HPLC法测定芦丁含量
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[RP—HPLC法测定不同产地槐米中芦丁 ]
➢ 甲醇-0.5％磷酸(50:50) [高效液相色谱法同时测定杜仲叶中芦丁和槲皮素 含量的研究]
➢ 乙腈-纯化水-磷酸(47:53:0.2) [反相高效液相色谱法测定细梗胡枝子中槲皮素与 芦丁的含量]
色谱条件
✓检测波长:对芦丁对照品溶液分别在190~370nm
有文献报道: 采用聚酰胺柱法效果较为理想，因其可以有效地保护色
谱柱、除去其他杂质，且能达到良好的分离效果。 [高效液相色谱法测定痔速宁胶囊中芦丁含量]
色谱条件
✓流动相:
➢ 甲醇-1%冰醋酸溶液(32:68) [中国药典 2005] ➢ 选甲醇-1%冰醋酸溶液(32:68)为流动相时,芦丁
峰与相邻杂质峰的分离效果欠佳。加入一定量 的乙腈后，可提高柱效，获得较好的分离效果。 [高效液相色谱法测定毛冬青胶囊中芦丁的含量]
色谱条件
Diamonsil C18柱(200mm×4.6mm，5 m) 色谱柱柱温: 室温 流动相:甲醇-乙腈-冰醋酸-水(22:10:3:65)； 体积流量:1.0 mL/min； 检测波长：配制样品液,在可见紫外分光光度计200~400nm的
范围内进行扫描，选择适宜最大吸收波长处检测.
色谱条件
以测定赤芍中的甲醇的残留量为例
色谱柱 毛细管柱，30m×0.25mm。 检测器：FID 柱温：50℃ 气化室温度：150℃ 检测器温度：200℃ 载气：N2，流速30mL/min；
空气0.5kg/cm2； H2 0.7kg/cm2 灵敏度：102 进样：1L
溶液的制备
精密量取甲醇10L，置100mL量瓶中，精密 加0.1％（mL/mL)正丙醇（内标物质）溶液 20mL，加水稀释至刻度，摇匀，作为对照溶 液。
HPLC法测定芦丁含量
蔡瑜 柴晓鹃
目录
来源用途 化学结构 理化性质 色谱条件 实验步骤 预期结果
芦丁（ rutin ）
来源:广泛存在于自然界，几乎所有的芸香科和石 楠科植物中均含有，尤以芸香科的芸香草、豆科 的槐米、蓼科的荞麦、金丝桃科红旱莲、鼠李科 光枝勾儿茶、大蓟科野梧桐叶含量较为丰富，可 以作为提取芦丁的原料。
源自文库
GC测定赤芍中有机溶剂残留量
曹戟 张建祥 高明 蒋鹏 蔡瑜 柴晓鹃
赤芍的提取工艺
赤芍为毛茛科植物芍药或川赤芍的干燥根,为常用活血化瘀 药, 赤芍的主要药效成分芍药苷为单萜类化合物.
经典的单萜类化合物提取方法 水提醇沉法 水 甲醇 乙醇
赤芍的提取工艺改进 提取时水和醇的用量, 比例,提取时间等 精制时液液分配工序 石油醚、乙酸乙酯、正丁醇 硅胶柱层析或过大孔树脂柱等工序 甲醇 氯仿
的范围内进行扫描，芦丁在204nm、255nm、 355nm处出现3个吸收峰；
以上三个波长作为检测波长,文献中均有报 道,主要考虑其它杂质在测定波长处的干扰以及 芦丁在测定波长处的检测限等因素.
实验步骤
样品溶液的制备 称取适量芦丁样品,加甲醇制成每1ml含 0.1mg的溶液.
测定 精密吸取样品溶液20l,注入高效液相色谱 仪,测定,即得
预期实验结果
芦丁的保留时间约 5~6 min.
峰型细尖,对称因子 在0.95~1.05,与杂质 分离完全,柱效高.
讨论
芦丁的样品中通常含有其水解后的苷元---槲皮素,但 两者极性差别大,在通常色谱条件下,两者的峰分离 良好,槲皮素并无干扰.
若要同时测定样品中槲皮素和芦丁的含量,最好采用 梯度洗脱法,因为若用同一流动相,所需时间太长.下 图为流动相为甲醇-0.5%磷酸(35:65) 时的出峰谱图
➢ 甲醇-乙腈-冰醋酸-水(22:10:3:65)
实验表明单纯使用乙腈-水或甲醇-水虽然能够把 被测组分和其他组分分离，但拖尾严重。而二者 的合用可以达到较理想的分离度
若不加入少量冰醋酸或磷酸调节酸性，峰形有拖 尾现象，这主要是由于绿原酸、芦丁中羧基和黄 酮苷元的酚羟基产生电离，因而在固定相表面存 在着双保留机制。
临床应用：用于防治脑溢血，高血压，视网膜出 血，急性出血肾炎，慢性气管炎等.
化学结构及理化性质
芦丁（ rutin ）
分子量: 610.5244；
OH
分子式: C27H30O16 ；
OH 性状: 浅黄色针状结晶；
HO
O
酸碱性: 酸性
溶解度: 芦丁在冷水中极微溶
O Glc
(1:10000),在沸水中微溶(1:200),
OH
O
Rha
在沸乙醇中略溶(1:60),易溶于
碱性溶液、甲醇及乙醇，不溶
于氯仿、乙醚和苯.
色谱条件
✓色谱柱 :各种十八烷基硅烷键合相(ODS)色谱柱
Spherisorb ODS (150 mm×4.6 mm，5m) Hypersil ODS (250mm×4.6mm，5m) Kromasil ODS (250mm×4.6mm，5m)
取本品约0.16g，精密称定，置10mL量瓶中， 精密加入上述内标溶液2mL，加水溶解并稀释 至刻度，摇匀，作为供试品溶液。
精密吸取样品溶液1l,注入气相色谱仪,测定。
➢ 甲醇-0.5％磷酸(50:50) [高效液相色谱法同时测定杜仲叶中芦丁和槲皮素 含量的研究]
➢ 乙腈-纯化水-磷酸(47:53:0.2) [反相高效液相色谱法测定细梗胡枝子中槲皮素与 芦丁的含量]
色谱条件
✓检测波长:对芦丁对照品溶液分别在190~370nm
有文献报道: 采用聚酰胺柱法效果较为理想，因其可以有效地保护色
谱柱、除去其他杂质，且能达到良好的分离效果。 [高效液相色谱法测定痔速宁胶囊中芦丁含量]
色谱条件
✓流动相:
➢ 甲醇-1%冰醋酸溶液(32:68) [中国药典 2005] ➢ 选甲醇-1%冰醋酸溶液(32:68)为流动相时,芦丁
峰与相邻杂质峰的分离效果欠佳。加入一定量 的乙腈后，可提高柱效，获得较好的分离效果。 [高效液相色谱法测定毛冬青胶囊中芦丁的含量]
色谱条件
Diamonsil C18柱(200mm×4.6mm，5 m) 色谱柱柱温: 室温 流动相:甲醇-乙腈-冰醋酸-水(22:10:3:65)； 体积流量:1.0 mL/min； 检测波长：配制样品液,在可见紫外分光光度计200~400nm的
范围内进行扫描，选择适宜最大吸收波长处检测.
色谱条件
以测定赤芍中的甲醇的残留量为例
色谱柱 毛细管柱，30m×0.25mm。 检测器：FID 柱温：50℃ 气化室温度：150℃ 检测器温度：200℃ 载气：N2，流速30mL/min；
空气0.5kg/cm2； H2 0.7kg/cm2 灵敏度：102 进样：1L
溶液的制备
精密量取甲醇10L，置100mL量瓶中，精密 加0.1％（mL/mL)正丙醇（内标物质）溶液 20mL，加水稀释至刻度，摇匀，作为对照溶 液。
HPLC法测定芦丁含量
蔡瑜 柴晓鹃
目录
来源用途 化学结构 理化性质 色谱条件 实验步骤 预期结果
芦丁（ rutin ）
来源:广泛存在于自然界，几乎所有的芸香科和石 楠科植物中均含有，尤以芸香科的芸香草、豆科 的槐米、蓼科的荞麦、金丝桃科红旱莲、鼠李科 光枝勾儿茶、大蓟科野梧桐叶含量较为丰富，可 以作为提取芦丁的原料。
源自文库
GC测定赤芍中有机溶剂残留量
曹戟 张建祥 高明 蒋鹏 蔡瑜 柴晓鹃
赤芍的提取工艺
赤芍为毛茛科植物芍药或川赤芍的干燥根,为常用活血化瘀 药, 赤芍的主要药效成分芍药苷为单萜类化合物.
经典的单萜类化合物提取方法 水提醇沉法 水 甲醇 乙醇
赤芍的提取工艺改进 提取时水和醇的用量, 比例,提取时间等 精制时液液分配工序 石油醚、乙酸乙酯、正丁醇 硅胶柱层析或过大孔树脂柱等工序 甲醇 氯仿
的范围内进行扫描，芦丁在204nm、255nm、 355nm处出现3个吸收峰；
以上三个波长作为检测波长,文献中均有报 道,主要考虑其它杂质在测定波长处的干扰以及 芦丁在测定波长处的检测限等因素.
实验步骤
样品溶液的制备 称取适量芦丁样品,加甲醇制成每1ml含 0.1mg的溶液.
测定 精密吸取样品溶液20l,注入高效液相色谱 仪,测定,即得
预期实验结果
芦丁的保留时间约 5~6 min.
峰型细尖,对称因子 在0.95~1.05,与杂质 分离完全,柱效高.
讨论
芦丁的样品中通常含有其水解后的苷元---槲皮素,但 两者极性差别大,在通常色谱条件下,两者的峰分离 良好,槲皮素并无干扰.
若要同时测定样品中槲皮素和芦丁的含量,最好采用 梯度洗脱法,因为若用同一流动相,所需时间太长.下 图为流动相为甲醇-0.5%磷酸(35:65) 时的出峰谱图
➢ 甲醇-乙腈-冰醋酸-水(22:10:3:65)
实验表明单纯使用乙腈-水或甲醇-水虽然能够把 被测组分和其他组分分离，但拖尾严重。而二者 的合用可以达到较理想的分离度
若不加入少量冰醋酸或磷酸调节酸性，峰形有拖 尾现象，这主要是由于绿原酸、芦丁中羧基和黄 酮苷元的酚羟基产生电离，因而在固定相表面存 在着双保留机制。
临床应用：用于防治脑溢血，高血压，视网膜出 血，急性出血肾炎，慢性气管炎等.
化学结构及理化性质
芦丁（ rutin ）
分子量: 610.5244；
OH
分子式: C27H30O16 ；
OH 性状: 浅黄色针状结晶；
HO
O
酸碱性: 酸性
溶解度: 芦丁在冷水中极微溶
O Glc
(1:10000),在沸水中微溶(1:200),
OH
O
Rha
在沸乙醇中略溶(1:60),易溶于
碱性溶液、甲醇及乙醇，不溶
于氯仿、乙醚和苯.
色谱条件
✓色谱柱 :各种十八烷基硅烷键合相(ODS)色谱柱
Spherisorb ODS (150 mm×4.6 mm，5m) Hypersil ODS (250mm×4.6mm，5m) Kromasil ODS (250mm×4.6mm，5m)
取本品约0.16g，精密称定，置10mL量瓶中， 精密加入上述内标溶液2mL，加水溶解并稀释 至刻度，摇匀，作为供试品溶液。
精密吸取样品溶液1l,注入气相色谱仪,测定。