植物组织培养脱毒技术进展研究
果树组织培养脱毒技术和病毒检测技术研究进展
（． １ 内蒙古农业大学， 内蒙古 呼和浩特 Ｏ ０ １ １ ０ ９；２ 大连大学 ， ． 辽宁 大连 １ ６ ２ １６ ２） 摘 要： 病毒病对果树的危 害 日趋严重 ， 国对病毒病害的研究和防治极 为重视． 各 作者着重 论述 当前 果树
ｔｃ ｎｑ ｅ ，ｉ ｓｅｉ ｎ ｔ ｎｔｃ ｎｑ ｅ ｎ ｉ ｓｄ ｔｃｉｎｔｃ ｎｑ ｅ ｎｆｕｔ ｒｅ ｔｈ ｒｓｎ ，ｗ ｉｈｉｃｕ ｅ ｅｈ ｉｕ ｓ ｖｒ ｌ ｕ ｍｉａｉ ｅ ｈ ｉｕ ｓａ ｄｖｒ ｅｅ ｔ ｈ ｉｕ ｓｉ ｒｉｔ ｓａ ｅｐｅｅ ｔ ｈｃ ｌｄ ｓ ｏ ｕ ｏ ｅ ｅ ｔ ｎ
近４ ０年来 ， 植物组织培养技术得到了迅速发展 ， 已经成 为生物学科中的重要研究技术和手段之一． 组织培养技术对于果树这种需要采用无性繁殖的方法来大量培育种苗的植物来说 ， 更具有十分重要 的 意义． 目前病毒病严重危害着果树业的发展． 实现无病毒化栽培是当前 国内外急待并一直努力解决 的问 题． 脱毒和病毒检测技术是实现无病毒栽培的关键． 果树组织培养技术又为果树脱毒提供 了手段．
Ａｂ ｔａ ｔ ｈ ａａｄ ｏ ｉ ｓｄｓ ａｅ ｏｔｅ ｐｏ ｕ ｔ ｎ ｏ ｕｔｔ ｅ ｅ ｏ ｒ ｎ ｒ ｅ ｅｅ Ｔ ｅ ｓ ｄ ｓｒ ｃ ：Ｔ ｅｈ ｚ ｒ ｆｖｒ ｉｅｓ ｓｔ ｈ ｒｄ ｃｉ ｆｆ ｉ ｒ ｓｂ ｃ ｍｅｍｏｅ ａ ｄ ｍｏｅ ｓｖ ｒ． ｈ ｔ ｙ ｕ ｏ ｒ ｅ ｕ
维普资讯
第２ ７卷 第 ２期 ２０ ０ ６年 ４月
大
连
大 学 学
报
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Ｖ０ ． ７ Ｎ０ ２ Ｉ２
பைடு நூலகம்
植物组织培养发展现状研究[]
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植物组织培养的发展研究进展摘要：植物组织培养作为一种有效的技术手段，已经被广泛应用于生产实践的各个领域。
本文综述了植物组织培养的应用现状，指出其在雨中和优种块繁等方面的科技支撑作用。
同时概述了有关新技术的开发利用，及应用前景展望。
植物组织培养是从20世纪30年代初期发展起来的一项生物技术。
植物组织培养是指在无菌条件下，将离体的植物器官、组织、胚胎、原生质体等，在人工配制的培养基上给予适宜的培养条件，进行繁殖的方法。
由于是在试管内培养，且培养的是脱离植株母体的培养物，故也称离体培养或试管培养。
目前，植物组织培养技术研究已经取得巨大的进展，在观赏植物，如菊花、牡丹、百合等方面有诸多应用。
同时，许多观赏植物已经实现产业化生产，建立了一套相对完善的快繁体系，取得了明显的经济和社会效益。
1 植物组织培养的过程组织培养的技术过程大致分为六步：植物培养材料的采集，培养材料的消毒预处理，制备外植体，接种和培养，根的诱导，炼苗移植。
以上个步骤均在无菌条件下进行。
2 植物组织培养的应用现状2.1 在植物育种方面的应用2.1.1单倍体育种单倍体植株往往不能结实，难以进行繁殖。
在培养中用秋水仙素处理，可使染色体加倍成纯合二倍体。
这种培养技术在育种上的应用多为单倍体育种。
单倍体育种具有高速、高效、基因型一次纯合等优点。
因此，通过花药或花粉的培养的单倍体育种已成为一种新的育种手段。
2.1.2 胚培养采用人工的方法在无菌条件县从种子中将成熟胚和未成熟的胚分离出来，然后放在人工合成的培养基上培养，使它发育成正常的植株，从而有效的克服远缘杂交不亲和的障碍，获得杂种植物。
目前，在这一方面获得成功的自交或远缘杂交不亲和性植物有怀地黄、矮牵牛、普通小麦、黑小麦等。
2.1.3 培养细胞突变体在组织培养过程中，细胞处于不断分生状态，易受培养条件和外界环境（如放射、化学物质）的影响而产生诱变，从中可以筛选出对人们有利的突变体，从而培育新品种。
植物组培脱毒技术及在花卉上的应用
组织培养技术在名贵花卉上的应用前景摘要：综述了组织培养技术的形成、研究进展、意义及其应用植物组培脱毒技术的培养条件，并重点阐述了组织培养方法及其在名贵花卉上的应用以及病毒检测的重要性，最后浅析了组织培养技术存在的问题及展望。
关键词：组织培养；名贵花卉；应用；病毒检测；前景1组织培养技术概述1．1组织培养技术的形成危害植物的病毒、植物菌原体、类细菌有几百种，果树、花卉、蔬菜等植物病毒也不下500多种，绝大多数植物种类是靠无性繁殖的，由于病毒通过无性繁殖传递，在母体内逐代积累，种性退化严重，表现为植物生长受到抑制，形态畸变，产量下降，品质变劣，严重时只好拔除病株，因而造成很大经济损失，而目前生产上对病毒病的防治尚无特效药物。
自从2O世纪5O年代发现通过植物组织培养的方法，可以脱除严重患病毒病植物的病毒，恢复种性，提高产量、质量，组织培养脱毒技术便在生产实践中得到广泛应用，且有不少国家已将其纳入常规良种繁育体系，有的还专门建立了大规模的无病毒苗生产基地。
1．2组织培养技术研究进展white于1943年首先发现，在感染烟草花叶病毒的烟草植株生长点附近病毒的浓度很低，甚至没有病毒，并且病毒的含量随植株部位和年龄而异。
Morel等在这个启示下，于1952年利用感染花叶病毒的大丽菊茎尖分生组织培养，得到了无毒植株。
自1952年以来，通过茎尖分生组织培养或热处理与分生组织培养结合的方法获得成功的实例有100余种，其中最成功的实例之一是马铃薯的脱毒培养Ⅲ。
随着植物细胞培养技术的发展，2O世纪5O年代末通过愈伤组织培养脱毒获得成功。
7O年代初植物原生质体培养成完整的植株，为利用原生质体培育无毒植株提供了可能性。
1975年Shepard_5 通过对瘟染病毒的烟草原生质体的培养得到了无毒植株。
1972年Navarro等将果树嫁接方法与茎尖分生组织培养法两者有机结合，创立了一种新的植物组织培养脱毒技术，即茎尖显微嫁接法。
百合致病病毒及脱毒技术研究进展
百合致病病毒及脱毒技术研究进展
百合是一种重要的观赏、食用和药用植物。
然而，百合生长期间容易感染病毒，造成
严重的经济损失以及生态环境破坏。
因此，研究百合致病病毒及脱毒技术具有重要意义。
百合感染的主要病毒包括大白菜花叶病毒、姜黄黄化病毒、百合花叶病毒等。
其中，
大白菜花叶病毒是频繁出现的病毒，对百合的影响尤为严重。
百合感染病毒后，叶片变黄、形态异常、生长发育受到抑制，甚至会出现死亡。
因此，研究百合致病病毒的性质与特点
对于制定防治措施具有重要意义。
百合脱毒技术是一种将已经感染病毒的百合植物通过组织培养等技术去除病毒的方法。
百合脱毒技术主要包括热水处理法、化学处理法、组织培养法等。
其中，热水处理法是最
常用的一种方法，它通过复杂的温度处理过程、消毒过程和隔离过程，去除百合植株体内
的病毒。
白百合是我国重要的花卉之一，但是长期受到病毒的侵袭，其经济价值已经严重影响。
因此，白百合的脱毒技术成为解决这一问题的重要方法。
利用组织培养技术进行白百合脱毒，可以显著提高白百合脱毒成功率，同时无须使用化学药物，具有安全性和环保性优势。
近年来，由于基因编辑等先进技术的出现，百合转基因也成为研究的热点之一。
通过转基
因技术，可以实现百合对抗病毒的目的，这对于百合的生产和开发具有重要的现实意义。
总之，百合致病病毒对于百合产业的发展具有重要的影响，因此需要加强对百合致病
病毒及脱毒技术的研究与实践。
市场应用前景广阔的百合产业，将会走上健康、可持续、
具有良好经济效益的发展之路。
植物组织培养中的快繁与脱毒技术及其应用
植物组织培养是一种重要的生物技术，它能够实现植物的快速繁殖、脱毒和基因转化。
在植物学研究和植物育种领域，植物组织培养技术的应用非常广泛。
本文将深入探讨植物组织培养中的快繁与脱毒技术及其应用，以帮助读者更深入地理解这一重要领域。
1. 快繁技术在植物组织培养中，快繁技术是指利用植物体的一小部分组织或细胞，通过体外条件培养，实现植物的快速繁殖。
这种技术可以大大提高繁殖速度，缩短繁殖周期，是进行新种质创制、遗传改良和疫病防治的重要手段。
快繁技术的主要方法包括离体培养、愈伤组织培养和微繁殖等。
1.1 离体培养离体培养是将植物体表层（如幼叶、幼茎）或内部组织（如胚乳、子叶）分离出来，移入含有适当营养盐和植物生长调节物的培养基中培养。
通过控制培养条件和添加合适的植物生长激素，可以诱导组织分化和再生形成新植株。
1.2 愈伤组织培养愈伤组织是植物在受到外界刺激或损伤后，经过细胞分裂和组织再生形成的一种未分化的组织。
愈伤组织培养是利用这种特殊组织进行快速繁殖的一种方法，通过控制培养条件和添加植物生长调节物，可以诱导愈伤组织再生形成新植株。
1.3 微繁殖微繁殖是利用植物的微小芽或胚珠进行快速繁殖的方法。
通过培养条件的控制和植物激素的添加，可以诱导微小芽或胚珠快速生长并形成新植株。
2. 脱毒技术在植物组织培养中，由于植物体内可能携带病毒、细菌等病原体，因此会影响到组织培养的效果。
脱毒技术是为了解决这一问题而出现的一种重要技术。
脱毒技术能够有效地清除植物体内的病原体，提高组织培养的成功率和繁殖效率。
2.1 生物脱毒生物脱毒是利用生物制剂对植物体内的病原体进行清除的方法。
通过培养环境中添加含有特定菌株或真菌的生物剂，可以促进植物体内病原体的清除和组织的健康再生。
2.2 生理脱毒生理脱毒是利用植物自身的生理代谢特性进行脱毒的方法。
通过调节培养条件和添加特定的营养物质，可以激活植物的生理代谢活性，加速病原体的清除和组织的再生。
植物组培技术及其在花卉上的应用
繁 殖 组 织 培 养 脱 毒
目前已有人通过花的组织培养成功的获 得无毒的植株。 Eg：大丽花 通过花培的方法，可以使大丽花的脱毒 苗的成功率提高20%左右，茎尖培养脱毒 只有3%~5%。
茎的基础上，Murashige等提出了微体 嫁接技术，即茎尖分生组织嫁接在试管中经脱毒培养 的砧木上而得到完整植株。 微体嫁接技术解决了某些木本植物利用茎尖培养 发根难、生长缓慢的问题，并可使复合侵染的病毒分 离。 Eg：大丽花 大丽花茎尖培养出来的新茎不生根，把脱毒植株 的茎嫁接到健康的砧木上能得到完整的无毒植株。
四、问题及展望
组织培养脱毒技术已得到愈来愈多的国家和地 区的重视，正在以突飞猛进的速度向前发展，并逐 步走向工厂化和商品化。 从目前的发展趋势来看，植物病毒的防治任应 以培育无毒苗木、原种为主，而植物组织培养脱毒 技术的不断改进和提高以适应大规模的生产以事在 必行。对培养基和实验用具的进一步简化，可以降 低组织脱毒苗的生产成本，有助于大面积推广。 植物组织培养脱毒技术的推广和利用，目前迫 切需要与相应的全国性管理体系进行配套。对无毒 种质的保存技术也有待于进一步改进和提高。
3、抗血清鉴定法 特异性高，测定速度快，几小时甚至几分钟就可以完成。 植物病毒鉴定中最有用方法之一。 3.1原理 刺激抗体产生蛋白质抗原。抗原与抗体间能发生高度专 一性的血清学反应（免疫反应） 3.2方法 3.2.1叶绿体凝集法 3.2.2块茎沉淀法 3.2.3环形接口法 3.2.4酶联免疫法：用梅标记抗原或抗体的微量测定法。现 在灵敏度较高和常使用的方法。
植物组培脱毒技术及 其在花卉上的应用
一、植物组培脱毒技术概述 二、植物组培脱毒方法及其在花卉上的应用 三、病毒检测 四、问题及展望
一、植物组培脱毒技术概述
我国柑橘主要病毒类病害及其脱毒技术研究进展
我国柑橘主要病毒类病害及其脱毒技术研究进展柑橘是我国重要的经济作物之一，然而，柑橘的生产过程中普遍存在各种病毒类病害，如黄龙病、绿斑病、木质化等，严重影响了柑橘的产量和品质。
为了保障柑橘产业的发展，研究人员不断探索柑橘的脱毒技术，取得了一系列的进展。
一、黄龙病黄龙病是柑橘生产中最为常见、危害最大的病毒类病害，可引起树势衰退、花果畸形、果实变小等症状。
目前，脱毒方法主要包括化学处理、热处理和周期脱毒三种方式。
化学处理指的是将叶片和芽尖分别浸泡在氧化汞（Hg2O）和硫酸铜（CuSO4）溶液中，用于消毒。
此方法脱毒效果可达90%以上，但也可能造成伤害，如叶片枯黄、芽尖凋落等。
热处理是将覆土中的带毒枯枝及萎缩枝等移栽出来，直接浸泡在热水中，不断用凉水降温，使其达到特定的温度、时间来杀灭病毒。
热处理的脱毒率可达100%，但对植株造成的损伤也比较严重。
周期脱毒是利用矮化、轮休等方式，定期更新不同年龄的柑橘苗圃，达到脱毒的目的。
这种方法可以减少机械损伤和环境的影响。
二、绿斑病绿斑病是一种病毒类病害，可引发柑橘叶片上的黄绿色斑点。
目前，脱毒方法包括化学清洗、组织培养和转基因抗病技术三种方法。
化学清洗主要采用酸性介质，清洗柑橘枝条，能够去除病毒，脱毒效果较为理想。
组织培养则是将带毒细胞分离培养，消除病毒，再进行提取，以达到脱毒的目的。
转基因抗病技术是将耐病基因导入柑橘中，达到抵御病毒的能力，是一种比较先进的脱毒技术。
三、木质化柑橘木质化是一种普遍存在于柑橘中的病毒类病害，会导致柑橘叶片卷曲、枯死，严重影响果实的品质和产量。
目前，脱毒方法主要采取组织培养、转基因抗病技术和植物激素复合处理。
总体来说，柑橘脱毒技术的研究已经取得了很大的进展，但也存在着一些问题，如技术不够成熟、成本较高等。
因此，今后的研究应该更加注重技术的实用性和经济性，为我国柑橘产业的发展提供更加有力的支持。
植物组织培养技术应用研究进展
植物组织培养技术应用研究进展一、概述植物组织培养技术，作为一种在无菌条件下，通过人工操作将离体的植物组织、细胞或器官培养在适当的培养基上，以进行繁殖或生产次生代谢产物的生物技术，自20世纪初诞生以来，已经取得了显著的进展。
该技术的出现不仅极大地推动了植物科学研究的深入，也为农业、林业、园艺、医药等领域的发展带来了革命性的变革。
近年来，随着生物技术的不断发展，植物组织培养技术也得到了不断的优化和创新。
从培养基的改良、外源激素的应用到基因工程的介入，植物组织培养技术已经逐步从传统的形态学观察迈向了分子水平的研究。
同时，该技术在植物脱毒、快速繁殖、遗传转化、次生代谢产物生产等方面也取得了显著的应用成果，为现代农业和生物产业的发展提供了强有力的技术支撑。
尽管植物组织培养技术已经取得了显著的进展，但仍存在许多亟待解决的问题和挑战。
例如，如何提高培养效率、优化培养条件、减少培养过程中的污染和变异等，都是当前植物组织培养技术面临的重要问题。
进一步加强植物组织培养技术的研究和应用，不仅有助于推动植物科学研究的深入，也将为农业、林业、园艺、医药等领域的发展注入新的活力。
本文旨在综述近年来植物组织培养技术应用的研究进展，重点介绍该技术在植物脱毒、快速繁殖、遗传转化、次生代谢产物生产等方面的应用成果，同时探讨当前存在的问题和挑战，以期为植物组织培养技术的进一步发展和应用提供参考和借鉴。
1. 植物组织培养技术的定义与重要性植物组织培养技术，又被称为植物细胞工程或植物离体培养，是一种在无菌条件下，通过人工控制环境，使植物细胞、组织或器官在离体状态下进行再生和分化，最终形成完整植株的现代生物技术。
此技术自20世纪初诞生以来，已逐渐发展成为现代生物技术的重要组成部分，对植物科学研究、农业生产和生物工程等领域产生了深远的影响。
定义上，植物组织培养技术主要涉及到植物细胞的离体培养、脱分化、再分化以及植株再生等多个关键步骤。
离体培养是指将植物组织或细胞从母体中分离出来，在人工控制的环境中进行培养脱分化是指离体细胞失去原有的结构特性和生理功能，转变为具有分生能力的细胞再分化则是指这些分生能力强的细胞进一步分化成具有特定形态和功能的细胞或组织通过适宜的培养条件和调控手段，这些细胞或组织能够再生成为完整的植株。
植物组织培养技术的研究进展
植物组织培养技术的研究进展一、本文概述植物组织培养技术，作为一种在无菌条件下，通过人工操作将离体的植物组织、细胞或器官培养在人工配制的培养基上，使其再生为完整植株或生产具有经济价值的其他产品的技术，自其诞生以来，就在生物学、农业、林业、医药等领域引发了广泛的关注和研究。
本文旨在全面综述植物组织培养技术的研究进展，探讨其在实际应用中的潜力与挑战，以期为推动该领域的发展提供有益的参考。
本文将首先回顾植物组织培养技术的发展历程，梳理其从早期的摸索阶段到现代的精细化、高效化发展的主要历程。
接着，我们将重点关注近年来在植物组织培养技术方面取得的重要突破，包括培养基的优化、外植体选择的新策略、基因编辑技术在组织培养中的应用等。
我们还将探讨植物组织培养技术在植物育种、脱毒、次生代谢产物生产、生物反应器等方面的应用，并分析其在实际应用中的优势和局限性。
我们将对植物组织培养技术的未来发展进行展望，探讨如何通过技术创新和方法优化，进一步提高植物组织培养的效率和质量，以满足日益增长的农业生产需求和社会经济发展要求。
我们也将关注植物组织培养技术在应对全球气候变化、生物多样性保护等重大问题中的潜在作用，以期为推动植物组织培养技术的可持续发展提供新的思路。
二、植物组织培养技术的基本原理和方法植物组织培养技术，又称为植物微繁殖或植物细胞培养，是一种通过控制环境条件，利用植物细胞或组织的再生能力，在无菌条件下进行植物繁殖或遗传改良的技术。
其基本原理主要基于植物细胞的全能性，即植物体的每一个活细胞都含有该物种的全套遗传信息，并有能力发育成完整的植株。
植物组织培养的基本方法主要包括以下几个步骤：从植物体上获取所需的外植体（如叶片、茎尖、花药等）。
然后，通过表面消毒和切割处理，将外植体接入含有适当营养成分和植物生长调节剂的培养基中。
这些调节剂如细胞分裂素和生长素，对细胞的分裂和分化起着重要的调控作用。
接着，将接种后的外植体置于适宜的光照、温度和湿度条件下进行培养。
植物组织培养技术及应用进展
植物组织培养技术及应用进展摘要：当前，植物组织培养技术得到了快速发展。
本文系统介绍了植物组织培养的含义，以及植物组织培养技术应用于植物育种、应用于植物脱毒和快速繁殖、应用于植物有用产物生产、应用于植物种质资源保存和交换、应用于遗传、生理、生化和病理研究。
植物组织培养技术已经渗透到科研、生产和生活各个领域，必将为社会创造更大的价值和效益。
关键词：植物组织；培养技术；应用；进展1、引言当前，植物组织培养技术得到了快速发展。
人们可以利用植物的组织培养技术，生产优良无性系，为人们生产需要的多种代谢物质，单倍体、三倍体、多倍体及非整倍体。
这样细胞融合就打破种属间的界限，促进植物新品种的培育和种性的改良。
组织培养的植物细胞能够在细胞水平上研究的理想材料，加速植物快繁、花药培养、细胞器培养、原生质融合以及DNA重组技术。
因此，植物组织培养技术可以在各个植物科学的领域及农业、医药等多种行业。
这样就为社会创造了巨大的经济效益和社会效益。
2、植物组织培养技术的含义3、植物组织培养技术的应用现状3.1应用于植物育种当前，我国将植物组织培养应用于作物育种，特别是在：第一，单倍体育种。
单倍体育种的优点是高速、高效率、基因型一次纯合。
因此，通过花药或花粉培养的单倍体育种，而成为一种最新的育种手段，育成大面积种植的作物新品种。
我国在单倍体育种方面取得了重大成果。
我国育成了作物新品种—单育1号烟草品种，以及中花8号水稻和京花1号、京单92-2097小麦等面积栽培的作物新品种。
第二，胚胎培养。
植物的杂交不孕使远缘杂交不容易成功。
但是，采用胚的早期离体培养能够使胚正常发育和培养出杂交后代，以无性系繁殖获得数量较多、性状一致的群体，胚培养已在多个科属中成功。
这种技术就是把未受精的胚珠分离出来，在试管内用异种花粉在胚珠上萌发受精，产生的杂种胚在试管中发育成完整植株。
用胚乳培养可以获得三倍体植株，三倍体加倍后可得到六倍体，可育成多倍体新品种。
植物组织培养技术第七章植物脱毒快繁技术
1、茎尖培养脱毒原理
病毒在植物体内分布不均匀，其数量随植株 部位及年龄而异，越靠近茎顶端区域，病毒感染 的程度越低，生长点即分生组织（约0.1-1mm） 几乎不含或含病毒很少。
分生组织不带病毒，可能有4方面的原因：
1、植物体病毒的移动主要靠2条途径：一是通过维管 系统，而分生组织中尚未形成维管系统；二是通过胞间连 丝，但这条途径病毒移动速度非常慢，赶不上茎尖和根尖 细胞不断分裂和活跃的生长速度。
二、脱毒方法
(一) 热处理脱毒
（一）发现： 1889年印度尼西亚爪畦人发现，患枯萎病的甘蔗(现证
明为病毒病)，放在50-52℃的热水中保持30min，甘蔗就可 去病生长良好。以后此方法被广泛用于防治许多植物的病 毒病。
热处理又称温治疗法。
• 1、热处理脱毒原理：
①病毒是DNA大分子，病毒进入植 物细胞后，随植物细胞DNA一起复制。 热处理并不能杀死细胞，只是钝化病毒 的活性，使病毒在植物体内增殖减缓或 增殖停止，而失去病毒的侵染能力。
把抗原-抗体的免疫反应于酶的催化反应相结合而发展 起来的一种综合性技术，灵敏度高，特异性强，发展最快 应用最广的方法。
原理：采用酶标记的特异抗体指示抗原-抗体的结合， 从而检测样品中的抗原定量测定法。
操作程序：将待检植物汁液注入酶联板（聚苯乙烯多 孔微量反应板）中，使抗原吸附在它的孔壁，加入酶(
过氧化物酶或碱性磷酸酶)标记的特异抗体，抗原 -抗体充分反应后，清洗，固相载体酶联板表面只留 下以酶标记的抗原-抗体复合物。加入酶嘚无色底物
葡萄扇叶病毒
苹果花叶病毒
（二）茎尖培养脱毒
1、茎尖培养脱毒原理 2、培养基 3、茎尖培养方法 4、影响微茎尖培养的因素
①外植体大小 ②培养条件 ③外植体的生理状态
超低温处理植物脱毒研究进展
超 低 温 处理 植 物 脱 毒研 究进展
杨 智 ，陈 春 伶 。 ，徐 美 隆 。
（ １ ． 国家 经济 林木 种苗 快 繁工 程技 术研 究 中心 ， 宁夏 银川 ７ ５ ０ ０ ０ ４ ； ２ ． 宁夏 大学 生命 科学 学 院 ， 宁夏 银川 ７ ５ ０ ０ ２ １ ； ３ ． 种 苗生 物工 程 国家 重点 实验 室 ， 宁夏 银川 ７ ５ ０ ０ ０ ４ ）
［ ８ ］ 李 王 艳． 佳 县 红 枣 产 业 的 困惑 ： 枣 价 为何 十年 上 不 去 ［ Ｎ］ ． 华商报 ，
２ ０ １ ２ — １ ２ — ２ ６ ： １ ３ ９ ．
［ １ ３ ］ 安广 池． 枣 新 品种 ‘ 伏脆 蜜 ’ ［ Ｊ ］ ． 园艺 学报 ， ２ ０ １ ０ ， ３ ７ （ ３ ） ： ５ ０ １ — ５ ０ ２ ． ［ １ ４ ］ 高京 草 ， 王 长柱 ， 高 华． 影 响枣 裂果 因子 的研 究［ 刀． 西 北林 学 院学 报 ，
生长相对正常因此在茎尖部位就会有更大的区域不含液氮超低温会将大部分茎尖细胞杀死不仅使成活率降病毒剥离茎尖时就可以剥取更大的茎尖l2这样就能低而且延长了茎尖复苏所用的时间从几周到几个月在保证脱毒率的基础上提高２ ０ １ ３ （ ］ ２ ） ： １ ８ ４ ～ １ ８ ７
行 了 简要 探 讨 。
关键词 ： 超低温处理 ； 茎尖剥离 ； 热处理 ； 植物病毒 ； 脱毒 中图分类号： Ｔ Ｂ ６ ６ ； Ｑ ８ １ ３ ． １ ２ 文献标识码： Ａ 文章编号： １ Ｏ ０ １ 一ｏ ０ Ｏ ９ （ ２ ０ １ ３ ） １ ２ —０ １ ８ ４ —０ ４
第 一作 者简 介 ： 杨智 （ １ ９ ８ ７ 一 ） ， 男， 硕士， 现 主要 从 事 葡 萄脱 毒 与 病
樱桃的组织培养
樱桃矮化砧木组培快繁技术及脱毒研究陶波（甘肃农业大学生命科学技术学院09级）摘要：本文综述了大樱桃矮化砧木组织培养及脱毒技术研究进展，重点对樱桃矮化砧木GD-1、GD-2外植体的初代培养、增殖培养、生根培养等环节进行了研究，也对樱桃茎尖脱毒技术进行了研究。
以大樱桃嫩梢芽为外植体进行茎尖组培脱毒研究，结果表明：(1)筛选出的增殖培养基为MS +6–B A1.0 mg/L +NAA0.2mg/L+GA30.5mg/L+蔗糖30g/L+琼脂6.5g/L，丛生芽增殖数达到6个以上。
确定良好的生根培养基为1/2MS+IBA0.7mg/L+NAA0.2mg/L+蔗糖20g/L+琼脂3.5g/L，生根率可达75.1%。
(2)外植体进行暗培养能提高生根率，生根率达到了73%，而对照仅有57%，单株根数也从1.2条增加到了1.7条。
(3)采用特异引物的RT-PCR扩增方法，对3个大樱桃品种进行了李坏死环斑病毒(PNRSV)的检测。
结果表明，0.5～0.8mm 茎尖培养对李坏死环斑病毒(PNRSV)的脱毒率达78.5％；0.5mm 以下茎尖培养对PNRSV 的脱毒率达 93.3％，证明大樱桃试管苗0.5mm 以下的小茎尖培养能有效脱除 PNRSV病毒。
关键词：大樱桃；矮化砧木；组培快繁；脱毒技术Rearch On Tissue Culture Rapid Propation Technology And Virus-free Of Sweet CherryDwarfing RootstocksAbstract: The paper summarized research progress on tissue culture rapid propagation and virus-free of sweet cherry dwarfing rootstocks, mainly studied crucial technology of propagating, rooting, acclimatizating and transplanting on tissue culture of the sweet cherry dwarfing rootstocks GD-1.GD-2, elementarily discussed on virus-free of cherry. The results indicated：(1)The culture medium of MS+6-BA1.0mg/L+NAA0.2 mg/L +sucrose 30g/L+agar 6.5g/L was screened out used to differentiate and multiply and differentiating quantities of buds up to more 6. Meanwhile, the inducing rate on culture medium of 1/2 MS +IBA 0.7mg /L +NAA0.2 mg/L+sucrose20g/L+agar3.5g/L being responsible for root growth up to 75.1% was accounted for the optim- umone.(2) The root percentage of shoots of GD-1,GD-2 was improbed by a dark treatment of explants.(3) Total RNA, isolated from three sweet cherry cultivars, was used as template to amplify PNRSV by polymerase chain reaction (PCR). The results showed the virus-free rate of PNRSV is 78.5% on 0.5～0.8mm shoot tip; The virus-free rate of PNRSV is 93.3% less than 0.5mm shoot tip, it was proved that PNRSV could be elimin -ated effectively from sweet cherry plantlets in vitro by culture of shoot tip less than 0.5mm.Key word: Sweet cherry; Dwarfing rootstocks; Tissue culture rapid propagation; Virus-free樱桃（Prunus）为蔷薇科樱属（Cerasus Mill.）的落叶乔木。
浅谈马铃薯茎尖脱毒培养技术的研究进展
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西 昌 农 业 科 技
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的发 育 ，但 可 以提高 脱 毒率 ． 制 剂对 马 铃薯 茎 尖 培养脱 毒是 否有 相 同 的效果 ，值 得研 究和探 讨 。刘 华 、冯高 采用 不 同浓 度 高 锰 酸钾 、过 氧 化氢 、新 洁 尔灭 、尿素稀 释 液对 马铃 薯进 行浸 种处 理 ，发 现 病毒 钝 化 明显 。用处 理 过 的薯 块 做种 薯 ，产 量 明显 提 高 。 而Ｃａｓｓｅｌｌｓ，Ａ．Ｃ等 （ｍ 将 病 毒 唑加 入 培养 基 中 ，培 养 马 铃薯 的分 生组 织 和外 植 体 ，可脱 除 马铃 薯 的Ｘ、Ｙ、Ｓ 和Ｍ病 毒 。 ２．３ 热 处理 的使 用
马铃薯茎尖培养脱毒研究进展
组培课程论文题目马铃薯茎尖培养脱毒研究进展学院生命科学技术学院专业生物技术(制品方向)姓名刘小强指导教师李胜职称教授甘肃农业大学生命科学技术学院二〇一一年六月马铃薯茎尖培养脱毒研究进展刘小强（甘肃农业大学生命科学技术学院09级甘肃兰州 730070）摘要: 综述了马铃薯茎尖培养脱毒的原理,影响马铃薯茎尖培养脱毒的因素，马铃薯试管苗快繁技术与培养条件优化等方面的研究进展,指出了茎尖培养脱毒中尚存在的一些问题。
关键词: 马铃薯；茎尖培养脱毒；脱毒试管苗；前景马铃薯是世界上第四大粮食作物，属茄科茄属双子叶植物，其特点是产量高、营养丰富、适应性强、经济价值较高，又是重要的工业原料。
随着农业产业结构的调整和国内外马铃薯加工业的不断发展扩大，市场对马铃薯的需求也逐渐增多，近年来，我国马铃薯的栽培面积不断扩大，占世界第二位。
但是长期以来有“植物癌症”之称的病毒病一直困扰着马铃薯生产的发展。
马铃薯整个生育期均易感染多种病毒病，在我国马铃薯产区危害马铃薯的主要病毒和类病毒有：马铃薯X 病毒（PVX）、马铃薯Y 病毒（PVY）、马铃薯卷叶病毒（PLRV）、马铃薯A 病毒（PVA）、马铃薯S病毒（PVS），还有一种类病毒-马铃薯纺锤块茎类病毒（PSTVD）。
其中PVY、PLRV、PVX 是危害马铃薯最严重的病毒。
田间表现使植株矮小，叶片翻卷、花叶、皱缩，马铃薯品种种性退化，品质变劣，甚至失去种用价值。
目前主要通过茎尖脱毒获得脱毒试管苗的方法防治该病的发生。
目前,马铃薯茎尖培养脱毒的研究及在生产上的广泛应用取得了巨大的经济效益。
近年来, 这方面的研究又取得了不少研究成果, 现作一综述。
1 马铃薯病毒病及茎尖培养脱毒原理目前, 在马铃薯作物上已发现了多种病毒、类病毒以及植原体, 已报道的就有25 种之多, 但仅少数病毒危害严重, 如马铃薯Y 病毒( PVY) 、马铃薯卷叶病毒(PLRV) 、马铃薯A 病毒和 X 病毒(PVA、PVX) 以及马铃薯纺锤块茎类病毒(PSTVD) 等。
草莓种苗的脱毒技术试验研究
草莓(Fragaria ananassa Duch.)属蔷薇科草莓属多年生草本植物,是一种重要的经济作物[1],在我国很多地方被广泛栽培,具有较好的经济效益。
草莓是一种以匍匐茎无性繁殖的作物,因长期种植,体内病毒逐年积累加重,病毒病发生严重[2]。
一旦草莓感染了病毒后,植株生长缓慢、叶皱缩、果实逐年变小、畸形、品质差,一般减产30%~80%[3],草莓病毒病已成为了草莓生产中的一大危害。
草莓病毒病,目前还没有一种比较好的药剂可用于防治。
培育无病毒母本苗,栽培无病毒苗木,是防治草莓病毒病的根本对策[4]。
目前世界上生产草莓无毒苗最普通、最有效的方法是用茎尖培养法培育草莓无病毒苗[5]。
草莓脱毒技术的研究,国内已有很多报道,上海交通大学农业与生物学院何欢乐等的研究结果[2]表明,最适宜的草莓脱毒法为改良热处理+茎尖培养法,即先将草莓匍匐茎放在40℃热水中处理4h,再剥取≤0.5mm 大小的茎尖进行培养,脱毒效果良好;高山林[3]的研究结果表明,把切取的草莓芽洗净后经过高温短时间热处理,然后用茎尖培养法获得无病毒草莓苗;刘健等[6]的研究表明,经40~42℃高温处理草莓匍匐茎后再剥取茎尖,得到的试管苗能达到100%脱毒率;顾地周等[7]的研究表明,利用试管内高温处理(在温度35~50℃条件下,培养30~80d)结合茎尖脱毒的方法可以完全脱除草莓病毒,从而建立了草莓脱毒体系;覃兰英等[8]的研究表明,将草莓在35℃下热处理7d 后,逐步升温至38℃,在湿度40%~68%、光照度4000~5000lx 条件下热处理35d 后,将长出的新茎茎尖再行组培,可获得100%的脱毒苗;童尧明等[9]的研究表明,以草莓茎尖分生组织0.2~0.4mm 一次性培养出组培苗,出苗率83%~90%,脱毒率达100%;高遐虹、李梅[10]的研究结果表明,采用草莓的茎尖2次脱毒法,对宝交早生等6个草莓品种的茎尖进行组培脱毒,经检测可全部脱除草莓斑驳病毒、草莓轻型黄边病毒、草莓镶脉病毒和草莓皱缩病毒,茎尖2次脱毒法操作简便、易掌握,脱毒率达100%,分化率达79%。
我国植物组培技术的发展及展望
发展历程
自20世纪初植物组织培养技术诞生以来，我国在该领域的发展迅速。下面将 从实验室建设、科研机构参与、资金支持、政策鼓励等方面介绍我国植物组培技 术的发展历程。
1、实验室建设：随着科技的不断进步，我国植物组培实验室的数量和规模 逐渐扩大。近年来，各级政府和企业纷纷加大了对实验室的投资力度，建立了众 多具备国际先进水平的植物组培实验室，为我国的植物组培技术研发提供了坚实 的硬件基础。
3、细胞工程：通过组织培养技术，可以诱导园艺植物细胞产生突变，筛选 出具有优良性状的突变体，为新品种的培育提供基础。
4、基因工程：基因工程是现代生物技术的核心之一。通过组织培养技术， 可以将外源基因导入园艺植物细胞中，并获得转基因植株，为新品种的培育提供 新的途径。
目前，虽然组培技术在园艺植物中的应用已经取得了一定的成果，但仍存在 一些不足之处。例如，组织培养过程中可能会出现变异和基因型丢失等问题，影 响植株的遗传稳定性和品质。此外，外源基因的导入和表达也可能受到多种因素 的影响，难以获得理想的转基因植株。
通过研究，我们成功优化了铁皮石斛的组培快繁和栽培技术。组培快繁技术 的结果显示，采用半木质化茎段作为外植体，以MS培养基为基础，添加6-BA 1.0 mg/L和NAA 0.5 mg/L的激素组合可以实现最佳的增殖和生根效果。栽培技术的实 验结果表明，选择适宜的山区环境，使用树皮、苔藓和珍珠岩的混合基质进行栽 培，合理的施肥、水分管理和病虫害防治能够有效提高铁皮石斛的产量和品质。
植物组培污染是指在植物组织培养过程中，培养基和培养环境受到各种有害 微生物和其它杂质的污染。这些污染源可能包括细菌、真菌、病毒、支原体等微 生物，以及培养基中的杂质和污染物。植物组培污染对植物生长和发育产生严重 影响，可能导致实验失败、研究受阻和经济损失。
我国植物组织培养研究进展
我国植物组织培养研究进展一、概述植物组织培养，作为一种在无菌条件下，将离体的植物器官、组织、细胞或原生质体培养在人工配制的培养基上，使其再生为完整植株或生产具有经济价值的其他产品的技术，自20世纪初诞生以来，已在全球范围内得到了广泛的应用和研究。
我国作为农业大国，植物组织培养技术在农业、林业、园艺等领域具有极其重要的意义。
近年来，随着生物技术的飞速发展，我国的植物组织培养研究也取得了长足的进步。
在基础理论方面，我国的科研工作者深入探讨了植物细胞全能性、细胞分化与再分化、遗传物质稳定性等关键问题，为植物组织培养技术的优化和应用提供了理论支持。
在应用研究方面，我国已成功将植物组织培养技术应用于作物脱毒、种质资源保存、遗传转化、次生代谢产物生产等多个领域，取得了一系列具有自主知识产权的重要成果。
与发达国家相比，我国在植物组织培养技术方面仍存在一些差距，如技术普及程度不高、创新能力不足、产业链不完善等。
进一步加强植物组织培养技术的研究与应用，提高我国在这一领域的国际竞争力，具有重要的现实意义和深远的社会影响。
本文旨在综述我国植物组织培养技术的研究进展，分析当前存在的问题与挑战，并展望未来的发展趋势，以期为推动我国植物组织培养技术的持续发展和应用提供参考和借鉴。
1. 植物组织培养的定义与重要性植物组织培养，也被称为植物细胞培养，是一种在无菌条件下，将离体的植物组织、器官、细胞或原生质体在人工控制的环境中，通过提供适当的营养物质和激素，使其在人工培养基上进行繁殖或产生次生代谢产物的技术。
这种技术自20世纪初诞生以来，已成为现代生物技术的重要组成部分，并在农业、林业、园艺、医药等多个领域展现出巨大的应用潜力。
植物组织培养的重要性主要体现在以下几个方面：它是植物繁殖的一种高效手段，通过微繁殖技术可以快速繁殖稀有和优良品种，提高繁殖系数，满足大规模生产的需求。
组织培养技术为植物遗传转化提供了受体系统，为植物基因工程和分子育种提供了可能。
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存活率，再 生率和脱毒 率高
意义：超低温保存是种资源长
久保存的理想方法，在液氮中亦 可保证材料的遗传稳定性.
去除原菌 感染
原理：在冰冻和冻融期间，细
胞的结构和功能受损严重，含有 病毒的顶端细胞液泡较大，水分 多，易形成冰晶而致死，分生组 织含水分少，胞质浓，不易被冻 死
植株再生后无毒
优点
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植物组织培养脱毒技术进展 研究
主讲人： 小组成员：邱智海，史丽丽，王 珍，熊化鑫，徐德贵， 徐小金，鄢惠庆，杨 林，余欢，曾国敏
组织培养脱毒
脱毒技术的发展过程
常用的脱毒技术 无病毒植株检测方法 脱毒技术的未来
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植物组织培养常用脱毒方法
茎尖大小和脱毒率
热处理
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如采用茎尖培养和热处理都不能除去 悬钩子丛矮病毒（RBDV），若热处 后，再采用茎尖玻璃化超低温保存， 存活的植株中35%无该病毒
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脱毒甘蔗
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脱毒草莓
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敏感，该法只对球状病毒（如葡萄扇 叶病毒，苹果花叶病毒）或线状病毒 （如马铃薯X,Y病毒）有效果，而对 杆状病毒（如千日红病毒）不起作用
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制作人：王珍
分子生物学法
1.核酸杂交技术； 2.RT-PCR； 3.荧光定量PCR； 4.DNA微阵列技术
特异性强，灵敏度高，而且不需要准备 抗血清以及放射性探针，操作简单，适 用广泛，是植物病毒检测的重要方法
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展望
现有的脱毒技术多种多样，各有优缺 点，目前应用的趋势是将不同的方法 结合起来，从而阻止植物病毒的扩散
抗病毒化学药剂
超低温保存
抗病毒化 学药剂来抑制病毒核 酸与蛋白质的合成或 是改变寄主的代谢方 式
1
•化学抗病毒试剂：9（2-羟二氧）甲基鸟嘌 呤，2-硫尿嘧啶，叠氮 胸苷，2,4-氧六氢三氮杂 苯（DHT）和类似嘌呤 碱基代谢物质三氮唑核 苷（病毒唑）
2
•优点：与茎尖培养相 结合，可较容易脱去 多种病毒，而且此法 对取材要求不严，接 种茎尖可大于1mm， 易于分化出苗，提高 成活率 •缺点：不能脱去所有 病毒，尚不能完全抑 制病毒使其失活
脱毒技术的发展过程与应用
自1952年法国莫勒尔使用生长点培养 法获得无病毒植株后，该种脱毒技术被 广泛使用。通过脱毒，使植株恢复种性， 增强抗性，生长健壮，光合作用增强， 明显提高了植株的产量和品质。尤其是 该技术在马铃薯和甘薯上的应用，对其 种植逐步走向规模化，标准化，区域化 具有重要意义。
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酶联免疫吸附法
原理
优缺点
①使抗原或抗体结合到某种固相载体表面，并保持其免疫活性 ②使抗原或抗体与某种酶连接成酶标抗原或抗体，这种酶标抗原 或抗体既保留其免疫活性，又保留酶的活性。用洗涤的方法使固相 载体上形成的抗原抗体复合物与其他物质分开，最后结合在固相载 体上的酶量与标本中受检物质的量成一定的比例。加入酶反应的底 物后，底物被酶催化变为有色产物，产物的量与标本中受检物质的 量直接相关，故可根据颜色反应的深浅刊物定性或定量分析。 优点：由于酶的催化频率很高，故可极大地放大反应效果，从 而使测定方法达到很高的敏感度。 缺点：需要制备抗体，而且一次只能检测一种病毒。
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茎尖脱毒法
原理：病毒在寄主植物内靠维管系统运输，茎尖分生 组织中未形成维管束，所以病毒的运动受阻，所以茎 尖组织中不含或只含低浓度病毒
依据： 病毒在植物体内分布是不均一的，越接近生 长点约（0.1-1mm区域），病毒浓度越稀，因此有可 能采用小的茎尖离体培养而脱除植物病毒 技术关键：1.被脱毒植物携带病毒的诊断及其在体内 的分布；2.母体植株的选择和预处理；3.茎尖的剥离； 4.脱毒效果检测；5. 影响脱毒效果的因素
3
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无病毒植株检测
脱毒后的无病毒植 株须经严格的病毒 鉴定和检测证明确 属无毒良种种源， 并采取严密的防病 毒重复污染措施才 能取得预期效果
建立快速，高灵敏 度，高通量的病毒 检测体系是病毒害 预防和综合防治的 先决条件
1.酶联免疫吸附反应 （ELISA） 2.分子生物学法
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东方百合组培脱 毒时，茎尖小于 0.3mm，成活率 只有20%，小于 0.1mm全部死亡
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高温处理
热处理
原理：高温可抑制病毒的增殖，
减缓病毒在植物体内的扩散速度
方法：1.热水浸泡；2.高温空气处
理.
优点：热处理结合适宜的茎尖分
生组织大小是获得无病毒植株的关键 因素.
缺点：并非所有病毒都对热处理
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脱毒工作室
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超低温
无需昂贵 仪器或设 备 出无毒苗 所需时间 短
指示植物鉴定：a.摩擦接种法 b.嫁接法
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脱毒率
席梦利等对宜兴 百合脱毒培养得 出接种 0.3~0.5mm茎尖 脱毒效果最好
茎尖脱毒的关键是茎尖大小和脱毒率， 脱毒的成功率与所切茎尖分生组织大 小成反比，为了提高脱毒率，须切下 足够小茎尖分生组织（0.2~0.5mm） 同时其再生能力与分生组织大小成正 比