽低聚原花青素对DPPH自由基、ABTS 自由基以及超氧阴离子自由基具有较高的清除能力,IC50值分别为23.52μg/mL、51.38 μg/mL和684.46 μg/mL,具有较高的还原能力,且均优于对照水溶性维生素E.与维生素C相比,原花青素对ABTS自由基的清除能力以及还原能力均优于维生素C,两者DPPH自由基的清除能力相当,原花青素和水溶性维生素E在极低质量浓度(0.05～1.00 μg/mL)范围内,对超氧自由基具有清除能力,清除率为30％～40％,随着质量浓度的增加,维生素C的超氧阴离子自由基清除能力优于葡萄籽低聚原花青素.【期刊名称】《中国酿造》【年(卷),期】2017(036)004【总页数】4页(P149-152)【关键词】葡萄籽低聚原花青素;还原力;自由基;抗氧化活性【作者】梁红敏;高德艳;胡文效【作者单位】山东省葡萄研究院,山东济南250100;山东省葡萄研究院,山东济南250100;山东省葡萄研究院,山东济南250100【正文语种】中文【中图分类】R285.3近年来，国内以葡萄籽原花青素为原料的保健食品和膳食营养补充剂越来越多，但是由于还没有相应的国家和行业标准，各原料生产企业按照各自的企业标准生产，导致了现在市场上原料和产品质量的差异，而原花青素的生产应该以较高活性的组分为主，以提高产品质量，扩大其应用范围。
刺葡萄籽原花青素提取、提纯及其抗氧化性的研究的开题报告
刺葡萄籽原花青素提取、提纯及其抗氧化性的研究的开题
报告
一、选题背景
花青素是一类天然的多酚化合物，广泛存在于植物中，如红酒、葡萄、柿子、紫薯等。
花青素具有良好的抗氧化性能、降低血糖、抗炎等多种生物活性，因此在食品、医药、化妆品等领域具有广阔的应用前景。
刺葡萄是一种生长于中国南方的果树，其果实富含花青素，并且具有丰富的营养价值。
因此，对刺葡萄籽中花青素的提取、提纯及其抗氧化性进行研究，对于充分利用刺葡
萄资源，开发新型抗氧化剂具有重要意义。
二、研究内容
本研究主要围绕刺葡萄籽原花青素的提取、提纯及其抗氧化性开展。
具体步骤如下：
1. 采集刺葡萄果实，分离出籽，干燥后制备成粉末。
2. 采用酒精提取、正硅酸钙柱层析、聚合物吸附树脂等方法对刺葡萄籽中花青素进行
提纯。
3. 对提取、提纯后的样品进行UPLC、HPLC等方法的分析，确定其组成及含量。
4. 测定提取、提纯后花青素的总抗氧化能力、DPPH自由基清除能力、还原力等指标，评价其抗氧化性能。
5. 对提取、提纯后的花青素进行稳定性、溶解性、保存条件等方面的评价。
三、研究意义
本研究将对刺葡萄籽中花青素的提取、提纯及其抗氧化性进行深入的研究，可以为刺
葡萄资源的开发利用提供重要科学依据。
同时，本研究所得的刺葡萄籽花青素提纯制
备工艺、抗氧化性能等方面的成果，也有望为制备高附加值的抗氧化剂、食品添加剂、保健品等提供有效的技术支持。
葡萄籽提取物原花青素抗氧化作用量效关系研究
葡萄籽提取物原花青素抗氧化作用量效关系研究作者：解素花等来源：《中国中医药信息》2013年第12期摘要：目的观察葡萄籽提取物原花青素抗氧化作用的量效关系。
方法实验小鼠随机分为空白组、模型组和原花青素5 mg/kg组、15 mg/kg组、45 mg/kg组、135 mg/kg组、405 mg/kg 组。
模型组和各给药组小鼠腹腔注射D-半乳糖120 mg/kg制备氧化损伤模型，空白组注射等体积生理盐水溶液，造模期间各组动物给予相应药物，连续造模7周。
给药结束后，测定血清中丙二醛（MDA）水平和超氧化物歧化酶（SOD）活性，观察受试物的量效关系。
结果原花青素45、135、405 mg/kg剂量组可显著降低模型小鼠血清MDA水平，原花青素15、45、135、405 mg/kg剂量组血清SOD活性提高。
结论原花青素在>15 mg/kg剂量时对小鼠D-半乳糖氧化损伤模型显示出较好的抗氧化活性，提示临床应保证一定的服用剂量以发挥较好的抗氧化功效。
关键词：葡萄籽；原花青素；D-半乳糖；抗氧化；量效关系；小鼠DOI：10.3969/j.issn.1005-5304.2013.12.014中图分类号：R285.5 文献标识码：A 文章编号：1005-5304（2013）12-0037-03葡萄籽为葡萄科葡萄属葡萄（Vitis vinifera L.）的种子，在食品工业中是葡萄相关加工产品的废弃部分。
但近些年来，随着研究的不断深入，发现葡萄籽具有很高的营养价值和药用价值，其中所含的原花青素（proanthocyanidin）为葡萄籽生物活性的重要成分之一[1]。
原花青素是葡萄中最主要的多酚类物质，因在酸性介质中加热产生红色的花青素而得名。
葡萄籽原花青素（grape seed proanthocyanidin extract，GSPE）是由儿茶素、表儿茶素及其没食子酸酯通过C4-C6或C4-C8键共价相连组成的多聚体。
葡萄籽原花青素的分离提纯及抗氧化性研究
葡萄是世界上经济价值较高的一种水果,为葡萄科(Vitaceae)葡萄属(Vitis)植物。葡萄果实中含有大量的酚类物质,其中30-40%存在于葡萄皮中,60-70%存在于葡萄籽中。原花青素(Proanthocyanidin,简称PC)是葡萄籽中含量最大的酚类物质,具有高度羟基化的结构,能够抗氧化、清除自由基、治疗心血管疾病,有很大的开发利用价值。 经改良的香草醛-盐酸法测定原花青素含量的精密度、准确度比原方法有明显提高,而且大大提高了显色稳定性,缩短了分析时间。改良后的测定方法快速、简便、有效,可用于葡萄皮、籽、梗及其提取物中的游离态原花青素含量测定。在正丁醇-盐酸液中加入SDS和2-巯基乙醇,能够将结合态中的原花青素分离出来,通过显色反应确定结合态原花青素的含量,其测定结果的精密度和稳定性较好,可用于葡萄籽、梗中蛋白结合态和纤维素结合态原花青素含量的测定。葡萄籽中游离态、蛋白结合态、纤维素结合态原花青素含量分别为3.86%、2.93%、2.80%。在低温条件下贮藏,铝箔真空包装可减少多酚和游离态原花青素的损失以及向结合态原花青素的转化。 以真空干燥葡萄籽为原料,用70%乙醇提取葡萄籽原花青素,其最佳工艺参数为葡萄籽粉粒度80-150目、搅拌时间55min、提取温度15℃、加酸量0.75%。20℃时,HP-2MGL树脂对葡萄籽原花青素的纯化效果最好,吸附率为91.1%,解吸率为95.8%。经HP-2MGL纯化的GSPP3组分的原花青素含量为96.5%,明显高于GSPP1和GSPP2。LC-MS分析结果表明,GSPP3质谱总离子流共有27个峰,说明GSPP3组分中原花青素的组成较为复杂,其中2号峰和4号峰的质谱及碎片信息表明,它们是原花青素二聚体。用SephadexLH-20对GSPP3组分进一步纯化,用70%丙酮洗脱得到GSPP3-SP1和GSPP3-SP2两个组分。LC-MS分析表明,GSPP3-SP1有四个峰
葡萄籽原花青素抗衰老作用的研究葡萄籽原花青素;D-半乳糖;抗氧化作用;抗衰老作用
目前，随着老年人口的迅速增加[1]，衰老相关疾病发病率也在不断增长[2]。
生物体的衰老过程主要表现为机体组织和细胞中自由基累积。
自由基是正常代谢的中间产物，其反应能力强，可使细胞中多种物质发生氧化，损害生物膜，还可引发DNA 的损伤，进一步诱发肿瘤等疾病。
随着年龄的增长，人体的自由基防御能力减弱。
葡萄籽的提取物葡萄籽原花青素（grape seed proanthocyanidin extract，GSPE）具有增强心血管活性、抗氧化、抗衰老等多种生物活性和药理作用[3]。
GSPE用于食品中能有效清除体内自由基，防治与自由基相关的心血管等疾病[4]；在化妆品中使用也可使皮肤老化减慢[5]。
研究显示模拟自然衰老过程公认的研究方法是持续注射一定量D-半乳糖[6]。
本研究采用D-半乳糖建立小鼠衰老模型，检测葡萄籽原花青素对衰老小鼠的抗氧化功效，探讨葡萄籽原花青素的抗衰老作用，为其在抗衰老方面的应用提供依据。
1 仪器与材料1.1 仪器AE224电子天平（上海恒平）；SG-4054恒温水浴锅（上海硕光）；JJ-2高速组织捣碎机（上海净信科技）；XSP-9CA光学显微镜（上海光学仪器一厂）；Varioskan Flash全波长扫描多功能读数仪（美国Thermo Scientific公司）。
1.2 材料葡萄籽原花青素提取物（GSPE，陕西惠科植物有限公司，纯度大于95 %）；D-半乳糖粉剂（上海国药集团，批号：20061025）；维生素C注射液[华润双鹤利民药业（济南）有限公司，批号：H20023350]；超氧化物歧化酶（SOD）检测试剂盒，丙二醛（MDA）检测试剂盒，谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）检测试剂盒，羟脯氨酸（HYP）检测试剂盒（南京建成生物工程研究所，生产批号：20190514）。
1.3 实验动物雄性昆明种小鼠60只，20～22 g，购自西安交通大学医学实验动物中心，动物质量合格证号：SCXK（陕）2010-001，动物使用许可证号：SYXK （陕）2018-001。
葡萄籽原花青素提取物抗氧化作用研究
葡萄籽原花青素提取物抗氧化作用研究朱振勤;翟万银;陈季武;夏晶;傅蓓蓓;谢萍;胡天喜【期刊名称】《华东师范大学学报（自然科学版）》【年(卷),期】2003(000)001【摘要】为研究葡萄籽原花青素提取物(grape procyanidins extract,GPE)抗氧化和对DNA氧化损伤的保护作用,我们采用七种生物化学发光体系,检测了GPE对O*2、@OH、H2O2、ONOO-和全血嗜中性白细胞"呼吸爆发"产生的多种活性氧的清除作用,以及对@OH引起的DNA氧化损伤的保护作用;采用Fe2+诱发脂蛋白多不饱和脂肪酸过氧化比色体系,检测了GPE对脂质过氧化的抑制作用.结果显示, GPE能有效地清除O*2、@OH、H2O2、ONOO-和全血嗜中性白细胞"呼吸爆发"产生的多种活性氧而抑制体系发光,并有效抑制脂质过氧化,半抑制浓度分别约为0.2μg /ml、90μg /ml、0.5μg /ml、10μg /ml、130μg /ml及70μg /ml;25μg /ml的GPE对DNA氧化损伤的抑制率约为70%. 提示GPE能有效清除多种自由基,保护DNA免受*OH引起的氧化损伤,是良好的抗氧化剂.【总页数】5页(P98-102)【作者】朱振勤;翟万银;陈季武;夏晶;傅蓓蓓;谢萍;胡天喜【作者单位】华东师范大学,生命科学学院,上海,200062;中国科学院硅酸盐研究所,生物材料与组织工程中心,上海,200050;华东师范大学,生命科学学院,上海,200062;华东师范大学,生命科学学院,上海,200062;华东师范大学,生命科学学院,上海,200062;华东师范大学,生命科学学院,上海,200062;华东师范大学,生命科学学院,上海,200062【正文语种】中文【中图分类】Q591;Q599【相关文献】1.葡萄籽原花青素提取物对衰老模型小鼠抗氧化作用 [J], 高璐;王滢;饶胜其;杨振泉;黄阿根;胡博然2.葡萄籽原花青素抗氧化作用的研究 [J], 孙芸;徐宝才;谷文英3.葡萄籽原花青素提取物的研究进展 [J], 毕玲;傅柏平4.葡萄籽原花青素对大鼠肝缺血再灌注损伤的抗氧化作用研究 [J], 张琳;买买提祖农·买苏尔;袁一木;王蕾;马小娟5.葡萄籽原花青素提取物对心肌梗死大鼠心肌功能的影响及其机制研究 [J], 张中喜; 曾令红; 陈永衡; 高国应; 邹平因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
探究葡萄籽提取物原花青素的提取
探究葡萄籽提取物原花青素的提取探究葡萄籽提取物原花青素的提取葡萄籽指导老师：沈喜海（河北科技师范学院化学系应用化学0801班）摘要：葡萄籽中含有一种抗氧化剂的植物化学物质——原花青素低聚物，具有抗衰老、防癌、防心血管病等作用。
初步研究了葡萄籽中原花青素的溶剂提取工艺，考察了丙酮浓度、微波时间、料液比等因素对原花青素提取量的影响。
进一步了解了原花青素的应用范围。
关键字：葡萄籽；原花青素；提取葡萄籽为葡萄科葡萄属葡萄的种子，是生产葡萄鲜食、榨汁和葡萄酒业的废弃部分。
但近些年来，随着研究的不断深入，发现葡萄籽具有很高的营养价值和药用价值。
研究发现，葡萄籽多酚类物质无论是含量还是种类都比葡萄皮和果肉丰富得多，并且这些多酚物质有着极强的抗氧化能力。
因此，以酿酒过程中产生的葡萄籽为原料，提取富含多酚类物质的葡萄籽提取物（grape seed ext ract，GSE），不仅能为葡萄的综合利用开辟新途径，而且还可带来巨大的经济效益和社会效益[1]。
1 葡萄籽提取物中的化学成分1. 1多酚类物质葡萄籽中含有多酚类物质（GSP），主要有儿茶素类和原花青素类。
儿茶素类化合物包括儿茶素、表儿茶素及其没食子酸酯，是葡萄籽中主要的单聚体，也是原花青素寡聚体和多聚体的构成单位。
葡萄籽提取物原花青素（GSPE）是由不同数目的黄烷醇聚合而成，目前研究最广的主要是由（+）-儿茶素、（-）-表儿茶素为单体聚合而成的这类化合物。
二至四聚体称为寡聚体（OPC），五聚体以上称为高聚体（PPC）。
其生物活性随聚合度增大、增强。
从葡萄籽中提取的生物类黄酮OPC与大多数黄酮相比，结构特殊，水溶性好，有效性高，生物利用度在90%以上，极易被人体吸收。
1.2 脂质类及其他化学成分葡萄籽中约含有10%～15%的葡萄籽油，其主要成分为亚油酸、亚麻酸等多种不饱和脂肪酸和甾醇等以及多羟基类（PHS）如白藜芦醇等。
葡萄籽油中含矿物元素钾、钠、钙和铁量较高，并含多种维生素。
大孔树脂分离纯化葡萄籽原花青素的研究
大孔树脂分离纯化葡萄籽原花青素的研究
葡萄籽原花青素具有很强的生物活性，可以抗氧化、降低血压和
血脂，抗肿瘤等一系列的作用。
但由于其分散性差而无法直接用于工
业生产。
因此，近年来，大孔树脂是应用于葡萄籽原花青素分离纯化
的一种有效的技术。
在这项研究中，首先，通过采用不同酸度、体积颗粒大小和有机
浓度及分散体系温度等参数对葡萄籽甾醇进行了≤1 mol/L 的多步提取，以获取较高的葡萄籽原花青素提取效率。
然后，研究人员采用了
多因子正交试验（活性炭、活性炭黏着剂），探索最佳萃取条件。
最后，经过各种操作技术的优化，选择了理想的超级分子过滤模板（SMS）和强迫流程（FP），对所得的萃取液在离子交换树脂上完成了大规模
的纯化，从而有效提取出高纯度的葡萄籽原花青素。
本研究表明，通过综合采用多种分离技术，如多步提取、多因子
正交试验、超级分子过滤模板和强迫流程，大孔树脂可有效分离和纯
化葡萄籽原花青素 / 阿魏酸。
研究为葡萄籽原花青素的研发利用奠定
了基础。
野生毛葡萄籽原花青素抗氧化活性的研究
在 自然 界 中 ， 酚类 物质广 泛存 在 ， 多 并作 为天然 的抗 氧
公式计 算 。 清除率 （ ： ％）
Ａ空白
化剂而广 泛应用 。对 于葡 萄籽 原 花青 素抗 氧化 性 的研究 报 道很 多【 Ｊ既包括 动物 体 内抗 氧 化试 验 ， ｌ ， ４ 又包 括 体外 细 胞 培养及 用化学方法 测定 。研究表 明 ， 葡萄籽原 花青 素是迄今
为止所发 现的最有效 的 自由基 清除剂 之一 ， 特别是低 聚 花青
×１ ０ ０
（） １
１３２ 野生 毛葡萄原花 青素清除羟基 自由基 （０ ） ．． ・Ｈ 的活性。 采用 邻 二 氮 菲 一Ｆ２ 化 法¨ 。 试 管 中 依 次 加 入 ５ ｅ 氧 。 。在 ｒｎＬ 邻 二氮菲溶液 ０６ｍ 、 酸盐 缓 冲液 （Ｈ值 ７４ ０４ ｒｏ Ｉ ， ／ ｒ ． ｌ 磷 Ｄ ．）． Ⅱ 和 ５ ｍ ｌ ｅ ．ＤＡ溶 液 ０６ｍ ； 中， 入体 积分 数 ｌ ｏ ＬＦ２ Ｅ Ｔ ｌ ｍ ／ ． ｌ 其 加 为 ０１ ２２ ．ｍ 作 为损伤管 ， ．％Ｈｏ ０８ ｌ 加入体 积分数 为 ０ １ ２２ ．％Ｈｏ ０８ ｌ １ ｌ 同浓度 的样 品溶 液 作 为样 品 管 ， 加 Ｈ０ ．ｍ 和 不 ｍ 不 ２２ 和样 品的作 为空 白管 ； 各 管用无 水 乙醇定 容 到 ４ｍ ， 将 ｌ３ ７℃
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超声提取葡萄籽原花青素工艺的优化及其抗氧化活性研究_金华_刘志刚_曾晓丹_高艳_
超声提取葡萄籽原花青素工艺的优化及其抗氧化活性研究金华＊，刘志刚，曾晓丹，高艳，马明硕（吉林化工学院分析测试中心，吉林吉林 １３２０２２）摘要：研究利用响应曲面法优化超声提取葡萄籽原花青素的工艺。
在单因素实验基础上，采用中心组合设计响应面实验，考察了提取温度、液料比、乙醇浓度以及超声时间对原花青素提取率的影响，并建立回归模型。
优化后的工艺：提取温度５５℃，液料比２０（ｍＬ／ｇ），乙醇浓度６５％，超声时间１０ｍｉｎ；在此条件下葡萄籽原花青素的提取率为２．４８２％，与回归模型预测值的相对偏差为０．３６％。
同时进行了提取物的抗氧化性检验，结果表明葡萄籽原花青素对超氧阴离子自由基具有较好的清除能力，且呈剂量相关性。
关键词：葡萄籽原花青素（ＧＰＡ）；超声提取；响应曲面；抗氧化中图分类号：ＴＳ２０２．３ 文献标志码：Ａ ｄｏｉ：１０．３９６９／ｊ．ｉｓｓｎ．１０００－９９７３．２０１４．０４．０２６文章编号：１０００－９９７３（２０１４）０４－０１０２－０６Ｓｔｕｄｙ ｏｎ Ｏｐｔｉｍｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ Ｕｌｔｒａｓｏｎｉｃ Ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ ｏｆ Ｐｒｏｃｙａｎｉｄｉｎｓｆｒｏｍ Ｇｒａｐｅ Ｓｅｅｄｓ ａｎｄ Ｉｔｓ Ａｎｔｉｏｘｉｄａｎｔ ＡｃｔｉｖｉｔｙＪＩＮ Ｈｕａ＊，ＬＩＵ Ｚｈｉ－ｇａｎｇ，ＺＥＮＧ Ｘｉａｏ－ｄａｎ，ＧＡＯ Ｙａｎ，ＭＡ Ｍｉｎｇ－ｓｈｕｏ（Ａｎａｌｙｓｉｓ ａｎｄ Ｔｅｓｔｉｎｇ Ｃｅｎｔｅｒ ｏｆ Ｊｉｌｉｎ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ ｏｆ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｊｉｌｉｎ １３２０２２，Ｃｈｉｎａ）Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｒｅｓｐｏｎｓｅ ｓｕｒｆａｃｅ ｍｅｔｈｏｄｏｌｏｇｙ（ＲＳＭ）ｉｓ ｕｓｅｄ ｔｏ ｏｐｔｉｍｉｚｅ ｔｈｅ ｕｌｔｒａｓｏｎｉｃ ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ｏｆｐｒｏｃｙａｎｉｄｉｎｓ ｆｒｏｍ ｇｒａｐｅ ｓｅｅｄｓ．Ｏｎ ｔｈｅ ｂａｓｉｓ ｏｆ ｓｉｎｇｌｅ ｆａｃｔｏｒ ｔｅｓｔ，ａ ｃｅｎｔｒａｌ ｃｏｍｐｏｓｉｔｅ ｄｅｓｉｇｎｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔ ｉｓ ｃｏｎｄｕｃｔｅｄ ａｎｄ ｔｈｅ ｒｅｓｐｏｎｓｅ ｓｕｒｆａｃｅ ａｎａｌｙｓｉｓ ｉｓ ｅｍｐｌｏｙｅｄ ｔｏ ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅ ｔｈｅ ｉｎｆｌｕｅｎｃｅｓ ｏｆｆｏｕｒ ｍａｉｎ ｆａｃｔｏｒｓ ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ ｕｌｔｒａｓｏｎｉｃ ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ，ｒａｔｉｏ ｏｆ ｓｏｌｖｅｎｔ ｔｏ ｒａｗ ｍａｔｅｒｉａｌ，ｅｔｈａｎｏｌｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ ａｎｄ ｕｌｔｒａｓｏｎｉｃ ｔｉｍｅ ｏｎ ｔｈｅ ｙｉｅｌｄ ｏｆ ｐｒｏｃｙａｎｉｄｉｎｓ．Ｔｈｅｎ ａ ｒｅｇｒｅｓｓｉｏｎ ｍｏｄｅｌ ｉｓ ｅｓｔａｂｌｉｓｈｅｄ．Ｔｈｅ ｏｐｔｉｍｕｍ ｃｏｎｄｉｔｉｏｎ ｉｓ ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ ｏｆ ５５℃，ｒａｔｉｏ ｏｆ ｓｏｌｖｅｎｔ ｔｏ ｒａｗ ｍａｔｅｒｉａｌ ｏｆ ２０（ｍＬ／ｇ），ｅｔｈａｎｏｌｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ ｏｆ ６５％ａｎｄ ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ ｔｉｍｅ ｏｆ １０ｍｉｎ．Ｕｎｄｅｒ ｓｕｃｈ ｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓ，ｔｈｅ ｙｉｅｌｄ ｏｆ ｐｒｏｃｙａｎｉｄｉｎｓｉｓ ２．４８２％，ｗｈｉｃｈ ｉｓ ｅｘｔｒｅｍｅｌｙ ｃｏｎｓｉｓｔｅｎｔ ｗｉｔｈ ｔｈｅ ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ ｖａｌｕｅ ｗｉｔｈ ａ ｒｅｌａｔｉｖｅ ｅｒｒｏｒ ｏｆ ０．３６％．Ｐｙｒｏｇａｌｌｏｌ ｏｘｉｄａｔｉｏｎ ｍｅｔｈｏｄ ｉｓ ａｐｐｌｉｅｄ ｆｏｒ ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ ｏｆ ａｎｔｉｏｘｉｄａｎｔ ａｃｔｉｖｉｔｉｅｓ ｏｆ ｐｒｏｃｙａｎｉｄｉｎｓ ｉｎｇｒａｐｅ ｓｅｅｄｓ．Ｔｈｅ ｒｅｓｕｌｔｓ ｓｈｏｗ ｔｈａｔ ｔｈｅ ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ ｈａｓ ｃａｐａｃｉｔｙ ｔｏ ｓｃａｖｅｎｇｅ ｒａｄｉｃａｌ ａｎｄ ｔｈｅ ｓｃａｖｅｎｇｉｎｇａｃｔｉｖｉｔｙ ｉｎｃｒｅａｓｅｓ ｗｉｔｈ ｔｈｅ ｐｒｏｃｙａｎｉｄｉｎｓ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ．Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ：ｇｒａｐｅ ｓｅｅｄ ｐｒｏｃｙａｎｉｄｉｎｓ（ＧＰＡ）；ｕｌｔｒａｓｏｎｉｃ ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ；ｒｅｓｐｏｎｓｅ ｓｕｒｆａｃｅ ｍｅｔｈｏｄｏｌｏｇｙ；ａｎｔｉｏｘｉｄａｎｔ 东北山葡萄是在长白山高山气候环境下生长的特有品种，所酿造的山葡萄酒以其独特的风味和集滋补养身、祛病延年为一体的至高品质深受国内外欢迎。
大孔树脂分离纯化葡萄籽原花青素的研究
大孔树脂分离纯化葡萄籽原花青素的研究葡萄籽原花青素是一种具有抗氧化、抗肿瘤、抗炎、调节血脂等多重生理活性的天然黄酮类物质，它们有益于维护人体健康。
然而，葡萄籽原花青素在自然界中含量很低，特别是在葡萄汁中，不仅葡萄籽原花青素分散性差，而且易受微生物与游离基反应，因此，对于这一类物质的纯化分离至关重要。
随着科技的发展，许多精密的分离技术逐渐得到推广应用。
其中，大孔树脂分离技术是一种常用的分离技术，它由流动相和定留相组成的层析平台，能够有效分离和纯化物质。
在葡萄籽原花青素的分离纯化技术中，大孔树脂是一种重要的分离工具，因此研究人员需要充分挖掘其应用潜力以获得更高品质的葡萄籽原花青素。
为了更好地了解大孔树脂分离纯化葡萄籽原花青素的技术，我们进行了相关实验研究。
首先，我们选取了葡萄汁作为实验模型，对原料进行了抑菌处理，并采用柱层析法对其中的葡萄籽原花青素进行分离纯化。
实验结果表明，大孔树脂分离技术能有效分离和纯化葡萄籽原花青素。
该方法还能减少反应时间和费用，改善分离效果，提高产品纯度。
此外，大孔树脂分离技术在分离纯化葡萄籽原花青素过程中还存在一些问题，如分离效率不高、分离效果不理想、产品分散性差等。
为了改善上述问题，需要采用更复杂的工艺，加强大孔树脂分离技术。
为此，我们尝试了多种改进方法，包括增加流速、调整萃取溶液pH值、改变柱内温度、改变柱内洗涤液浓度等，以期获得更高品质的葡萄籽原花青素产品。
实验结果表明，通过采用复杂的分离工艺，分离效果明显改善，产品纯度提高。
最后，我们在大孔树脂分离纯化葡萄籽原花青素的技术中研发了有效可靠的分离方案，以提供更高品质的葡萄籽原花青素产品。
综上所述，大孔树脂分离技术在葡萄籽原花青素分离纯化过程中发挥了重要作用。
与其他分离技术相比，这一技术具有低成本、高效率、安全可靠的优点，因此得到了广泛应用。
大孔树脂分离技术不仅可以提高葡萄籽原花青素的纯度，而且还可以提高葡萄籽原花青素的分散性和抗氧化性能。
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・实验研究Experimental R esearch ・葡萄籽原花青素的梯度分离及其抗氧活性研究3Studies of G radient Extraction of G rape Seed Proanthocyanidin and Their Anti 2oxidative Effects杨怀霞Yang Huaixia 1,马庆一Ma Qingyi 2,许 闽Xu Min 11.河南中医学院Henan College of Traditional Chinese Medicine ;2.郑州轻工业学院Zhengzhou Institute of Light Industry摘要:目的:研究葡萄籽原花青素的梯度分离方法及各组分的抗氧化性能。
方法:葡萄籽样品通过乙醇粗提后,用不同溶剂梯度分离得到各组分,以乙酸乙酯组分为代表确定DPPH ・法测定活性的最佳浓度范围,再比较各组分自由基淬灭能力。
结果:最佳活性测定样品浓度范围1.0～10μg/ml ,运用此法测得的清除率在25%～80%之间,灵敏度和准确度较高;葡萄籽梯度分离各组分清除自由基能力:乙酸乙酯组分≥丙酮组分>乙醇组分>乙醚组分>乙醇粗提物>二氯甲烷组分>石油醚组分;其中乙酸乙酯组分和丙酮组分活性尤其突出,表明有高活性成分富集其中。
结论:梯度分离葡萄籽原花青素提取物的效果令人满意。
Abstract :Objective :To explore gradient extraction of grape seed proanthocyanidin and their antioxdative effect.Method :After sam 2ple grape seeds were extracted with ethanol ,the active components were obtained by application of different organic solvents.Through investigation of the free 2radical scavenging effect of ethylacetate components ,the optimum concentration range was deter 2mined by DPPH method and a comparison was made on the antioxidative effects of the different components from grape seeds.Re 2sult :The optimum assay range was 1.0～10ug/ml with the scavenging rate between 25%～80%.The sensitivity and accuracy of this method were satisfying.The free 2radical scavenging effects of different components from grape seed proanthocyanidin came in the following :Ethyl acetate >Acetone >Ethanol >Ether >the primary extracts of ethanol >Dichloromethane >Petroleum ether.A 2mong all components ,the activities of Ethyl acetate and Acetone extracts were excellent marked by the active components highly con 2centrated.Conclusion :Gradient extraction of grape seed proanthocyanidin was very promising.关键词:葡萄籽;梯度分离;抗氧化性;DPPH ・法K ey w ords :grape seed ;gradient extraction ;anti 2oxidative effect ;DPPH method中图分类号CLC number :R284.2 文献标识码Document code :A 文章编号Article ID :1672-6839(2004)05-0014-03 许多生理、病理现象都与体内自由基的产生和积累密切相关,寻找阻遏自由基反应的抗氧化剂的工作格外重要[1]。
近年来,植物源抗氧化剂由于其低毒、高效成为研究热点,葡萄籽中提取的原花青素更因其独特的抗氧化特性及高生物利用率倍受青睐,但因其组成复杂,各类成分之间性质相近,难以分离,极大地影响了有效成分的开发利用[2]。
DPPH ・法简便、快速、重现性好,广泛用于各种自由基清除剂筛选研究的分析跟踪[3]。
本文以梯度提取方法分离葡萄籽中的有效成分,以乙酸乙酯组分为代表确定DPPH ・法测定活性的最佳样品浓度范围,并对比了各组分的自由基淬灭能力,即其抗氧化活性的强弱。
该研究方法简便、有效,既为葡萄籽提取物的开发应用提供理论依据,也为其它同类研究提供参考。
1 实验材料材料:葡萄籽样品(民权葡萄酒厂下脚料)。
试剂:DPPH ・(1,1-二苯基-2-苦肼基自由基,日本东京工业株式会社生产),原花青素标准品(Sigma 公司生产,含3基金项目:河南省教育厅科技攻关项目(编号:20023600010)量98%),其它试剂均为分析纯。
主要仪器:RE -52旋转蒸发器(上海安亭电子仪器厂),LD4-2离心机(北京医用离心机厂),752型紫外光栅可见分光光度计(上海精密科学仪器有限公司),DZF -IB 型真空干燥箱(上海跃进医疗器械厂)。
2 实验方法2.1 样品处理及有效成分分离提取取风干恒重的葡萄籽样品100g ,粉碎过20目筛,用700ml 80%乙醇浸泡过夜,水浴回流5h ,将提取液浓缩至粘稠油状,加入硅藻土拌匀,以滤纸包裹,移入索氏提取器,依次用石油醚、二氯甲烷、乙醚、乙酸乙酯、丙酮、乙醇等溶剂在避光下提取3h ,提取液减压浓缩后分别用乙醇定容记为A ,不溶部分用乙酸乙酯溶解后记为B 备用。
2.2 清除自由基活性试验(DPPH ・法)取0.20ml 样品溶液,加入4.00ml 的50μmol/L 的DPPH ・溶液混匀,放置30min ,以原溶剂调零点,在517nm处测吸光度记为Ai ,同法0.20mL 溶剂+DPPH ・溶液混匀测定吸光度记为Ac ;0.20ml 样品溶液+4.00ml 的溶剂混匀测吸光度记为Aj 。
按照以下公式计算自由基清除率:・41・2004年10月第5期No.5 Oct. 2004河南中医学院学报JOURNAL OF HENAN UNIVERSITYOF CHINESE MEDICINE 第19卷总第114期Vol.19Serial No.114IP (%)=[1-(Ai -Aj )/Ac ]×100其中Aj :反映样品自身对吸光度的贡献;Ac :为DPPH ・本身在测定波长的吸收;Ai :样品对DPPH ・作用后的吸光度数值。
2.3 样品用量选择与抗氧化活性测定先将乙酸乙酯组分A 部分用95%乙醇稀释为不同浓度,进行清除自由基活性试验以确定最佳样品用量,再分别用95%乙醇、乙酸乙酯稀释其它各组分A 、B 部分,取同样量进行样品活性测定。
2.4 原花青素含量测定采用香草醛-盐酸法[4],以原花青素为标准品作标准曲线,计算样品中原花青素含量。
2.5 薄层分析以甲苯∶丙酮∶醋酸=3∶3∶1体系展开,参考文献[5]进行分析。
表1 梯度提取各组活性测定结果%组分乙醇丙酮乙酸乙酯AB乙醚AB二氯甲烷AB石油醚乙醇粗提颜色暗红色棕红色红色红色红色红色黄绿色黄绿色灰绿色暗红色收率 1.0250.9610.1960.0010.2720.0040.1090.0050.326 3.050原花青素54.3358.6793.33101.0042.0040.319.070.000.0042.00IP86.4193.3393.5990.2485.9075.6135.904.884.5576.413 实验结果3.1 样品用量的选择乙酸乙酯组分A 部分用95%乙醇稀释为不同浓度,进行清除自由基活性测试结果见图1、图2。
图1 不同浓度样品的淬灭自由基活性测试图2 不同浓度样品的自由基清除率 图1的Aj -C 曲线显示:样品在测定波长517nm 下有吸收,并且随浓度的增加而增大,但当样品用量低于25μg/ml 时,Aj <0.005样品在测定波长下的吸收与测定值相比微不足道,毋须考虑样品本身对吸收度的贡献;从图2样品用量与清除率的关系看来,样品浓度0.25～10μg/ml 与清除率呈正相关关系;在样品加入浓度超过10μg/ml 时,自由基清除率在80%以上,此时若用量继续增加,清除率变化不大,且样品浓度过大,样品吸收使背景加深影响测定,在此浓度区间测定灵敏度和准确度都不高;而当C <1μg/mL 清除率小于25%测定结果的绝对误差会比较大,显然活性测定浓度范围1～10μg/ml ,清除率在25%～80%,对于比较各个组分的活性十分有利,方法灵敏度、准确度均较高。
3.2 样品测定葡萄籽样品梯度分离各组分加入浓度10μg/ml 的活性测定结果见表1。
显然:乙酸乙酯组分≥丙酮组分>乙醇组分>乙醚组分>乙醇粗提物>二氯甲烷组分>石油醚组分。
各组分活性与原花青素含量呈正相关的关系。
4 讨论由葡萄籽各级提取物的抗氧化性测定过程可以知道,判断物质的抗氧化效果,样品用量选取至关重要。
清除率与样品浓度呈正相关关系,在一定浓度范围内测定的灵敏度和准确度令人满意。
样品本身在测定波长的吸收不得不考虑,样品用量并非越大越好,其用量大到一定程度,样品活性强弱难以比较,如果用量太大,样品本身对吸收值的贡献远远超过它淬灭自由基所引起的吸光度值的减少(Aj >Ac -Ai ),样品本身的吸收会掩盖它对自由基的清除能力,由此还可能得出样品无抗氧化性或有助氧化作用的错误结论。
从梯度提取各组分的活性测定结果可见原花青素是主要抗氧化活性成分。
普遍地各组分的醇溶部分比乙酸乙酯溶解物的活性强,说明活性高的成分是水溶性好的原花青素低聚体,乙醇粗提物、石油醚组分、二氯甲烷组分、乙醚组分、乙醇组分的活性差异大,此样品用量可以明显地比较出它们清除自由基能力的差异。