第十四章 真菌检验技术.pptx
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微生物检验真菌PPT课件
(2)、分离培养与鉴定：将标本接种于沙氏培养基上25℃培养，2-3d开始 生长，初为白色湿润的酵母型菌落，以后变为淡咖啡色至深褐色。37℃ 培养2-3d，可形成乳白色或淡褐色酵母型菌落。
（3）、对碘化钾、伊曲康唑、特比萘芬 等药物敏感。
第53页/共118页
脚气
• 脚气是一种常见的真菌感染性皮肤病。 • 多见于趾间,足底及足缘,有深在性水疱,糜烂及鳞屑,伴有瘙痒等症状.多见于成人,
• 毛癣菌属（Trichophyton）属半知菌亚门－丝孢 菌目－丛梗孢菌科，有20余种，其中14种能引起 人和动物的感染。
• 临床上常见的有
红色毛癣菌(trichophyton rubrum)
须癣毛癣菌(,又称石膏样毛癣菌)
许兰毛癣菌(,又称黄癣菌)
紫色毛癣菌（）
第28页/共118页
毛癣菌：菌落灰白、红、橙或棕色, 表面呈绒毛状、粉粒状或蜡样。 大分生孢子细长棒状薄壁。菌丝有 螺旋状、球拍状、鹿角状和结节状
作用 真菌繁殖结构
细菌休眠结构，
抵御不良环境
低抗力 不强，加热60~70℃ 强 ， 有 的 可 耐
短时间即可死亡 100℃数小时
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Categories of spore
sexual spore: 分生孢子
asexual spore 叶状孢子
孢子囊孢子
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大分生孢子
小分生孢子 芽生孢子
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（二）、真菌抗原检测
• 白假丝酵母菌甘露聚糖抗原、隐球菌多糖荚膜抗原、组织胞浆菌循环多糖抗原 • 常用的方法有胶乳凝集试验、ELISA、半定量放射免疫法
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（三）、真菌的分离培养
真菌实验室检测技术新进展护理课件
定期组织国际学术交流和培训活动，分享最新的 研究成果和实践经验，提高全球真菌实验室检测 技术人员的专业水平。
05
护理人员在真菌实验室检测技术 中的角色和责任
提高对真菌实验室检测技术的认识和理解
了解真菌实验室检测技术的目的和意义
护理人员应了解真菌实验室检测技术在诊断和治疗真菌感染中的重要作用，以及其对患者 预后的影响。
开发新型检测技术和方法
下一代测序技术
01
利用下一代测序技术对真菌进行全基因组测序或宏基因组测序
，快速准确地鉴定和分型真菌。
代谢组学和蛋白质组学技术
02
利用代谢组学和蛋白质组学技术分析真菌的代谢产物和蛋白质
表达，为真菌的鉴定和分型提供新的手段。
生物传感器技术
03
利用生物传感器技术对真菌进行快速、简便的检测，提高检测
学习真菌实验室检测技术的原理和方法
护理人员需要了解真菌实验室检测技术的原理、方法及操作流程，以便更好地配合实验室 工作。
掌握解读检测结果的能力
护理人员应具备解读真菌实验室检测结果的能力，能够根据结果判断患者是否感染真菌及 感染的具体病菌种类。
规范操作和维护实验室安全
遵守实验的规章制度，确保实验室内环境清 洁、卫生，符合安全要求。
护理人员应及时向医生反馈患者的病情变化和实验室检测结果，以便医
生根据情况调整治疗方案。
02
与其他护理人员协作
在真菌感染患者的护理过程中，护理人员之间应保持密切协作，共同完
成患者的诊断和治疗工作。
03
共同参与患者教育
护理人员可与医生、实验室技术人员共同参与患者教育活动，向患者及
家属介绍真菌感染的预防和注意事项，提高患者的自我保护意识和能力
05
护理人员在真菌实验室检测技术 中的角色和责任
提高对真菌实验室检测技术的认识和理解
了解真菌实验室检测技术的目的和意义
护理人员应了解真菌实验室检测技术在诊断和治疗真菌感染中的重要作用，以及其对患者 预后的影响。
开发新型检测技术和方法
下一代测序技术
01
利用下一代测序技术对真菌进行全基因组测序或宏基因组测序
，快速准确地鉴定和分型真菌。
代谢组学和蛋白质组学技术
02
利用代谢组学和蛋白质组学技术分析真菌的代谢产物和蛋白质
表达，为真菌的鉴定和分型提供新的手段。
生物传感器技术
03
利用生物传感器技术对真菌进行快速、简便的检测，提高检测
学习真菌实验室检测技术的原理和方法
护理人员需要了解真菌实验室检测技术的原理、方法及操作流程，以便更好地配合实验室 工作。
掌握解读检测结果的能力
护理人员应具备解读真菌实验室检测结果的能力，能够根据结果判断患者是否感染真菌及 感染的具体病菌种类。
规范操作和维护实验室安全
遵守实验的规章制度，确保实验室内环境清 洁、卫生，符合安全要求。
护理人员应及时向医生反馈患者的病情变化和实验室检测结果，以便医
生根据情况调整治疗方案。
02
与其他护理人员协作
在真菌感染患者的护理过程中，护理人员之间应保持密切协作，共同完
成患者的诊断和治疗工作。
03
共同参与患者教育
护理人员可与医生、实验室技术人员共同参与患者教育活动，向患者及
家属介绍真菌感染的预防和注意事项，提高患者的自我保护意识和能力
《真菌检验》课件
真菌检验的主要方法
1
采样
选择适当的采样方法和工具以收集环境中的真菌样品
2
培养
将采样得到的样品培养在适当的培养基上以促使真菌生长
3
识别
利用显微镜和分类学知识对培养得到的真菌进行鉴定
真菌检验的应用领域
室内空气质量
了解室内真菌水平以评估空气质量和呼吸健 康风险
环境研究
研究真菌在生态系统中的角色和影响，以改 善环境保护
真菌检验的发展趋势
自动化技术
利用自动化设备和软件提高 真菌检验的准确性和效率
分子生物学
应用基因检测和测序技术以 更快速、精确地鉴定真菌，发现新的应用领域
总结与展望
真菌检验是一项关键的环境科学技术 随着技术的不断发展，真菌检验将在更多领域发挥重要作用 感谢您参与我们的《真菌检验》PPT课程
食品工业
监测食品加工过程中的真菌污染以确保食品 安全
医学诊断
帮助诊断真菌感染疾病，并确定适当的治疗 方法
真菌检验的优缺点
• 优点：提供精确的真菌信息，有助于保护健康和环境 • 优点：可以快速鉴定真菌，提高工作效率 • 缺点：需要专业知识和设备，成本较高 • 缺点：某些真菌难以培养和鉴定，可能导致结果不确定
真菌检验
欢迎来到《真菌检验》PPT课件 在本课程中，我们将探讨真菌检验的基本概念和实际应用案例
什么是真菌检验
真菌检验是一种用于检测和鉴定环境中真菌的方法 通过采样、培养和识别技术，我们可以确定真菌的种类和数量
为什么需要真菌检验
真菌是一类常见的微生物，广泛存在于我们的环境中 虽然大多数真菌对人类无害，但某些真菌可能引发健康问题 通过真菌检验，我们可以评估环境质量，并采取必要的控制措施
真菌及其毒素的检验幻灯片PPT
• 2．丝状菌落：菌落蔬松，呈棉絮状，绒毛状或粉末状， 一部分菌丝向上空生长并形成孢子，另一部分菌丝伸入培 养基下层，培养基的正面和背面可显示各种不同颜色。。
• 3．酵母样菌落：外观性状同酵母型菌落，但在菌落表面 除见生芽细胞外，还有假菌丝伸入培养基中，念珠菌。
• 四 产毒霉菌的检验
• 1．样品的采取 • （1）患病畜禽的病变组织，无菌采取脓汁、肺、肾、肝
真菌及其毒素的检验幻灯片PPT
本PPT课件仅供大家学习使用 请学习完及时删除处理 谢谢！
• 一 真菌的形态特征 • 真菌细胞 • 单细胞 单细胞呈园或椭园形，常见于酵母和类酵母菌， • 多细胞 多细胞呈丝状，交织在一起成菌丝体，常见于霉菌。
• 1.酵母：
• 大多数为单细胞，卵园形，园形，园栓形或柠檬形，
• 无隔菌丝：菌丝为长管状，单细胞，细胞质内含多个核， 其生长过程只表现为菌丝的延长和细胞核的裂殖增多，以 及细胞质的增加，如毛霉，根霉，犁头霉。
• 有隔菌丝：为大多数的。菌丝由横隔膜分隔成成串的多细 胞，每个细胞内含有一个或多个细胞核，有些菌丝外观看 起来像多细胞，但横隔膜上有小孔，使细胞质或细胞核， 可自由流通，每个细胞功能也相同，如青、曲、白地霉。
• 三 真菌的培养
• 真菌的生长对营养的要求不高，一般马龄薯葡萄糖琼脂、 沙堡弱、花生c-d，察氏，保存菌种用察氏培养基。
• 霉菌培养温度22～28℃，PH6.5～6.8最适宜，但它可在PH 1.7～9.3的环境中生长，一般在温度稍高，湿度较大的环 境中生长。
• 真菌的菌落有以下三种类型：
• 1．酵母型菌落：类似于一般菌落，菌落光滑，湿润，柔 软致密，显微镜检查可见圆形或椭圆形的生芽细胞，多见 于酵母菌、隐球菌。
• 2．样品的处理与分离培养
• 3．酵母样菌落：外观性状同酵母型菌落，但在菌落表面 除见生芽细胞外，还有假菌丝伸入培养基中，念珠菌。
• 四 产毒霉菌的检验
• 1．样品的采取 • （1）患病畜禽的病变组织，无菌采取脓汁、肺、肾、肝
真菌及其毒素的检验幻灯片PPT
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• 一 真菌的形态特征 • 真菌细胞 • 单细胞 单细胞呈园或椭园形，常见于酵母和类酵母菌， • 多细胞 多细胞呈丝状，交织在一起成菌丝体，常见于霉菌。
• 1.酵母：
• 大多数为单细胞，卵园形，园形，园栓形或柠檬形，
• 无隔菌丝：菌丝为长管状，单细胞，细胞质内含多个核， 其生长过程只表现为菌丝的延长和细胞核的裂殖增多，以 及细胞质的增加，如毛霉，根霉，犁头霉。
• 有隔菌丝：为大多数的。菌丝由横隔膜分隔成成串的多细 胞，每个细胞内含有一个或多个细胞核，有些菌丝外观看 起来像多细胞，但横隔膜上有小孔，使细胞质或细胞核， 可自由流通，每个细胞功能也相同，如青、曲、白地霉。
• 三 真菌的培养
• 真菌的生长对营养的要求不高，一般马龄薯葡萄糖琼脂、 沙堡弱、花生c-d，察氏，保存菌种用察氏培养基。
• 霉菌培养温度22～28℃，PH6.5～6.8最适宜，但它可在PH 1.7～9.3的环境中生长，一般在温度稍高，湿度较大的环 境中生长。
• 真菌的菌落有以下三种类型：
• 1．酵母型菌落：类似于一般菌落，菌落光滑，湿润，柔 软致密，显微镜检查可见圆形或椭圆形的生芽细胞，多见 于酵母菌、隐球菌。
• 2．样品的处理与分离培养
真菌学检验ppt课件
外阴炎。男性念珠菌龟头炎、包皮炎。
❖ 体弱婴儿鹅口疮；
❖ 假丝酵母菌性肠炎、肺炎等。
❖ AIDS最常见并发症之一。
白假丝酵母菌皮肤黏膜感染 （鹅口疮）
67
微生物特性：
： 典 型❖类圆酵形母或型 卵菌 落园，形表；面 光 滑 ， 呈
奶油色，有酵母气味。
， 可 看❖到出表芽层方为 式卵 圆繁形殖芽，生在细组胞织， 底 假 菌 丝 。内可见芽生孢子、假菌
观察真菌菌落的色素、鉴别深 部真菌，使二相型真菌呈酵母 型
刺激真菌孢子形成
血琼脂
多数病原性真菌
皮肤真菌实验培养基（DTM） 分离皮肤真菌
38
❖ 平皿培养：只能培养生长繁殖较快的真菌; ❖ 大试管培养:用于皮肤癣菌的培养和真菌菌种的保存; ❖ 玻片培养(微量、小培养):可用于真菌菌种的鉴定。
39
观察菌落形态应注意：
起（如灰指甲可由毛癣菌或表皮癣菌引起）
51
红色毛癣菌
52
53
甲癣
54
微生物学检验
1、标本采集：70%乙醇消毒
55
2、直接镜检：
10%KOH（皮屑）； 25%KOH或 NaOH + 5%甘油（指甲）；
透明、有隔、有分支的菌丝及成链的关节孢子 发外型感染或发内型感染
56
57
断发毛癣菌引起的 发内型感染的头发
丝；
68
❖ 假菌丝 (pseudohypha): 指酵母菌菌种进行一 连串的芽殖后，长大的子细胞仍不脱落分离， 并继续出芽，细胞成串排列，在分隔处缢缩, 这种菌丝状的细胞串就称为假菌丝。
微❖ 在生玉物米特粉性培养：基中可产生假菌丝和厚膜孢子。
70
厚膜孢子形成试验
微生物检验
❖ 体弱婴儿鹅口疮；
❖ 假丝酵母菌性肠炎、肺炎等。
❖ AIDS最常见并发症之一。
白假丝酵母菌皮肤黏膜感染 （鹅口疮）
67
微生物特性：
： 典 型❖类圆酵形母或型 卵菌 落园，形表；面 光 滑 ， 呈
奶油色，有酵母气味。
， 可 看❖到出表芽层方为 式卵 圆繁形殖芽，生在细组胞织， 底 假 菌 丝 。内可见芽生孢子、假菌
观察真菌菌落的色素、鉴别深 部真菌，使二相型真菌呈酵母 型
刺激真菌孢子形成
血琼脂
多数病原性真菌
皮肤真菌实验培养基（DTM） 分离皮肤真菌
38
❖ 平皿培养：只能培养生长繁殖较快的真菌; ❖ 大试管培养:用于皮肤癣菌的培养和真菌菌种的保存; ❖ 玻片培养(微量、小培养):可用于真菌菌种的鉴定。
39
观察菌落形态应注意：
起（如灰指甲可由毛癣菌或表皮癣菌引起）
51
红色毛癣菌
52
53
甲癣
54
微生物学检验
1、标本采集：70%乙醇消毒
55
2、直接镜检：
10%KOH（皮屑）； 25%KOH或 NaOH + 5%甘油（指甲）；
透明、有隔、有分支的菌丝及成链的关节孢子 发外型感染或发内型感染
56
57
断发毛癣菌引起的 发内型感染的头发
丝；
68
❖ 假菌丝 (pseudohypha): 指酵母菌菌种进行一 连串的芽殖后，长大的子细胞仍不脱落分离， 并继续出芽，细胞成串排列，在分隔处缢缩, 这种菌丝状的细胞串就称为假菌丝。
微❖ 在生玉物米特粉性培养：基中可产生假菌丝和厚膜孢子。
70
厚膜孢子形成试验
微生物检验
真菌实验室技术课件
方块法
小钢圈法
平皿培养
试管培养
方块小培养法
钢圈小培养法
真菌病病理检查法
标本切片的制作 标本组织染色法 真菌在组织中的形态
真菌病血清学检查法
真菌抗原检测
隐球菌乳胶凝集试验（隐球菌荚膜多糖抗原） G试验（β-1,3-葡聚糖试验）
主要检测念珠菌、曲霉侵袭性感染，及一些少见真菌（如镰 刀菌、毛孢子菌等）感染。
菌的检测困难
真菌药敏试验的方法
微量液体稀释法
是多量液体稀释法的改良，将试管改为96孔 微孔板，标本及试剂体积减少至0.2ml，培养时间 也缩短至24小时，并以肉眼或分光光度计判断终 点。
优点：简单易行，省时，损耗少 缺点：终点难以确定，标准化问题， 对丝状真菌的检测困难。
微量液体稀释法
琼脂扩散法
ROSCO纸片法
真菌药敏试验的方法
E试验（E-test）法
为一种琼脂扩散法的改良，采用标准培养基，将
待测菌液涂抹于培养基表面后，臵入含有以梯度浓度 排列的药液条，经孵育后观察药液条周围出现的椭圆
形抑菌区，以达到抑菌的最小药物浓度为MIC终点。
优点：简单易行，判断抑制终点清晰，可以进行 定量测定
合成培养基（如察氏培养基）
常规培养基：沙氏琼脂（SDA）、改良沙氏琼脂（SAB）、
脑心浸膏琼脂（BHIA）、脑心浸膏肉汤（BHIB）、
马铃薯葡萄糖琼脂（PDA）等
抗生素：常用氯霉素（50μg/ml）、放线菌酮（500 μg/ml）
真菌培养鉴定
培养方法
试管培养 平皿培养（大培养） 小培养 玻片法
缺点：价格昂贵
E-test 法
真菌的实验诊断PPT.
17
092
18
区分酵母样或霉样菌落
19
Aspergillus fumigatus - Colonial Morphology, Sabouraud葡萄糖琼脂培养基烟曲霉菌
20
Aspergillus fumigatus - Microscopic Morphology, 100x Lactophenol cotton blue (单列) 分生孢子头、分生孢 子梗、顶囊、瓶梗、分生孢子
真菌感染的危险因素：
中心静脉插管 尿道插管 广谱抗生素 气管插管 腹部外科 肠胃外营养 营养不良 住院时间
感染之前定殖
1
医学重要的酵母菌分类
Segal B, Bow EJ, Menichetti F: Infect Dis Clin N Am 2002;16:935-64
条件致病的酵母菌
21
Aspergillus flavus - 在Sabouraud葡萄糖琼脂黄曲霉菌 生长快黄色表面粉末状
22
Aspergillus flavus - Microscopic Morphology, 100x Lactophenol cotton blue 黄曲霉菌( 二列为主)分生孢子头、 分生孢子梗、顶囊、瓶梗、梗基、分生孢子
23
Penicillium species - Colonial Morphology, Sabouraud agar 青霉属 气生菌丝密毯状
24
1.6.1设定标准 1.5.3留心简历中的空白时间和前后矛盾之处 2.6.4感谢应聘者 （2）如果摔伤后，在四肢部位有大血管破裂，出血量很能多，应马上找些橡皮管、布带、绷带作为止血带在大腿根部上肢腋窝处勒紧 止血。 4、总结
6
092
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区分酵母样或霉样菌落
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Aspergillus fumigatus - Colonial Morphology, Sabouraud葡萄糖琼脂培养基烟曲霉菌
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Aspergillus fumigatus - Microscopic Morphology, 100x Lactophenol cotton blue (单列) 分生孢子头、分生孢 子梗、顶囊、瓶梗、分生孢子
真菌感染的危险因素：
中心静脉插管 尿道插管 广谱抗生素 气管插管 腹部外科 肠胃外营养 营养不良 住院时间
感染之前定殖
1
医学重要的酵母菌分类
Segal B, Bow EJ, Menichetti F: Infect Dis Clin N Am 2002;16:935-64
条件致病的酵母菌
21
Aspergillus flavus - 在Sabouraud葡萄糖琼脂黄曲霉菌 生长快黄色表面粉末状
22
Aspergillus flavus - Microscopic Morphology, 100x Lactophenol cotton blue 黄曲霉菌( 二列为主)分生孢子头、 分生孢子梗、顶囊、瓶梗、梗基、分生孢子
23
Penicillium species - Colonial Morphology, Sabouraud agar 青霉属 气生菌丝密毯状
24
1.6.1设定标准 1.5.3留心简历中的空白时间和前后矛盾之处 2.6.4感谢应聘者 （2）如果摔伤后，在四肢部位有大血管破裂，出血量很能多，应马上找些橡皮管、布带、绷带作为止血带在大腿根部上肢腋窝处勒紧 止血。 4、总结
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真菌检验【送检】 ppt课件
e) 标本保存方式不恰当或保存时间超过规定； g) 血 培 养 瓶 破 碎 、 渗 漏 或 过 有 效 期 ； i) 稀薄唾液或低倍镜下上皮细胞数大于 10
j) 尿液采集未清洗会阴部及尿道口。
ppt课件
29
参 考 文 献 ： [1] 秦 启 贤 主 编 ： 临 床 真 菌 学 . 复 旦 大 学 出 版 社 ， 2001. [2] 王 端 礼 主 编 ： 医 学 真 菌 学 － 实 验 室 检 验 规 范 . 人 民 卫 生 出 版 社 ， 2005. [3] 吴 绍 熙 主 编 ： 现 代 医 学 真 菌 检 验 手 册 （ 第 二 版 ） . 中 国 协 和 医 科 大 学 出 版 社 ， 2005. [4] 周 庭 银 ， 倪 语 星 。 临 床 微 生 物 检 验 标 准 化 操 作 . 上 海 科 学 技 术 出 版 社 ， 2009. [5] 周 庭 银 . 临 床 微 生 物 学 诊 断 与 图 解 （ 第 三 版 ） . 上 海 科 学 技 术 出 版 社 ， 2012. [6] James V. Manual of Clinical Microbiology [M], 10th ed. Washington, DC: ASM Press, 2011. [7] Sybren de Hoog, Guarro J, Gene J, et al. Atlas of clinical fungi [M]. CBS,Electronic Version 3.1, 2011. [8] CLSI, Clinical and Laboratory Standards Institute, Reference Method for Broth Dilution Antifungal Susceptibility Testing of Yeasts, 2009, M27-A3, vol.28, No14. [9] CLSI, Clinical and Laboratory Standards Institute, Reference Method for Broth Dilution Antifungal Susceptibility Testing of Yeasts, 2012, M27-S4, vol.28, No15. [10] CLSI, Clinical and Laboratory Standards Institute, Reference Method for Broth Dilution Antifungal Susceptibility Testing of Filamentous Fungi, 2009, M38-A2, vol.28, No16. [11] CLSI, Clinical and Laboratory Standards Institute, principles and procedures for blood cultures; approved guideline, 2009, M47-A2, vol.28, No16. [12] EUCAST.The European Committee on Antimicrobial Susceptibility Testing.Breakpoint tables for interpretation of MICs. Version 6.1,2013. [13] 抗酵样真菌药物敏感性试验肉汤稀释法，中华人民共和国行业标准， WS/T,421 -2013,2013-07-16 发布， 1-14 [14] 抗丝状真菌药物敏感性试验肉汤稀释法，中华人民共和国行业标准， WS/T,411-2013,2013-06-03 发布， 1-14
真菌ppt课件
毛霉菌
引起毛霉病，主要侵犯血管，常见于鼻脑毛霉病、肺胃毛霉病、皮肤毛霉病和播 散性毛霉病，病情凶险，死亡率高。
05
真菌与人类关系探 讨
食用真菌营养价值及开发利用现状
营养价值
食用真菌富含蛋白质、多糖、氨基酸等营养成分，具有提高 免疫力、抗肿瘤等功效。
开发利用现状
目前，市场上已有多种食用真菌产品，如蘑菇罐头、香菇酱 等，深受消费者喜爱。
灭菌处理。
真菌接种
02
从菌种保藏中心或实验室保藏的菌种中挑选目标真菌，进行接
种操作。
实验器材准备
03
准备显微镜、无菌操作台、接种环、培养皿等实验所需器材，
并进行清洗和消毒处理。
实验步骤和注意事项说明
无菌操作
在实验过程中，严格遵守无菌操作规程，避免杂菌污染。
培养条件控制
根据目标真菌的生长特性，控制好培养温度、湿度和光照等条件 ，确保真菌正常生长。
THANKS
感谢您的观看
观察真菌菌落、菌丝、孢子等 形态学特征进行分类鉴定。
培养特性
根据不同真菌在特定培养基上 的生长特性进行鉴定。
生理生化特性
利用真菌的生理生化反应特点 进行分类鉴定。
生物学特性
通过研究真菌与其他生物的互 作关系进行分类鉴定。
现代分子生物学技术在真菌分类鉴定中应用
DNA序列分析
通过比较真菌DNA序列差异进 行分类鉴定。
真菌繁殖方式及特点
无性繁殖
包括分生孢子、芽孢子等，繁殖 速度快，易产生变异。
有性繁殖
通过配子囊结合形成担子或子囊， 进行有性生殖，可产生新的遗传性 状。
准性生殖
介于无性和有性之间的一种生殖方 式，通过基因重组产生新的遗传变 异。
引起毛霉病，主要侵犯血管，常见于鼻脑毛霉病、肺胃毛霉病、皮肤毛霉病和播 散性毛霉病，病情凶险，死亡率高。
05
真菌与人类关系探 讨
食用真菌营养价值及开发利用现状
营养价值
食用真菌富含蛋白质、多糖、氨基酸等营养成分，具有提高 免疫力、抗肿瘤等功效。
开发利用现状
目前，市场上已有多种食用真菌产品，如蘑菇罐头、香菇酱 等，深受消费者喜爱。
灭菌处理。
真菌接种
02
从菌种保藏中心或实验室保藏的菌种中挑选目标真菌，进行接
种操作。
实验器材准备
03
准备显微镜、无菌操作台、接种环、培养皿等实验所需器材，
并进行清洗和消毒处理。
实验步骤和注意事项说明
无菌操作
在实验过程中，严格遵守无菌操作规程，避免杂菌污染。
培养条件控制
根据目标真菌的生长特性，控制好培养温度、湿度和光照等条件 ，确保真菌正常生长。
THANKS
感谢您的观看
观察真菌菌落、菌丝、孢子等 形态学特征进行分类鉴定。
培养特性
根据不同真菌在特定培养基上 的生长特性进行鉴定。
生理生化特性
利用真菌的生理生化反应特点 进行分类鉴定。
生物学特性
通过研究真菌与其他生物的互 作关系进行分类鉴定。
现代分子生物学技术在真菌分类鉴定中应用
DNA序列分析
通过比较真菌DNA序列差异进 行分类鉴定。
真菌繁殖方式及特点
无性繁殖
包括分生孢子、芽孢子等，繁殖 速度快，易产生变异。
有性繁殖
通过配子囊结合形成担子或子囊， 进行有性生殖，可产生新的遗传性 状。
准性生殖
介于无性和有性之间的一种生殖方 式，通过基因重组产生新的遗传变 异。
真菌感染的诊断ppt课件
/
检查抗原抗体n常用补体结合、凝集试验、酶联免疫吸附试验、 放射免疫测定等。如隐球菌乳胶凝集试验n真菌代谢产物:气(液)相色谱分析法
一是作为领导干部一定要树立正确的权力观和科学的发展观，权力必须为职工群众谋利益，绝不能为个人或少数人谋取私利血清学检测
/
一是作为领导干部一定要树立正确的权力观和科学的发展观，权力必须为职工群众谋利益，绝不能为个人或少数人谋取私利其他检测方法n 血浆(1-3) - -D葡聚糖测定: 是真菌细胞壁的 重要成分, 正常人血浆含量<4.0pg/ml,真菌感 染患者血中浓度迅速上升,并与病情平行变化, 2h之内可出结果n PCR法: 用真菌特异性DNA片断为引物进行扩 增, 该法特异性为100%,敏感度高,可扩增出仅含15个念珠菌的标本, 24h得结果。目前除白色念球菌外,尚有组织胞浆菌核基因探针n PFLP:限制性内切酶片断长度多态性分析
/
肺部真菌感染的治疗
/
一是作为领导干部一定要树立正确的权力观和科学的发展观，权力必须为职工群众谋利益，绝不能为个人或少数人谋取私利
/
n 存在真菌感染的危险因素n 发热、咳痰、肺部啰音 n 鹅口疮n 肺部浸润影n 抗菌药物治疗无效
肺部真菌感染临床诊断标准
/
一是作为领导干部一定要树立正确的权力观和科学的发展观，权力必须为职工群众谋利益，绝不能为个人或少数人谋取私利
一是作为领导干部一定要树立正确的权力观和科学的发展观，权力必须为职工群众谋利益，绝不能为个人或少数人谋取私利拟诊真菌感染具备下列其中一项者 n 血培养阳性>1次n 锁穿管尖培养阳性>1次n 同一部位的标本涂片菌丝阳性>2次 n 同一部位标本真菌培养阳性>2次n 同一部位标本涂片菌丝阳性和芽孢阳性>1次伴真菌培养阳性>1次n >2个部位培养出同一真菌
检查抗原抗体n常用补体结合、凝集试验、酶联免疫吸附试验、 放射免疫测定等。如隐球菌乳胶凝集试验n真菌代谢产物:气(液)相色谱分析法
一是作为领导干部一定要树立正确的权力观和科学的发展观，权力必须为职工群众谋利益，绝不能为个人或少数人谋取私利血清学检测
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一是作为领导干部一定要树立正确的权力观和科学的发展观，权力必须为职工群众谋利益，绝不能为个人或少数人谋取私利其他检测方法n 血浆(1-3) - -D葡聚糖测定: 是真菌细胞壁的 重要成分, 正常人血浆含量<4.0pg/ml,真菌感 染患者血中浓度迅速上升,并与病情平行变化, 2h之内可出结果n PCR法: 用真菌特异性DNA片断为引物进行扩 增, 该法特异性为100%,敏感度高,可扩增出仅含15个念珠菌的标本, 24h得结果。目前除白色念球菌外,尚有组织胞浆菌核基因探针n PFLP:限制性内切酶片断长度多态性分析
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肺部真菌感染的治疗
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一是作为领导干部一定要树立正确的权力观和科学的发展观，权力必须为职工群众谋利益，绝不能为个人或少数人谋取私利
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n 存在真菌感染的危险因素n 发热、咳痰、肺部啰音 n 鹅口疮n 肺部浸润影n 抗菌药物治疗无效
肺部真菌感染临床诊断标准
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一是作为领导干部一定要树立正确的权力观和科学的发展观，权力必须为职工群众谋利益，绝不能为个人或少数人谋取私利
一是作为领导干部一定要树立正确的权力观和科学的发展观，权力必须为职工群众谋利益，绝不能为个人或少数人谋取私利拟诊真菌感染具备下列其中一项者 n 血培养阳性>1次n 锁穿管尖培养阳性>1次n 同一部位的标本涂片菌丝阳性>2次 n 同一部位标本真菌培养阳性>2次n 同一部位标本涂片菌丝阳性和芽孢阳性>1次伴真菌培养阳性>1次n >2个部位培养出同一真菌
真菌检验技术—真菌的培养技术(微生物检验课件)
染性真菌菌落不下沉,很少引起开裂。
❖ 通过培养可确定菌种，辅助直接检查的不足； ❖ 通常用沙保氏培养基（SDA）（22～28℃）； ❖ 深部真菌可用血琼脂或脑心葡萄糖血琼脂37℃培养；
❖ 温度 :22 ℃ ～ 28℃(深部真菌:28 ℃ / 37℃)需氧、 湿度高;PH :4.0～6.0 (弱酸性)
真菌的分离培养
真菌培养是目前鉴定真菌的惟一方法。培养 真菌的温度为28℃，但深部真菌为37℃。菌落是 鉴别真菌的方法。注意以下几点：
①菌落性质：酵母菌还是霉菌； ②菌落大小:病原性真菌菌落小，而条件致病性真
菌菌落大；
③菌落颜色:病原性真菌颜色淡，污染真菌颜色深；
④致病性真菌菌落下沉，有时使培养基开裂；污
❖ 生长速度 : 慢(1～4周见典型菌落) ❖ 菌落特征 :酵母/酵母样菌 :光滑 柔软、湿润;丝状
菌:疏松 (绒毛状、棉絮状、粉末状);颜色 (正 / 背 面)
常用培养方法
❖ 试管法---初代培养、菌种保存 ❖ 大培养---纯种的培养、研究 ❖ 小培养---菌种鉴定 (玻片法 钢圈法 方块法)
❖ 通过培养可确定菌种，辅助直接检查的不足； ❖ 通常用沙保氏培养基（SDA）（22～28℃）； ❖ 深部真菌可用血琼脂或脑心葡萄糖血琼脂37℃培养；
❖ 温度 :22 ℃ ～ 28℃(深部真菌:28 ℃ / 37℃)需氧、 湿度高;PH :4.0～6.0 (弱酸性)
真菌的分离培养
真菌培养是目前鉴定真菌的惟一方法。培养 真菌的温度为28℃，但深部真菌为37℃。菌落是 鉴别真菌的方法。注意以下几点：
①菌落性质：酵母菌还是霉菌； ②菌落大小:病原性真菌菌落小，而条件致病性真
菌菌落大；
③菌落颜色:病原性真菌颜色淡，污染真菌颜色深；
④致病性真菌菌落下沉，有时使培养基开裂；污
❖ 生长速度 : 慢(1～4周见典型菌落) ❖ 菌落特征 :酵母/酵母样菌 :光滑 柔软、湿润;丝状
菌:疏松 (绒毛状、棉絮状、粉末状);颜色 (正 / 背 面)
常用培养方法
❖ 试管法---初代培养、菌种保存 ❖ 大培养---纯种的培养、研究 ❖ 小培养---菌种鉴定 (玻片法 钢圈法 方块法)
真菌感染实验室检测PPT课件
株数
119 56 46 20 11 22
%
44 21 16 7 4 8
19
2006~2012年念珠菌分布
60%
2006
50%
2007 2008
2009
40%
2010
2011
30%
2012
20%
10%
0%
白色念珠菌 热带念珠菌 光滑念珠菌 清酒念珠菌 中间念珠菌 近平无滑名念念珠珠菌菌
20
念珠菌药敏试验结果
3 2.2
2
1
0 1978～1982 1983～1987 1988～1992
Grool A, et al. Trends in the postmortern epidemlology of invasive fungal infections at a
university hospital. [J]. J Infect, 1996, 33(1): 23．
8
中国3347例尸检结果IFI发病率
7
6
P<0.01
5
6.06 5.23
4
3
2.77
2
1
1.04
0
1953-1962
1963-1972
1973-1982
1983-1993
北京协和医院对1953-1993年共计3447例尸检进行回顾性调查分析
9
人类最常见的深部真菌病
念珠菌病（监护中心、白血病、烧伤、肿瘤、AIDS、 SARS） 隐球菌病（AIDS、移植、SLE） 曲霉病（白血病、移植、AIDS、SARS ） 接合菌病（白血病、糖尿病、烧伤） 马内菲青霉病（自然疫源）
Pfaller MA，Diekema DJ．Epidemiology of invasive candidiasis：a persistent public health problem E [J]. Clin Mi1cr6obiol Rev, 2007, 20 (1): 133-163.
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菌的培养。隐球菌对这两种药物敏感.应避免使用，以防假阴性结果的发生， 许多病原性真菌如白假丝酵母菌在血琼脂上生长良好。 玉米吐温80琼脂，用于观察白念珠菌厚壁孢子及假菌丝；红色毛癣菌在此 培养基产色素较好。 马铃薯葡萄糖琼脂（PDA），是培养真菌较好的培养基，同时也是鉴定真 菌较好的培养基之一。鉴定皮肤癣菌一般不用此培养基。 尿素培养基，生化反应鉴别培养基，用于鉴定须癣毛癣菌和隐球菌，可使 橘红色培养基变成紫红色。 二相性真菌常使用营养更丰富：
3.采集的标本量要足
血液和脑脊液标本5ml，胸腔液20ml，皮屑标本两块，活体组织两 份（一份送病理科检查, 一份做镜检和培养）。
4.严格无菌操作
严格无菌操作，消毒处理，尤其是在采集血液和脑脊液标本时，要 避免污染杂菌。
5.采集的标本立即送检
对采集的标本应立即送检，特别是深部真菌标本最长不得超过2h。
8.阴道及宫颈分泌物
用拭子采集两份，一份制片检查，一份作分离培养。
（二）采集标本注意事项
1.采集的标本要适宜
不同真菌感染应采取不同的临床标本。怀疑为浅部真菌感染，应刮 取病变边缘的痂、皮屑，发癣应取折断了的病发。怀疑为深部真菌 感染应取血液、脑脊液、痰、脓汁等。
2.在用药前采集标本
须在用药前采集，对已用药者需停药一段时间后再采集标本。
脑心浸液琼脂（BHI）、沙比培养基，并在培养基中加人氯霉素、庆大霉素、四环素 等，以抑制霉菌生长，双相真菌可在该培养基上呈酵母相。
二、培养方法
培养方法有平皿培养、大试管培养和玻片培养等。 平皿培养的优点：
表面较大，可使标本散布，便于观察菌落形态，但水分易蒸发，只 能培养生长繁殖较快的真菌，如假丝酵母菌、隐球菌。
大试管培养的优点：
水分不易蒸发，主要用于皮肤癣菌的培养和真菌菌种的保存。
玻片培养（微量培养、小培养）
将培养皿的真菌培养基切成一个1cm*1cm的小方块，置无菌玻片 中央，将真菌点种于培养基的一侧，再盖上无菌盖玻片后培养，培 养后将其盖玻片放人另一载玻片上观察菌丝和孢子，可鉴定菌种。
多数真菌培养的温度为28度，深部真菌为37度。 二相性真菌培养：
水合氯醛-苯酚-乳酸 封固液
透明力较强，限于不 透明标本的检查
2.显微镜检查
可观察真菌菌丝和孢子 低倍镜下弱光观察，再用高倍检查其特征
三、染色镜检
染色镜检
革兰染色 乳酸酚棉蓝
染色 墨汁染色
荧光染色
糖原染色
均为革兰阳 性
吖啶橙染色 常用方法， 病理检查用
第二节 真菌培养技术
最适PH4.0〜6.0 沙保弱培养基（SDA琼脂，葡萄糖蛋白胨琼脂），一般细菌不易生长。 也可加入氯霉素或放线菌酮，可防止细菌和污染真菌生长，多用于皮肤癣
病性真菌有时使培养基开裂，污染霉菌很少引起培养 基开裂。
第三节 真菌的其他鉴定方法
一、生化反应
1.糖（醇）类发酵试验
常用的糖有单糖（葡萄糖、果糖、半乳糖〉、双糖（麦芽糖、蔗糖、 乳糖、海藻糖〉、三糖（蜜三糖）、多糖（淀粉）、醇类有甘油、 甘露醇、山梨醇、肌醇等。
2.同化碳源试验
将1ml含菌生理盐水与已融化的固体同化碳源培养基（45度）混合， 然后在培养基上分别加人各种糖少许，置25或37度孵育后观察结 果。若24小时后无变化可重复加糖少许。如能同化，在加入糖的周 围有生长圈，否则无生长。固体平板培养基适用于生长快的真菌， 而液体培养基则适合于生长慢的真菌，同化慢的糖类（如半乳糖）， 若同化，则培养基浑浊。
3.同化氮源试验或利用硝酸钾试验
方法与同化碳源试验相同，但需用无氮源的培养基，不要加糖类， 而加入硝酸钾。牛乳分解试验、脲酶试验等同细菌操作
二、免疫学检查
1. 皮肤试验 2. 血清学试验
三、其他鉴定诊断实验
1.厚膜孢子形成试验
白假丝酵母菌接种在玉米吐温80琼脂。25℃，72h内观察丰富的假 菌丝。
（三）真菌鉴定程序
二、直接镜检
镜检阳性，可初步判定真菌感染，但多不能确 定种类
镜检阴性，不轻易否定真菌感染的可能，进一 步检查
1.标本制备
标本置玻片 上
标本处理液
加标本处理 液
KOH
生理盐水
加盖玻片镜 检
促进角质蛋白溶解 皮屑10%、毛发20%， 标本长时间保存可加
入10%甘油
观察真菌出芽现象
镜下：假菌丝中隔部有成簇圆形分生孢子，菌丝顶端有厚膜 孢子。
2.芽管形成试验
0.2ml血清加少量真菌，37 ℃，每隔1h用接种环取样检查，共三次， 白假丝酵母菌孢子长出短小芽管。
3.动物接种 4.病理组织检查 5.核酸检测 6.真菌毒素检测
第十四章 真菌检验技 术
真菌学实验注意事项
1.真菌的检验操作应在生物安全柜内进行。 2.每天工作前后要对工作区域进行消毒。 3.不可试着闻平板上培养物产生的气味。 4.不可对组织胞浆菌、球孢子菌进行玻片培养，
以防其孢子在空气中弥散。
第一节 真菌形态检验技术
标本采集
直接镜检
真菌形态检 验技术
染色镜检 分离培养
生化反应
免疫学试验
ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
一、标本的采集和处理
1.毛发
取根部折断，脏而松动或有病损部位的毛发，将病毛置无菌平皿内送检。
2.皮屑
先用70%酒精消毒后，手术刀轻轻刮取，皮肤选择病损的活动边缘，手癣 取虎口处，足癣取第4、5趾间，花斑癣取表浅皮屑。婴儿皮肤或粘膜处菲 薄的皮肤可用浸有生理盐水的棉拭子轻轻擦取。
3.口腔粘膜
用无菌棉拭，于口腔或咽部的白色点状或小片处取材
4.脓汁及渗出物
未破损者用注射器抽取，破损者取痂皮下较深处脓液。
5.痰
晨痰，先漱口再深咳，用无菌器皿收集。
6.血液和体液
血液5~10ml抗凝于培养瓶，CSF5ml送检，胸水少于20ml，离心沉淀。
7.粪便和尿液
粪便置无菌小盒，尿液取清洁留尿或导尿标本于无菌试管。
28度培养真菌呈菌丝相（霉菌型） 37度培养为组织相（酵母型）。
现察菌落生长情况是鉴别真菌的主要方法之一。
三、生长现象
观察菌落形态时注意以下几点：
①菌落性质，是酵母菌还是霉菌； ②菌落大小，一般病原性真菌菌落小，而条件致病性
真菌菌落大； ③菌落颜色， 一般病原性真菌颜色淡，污染真菌颜
色深； ④致病性真菌菌落下沉，污染性真菌菌落不下沉；致
3.采集的标本量要足
血液和脑脊液标本5ml，胸腔液20ml，皮屑标本两块，活体组织两 份（一份送病理科检查, 一份做镜检和培养）。
4.严格无菌操作
严格无菌操作，消毒处理，尤其是在采集血液和脑脊液标本时，要 避免污染杂菌。
5.采集的标本立即送检
对采集的标本应立即送检，特别是深部真菌标本最长不得超过2h。
8.阴道及宫颈分泌物
用拭子采集两份，一份制片检查，一份作分离培养。
（二）采集标本注意事项
1.采集的标本要适宜
不同真菌感染应采取不同的临床标本。怀疑为浅部真菌感染，应刮 取病变边缘的痂、皮屑，发癣应取折断了的病发。怀疑为深部真菌 感染应取血液、脑脊液、痰、脓汁等。
2.在用药前采集标本
须在用药前采集，对已用药者需停药一段时间后再采集标本。
脑心浸液琼脂（BHI）、沙比培养基，并在培养基中加人氯霉素、庆大霉素、四环素 等，以抑制霉菌生长，双相真菌可在该培养基上呈酵母相。
二、培养方法
培养方法有平皿培养、大试管培养和玻片培养等。 平皿培养的优点：
表面较大，可使标本散布，便于观察菌落形态，但水分易蒸发，只 能培养生长繁殖较快的真菌，如假丝酵母菌、隐球菌。
大试管培养的优点：
水分不易蒸发，主要用于皮肤癣菌的培养和真菌菌种的保存。
玻片培养（微量培养、小培养）
将培养皿的真菌培养基切成一个1cm*1cm的小方块，置无菌玻片 中央，将真菌点种于培养基的一侧，再盖上无菌盖玻片后培养，培 养后将其盖玻片放人另一载玻片上观察菌丝和孢子，可鉴定菌种。
多数真菌培养的温度为28度，深部真菌为37度。 二相性真菌培养：
水合氯醛-苯酚-乳酸 封固液
透明力较强，限于不 透明标本的检查
2.显微镜检查
可观察真菌菌丝和孢子 低倍镜下弱光观察，再用高倍检查其特征
三、染色镜检
染色镜检
革兰染色 乳酸酚棉蓝
染色 墨汁染色
荧光染色
糖原染色
均为革兰阳 性
吖啶橙染色 常用方法， 病理检查用
第二节 真菌培养技术
最适PH4.0〜6.0 沙保弱培养基（SDA琼脂，葡萄糖蛋白胨琼脂），一般细菌不易生长。 也可加入氯霉素或放线菌酮，可防止细菌和污染真菌生长，多用于皮肤癣
病性真菌有时使培养基开裂，污染霉菌很少引起培养 基开裂。
第三节 真菌的其他鉴定方法
一、生化反应
1.糖（醇）类发酵试验
常用的糖有单糖（葡萄糖、果糖、半乳糖〉、双糖（麦芽糖、蔗糖、 乳糖、海藻糖〉、三糖（蜜三糖）、多糖（淀粉）、醇类有甘油、 甘露醇、山梨醇、肌醇等。
2.同化碳源试验
将1ml含菌生理盐水与已融化的固体同化碳源培养基（45度）混合， 然后在培养基上分别加人各种糖少许，置25或37度孵育后观察结 果。若24小时后无变化可重复加糖少许。如能同化，在加入糖的周 围有生长圈，否则无生长。固体平板培养基适用于生长快的真菌， 而液体培养基则适合于生长慢的真菌，同化慢的糖类（如半乳糖）， 若同化，则培养基浑浊。
3.同化氮源试验或利用硝酸钾试验
方法与同化碳源试验相同，但需用无氮源的培养基，不要加糖类， 而加入硝酸钾。牛乳分解试验、脲酶试验等同细菌操作
二、免疫学检查
1. 皮肤试验 2. 血清学试验
三、其他鉴定诊断实验
1.厚膜孢子形成试验
白假丝酵母菌接种在玉米吐温80琼脂。25℃，72h内观察丰富的假 菌丝。
（三）真菌鉴定程序
二、直接镜检
镜检阳性，可初步判定真菌感染，但多不能确 定种类
镜检阴性，不轻易否定真菌感染的可能，进一 步检查
1.标本制备
标本置玻片 上
标本处理液
加标本处理 液
KOH
生理盐水
加盖玻片镜 检
促进角质蛋白溶解 皮屑10%、毛发20%， 标本长时间保存可加
入10%甘油
观察真菌出芽现象
镜下：假菌丝中隔部有成簇圆形分生孢子，菌丝顶端有厚膜 孢子。
2.芽管形成试验
0.2ml血清加少量真菌，37 ℃，每隔1h用接种环取样检查，共三次， 白假丝酵母菌孢子长出短小芽管。
3.动物接种 4.病理组织检查 5.核酸检测 6.真菌毒素检测
第十四章 真菌检验技 术
真菌学实验注意事项
1.真菌的检验操作应在生物安全柜内进行。 2.每天工作前后要对工作区域进行消毒。 3.不可试着闻平板上培养物产生的气味。 4.不可对组织胞浆菌、球孢子菌进行玻片培养，
以防其孢子在空气中弥散。
第一节 真菌形态检验技术
标本采集
直接镜检
真菌形态检 验技术
染色镜检 分离培养
生化反应
免疫学试验
ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
一、标本的采集和处理
1.毛发
取根部折断，脏而松动或有病损部位的毛发，将病毛置无菌平皿内送检。
2.皮屑
先用70%酒精消毒后，手术刀轻轻刮取，皮肤选择病损的活动边缘，手癣 取虎口处，足癣取第4、5趾间，花斑癣取表浅皮屑。婴儿皮肤或粘膜处菲 薄的皮肤可用浸有生理盐水的棉拭子轻轻擦取。
3.口腔粘膜
用无菌棉拭，于口腔或咽部的白色点状或小片处取材
4.脓汁及渗出物
未破损者用注射器抽取，破损者取痂皮下较深处脓液。
5.痰
晨痰，先漱口再深咳，用无菌器皿收集。
6.血液和体液
血液5~10ml抗凝于培养瓶，CSF5ml送检，胸水少于20ml，离心沉淀。
7.粪便和尿液
粪便置无菌小盒，尿液取清洁留尿或导尿标本于无菌试管。
28度培养真菌呈菌丝相（霉菌型） 37度培养为组织相（酵母型）。
现察菌落生长情况是鉴别真菌的主要方法之一。
三、生长现象
观察菌落形态时注意以下几点：
①菌落性质，是酵母菌还是霉菌； ②菌落大小，一般病原性真菌菌落小，而条件致病性
真菌菌落大； ③菌落颜色， 一般病原性真菌颜色淡，污染真菌颜
色深； ④致病性真菌菌落下沉，污染性真菌菌落不下沉；致