第十三章 革兰氏阳性产芽孢杆菌

（四）微生物学诊断
主要是检查肉毒毒素，定型用毒素中 和试验。
此外，也可用间接血凝试验或琼脂扩 散试验检测毒素。
（五）免疫防治
在动物肉毒中毒症常发地区，可用明 矾沉淀类毒素作预防注射，有效免疫 期可持续半年至一年，也可用氢氧化 铝或明矾菌苗接种。
三、气肿疽梭菌(C1.chauvoei)
（一）病原性
产气荚膜梭菌D型(C.Perfringens type D) 产气荚膜梭菌E型(C.Perfringens type E) 气肿疽梭菌(C.chauvoei) 腐败梭菌(C.septiccum) 诺维梭菌A型(C.novyi type A) 诺维梭菌B型(C.novyi type B) 诺维梭菌C型(C.novyi type C) 溶血梭菌(C.haemoiyticum) 肉毒梭菌A～F型(C.Botulinum type A～F) 阿根廷梭菌(C.argentinense) 破伤风梭菌(C.tetani) 艰难梭菌(C.difficiie)
• 检样分成两份，一份不加热，一份煮沸 30 min，然后分别静脉注射家兔(1～2m1) 或小鼠(0.1～0.3m1)。
• 如不加热组动物死亡，加热组动物不死 亡，证明有毒素存在。
• 确定毒素的型，须进一步做毒素中和保 护试验。
中和试验方法
• 将未煮沸的上清液分为4份，每份1ml， 分别加入B、C、D型抗毒素及生理盐水 1ml，混合均匀后在37℃下作用40min， 然后分别静脉注射小鼠或家兔一组， 观察24h，记录各组动物的死亡及存活 情况，判定菌型。
3、分离培养 可用普通琼脂或血琼脂平板，得到的 纯培养物可作以下鉴定： ① 噬菌体裂解试验 ② 青霉素抑菌试验 ③ 荚膜形成试验 ④ 串珠试验 ⑤ 溶血试验
4、动物试验
将被检材料制成1：5悬液，皮下注射 小鼠、豚鼠或家兔。动物通常于注射 后24～72h死于败血症。
剖检可见注射部位胶样浸润及脾脏肿 大等病理变化。取血液、脏器涂片镜 检，当发现竹节状有荚膜的大杆菌时， 即可诊断。
又名费氏梭菌(Cl.feseri)，俗称黑腿 病杆菌，为气肿疽的病原体。
此病主要发生于幼牛(6个月～3岁)， 通过消化道或创伤感染而发病，症状 主要是在肌肉丰满部位发生气性水肿， 触诊时有捻发音。受害肌肉常呈暗红 色到黑色，并常伴有跛行，故又称为 黑腿病(Blackleg)。
（四）分型
该菌至少可产生20种外毒素，毒素以 小写希腊字母表示，其中α、β、ε 和ι是主要致死毒素，其余为次要致 死毒素和非致死性毒素。
根据主要致死毒素与其抗毒素的中和 试验可将此菌分为A、B、C、D和E 5个 型。
（五）致病性 本菌致病的主要物质是其产生的毒素。 A型菌 人气性坏疽和食物中毒 B型菌 羔羊痢 C型菌 羊猝狙(struck) D型菌 羊、牛的肠毒血症 E型菌 犊牛、羔羊肠毒血症
梭菌病的分类及诊断
梭菌病，按性质和症状大致可分为5类。 ①气肿疽与恶性水肿 ②快疫与类快疫 ③痢疾与肠炎 ④食物中毒 ⑤破伤风
除第一类外，其余主要是由细菌毒素所致，所 以诊断重点应是毒素检查。而气肿疽与恶性水 肿是由细菌感染引起，诊断应进行细菌学检查。
一、产气荚膜梭菌(Cl.perfringens)
肉及肉制品、蔬菜、鱼
Cα
C1、D 水禽
无脊椎动物
Cβ
C2、D 牛、马、貂、犬 尸体、青贮饲料
D
C2、D 牛、绵羊
小动物尸体
E
E
人、鱼类、野鸟 鱼及鱼制品、鱼塘污泥
F
F
人
肝酱、鱼
（三）致病性 A、B型毒素：引起马、牛、水貂等动物饲 料中毒和鸡软颈病。 C型毒素：主要引起禽类、马、牛、羊 以及水貂肉毒中毒症。 D型毒素：是南非和澳大利亚牛、绵羊 肉毒中毒的病因。 A、B、E及F型毒素引起人的食物中毒。
血 琼 脂 不溶血，个别菌株可轻微溶血。 普通肉汤 24h后，上部液体透明，管底有白
色絮状沉淀，轻摇试管，沉淀物徐 徐上升，卷绕成团而不散开。 明胶穿刺 倒松树状生长，明胶上部逐渐液化 呈漏斗状。 青霉素培养基 0.5IU／ml，串珠反应
炭疽杆菌在普通琼脂培养基上形成的卷发样菌落
炭疽杆菌在血琼脂培养基上形成的菌落
3、肉毒毒素
肉毒毒素是一类锌结合蛋白质，具蛋 白酶活性，性质稳定，是毒性最强的 神经麻痹毒素之一。
该毒素可作用于胆碱能神经末梢，阻 断乙酰胆碱的释放，导致肌肉麻痹。
（二）细菌分型及所产毒素
根据毒素抗原性的差异，分为7个型。
菌型 毒素类型 最易感动物
毒素来源
A
A
人、鸡、貂
蔬菜、水果、肉、鱼
B
B
人
（二）血清学检查 多用已知抗体检查被检的抗原。 如： 炭疽环状沉淀反应（Ascoli氏反应） 协同凝集试验 串珠荧光抗体检查 琼脂扩散试验 酶标SPA间接染色法
四、免疫防治
1、Ⅱ号炭疽芽孢苗 用于牛、马、驴、骡、骆驼、绵羊、山羊和猪。注 射后14d即可产生坚强免疫力，免疫期一年。
2、无毒炭疽芽孢苗 适用于牛、马、驴、骡、绵羊和猪，免疫期一年。 此苗对山羊反应强烈，可引起严重局部反应，有的 甚至发生死亡，故禁用于山羊。
炭疽毒素由三种亚单位构成。 水肿因子（edema factor,EF） 致死因子（lethal factor,LF） 保护性抗原（protective antigen,PA）
三者单独存在均无毒性，只有PA与EF或 者LF结合才有毒性作用。
（二）所致疾病
本菌可致各种家畜、野兽和人类的炭疽病。 主要通过消化道传染，但也可经呼吸道及皮 肤创伤或通过吸血昆虫传播。 草食动物 急性败血症 肉食动物 胃肠炎、咽炎 杂食动物 慢性咽喉肿胀或隐性感染
炭疽杆菌形成芽孢的条件：
① 有充分的O2 ② 25～35℃
③ 有一定的湿度
④ 中性或弱碱性环境
由于炭疽杆菌在体外可形成芽孢，所以， 我国兽医法规定：禁止解剖死于炭疽的 动物尸体。
（二）生长要求及培养特性
1、生长要求
37℃ 、有氧、普通培养基
2、培养特性
普通琼脂 形成灰白色、不透明、大而扁平、 表面干燥、边缘呈卷发状的菌落。
所致疾病
恶性水肿，人食物中毒 羔羊痢，驹、绵羊、山羊肠毒血症 羊猝狙，犊牛、羔羊、仔猪肠毒血 症，人、禽类坏死性肠炎 绵羊、山羊、牛肠毒血症 犊牛、羔羊痢疾 气肿疽 恶性水肿、羊快疫 恶性水肿 黑疫 水牛骨髓炎 牛、羊细菌性血红素尿 动物和人肉毒中毒症 人肉毒中毒症（阿根廷） 破伤风 人、犬、猪、驹肠炎、腹泻
又名魏氏梭菌、产气荚膜杆菌。 该菌是羔羊痢、羊猝狙和羊肠毒血症的 病原体，也可引起人恶性水肿。
（一）形态及染色
G＋大杆菌，长约l.3～19.0μm，单独散在。 无鞭毛。芽孢位于菌体中央，使菌体膨胀 呈梭形。多数菌株可形成荚膜。
（二）生长要求及培养特性 生长要求 在厌氧，加葡萄糖、血液或血清的培养 基中培养。
培养特性 生长迅速，8min繁殖一代。 血琼脂 形成灰白色、边缘整齐的圆顶状菌落或边 缘呈锯齿状的大菌落。大多数菌株可产生 双层溶血环。 葡萄糖血清琼脂 灰白色，半透明，“勋章”样的大菌落。 厌氧肝汤 培养5～6 h即呈均匀浑浊，并产生大量气 体。
（三）生化特性
最突出的是对牛乳 培养基的“暴烈发 酵”。
羊肠毒血症: 肠道浆膜、粘膜充血、出血
仔猪梭菌性肠炎，小肠严重出血
（六）微生物学诊断
A型所致气性坏疽的微生物学诊断，主 要依靠细菌分离鉴定。
其余各型所致的疾病，均系细菌在肠 道内产生毒素所致，诊断重点是作肠 毒素检查。
毒素检查方法
• 取回肠内容物，加5～10倍灭菌生理盐水 稀释，离心沉淀取上清液，即检样。
肉毒梭菌是一种腐生性的G＋大杆菌，专性 厌氧。该菌分布于土壤，海洋和湖泊的沉 积物，哺乳动物、鸟类和鱼的肠道，饲料 以及食品中。当有适宜营养且获得厌氧环 境时，即可生长繁殖并产生肉毒毒素。人 畜食入含此毒素的食品、饲料时即可发生 肉毒中毒症(botulism)。
（一）主要特性 1、形态染色 革兰氏阳性大杆状，形成芽孢，有 周鞭毛。 2、培养 专性厌氧，产毒最适温度25～30℃。 血琼脂：直径1～6mm不规则菌落，β溶血
• 此外，毒素检查亦可用PCR技术。
（七）免疫防治
预防羔羊痢、猝狙、肠毒血症以及仔 猪肠毒血症等，可用厌氧菌三联苗或 五联苗。
三联苗（快疫-猝狙-肠毒血症） 五联苗（羊快疫-猝狙-肠毒血症-羔羊痢疾
-黑疫）
五联菌苗免疫期，除对羊快疫较短外， 对其它四病可达一年。
二、肉毒梭菌(C1.botulinum)
（一）细菌学检查 1、病料采集 生前：水肿液或血液 死后：耳朵 肠炭疽：粪便 若已错剖畜尸，可采取脾、肝等进行 检验，尸体就地深埋2米以下，表面用 20%的石灰乳消毒。
2、镜检
病料涂片干燥后，在10%的福尔马林 溶液或在0.1%升汞中浸泡10～15分 钟，然后用美蓝或瑞氏染色法染色 镜检，如发现有荚膜的竹节状大杆 菌，即可作出初步诊断。
2、菌体抗原
成分为多糖，与毒力无关，但性质稳定，经 腐败和高温处理不被破坏，可与炭疽阳性血 清发生沉淀反应，故可用于皮毛等畜产品的 检验。
3、保护性抗原（PA）
是一种胞外蛋白质抗原，为炭疽毒素 的组成成分之一，具有免疫原性，能 使机体产生抗炭疽杆菌感染的保护力。
4、芽孢抗原
是芽孢外膜层含有的抗原决定簇，它 与皮质一起组成炭疽芽孢的特异性抗 原，具有免疫原性和血清学诊断价值。
二、致病性
（一）毒力因子
1、荚膜
增强细菌的抗吞噬能力，有利于细菌扩散。
2、炭疽毒素(anthrax toxin)
包括水肿毒素及致死毒素两种。毒性作用主 要是损伤微血管的内皮，增强微血管的通透 性，改变血液循环动力学，损害肾脏功能， 干扰糖代谢，血液呈高凝状态，易形成感染 性休克和弥漫性血管内凝血，最后导致动物 死亡。