15秋专科药学专业大作业答案(生物技术制药概论【1138】)

3.简述或者图示基因工程制药的基本流程。
答：基因工程制药的基本流程分为上游技术：目的基因及载体的选择与制备→组建重组质料→转入宿主细胞扩增→筛选鉴定转化细胞→获得重组工程菌（或细胞）下游技术：重组工程菌发酵培养→目的产物分离纯化→过滤除菌，除热原→产品鉴定与质量检测→制剂研究及包装
4.比较转化、转导、转染三种不同方式基因导入宿主的方法？
适用于载体构建菌落鉴定，最好是插入片段较大的（大于1kb），好区分。无需酚仿等有毒物质参与，安全！
上面两种方法很适合初筛，得到的疑是菌落90％以上就是阳性克隆。
3.用酚抽一下，效果很好，100％成功
1）但是只能用于比大小，不能鉴定详细的插入情况，属于粗筛
2）挑克隆，接至1.5ml EP管/700uL抗性LB培养基，37度摇3小时
6.生物技术药物与化学药物的主要区别是什么？
答:其实没有明显的界限，如果非要区分的话
传统的化学合成工艺没有生物活性的大分子（蛋白质、核酸等）或微生物的参与，而是通过人工设计的合成路线，以经典的有机反应进行合成的
生物技术的引入主要体现在生物活性分子，如各种酶，参与到合成中，最大的优势在于反应的选择性提高、反应条件更温和、反应速率也有一定的提高，同时微生物参与的合成则更为便捷，如染色体被修改了的大肠杆菌已经被用于合成药物，只需要提供含有人工合成的原料的培养液，大肠杆菌体内的各种酶就能利用这些原料来合成药物
答：转化作用（transformation）：将携带某种遗传信息的DNA引入宿主细胞，通过DNA之间同源重组作用，获得具有新遗传性状生物细胞的过程称为转化作用。转化是生物界客观存在的自然现象。转导作用（transduction）：自然界中，通过噬菌体或病毒的感染作用将一个细胞的遗传信息传递到另一个细胞的过程称为转导（transduction）。即通过噬菌体（病毒）颗粒感染，把DNA导入被感染的宿主细胞的过程。转染作用（transfection）：转染作用是将外源DNA分子导入真核细胞的过程，原核生物中转化的同义词。
西南大学网络与继续教育学院课程考试答题卷
学号：姓名：层次：高起专
类别：网教专业：药学2015年12月
课程名称【编号】：生物技术制药概论【1138】
题号
一
二
三
四
五
总分
评卷人
得分
（横线以下为答题区）
一
生物技术药物：生物技术药物是利用生物体、生物组织、细胞或其成分，综合应用生物学、生物化学与分子生物学、微生物学与免疫学、物理化学与工程学和药学的原理与方法加工制造而成的一大类用于预防、诊断、治疗和康复保健的制品。
5.举出三种当前流行的单克隆抗体药物名称和适应症
答：一、阿达木单抗阿达木单抗为首个成功开发的重组全人源化免疫球蛋白单克隆抗体，用于RA、强直性脊柱炎（AS）、银屑病（Ps）、银屑病关节炎（PsA）、幼年特发性关节炎（JIA）和克罗恩病（CD）等治疗。二、利妥昔单抗利妥昔单抗用于1、B细胞性恶性肿瘤（非霍奇金淋巴瘤、淋巴细胞白血病）2、自身免疫性疾病（B淋巴细胞与免疫异常、系统性红斑狼疮、肾脏病、类风湿关节炎等）三、曲妥珠单抗曲妥珠单抗通过拮抗肿瘤细胞生长信号传导从面抵制肿瘤生长、影响细胞周期、下调肿瘤细胞表面HER-2蛋白质表达及减少VEGF生产途径发挥作用，适用于HER-2过表达的乳腺癌。也常用于其他部位的肿瘤，如头颈肿瘤、胃癌等，即将被用于转移性或进展期胰腺癌的治疗。
质粒:是染色体外能够进行自主复制的遗传单位，包括真核生物的细胞器和细菌细胞中染色体以外的脱氧核糖核酸(DNA)分子。现在习惯上用来专指细菌、酵母菌和放线菌等生物中染色体以外的DNA分子。在基因工程中质粒常被用做基因的载体。
培养基:培养基（Medium）是供微生物、植物组织和动物组织生长和维持用的人工配制养料，一般含有碳水化合物、含氮物质、无机盐（包括微量元素）、维生素和水等，有的还含有抗菌素、色素、激素和血清。
10.论述题：系统分析你掌握的几种重组阳性克隆子的筛选和鉴定方法
常用的有PCR法和cracking法，可以快速鉴定出阳性克隆。
具体如下：
1.PCR法：
1).准备好PCR管，加入6ul水/管。
2).用tip头挑起菌落，在1中来回吹吸几次。
3).在2中用的tip头，可以直接在另一块LB板上划线培养。
4).加入PCR mixture，PCR鉴定即可。注意做过阳性，阴性对照。
GLP:GLP（Good laboratory practice of drug）药品非临床研究质量管理规范。指对从事实验研究的规划设计、执行实施、管理监督和记录报告的实验室的组织管理、工作方法和有关条件提出的法规性文件。
2.简述生物技术在制药领域的应用
答：生物技术在制药领域的应用：1、利用基因工程技术生产多肽/蛋白质类药物或疫苗2、利用蛋白质工程技术制造新型活性多肽/蛋白质类药物3、利用细胞工程技术制备抗体类药物4、利用酶工程技术获得活性药物分子或药物中间体5、利用发酵工程技术提高生产工艺水平6、现代生物技术在新药研发中的作用
我常用此法做TA克隆鉴定，也可以用于载体构建鉴定，无需提质粒，很实用。
2.CRACKING法：
1).将长出的克隆，划线到另一块抗性LB板，培养，使均线长大较为粗大。
2).于PCR管中加入水6ul/管，挑1均线，尽可能挑取，混匀于水中。
3).加入6ul含有loaddingbuffer的2×cracking液（20%蔗糖＋0.5%SDS+0.5M NaOH），来回吹吸混匀，点样，跑胶即可。
5）注意要点：Agarose胶配的长一点，这样可以把基因组DNA，质粒，RNA都跑开（闲RNA看着不爽，可以外加RNA酶，但是我觉得没必要，浪费步骤和时间）
6）配合阴性对照/阳性对照，可以用菌抽后为对照，也可以直接加相当片断大小的重组质粒，平行孔电泳，作为对照
3）留100ul备用，后续可以摇大管，剩下的菌液，12000rpm×30秒
4）吸掉大部分上清，留一点（这样后续不用单独加H20了，效果是一样的，鉴定的时候，时间就是生命，否则该烦死了），然后，往菌的沉淀里，加入一滴Tris平衡酚，然后VOTEX5秒，再离心12000rpm×30秒，直接取上清Agarose电泳就可以了，有的人习惯再用氯仿抽一遍，但是我从来不用，效果也一样理想。
PCR:聚合酶链反应，在四种脱氧核苷三磷酸（dNTP）存在下，以寡聚核苷酸为引物及单链DNA为模板，经DNA聚合酶催化合成DNA上互补链的过程称为聚合酶链反应（polymerase chain reaction，PCR）。
单克隆抗体:由单一B细胞克隆产生的高度均一、仅针对某一特定抗原表位的抗体，称为单克隆抗体。