全波长扫描式多功能读数仪

全波长扫描式多功能读数仪
操作规程
Thermo Scientific Varioskan® Flash
厦门大学医学院中心实验室
王晓珍
2017年10月
正式操作仪器之前请注意如下事项：
首先要在仪器预约保护时间内及时使用本人注册的校园卡刷卡开始实验。

1.查看仪器使用记录本，如之前使用者有记录仪器异常情况，请不
要开机使用。

2.查看仪器整体有无异常，周围环境是否正常，需要时要开启室内
空调，空气湿度过高时要关闭门窗。

3.在刷卡前要检查酶标仪的刷卡机USB接线是否与电脑主机相连，
再查看仪器使用记录本及刷卡机“日历”，如之前使用者刚刚关机，请等候20分钟以上再开机使用。

一、开机：
轻按仪器左侧的按钮启动仪器，仪器启动后有2分钟左右的全面自检，自检完成后LED 灯由黄色转为绿色，显示仪器正常。

二、工作站使用：
1、仪器自检结束后，打开电脑，双击启动工作站，输入默认用户名
“admin”，无密码，点击“OK”进入软件。

A、调用已有程序：在工作站界面点击Open Session ，选择打开已
有的程序（程序前面的图标为）。

B、新建程序：在工作站界面点击New session 新建程序：
a、在新对话框内给程序命名，在处输入文件名，
点击Next；
b、在新对话框内选择您所用的微孔板，如96 孔平底板，您可以选择默认版型
Use default，点击Next。

2、点击Finish进入程序编辑界面：
选中，点击右上角进入填充向导界面：
A、红色代表当前孔，您所设置的样品类型都会以当前孔为起点进行填充，
可以用鼠标选择当前孔的位置；
B、样品类型有以下几种：Blank、Calibrator、Control、Empty、Unknown ，
可以通过下拉菜单进行选择；
C、如已选择 Calibrator，则需要设定标准品的浓度梯度，Concentration
为起始浓度，Unit为单位，如 mg/mL 或 mM，勾选 Generate series，进入下一对话框；
D、如图，假设起始浓度为 1.0，浓度梯度选择除法，依次稀释10倍，共8
个样品，每个样品重复2次。

也可以用+、-、*等梯度方法。

还可以在Multiple values处依次输入浓度值后点击 Add 添加即可；
E、点击 OK 后得到下图。

如果鼠标落在定义好的孔上，会显示孔的类型，
及标准品浓度；
F、Unknown 的设定类似，如设定数量（20个样品）和2个重复样品后得到
下图：
G、Blank 设定较为简单，
设定一下数量即可得到下图；
3、各个板孔设置编辑完成后，即可设置试验方法：点击后在Steps
中添加实验方法和步骤。

方法是按鼠标右键调用步骤清单，或直接点击左边相应的方法图标。

具体以下三种实验方法：
A、光吸收检测
B、荧光检测
C、化学发光检测
D、DNA/RNA浓度检测
4、全部设置完成后点击左上的存盘键保存程序，点击出板
键，待仪器自动移出托盘架后放入微孔板，放板前，请确认适配器与所使用的微孔板类型相符，去掉板盖，将微孔板的A1孔对准托架左上角
A1位置，点击进板键，点击运行键，仪器自动移入托架并开始检测。

5、检测完成后，选中，然后点击Report ，在Select items
to report中选中要导出的内容，点击Add到Report items中，点击View
Report
点击 View Report 后切换到 Report 面板，对导出结果进行浏览。

按保存，填入文件名称（File name），选择文件类型（.xls 或.pdf 或.txt），
一般保存结果至 Excel 文件。

6、将文件上传到Data cloud，做好实验记录，查看预约记录，若接下来没有人使用仪器，先关闭工作站，等半个小时再关闭仪器开关。

然后清理实验桌，刷卡结束实验，关灯离开实验室。

A、光吸收检测
1、如果已知最佳比色波长，点击Photometric Measurement 光吸收检测，在Paramenters处设置参数，在Wavelength中输入检测波长（单波长检测时），也可以设置多波长检测，勾选Multiple measurements，然后依次输入波长，依次点击Add：
2、如果不确定最佳比色波长，可以先进行光吸收光谱扫描Photometric Scanning ，仪器将从设定的起始（Start）波长，每次递进（Step size）扫描到结束（End）波长。

注意普通的酶标板对于 300nm 以前的紫外光有很强的吸收，如果被检测物质（如核酸）的最大吸收峰在 300nm 以前，请选购紫外板或石英板。

B、荧光检测
1、如已知最佳激发波长与发射波长，点击Fluorometric Measurement
进行荧光检测：
A、检测悬液时选择Top荧光顶读，Excitation Wavelength中输入激发波
长，Emission Wavelength中输入发射波长即可。

多波长检测选择Multiple measurements,Ex/Em中依次输入激发波长和发射波长，依次点击Add添加。

B、检测贴壁细胞内荧光染料时，需选择Bottom荧光底读，同时选择
Multipoint，选择读点模式，黄色表示选中；Plate tray处选择
96-well Plate W/O lid。

2、如不确定样品的激发光、发射光波长，点击Fluorometric Scanning 进
行荧光光谱扫描，当Fixed wavelength中选择Excitation固定激发光时，Wavelength中输入激发光固定波长，Start、 End中输入发射光扫描起始波长，然后再点击Fluorometric Scanning ；然后固定发射波长，扫描激发波长。

注意：1、激发波长要小于发射波长
2、正确选择发射和激发波长之间的差值，
如Excitation bandwidth选择5nm，
差值必须大于19nm；如选择12nm，
差值必须大于26nm。

C、化学发光检测（报告基因检测、双报告基因检测）
点击Luminometic Measurement ，一般选择Normal高敏模式，Measurement time设定单孔的检测时间，一般为1000ms，如有特殊要求再进行更改但检测时间一般都大于1000ms，右击程序，选择Plate out ，然后选择Pause，设置暂停时间，最后选择Plate In ，然后再点击，开始检测；
如果需要使用分液进样器，先在仪器上把进样端口放入样品溶液中（样品溶液必须大于800ul），再将分液端插入L1端口中，然后在进样板进样装置的左侧放置一个八联管，用于收集prime tip分液时分液口尖端产生的少量残留溶液。

在设置程序时，点击Dispense程序，程序中分样器Dispenser选择1，volume 为每孔进样量，dispensing speed选择medium，prime tip 选择automatic，postion 选择L1。

自动进样后需要混匀的，可以再添加震动程序，震荡程序中duration time= on time + off time，speed震荡速度一般选择300，震荡幅度选择1。

以上程
序编辑完后再添加自发荧光程序，点击开始检测。

实验结束后，必须清洗分液器，分液器清洗程序如下：先将用于抽取溶液的那端钝头插入到装有多于1.5ml的ddH2O中，再将分液的那段针都悬空放在废液缸上，然后再点击prime程序进行三次清洗分液器，最后不再抽取ddH2O进行空prime一次，排清管道中的水。

D、DNA和RNA检测
使用专门的适配器进行检测，先将适配器置于进样装置上，然后使用无尘纸擦拭适配器滴液的白色石英进样孔，之后将待测样品溶液按每孔2ul点在进样孔上。

打开程序，选择DNA和RNA程序文件种类，打开程序后点击Plate In ，然后再点击开始检测。

检测完成后清理测试板时可以直接用ddH2O冲洗，然后自然晾干或者用无尘纸吸水擦拭干净。

离开实验室之前切记要及时使用本人注册的校园卡刷卡结束实验。

仪器使用注意事项：
1、请将仪器放置在整洁、干燥的环境中，务必远离水槽和风口。

2、仪器使用过程中，除取样品时戴手套外，其余仪器操作禁止戴手套。

3、放板前，请确认适配器与所使用的微孔板类型相符，并确认适配器与微
孔板放置正确（检查是否平齐）。

将板盖去掉，微孔板的 A1 孔对准托
架上 A1 孔的位置。

4、如发生卡板，请立即关闭电源，手动把板取出。

5、如果测量的是条板，请关闭仪器的自动板检测功能（软件主面板
Settings > Options > Check plate）。

6、仪器未选配带盖的微孔板适配器，不能在仪器内对样品进行孵育。

7、适配器比较贵重，拿取使用时一定要注意。

8、测量后，请将微孔板取出。

若软件已关闭，可通过主机上进板/出板键
取出微孔板。

并做好仪器的清洁工作。

9、实验完成后，做好仪器使用记录。