血小板抗体检测
血小板抗体检测及配型
血小板抗体测定操作规程【检测原理】反应板中已包被抗血小板单克隆抗体，血小板悬液经离心洗涤后可在反应孔底部形成血小板单层。
加入血清或血浆，在孔中经过孵育后，若该血清或血浆中含有血小板抗体，则该抗体与反应孔中的血小板单层结合，未结合的成分通过洗涤被去除。
加入抗人及人致敏红细胞（指示红细胞），经离心后指示红细胞通过抗人的桥连与血小板单层上的血小板抗体结合，因此阳性反应为指示红细胞平铺在反应孔底部表面。
而阴性反应为指示红细胞在离心力的作用下聚集于反应孔底部中央。
【试剂组成】1、反映板2、低离子强度溶液3、抗人IgG4、25×浓缩洗涤液5、阴阳性对照6、指示红细胞7、冻干血小板8、生理盐水【样本要求】新鲜血清或血浆样本，4℃可保存7天，若需长期保存应-20℃冻存。
样本检测前经离心5分钟后，取上清液进行检测。
【实验前准备】1将试剂盒平衡至室温(18-25°C)2、25×浓缩洗涤液用纯化水按1:24体积比稀释成洗涤工作液。
【适用仪器】平板式离心机。
离心力和离心转数的换算公式为Rcf(g)=1.119×10-5×r×(rpm)2（r为离心半径，单位cm）。
【检测步骤】(一)抗体检测1、制备血小板悬液：可将商品化的冻干血小板稀释后直接使用；也可自己制备三人份等比例混合型血小板悬液（将有效期内机采血小板用生理盐水进行5-10倍稀释后混合；或采血当天8小时内或枸橼酸钠抗凝全血经离心10分钟，取上层2/3富血小板血浆混合）。
血小板悬液应贮于塑料容器中，保存并在8小时内进行检测。
2、根据检测量出反应板条，标记患者、阳性对照及阴性对照孔，未使用的板条应储存于自封袋中，加入干燥剂密封后，2-8℃储存。
3向反应孔中加入1滴（50ul）上述血小板悬液，轻摇反应板约10秒钟。
4、用平板离心机将反应板以50g离心5分钟，使血小板固定在反映孔底部。
5、倒出反应孔中的液体，并用滴管滴加洗涤工作液清洗3次，洗涤过程中轻摇微孔板，然后轻轻甩掉洗涤液。
血小板抗体检测和相容性血小板输注的应用
血紫癜 （Ｔ ） Ｐ Ｐ 相符合 。 对血小板输注疗效 的评价 ， 由于血小板
输 注后 患 者 出血症 状 不易 量化 ，故 以血小 板恢 复 百分 率
的 １ ３例 进 行 ２次 以 上 血 小 板 输 注 治 疗 的血 液 病 及 肿 瘤 患 １
上普遍采用机采血小板输注 ， 但有妊娠史 的女性或 多次输血
的患者 ， 易产生同种免疫 ， 导致血小板输注无效 （Ｔ 。本文 Ｐ Ｒ） 通过对 １ ３例多次输注 机采血小板 的患者进行 血小板抗体 １
展 ， 腔镜 、 腹 宫腔 镜 下 处 理 子宫 肌 瘤 已成 为手 术 发 展 的方 向 ， 具 有 创 伤 出血 少 、 复 快 的 特 点 。 恢
［ ］ 黎培毅 ， ４ 刘宏伟 ， 杨延林 ． 腹式筋膜 内子宫 切除术． 用妇产科 实
杂志，９ ８ １ （ ）３ ． １９ ，４ １ ：６ ［ ］ 唐 良萏 ， ５ 卞度宏． 妊娠合并子宫肌瘤 的处理 ． 实用妇产 科杂志 ，
被检测 。
１ 统计 学 处 理 ． ４
Ａ Ｏ血 型不合而导致血小板破坏 ｌ。若血小板输 注后 １ｈ的 Ｂ ５ ｌ Ｃ Ｉ７ ， Ｃ＜ ． 应首先考虑免疫 因素所 致 ； １ｈ的 Ｃ Ｉ 数在正 ５ 若 Ｃ指
常范 围内， ２ 而 ４ｈ的 Ｃ Ｉ４５ 则应考 虑非免疫性 因素所致 。 Ｃ ＜ ．， 本研究结果显示 ４ ． ６９ ％患者出现 Ｐ Ｒ， Ｔ 与文献 ［ ］ ６ 报道在多次 输血 和慢性血小板减少 患者 中 ，有 ３ ％一０ ０ ７ ％出现血小板输
为正常卵巢组织。我院在全子宫切除术时是否切 除卵巢 已采 取非常慎重的态度 。术中应仔细检查双侧卵巢 ， 若正常 ． 原则 上予 以保 留。
参 考 文 献
血小板抗体检测试剂盒(固相凝集法)使用操作说明
血小板抗体检测试剂盒（固相凝集法）使用操作方法1、平衡室温取出血小板抗体检测试剂盒（固相凝集法）、血小板抗体检测用指示红细胞（固相凝集法）、血小板抗体筛检细胞（冻干粉）放在室温中平衡至室温。
2、检测样本准备将血浆（血清）3000转离心5-10分钟。
3、配制浓缩洗涤液将浓缩洗涤液以1：24比例与蒸馏水混合（满瓶20ML浓缩洗涤液兑480ML蒸馏水）。
4、配制血小板抗体筛检细胞（冻干粉）将冻干粉依比例与生理盐水混合（冻干粉0.5ML与0.5ML生理盐水混合），混合后放置5分钟，使用前轻轻摇匀。
5、标识由包装内取出一条反应板，平衡至室温。
标记阳性对照、阴性对照、检测样本序号。
6、加血小板向反应板孔中各加入1滴（约50µl）混匀的血小板悬液，轻摇反应板约10秒钟。
7、固着将反应板用平板离心机以50g离心5分钟（专用血小板离心机用程序1）。
8、洗涤将反应板用洗涤液洗3至4次，洗涤过程中轻摇微孔板，然后再轻轻甩掉洗涤液。
最后一次洗涤后将残余液体蘸干。
9、加样先向各孔中加入2滴（100µl）低离子强度溶液，再分别滴加1滴（50µl）阳性对照、阴性对照、检测样本。
10、孵育将反应孔用封口胶纸封好，轻摇混匀后置湿盒中37℃孵育30分钟（或气浴孵育35至40分钟）。
11、洗涤(同步骤8)反复洗涤5至6次。
12、加指示物立即向上述各孔加入1滴抗人IgG（50µl）和1滴（50µl）混匀的血小板抗体检测用指示红细胞悬液，轻轻振荡混匀。
13、离心将反应板以200g离心5分钟（专用血小板离心机用程序2）。
14、结果判定观察并记录实验结果。
阳性反应为指示红细胞黏附在反应孔底部表面，而阴性反应为指示红细胞在离心力的作用下聚集于反应孔底部中央，弱阳性反应格局介于两者之间。
血小板抗体检查及配血操作规程
【口的】Capture-?®是设计用来检测血小板IgG抗体的固相系统。
可为血小板输注无效患者进行血小板配血。
【适用范圉】血小板输注无效患者血小板输注前配血【检测原理】Capture-P是一个固相抗体检测系统，是曲Rachel等人4、Juji等人5和Sh让毗&等人6发表的检测过程改良而来。
患者或供体血小板首先结合于聚苯乙烯微孔表面。
然后用它们来捕获患者或供体血浆中的血小板抗体。
血清在结合有血小板的微孔中进行简短孵育，使抗体与血小板结合（如果抗体存在）。
把微孔中游离的IgG 冲洗掉，并加入结合抗IgG指示红细胞。
进行离心，这样会使指示红细胞与结合于固定的血小板上的抗体接触。
阳性检测中，在指示红细胞和结合血小板抗体间形成了抗免疫球蛋口G桥联，从而阻止了指示红细胞向微孔底部的移动。
作为这种桥联的结果，指示红细胞会形成一个汇合单层从而覆盖固定的血小板。
相反，如果是阴性检测，当不存在血小板抗原-抗体反应时，指示红细胞的移动就不会被阻止，就会被离心到微孔底部，进而形成紧密圧缩、清晰的细胞扣。
可以使用事先经过冲洗和保存的血小板，这个步骤是可以选择的。
使用血小板冲洗和储存洛液洗涤血小板，使之不含污染性血浆蛋口和非血小板细胞成分，这样的血小板可以用来制备Capture-P检测微孔的单分子层。
【主要组成成份】Capture-P检测微孔板：1X8微带板，坚硕U型底部，表面覆盖特异性血小板粘合剂。
每个微带板可以进行8个单独的检测。
这些微带板保存于一个可重复性密封的铝箔袋中，铝箔袋中含有干燥剂和湿度计。
微带板可以单使用，也可以多个使用。
未使用的微带板.干燥剂和湿度计要立即谨慎重新密封于铝箔袋中，以免暴露于湿气中使粘合剂失效。
Capture检测微孔的辅助试剂：（另行购买）Capture LISS：低离子强度溶液，含有甘氨酸、漠甲酚紫染料和防腐剂叠氮化钠（0. 1%）* OCapture-P指示红细胞：结合有兔抗人IgG抗体的红细胞悬液。
血小板抗体检测及临床应用
荧光法
√
√
极高 一般 ＞2h 荧光显微镜 或流式细胞仪
敏感性高 特异性不足
固相凝集法
√ √
高 较好 ＜1h 平板离心机，洗板机
血小板交叉配型应用最 为广泛的方法
03 固相法血小板检测
MASPAT试剂盒组成
MASPAT试剂盒 (K1360)
• 96孔板 (12 条 *8 孔) • 微孔上包被有血小板单克隆抗体 • MASPAT LISS液：10 ml • MASPAT 抗人 IgG: 6 ml • 阳性质控(混合血小板特异性抗体): 1 ml • 阴性质控(不含血小板特异性抗体): 1 ml
非溶血性输血反应风险评估
白细胞特异性和组织相容性（HLA）抗体是引起临床非溶血性发热输血不良反应的最主 要原因，尤其是有输血史、输血小板史、妊娠史、器官移植史、自身免疫性疾病史等患 者临床输血工作中，输血不良反应约70%. 文献报道输注红细胞为2-6%，输注血小板为20-30%，多次输血患者高达27-63%.
目的
检测受血者血清中是否存在待输血小板的抗体，或患者反复输注血小板、全血及血小板 的血液制品后产生血小板抗体，这些抗体能够导致血小板输注无效及输血反应。
临床意义
只有经过血小板筛查和配型，输注与患者相合或基本相合的血小板，才能达到安全有效 输注血小板功效，另外血小板抗体筛查可协助诊断某些血小板减少症。
白细胞特异性和组织相容性（HLA）抗体的检测对于预防和减少非溶血性发热输血反应 非常有意义。
05 血小板抗体检测应用（输血科） 血小板抗体阳性性别比较及发生NHTR比例
吴宇辰，徐笑红，叶宏宇，血小板抗体对非溶血性输血反应的影响，中国输血杂志，2015-28.8
06 血小板抗体检测应用（输血科） 输血反应与血小板抗体关系
血小板抗体检查对多次输血患者的意义
血小板抗体检查对多次输血患者的意义发表时间：2016-05-03T16:36:46.580Z 来源：《医药前沿》2015年12月第35期作者：黄元君[导读] 贵州省黔西南州人民医院输血科多次输注血小板的患者血小板相关抗体阳性率明显上升。
（贵州省黔西南州人民医院输血科 562400）【摘要】目的：观察血小板抗体检查对多次输血或输血小板患者的意义。
方法：采用固相凝集法进行血小板抗体检测。
把多次输注与初次输注患者分为两组做对比。
根据血小板计数增加指数（CCI）、血小板计数以及临床症状进行疗效评估，分析抗体产生的的治疗效果。
结果多次输血或输注血小板的患者抗体阳性率与输注的次数和数量成正比。
结论多次输注血小板的患者血小板相关抗体阳性率明显上升。
【关键词】血小板抗体；多次输注【中图分类号】R446 【文献标识码】A 【文章编号】2095-1752（2015）35-0111-02 血小板减少是临床上出血最常见的原因之一，因治疗不及时或疗效不佳而致死亡的危险性较大，为临床所重视。
血小板作为一种特殊的血液制品，它的输注是临床治疗血小板减少性出血最有效的方法。
然而多次输血和血小板的患者可产生血小板抗体，其输注量及输注次数越多，患者体内免疫相关性血小板抗体的产生概率越高，也越容易导致血小板输注无效。
为了使有限的血小板得到合理的应用，尽量避免输注无效，拟对多次输血血小板的患者预先进行血小板抗体检测。
以防其导致的输注无效。
血小板分为浓缩（手工）和机采血小板。
1.临床资料1.1 一般资料我院2014年8月～2015年6月多次输血或血小板的患者共107中多次输注的5次以上（最少也是2次以上），排除发热、脾肿大、败血症、弥漫性血管内凝血等致血小板减少非免疫性因素。
其中男性68例，女性39例，平均年龄38.5岁。
其中白血病35例，骨髓增生异常综合症22例，全血细胞减少15例，血小板减少21例，再生障碍性白血病14例。
初次输血患者107例。
血小板抗体检测妇科篇稿
血小板抗体检测项目推行重点（妇产科）最近几年来研究发现母婴间血小板血型不合致使的同种异体抗体免疫要素是造成不明原由初期流产、死胎以及重生儿罹患血小板同种免疫性减少症的主要要素。
在妇女怀胎前和怀胎期的惯例体检中进行血小板抗体筛查特别对有频频多次复发性初期流产史妇女尤其重要，它能有效地商讨初期流产的病因、初期展望及预防 NAITP 的发生。
一、临床背景：据文件报导，最近几年来研究发现母婴间血小板血型不合，孕妇有多次妊娠史、流产史、输血史，以及孕妇患有自己免疫性疾病是致使孕初期（ 14 周左右）不明原由流产和胎儿出生后罹患重生儿血小板同种免疫性疾病（发病率约 1 ‰）的主要要素。
这些病症的发生皆与孕妇体内存在或因为同种免疫刺激产生血小板抗体有关。
二、血小板抗体检测的临床意义及项目优势：1.频频流产、不孕不育查因：关于频频和习惯性流产史（特别是孕初期）和不孕不育史的患者，检测患者血清和血浆中血小板抗体的水平，可对其造成流产和不孕不育的原由作出协助诊疗。
2.产检（特别针对高龄和二胎产妇）1）孕初期检测：在孕初期（三个月）产检中惯例检测母亲与胎儿的血小板相容性，关于孕初期出现流产和死胎的风险评论拥有特别重要的意义2）孕后期检测：在孕后期（胎儿出生前）检测母体血清或血浆中血小板抗体水平，对胎儿出生后罹患重生儿血小板同种免疫性疾病风险评论拥有特别重要的意义。
3.妊娠期血小板降低的查因：孕妇在妊娠期血小板减少是一种常有现象，如是生理性降低则危害不大，常常生产后会恢复正常。
但假如血小板的降低是因为孕妇自己免疫性疾病惹起的则会惹起流产、死胎、以及重生儿有关的血小板减少性疾病，危害严重。
项目优势：风险小、利润大1、极少波及血小板输注，减少了好多麻烦；2、流产查因、不良孕产史查因、不孕不育查因、协助生殖等项目皆为自费，不占医保花费；3、优生优育每个家庭都很重视，多一项检测则多一份保障；4、没有过分医疗风险；5、临床患者量巨大，不必担忧临床标本量和科室利润。
血小板抗体(固相凝集法)检测标准操作规程
1目的为规范血小板抗体检测操作，保证检测的有效性及临床用血的安全性，依据《输血实验室管理规程》4.19.4条款的要求制定本规程。
2适用范围适用于医疗机构输血科（血库）进行血小板抗体检测。
3职责医疗机构输血科(血库)技术人员负责血小板抗体的检测。
4原理微孔板反应孔中包被有抗血小板单克隆抗体（针对血小板表面糖蛋白IIb/IIIa、Ib/V/IX），血小板悬液经离心洗涤后可在反应孔底部表面形成血小板单层。
加入受检血清或血浆，在孔中经过孵育后，若该血清或血浆中含有血小板抗体，则该抗体和反应孔中的血小板单层结合，未结合的成分通过洗涤被去除。
加入抗IgG及IgG致敏红细胞（指示红细胞），经离心后指示红细胞通过抗IgG的桥连与血小板单层上的血小板抗体结合，因此阳性反应为指示红细胞黏附在反应孔底部表面，而阴性反应为指示红细胞在离心力的作用下聚集于反应孔底部中央。
5设备与材料5.1材料血小板抗体检测试剂盒（固相凝集法）、血小板抗体筛检细胞（冻干粉）、血小板抗体检测用指示红细胞（固相凝集法）。
5.2设备平板离心机、血型血清学专用离心机、电热恒温水浴箱。
6检测环境室温应控制在18-25℃，湿度应控制在30%-70%。
7操作步骤7.1血标本采集及处理7.1.1检测样本准备7.1.1.1采集患者静脉血2ml，乙二胺四乙酸二钾（EDTA-K2）或枸橼酸钠抗凝，经3000rpm离心5分钟，分离出血浆进行检测。
7.1.1.2如果患者血标本为如果患者血标本为不抗凝血，经3000rpm离心5-10分钟，取上清进行检测。
7.1.1.3如果患者血标本为血浆（血清），3000转离心5-10分钟。
7.1.2血标本处理样本4℃可保存7天。
若需长期保存，应离心后分离血清或血浆，－20摄氏度冻存。
7.2平衡室温取出血小板抗体检测试剂盒（固相凝集法）、血小板抗体检测用指示红细胞（固相凝集法）、血小板抗体筛检细胞（冻干粉）放在室温中平衡至室温。
7.3制备血小板悬液7.3.1商品化的冻干血小板稀释后直接使用。
各类血小板功能检测的临床意义
二、血栓弹力实验
图1 血栓弹力图描绘的凝块形成的速度和强度曲线
TEG临床应用
• （一）监测凝血功能 • 目前常规凝血功能检测（如：PT, APTT）只
能检测血浆中凝血因子活性，反映凝血过程中某 一阶段或某种凝血产物。凝血过程中血小板与凝 血因子相互作用，无血小板参与的凝血检测不能 反应凝血全貌。TEG检测能够全面展现血凝块发 生发展的全过程，从凝血因子的激活到牢固的血 小板-纤维蛋白凝块形成再到纤维蛋白溶解，展示 患者凝血状况的全貌和血凝块形成的速率、血凝 块的强度，血凝块的纤溶水平。
TEG临床应用
• （二）指导成分输血
•
通过血栓弹力图检测能判断导致出血的具体
原因，检出是凝血因子、纤维蛋白、血小板的原
因还是肝素残留导致的出血，这样就能够指导输
注正确的血液成分进行止血治疗。通过对术后出
血原因进行鉴别，还能够减少二次手术风险。欧
美的许多国家将TEG作为进行血液制品管理的重 要工具，文献表明TEG指导输血有助于节约用血 、降低因过度输血引起的副作用及死亡率。
三、血小板功能检测
• 标本采集注意事项 • 总原则采血要顺利，不可反复穿刺，采血
不顺利，容易激活凝血因子，或激活血小 板，影响血小板的凝聚力，标本从采集到 操作完成在4小时内完成，放置过久降低血 小板的聚集强度和速度。用凝血蓝帽的抗 凝管采血3ml，立即轻轻颠倒混匀至少5次 ，不可过于剧烈，防治激活血小板。
二、血栓弹力实验
• 标本采集：与凝血常规管分开单独一管， 全血检测不需要离心，但病人抽血需要空 腹，才能减少食物蛋白的干扰。PS：凝血 常规可以与D2聚体同一管。当另作3P实验 建议单独抽一管。
二、血栓弹力实验
• 临床意义： • 血栓弹力图（TEG）是来观察血液凝固的动态和
血小板抗体检测在反复输血中的应用价值
血小板抗体检测在反复输血中的应用价值张玉朝【摘要】目的：探讨血小板抗体检测在反复输血中的应用价值。
方法选取南阳市中心血站2013年2月至2015年3月进行血小板抗体检测的200例反复输血患者，设为观察组；另外选取100例无输血史者，设为对照组，对两组患者进行血小板抗体检测并对结果进行对比分析。
结果观察组患者血小板抗体阳性率（37．5％）高于对照组（13．0％），差异有统计学意义（P ＜0．05）。
观察组输注无效率（85．0％）高于对照组（12．0％），差异有统计学意义（P ＜0．05）。
结论通过对反复输血患者进行血小板抗体检测能够有效评价血小板输注效果，为临床输血提供指导。
在对患者进行输血前建议先滤除白细胞以降低血小板抗体阳性率，预防和控制免疫性血小板输注无效的发生，保证输血的安全性。
【期刊名称】《河南医学研究》【年(卷),期】2016(025)003【总页数】2页(P448-449)【关键词】血小板;抗体;输血【作者】张玉朝【作者单位】南阳市中心血站河南南阳 473000【正文语种】中文目前，临床失血患者不断增加，血小板相关制品在医学范围内应用更加广泛，尤其是各种血液系统疾病和肿瘤患者的治疗。
但是从目前临床输血工作中发现，患者多次输血后可能产生血小板相关抗体，直接破坏了输入血小板的结构和功能，导致血小板输注无效。
因此，探究血小板抗体检测的应用价值对反复输血患者具有十分重要的意义[1]。
本文选取200例反复输血患者，进行血小板抗体检测，确保患者输血的安全，现具体分析如下。
1.1 一般资料选取南阳市中心血站2013年2月至2015年3月进行血小板抗体检测的200例反复输血患者(观察组)，患者均经5次以上输血，排除发热、感染和弥散性血管凝血等导致血小板输注无效的情况。
其中男120例，女80例；年龄为16～74岁，平均(42.1±3.2)岁；白血病43例，恶性肿瘤25例，全血小板减少40例，淋巴瘤37例，再生障碍性贫血55例。
血小板抗体检测及交叉配型
随着输血技术的发展、成分输血的推广,血小板输注是预防和治疗因血小板减少或血小板功能缺陷引起的出血、并可降低放疗和化疗后血小板减少导致出血的病死率的一种有效措施,近年来在临床上的应用日益普遍,但多次输血或随着输血技术的发展、成分输血的推广,血小板输注是预防和治疗因血小板减少或血小板功能缺陷引起的出血、并可降低放疗和化疗后血小板减少导致出血的病死率的一种有效措施,近年来在临床上的应用日益普遍,但多次输血或输多次及多人份的血小板可以导致血小板输注无效(platelet transfusion refractoriness, PTR),这也引起了全世界的关注。
血小板上的非特异性抗原中HLA-I类抗原及ABH抗原在血小板输注中具有临床意义。
供者与受者之间HLA抗原不合可能产生HLA抗体，而HLA抗体是导致PTR最常见的免疫性原因。
血小板特异性抗体（HPA抗体）常和HLA抗体共存，但作用不强，单独由血小板特异性抗体引起的PTR极其少见。
由于ABO、HLA、HPA等抗原不合是引起PTR的主要免疫因素，因此对于存在HLA和HPA抗体的患者，比较满意的治疗方案是选择ABO同型、血小板HLA和HPA交叉配型相合的单一供者的血小板输注，即相容性血小板输注，取代目前临床上普遍采用的随机血小板输注。
一、临床意义1. HLA抗体检测（1）对于血小板输注无效的病人，通过检测血小板HLA I类抗体，可以协助医生寻找病人血小板输注无效的原因。
（2）指导医生为HLA I类抗体阳性的病人选择合适的血小板输注方案，使宝贵的血液资源得到合理有效的利用。
（3）对于反复输注血小板的病人，定期测定血清中的HLA抗体可以预测血小板输注效果，并能及时发现导致病人血小板输注无效的免疫性因素。
2. 血小板交叉配型（1）区分病人血小板抗体的类型。
（2）对于免疫性血小板输注无效的病人，通过进行血小板配型，可以为病人选择相对应抗原阴性的血小板进行输注，从而提高血小板输注效果，并能减轻病人的经济负担。
五种血小板抗体检测方法的比较及其优化
磊铆戈学同等学力申请硕士学位论文（２００５届）五种血小扳抗体检测方法的比较及其优化Ｃｏｍｐａｌａｔｉｖｃｓｔｕｄｉｅｓｂｙｆｉｖｅｍｅｔｈｏｄｓａｎｄｍｏｄｉｆｉｃａｄｖｅａｐｐｌｉｃａｌｉｏｎ０１１ｄｃｔｃｃｔｉｏｎｏｆｐｌａｔｅｌｅｔａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ周晓华研究生姓名指导教师捌名申请学位级别专业名称——鱼——垂——堂—一研究方向血液免症论文提交日期２００５年１０月五种血小板抗体检测方法的比较及其优化第一部分２．１标本制备实验中所需血小板悬液采用本单位多人份Ｏ型献血员机采血小板，经ＴＥＮ洗涤两次后备用；患者标本及对照标本分离取血浆。
２．２ＭＡＳＰＡＴ法检测ＭＡＳＰＡＴ法也即单克隆抗体固相血小板抗体实验，其操作如下：调整血小板悬液为不低于Ｏ．１４×１０８／Ｌ。
向微孔中加入５０ｕｌ血小板悬液，１０００ｒｐｍ离心５ｍｉｎ。
用ＰＢＳ洗涤６次，每次洗涤时旋转并轻摇微孔板。
加入２滴ＬＩＳＳ试剂，再加入５０川被检血浆，轻摇１０ｓｅｃ，３７。
Ｃ孵育３０ｍｉｎ。
用ＰＢＳ洗涤６次，立即加５０ｌａｌＭＡＳＰＡＴ抗人ＩｇＧ，并加入１滴指示细胞，轻轻震荡，１０００ｒｐｍ离心５ｍｉｎ看结果。
如果指示红细胞聚集在微孔中部，表示阴性结果，如果指示红细胞结合到血小板层上，表示阳性结果。
见图１．２所示图１．２ＭＡＳＰＡＴ法检测血小板抗体结果（指示红细胞聚集在微孔中部，表示阴性结果，指示红细胞结合到血小板层上平铺散开，表示阳性结果。
）２３４５６图２．２两种微柱凝胶法改良方法检Ｎｎｍｄ，板抗体效果比较图（１、２为阴性对照，３、４为改良方法Ｉ所得结果，５、６为改良方法ＩＩ所得结果）结果微柱凝胶法的结果判读：如红细胞凝集在胶表面或凝胶中，则结果为阳性，如红细胞沉降于凝胶管底部，则结果为阴性；ＭＡＳＰＡＴ法结果判读：如果指示红细胞聚集在微孔中部，表示阴性结果，如果指示红细胞结合到血小板层上，表示阳性结果。
微柱凝胶原检测法及两种改良方法与ＭＡＳＰＡＴ法的结果比较见表２．１、表２．２。
血小板抗体检测专家共识
血小板抗体检测专家共识关键词：血小板抗体临床输血专家共识2016年7月25日，经国家标准化管理委员会批准，输血医学增设为临床医学二级学科。
输血医学的重要职能就是保障和指导临床安全、科学、精准输血，减少输血不良反应。
血小板具有复杂的抗原系统，包括与其它组织或细胞所共有的抗原，如ABO血型系统抗原和人类白细胞抗原（HLA）；血小板特异性抗原（HPA）；与单核/巨噬细胞及有核红细胞共有的GPⅣ/CD36抗原等。
妊娠、输血、器官移植等均可诱导机体产生血小板抗体，包括HLA抗体、HPA抗体和CD36抗体等。
这些抗体可以引起免疫性血小板输注无效（PTR）、胎儿和新生儿同种免疫性血小板减少症（FNAIT）、非溶血性发热反应（NHTR）、输血后紫癜（PTP）等。
红细胞抗体已经成为临床输血前免疫学检测的常规项目，而输血前血小板抗体检测并未得到临床充分重视。
目前，血小板输注的策略主要采用随机输注方式，反复输血及多次妊娠者容易产生血小板抗体，引起PTR、FNAIT等疾病，以及NHTR、PTP等输血不良反应。
为保障临床输血安全和疗效，预防PTR和输血不良反应，节约血液资源，诊断血小板抗体相关免疫性疾病，现形成血小板抗体检测专家共识，内容如下。
1 血小板抗体检测的临床意义1.1 免疫性血小板输注无效（PTR）诊断：血小板抗体是免疫性PTR的主要原因。
一般患者输注血小板后血小板抗体的阳性率为8.2%～60.0%，肿瘤患者和干细胞移植患者血小板抗体阳性率为12.6%～ 66.0%[8-10]，这些抗体是导致免疫性PTR的主要因素。
对患者进行血小板抗体筛查和鉴定，可以诊断免疫性PTR。
对血小板抗体阳性患者输注血小板交叉配合的血小板，可有效预防免疫性PTR。
1.2 HLA抗体导致NHTR诊断：NHTR在输血反应中占比最大，输注红细胞的NHTR的发生率约为0.08%～6.0%，输注血小板NHTR的发生率可高达20.3%～70.0%。
血小板实验流程
血小板抗体检测实验操作流程
【实验步骤】
1、试剂盒平衡至室温（18-25℃）
2、将25倍的浓缩洗涤液用蒸馏水稀释成工作液（浓缩洗液与蒸馏水1:24稀释）
3、制备血小板悬液（将冻干血小板复溶后直接使用）；
每支加500ul生理盐水→室温静置5分钟后混匀（现用现制备）；
1滴（50ul）血小板抗体筛选细胞
10秒钟
5分钟(程序1)
3次
2滴（100ul）低离子强度溶液（紫色液体）
50ul患者样本；阴性对照（绿色）、阳性对照（红色）
℃水浴箱孵育30分钟（气浴35分钟）
5次
1滴（50ul）抗人球IgG
1滴（50ul）指示红细胞
5分钟（程序2）后即可观察结果。
【结果判定】
1、阳性结果：指示红细胞平铺在反应孔底部表面；若指示红细胞只结合到部分孔底有平铺趋势，细胞外沿有不规则毛刺，并且结合的区域比阴性对照大为弱阳性。
表明患者血清或血浆中含有血小板抗体；或血小板交叉配型不合。
2、阴性结果：指示红细胞在反应孔底部中央形成红细胞聚集或红细胞聚集区出现少许中空形状但聚集区外沿光滑。
表明患者血清或血浆中不含血小板抗体；或血小板交叉配型相合。
血小板抗体检测及交叉配型反应格局
－±1＋2＋3＋4＋如果结果可疑，或阳性对照和/或阴性对照未出现正确结果，则必须重新检测。
两种血小板抗体检测技术的方法学比较
两种血小板抗体检测技术的方法学比较胡宁克;陆欢平【摘要】目的采用简易致敏红细胞血小板血清学试验(SEPSA)和微柱凝胶免疫分析技术(MGIA)检测血小板抗体,并对两种方法的结果进行比较.方法选择100例血小板减少症患者及20例健康体检者(正常对照组),采用SEPSA法和MGIA法分别检测血小板抗体.结果采用SEPSA法在100例血液病患者中共检出血小板抗体阳性8例,阳性率为8.0％；MGIA共检出血小板抗体阳性9例,阳性率为9.0％.两种方法结果的差异无统计学意义(x2=0.02,P＞0.05).两种方法检测结果均显示,血小板抗体阳性率与血小板输注次数有关(SEPSA:x2=23.66,P＜0.01；x2=20.02,P＜0.01).结论SEPSA法血小板抗体检出率与MGIA法基本一致,但MGIA法具有简便、快速、易于标准化等特点,更适合于批量标本的临床初筛试验.【期刊名称】《临床输血与检验》【年(卷),期】2012(014)003【总页数】3页(P239-241)【关键词】血小板抗体;SEPSA;MGIA;血小板减少症【作者】胡宁克;陆欢平【作者单位】200011 上海变通大学医学院附属第九人民医院检验科;200011 上海变通大学医学院附属第九人民医院检验科【正文语种】中文【中图分类】R331.1+43;R558+.2血小板输注对预防和治疗因血小板减少或功能缺陷引起的出血是一种有效的治疗手段。
随着成分输血技术的发展、机采血小板的普及、联合化疗及骨髓移植等在临床上的大量应用，需要血小板输注的患者日益增多。
血小板减少症患者接受血小板治疗，有助于减少出血的危险，但反复输注血小板后，有可能被血小板同种免疫致敏，容易产生血小板抗体而引起血小板输注无效(refractoriness to platelet transfusion，RPT)，随着输注次数增多，RPT发生率将会升高[1]。
因此，对反复输血和输注血小板的患者进行血小板抗体检测相当重要。
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去白细胞技术
• 了解与白细胞相关的输血副作用 • 1、同种异体反应 • 非溶血性发热反应 • 血小板输注无效 • 输血相关的移植物抗宿主病 • 2、病原体的输血传播 • 3、免疫抑制 • 术后感染、癌症复发、激活潜伏病毒
引起的输血副作用的白细胞阈值
• 1、非溶血性发热反应 5*108/u
• 2、输血相关免疫抑制 5*106/u
案例
• 常州市某医院一男性患者，64岁，因为骨折入 院，需要输血，交叉配血后主侧不合。
ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ• 谱细胞检查：
• 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 自身
IS - - - - - - - - - - -
IAT - 1+s - 1+1+ - - 1+ - 1+ -
• 检出IgG型抗-E抗体，经临床调查后，患者一 直强调无输血史。后经过多次询问后，患者30 年前因为打猎，腿部中枪，曾经输过血。
• 在洗涤中同时去除了钾、氨、乳酸、抗凝 剂和微小凝块等，血小板亦随血浆被去除 。
• 用生理盐水洗涤掉白细胞及血浆，能显著 降低输血反应。
适应症
• 2.3 适应证：
• 除上述红细胞制剂的适应证外，还有以下适应证
• 2.3.1 输入全血或血浆后发生过敏反应的患者。
• 2.3.2 自身免疫性溶血性贫血患者。
科学合理用血的目的
• 1.提高血液的携氧能力 • 2.纠正止凝血功能异常 • 3.抗感染治疗
提高血液制品安全性的方法
• 1、洗涤技术 • 去除绝大部分非红细胞部分，如洗涤红细胞等 • 2、去除白细胞技术
• 减少白细胞的数量，如少白红细胞、去白红细胞 、去白血小板等
• 3、病毒灭活技术
• 破坏病毒核酸及病毒脂质包膜和蛋白，如病毒灭 活血浆等
案例
• 常州某医院，患者，35岁，因急性贫血入院，入 院时血红蛋白25g/L，请求输血，询问病史，值班 医生介绍这名患者入院前，曾在乡镇卫生院输注 了头孢类药物，感觉身体不适，全身乏力，而且 患者主诉长期处于贫血状态，结合实验室检查初 步诊断为由药物性抗体引起急性自身溶血性贫血 。
• 本实验室提供输血方案：1、暂时不给予输血；2 、给予停药或者换其他药物进行治疗；3、保持静 脉畅通，保证进一步治疗的需要；4、每隔2-4小 时进行血常规检测，观察血液各项检测指标，特 别是血红蛋白含量。
案例
• 常州市某医院一对双胞胎患儿，出生1天有 余，因为急性黄疸，抽取血样送本实验室 进行检查。
• 检查记录：
• 多抗 IS 2+s
抗-IgG 2+
抗-C3d -
• 抗筛实验：
•Ⅰ
Ⅱ
Ⅲ 自身
• IS 3+s
-
3+ 2+
• 谱细胞检查： • 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 自身
IS - - - - - - - - - - -
• 4、血液辐照技术
• 灭活淋巴细胞活性，如辐照红细胞、辐照血小板 等
加强对患者的临床调查
• 检查前应尽可能了解、核对受血者的有关 资料，包括受血者姓名、年龄、性别、床 号、种族、临床诊断、输血史、药物史、 妊娠史，特别是以往输血反应的记录，等 等。这些资料是十分珍贵的信息，有助于 解决可能出现的血清学问题。
IAT - 3+ 2+s - 2+ 3+ - 2+s - - 2+
初步鉴定患儿体内含有IgG型抗-E抗体。随即 筛选E阴性的0.5u新鲜洗涤红细胞供其输注。 这个案例我们值得反思的是，在询问病史的 时候，我们没能够详细追问，孕妇在做产检 的时候血清中已经查出抗-E抗体，如果在急 救过程中我们能争取抢救的时间。
案例
• 予此建议主要考虑：1、患者产生自身抗体，此时 输血有加重溶血的可能；2、停止用药或者换药， 可以减少药物抗体继续产生的概率；3、患者长期 处于贫血状态，短时间的急性溶血性贫血，患者 可以耐受；4、观察血红蛋白，有助于进一步治疗 ，如果机体能够清除药物抗体，刺激骨髓造血可 有效改善贫血状态；5、如果患者血红蛋白经过观 察不能升高，在综合患者生命安全与输血风险考 虑的情况下，还是可以输注洗涤红细胞悬液，前 提是静脉必须保持畅通。
• 检查记录：
• 多抗
IS 4+
• 抗筛实验：
•Ⅰ
Ⅱ
Ⅲ 自身
• IS 4+
4+
4+ 4+
• 谱细胞检查：
• 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 自身
IS - - - - - - - - - - -
IAT 4+ 4+ 4+ 4+ 4+ 4+ 4+ 4+ 4+ 4+ 4+
• 经检查，患者出现自身抗体，直抗试验强 阳性，排除输血史和药物过敏情况，初步 诊断为自身免疫性溶血性贫血，由于当时 患者精神状况比较差，需要输血治疗，在 考虑输血风险和生命安全的情况下，结合 患者的实际情况，建议洗涤红细胞4U予以 间隔时间输注，输血速度要慢，可以同时 给予吸氧。后血红蛋白提高至56g/L，精神 有所好转。
输血的疗效与风险同在
• 输血是把双刃剑，它是现代医疗的重要手 段，在临床上能拯救生命、治疗疾病，同 时又可能给患者带来风险，引起一系列传 染病和免疫性疾病。为保障输血安全，各 国均建立多项法律、法规，并研发新的检 测系统和方法等，旨在提高输血安全，有 效实现其临床意义。
• 在临床方面，我们需要尽量避免不必要的 输血，越来越多的用血安全事件是由于临 床错误用血引起。病人是否需要输血、需 要输注何种血制品，都必须根据实验室诊 断结果，结合各种输血的适应症进行判断 。
• 2.3.3 高钾血症及肝肾功能障碍需要输血的患者。
• 2.3.4 由于反复输血已产生白细胞或血小板抗体引 起输血发热反应的患者也可试用本制品。
案例
• 常州市某医院一血液科患者，男，75岁， 血红蛋白45g/L，长期处于贫血状态，因交 叉配血试验不合，送本站实验室检查。
• 经询问后患者无输血史，无用药过敏史， 最近无服药史，头晕乏力入院。
• 值班医生接受了建议，24小时后经过血常规检测 ，患者血红蛋白升到45g/L。经过48小时患者血红 蛋白已升到65g/L。
洗涤红细胞悬液
• 制品性质：采用物理方式在无菌条件下将 保存期内的全血、悬浮红细胞血液制剂用 大量静脉注射用0.9%的生理盐水洗涤3-6次 ，去除绝大部分非红细胞部分。
• 保存期：4-6℃保存24小时。