基因诊断_PPT幻灯片
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分子诊断与基因检测的临床应用ppt课件
• 分子诊断及基因诊断在遗传学中的应用进展 • 分子诊断及基因诊断在肿瘤学中的应用进展
本标准适用于已投入商业运行的火力 发电厂 纯凝式 汽轮发 电机组 和供热 汽轮发 电机组 的技术 经济指 标的统 计和评 价。燃 机机组 、余热 锅炉以 及联合 循环机 组可参 照本标 准执行 ，并增 补指标 。
基因与肿瘤细胞生物学各个方面均有关
细胞增殖 血管新生
与细胞外基质的黏附 局部侵犯
进入血管内、存活、 外渗
未知功能的基因 (25)
与细胞外基质的黏附 细胞增殖
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分子诊断及基因检测 在临床中应用的进展
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文献检索及学术趋势
检索策略：查询2012-2018年间，以“gene diagnostic” or “molecular diagnostic”为关键词；主要查找遗传学领域文献和肿瘤学领域的文献，发 表文献量较大，在两个领域中均有广泛应用
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基因与肿瘤细胞生物学各个方面均有关
细胞增殖 血管新生
与细胞外基质的黏附 局部侵犯
进入血管内、存活、 外渗
未知功能的基因 (25)
与细胞外基质的黏附 细胞增殖
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分子诊断及基因检测 在临床中应用的进展
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文献检索及学术趋势
检索策略：查询2012-2018年间，以“gene diagnostic” or “molecular diagnostic”为关键词；主要查找遗传学领域文献和肿瘤学领域的文献，发 表文献量较大，在两个领域中均有广泛应用
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《基因诊断课件》
遗传咨询与基因诊断
1
定义
遗传咨询（Genetic Counseling）是指有专业背景的医师或遗传学工
作者通过对遗传病易感性、遗传模式等进行评估和分析，从而对患者
进行遗传咨询的一门专业。
2
必要性
尽管基因检测可以提供很多有价值的信息，但医生和患者还需要一种
更全面的咨询，以便在基因诊断中做出更好的决策。
传性肿瘤的诊断，也应用于病毒感染、分子人类学、基因工程等方面。
蛋白检测技术及其在基因诊断
中的应用
1
定义
蛋白检测是指检测某一特定蛋白的数量及品质，从而鉴定某一相关分
子生物学操作所获取的实验数据的质量。
2
应用
包括免疫印迹法、质谱、蛋白芯片等技术，可以帮助人们诊断和检测
各类疾病，例如肿瘤、糖尿病、心血管疾病。
技术研究中的空白。
测序技术
测序技术是基因诊断的重要手段，可帮助确定DNA序列及其突变信息。
核酸检测技术及其在基因诊断
中的应用
1
定义
核酸检测是指检测某一特定核酸的存在或变异，以完成相应分子生物
学任务的一种技术。
2
应用
包括PCR，西方印迹法、原位杂交等技术，不仅用于检测基因诊断常
用的结构性或功能性类似疾病的突变、多基因遗传性疾病的筛查、遗
共享基因组学数据库的建立与应用
概念
应用
共享基因组学数据库是指一系列的数据库和资
它可以为广大科学家提供进行基因组学分析所
源中心，包括人类基因组项目、1000人基因组
需的数据，帮助完诊断中的伦理问题
1
个人隐私
基因数据可以反映特定个人的敏感信息，因此需要保护个人隐私。
终于阅读了人类基因组，并
基因诊断原课件-精品文档
基因诊断
基因诊断的目的：
就是要通过各种手段，如杂交、扩增等，去寻找和发现这些 独特基因组、基因或基因片段的存在，从而证实某种病原体的存 在。
传统诊断与基因诊断的比较：
传统诊断的缺陷多，方法大多为：
1、表型诊断：以疾病或病原体的表型为依据。而表型的改变 在多数情况下是非特异的，出现的时间也比较晚，易错过治疗的 最佳时期。某些疾病本身不呈现显著的表型改变，用传统的检测 方法亦出现假阴性。
基因诊断
根据诊断目的或要求
分为定性诊断Biblioteka 定量诊断和半定量诊断,以及序列分析等。
二，基因诊断的策略
1， 从基因产物入手
这是一种比较早期的诊断策略。首先分析异常基因的产物 （蛋白质），并弄清是如何引起临床症状的。在纯化了该蛋白质 以后，进行氨基酸序列测定,据此合成致 疾病的分子缺陷。这种策略是由蛋白质至DNA，由表型至基因型。 迄今分离的绝大部分分子病和遗传性代谢缺陷病如白化病,苯丙酮 尿症(PKU)和镰状细胞贫血等的相关基因都是根据这一策略分离 的。
1、杂交Southern印迹用于检测DNA;Northern印 迹用于检测RNA;斑点印迹或称斑点杂交 ,既可检测 DNA也可检测RNA。
2、PCR法主要用为直接扩增DNA，但是通过逆转 录技术,可以将RNA先转变为cDNA再行扩增，称逆 转录PCR,如检测HCV，HGV，HIV等。
3、原位杂交,或原位PCR,也可分DNA或RNA原位 杂交和原位PCR或逆转录PCR。
基因诊断
根据待测标本的性质
分析体中的(血，尿，粪，痰液,胸腹水等等),细胞和组织 基因检测。
1、体液中的待测基因可在将标本适当处理后,根据需要 采用上述各种方法检测
2、组织切片内基因检测则可采用原位杂交和原位PCR法
DMD的基因诊断ppt课件
ppt课件.
38
线粒体12SrRNA基因
• 在线粒体基因突变导致耳聋的患者中，绝大部
分是由于A1555G突变引起。
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39
• 检测方法：PCR+测序
引物名称
引物序列
12SrRNA-F 12SrRNA-R
CCTCAACAGTTAAATCAAC CTCTGGTTCGTCCAAGTG
ppt课件.
假阴性结果
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17
ppt课件.
18
ppt课件.
19
MLPA
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20
ppt课件.
21
ppt课件.
22
非综合征型耳聋
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23
耳聋简介
• 听力丧失是最常见的感觉障碍。 • 发病率：1/500 新生儿 • 非综合征型耳聋(nonsyndromic hearing
loss, NSHL)：指不伴有耳外组织异常或 病变的耳聋。
10余项技术组成。 基础，共由10余项技术组成。 共由20余项技术组成。
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1
脊髓性肌肉萎缩症
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2
脊髓性肌肉萎缩症
• SMA • 由于脊髓前角细胞运动神经元变性
导致近端肌肉萎缩和无力
• 发病率1/10000 • 遗传方式：常染色体隐性遗传
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3
临床特征
• 婴儿期学龄前及青春期发病 • 表现为四肢的近端肌肉对称性
（connexin 26，CX26）
• CX26在细胞与细胞间形成间隙连接，在感觉毛细
胞受到声音的刺激后钾离子回流到内淋巴液的过 程中起着重要的作用。
ppt课件.
32
基因诊断PPT精品课程课件讲义
26
直接基因诊断—
突变型遗传病的直接基因诊断
e.g. 镰形红细胞贫血的基因诊断
27
e.g. 镰形红细胞贫血的基因诊断
1）Southern blot β珠蛋白链基因第6位密码子发生突变
GAG——GTG 谷Aa——缬Aa
28
已知限制酶Mst 1识别序列 （CCTNAGG）
CCTGAGG
CCTGTGG 突变后不能识别， 酶切位点消失，限制酶切片段长度发生变化。
6
核酸分子杂交的基本原理
根据核酸变性和复性的原理，不同来 源的DNA变性后，若这些异源DNA之间 存在某些相同序列的区域，在退火条 件下则可形成DNA-DNA异源双链；或 将变性的单链DNA与RNA经复性处理可 以形成DNA-RNA杂合双链。这种不同 来源的单链核酸分子在合适的条件下， 通过碱基互补形成双链杂交体的过程 称为核酸分子杂交（molecular hybridization）。
DNA多态性（DNA Polymorphism）： 群体中每个个体DNA区域中等位基因 （或片段）存在两种或两种以上的形式，对 基因功能没有影响，称DNA多态性。 它通过孟德尔方式遗传。常用做遗传分 析中的标记。
16
DNA分析中常用的遗传性多态性标记有3类：
1）RFLP：称限制性片段长度多态性，为第一代多
5
加热使DNA变性是实验室最常用的方法，称为热变性，DNA热变性 发生在一个狭窄的温度范围内。通常将DNA变性达到50%时（即增 色效应达到一半时）的温度称为解链温度或熔解温度（melting temperature），用Tm表示。 退火（annealing）：热变性DNA 在缓慢冷却时，可以复性，这种 复性称为退火。
基因治疗张幻灯片优秀课件
分子诊断
遗传性疾病的诊断
羊水和胎盘绒毛膜检测
探针杂交分析法
• 用途：用于诊断已知基因突变的疾病。 • 探针：人工合成两种寡核苷酸片段，长约
16－19个单核苷酸；其中一种是正常 的，另一种含有一个突变的单核苷酸。 探针可用同位素、生物素、地高辛等标 记。 • 样本：血液或羊水细胞。
待测样品（血细胞或羊水细胞） 提取分离DNA
恢复至正常水平的 5%-10%
维持免疫系统功能
改善病人症状
•重症联合免疫缺陷的基因治疗 腺苷脱氨酶基因治疗(1990)
Ashanti de Silva, Now 13, was the first patient to be treated with gene therapy.
1991年美国科学家对50位黑色素 瘤患者进行了基因治疗，把外源的肿 瘤坏死因子（TNF）基因导入患者体 内，从而达到杀死肿瘤细胞的功能， 研究也取得了成功。
如：哮喘病遗传度为80％、精神分裂症为80 ％、高血压遗传度为62％ 、冠心病遗传度为 65％ 、糖尿病遗传度（幼年型）为75％、 （老年型）为35％、唇裂＋腭裂遗传度为76 ％
第一节
基因诊断
基因诊断
一、概念和特点 概念：利用现代分子生物学和分子遗传
学的技术方法，直接探测基因结构及其表达 水平，从而对疾病作出诊断的方法。 分为 DNA诊断和RNA诊断两类。
们自然就想到如果能够使变异基因和异常表达 的基因变成正常基因和正常表达基因，那么就 可从根本上治愈遗传疾病，这就是基因治疗的 基本思路。
基因治疗的概念：向靶细胞或组织中引入 外源DNA片段，以纠正或补偿基因的缺 陷，关闭或抑制异常表达的基因，从而达 到治疗的目的。
2．基因治疗的历史
基因诊断与基因治疗PPT课件
• 用于探测点突变时一般需要合成两种探针，一种与正常基因 序列完全一致，能与之稳定地杂交，但不能与突变基因序列 杂交；另一种与突变基因序列一致，能与突变基因序列稳定 杂交，但不能与正常基因序列稳定杂交，这样，就可以把只 有一个碱基发生了突变的基因区别开来。
• PCR可结合ASO，即PCR－ASO技术，即先将含有突变点 的基因有关片段进行体外扩增，然后再与ASO探针作点杂交， 这样大大简化了方法，节约了时间，而且只要极少量的基因 组DNA就可进行。
• 根据探针的核酸性质不同又可分为DNA探 针、RNA探针、cDNA探针、cRNA探针及 寡核检测
• 核酸探针的常用酶促标记技术
–缺口平移 –DNA快速末端标记 –用T4多核苷酸酶标记DNA 5‘末端，随引物延伸 –聚合酶链反应
• 核酸探针的非放射性标记技术
1995年美国FDA批准Ad－P53肿瘤基因治疗等临床试验 的实施，标志着基因治疗已逐步进入一个正常的、目标明 确的理性化发展阶段。
• 18岁的格尔辛基（Jesse Gelsinger）因临床试验的某些 失误而于1999年9月17日死亡。格尔辛基是世界上首位由 基因治疗导致丧生的患者。他患先天性鸟氨酸甲酰氨基转 移酶（OTC）缺乏症（X连锁性遗传病）病症，在男性身 上较严重，往往引起新生男婴患者的死亡。
–光促生物素标记核酸 –酶促生物素标记核酸 –寡核苷酸的生物素末端标记 –酶标DNA –酶标寡核苷酸 –DNA半抗原标记
核酸分子杂交方法
• 核酸分子杂交可按作用环境大致分为固相杂 交和液相杂交两种类型
• 固相杂交是将参加反应的一条核酸链先固定 在固体支持物上，一条反应核酸链游离在溶 液中，固体支持物有硝酸纤维素滤膜、尼龙 膜、乳胶颗粒、磁珠和微孔板等。
胞培养。从1982年起采取妊娠8-12周的绒毛DNA 作产前诊断使产前基因诊断的时间提前。由于 PCR技术的应用，甚至在胚胎植入前(受精6d)也可 作产前诊断。
• PCR可结合ASO，即PCR－ASO技术，即先将含有突变点 的基因有关片段进行体外扩增，然后再与ASO探针作点杂交， 这样大大简化了方法，节约了时间，而且只要极少量的基因 组DNA就可进行。
• 根据探针的核酸性质不同又可分为DNA探 针、RNA探针、cDNA探针、cRNA探针及 寡核检测
• 核酸探针的常用酶促标记技术
–缺口平移 –DNA快速末端标记 –用T4多核苷酸酶标记DNA 5‘末端，随引物延伸 –聚合酶链反应
• 核酸探针的非放射性标记技术
1995年美国FDA批准Ad－P53肿瘤基因治疗等临床试验 的实施，标志着基因治疗已逐步进入一个正常的、目标明 确的理性化发展阶段。
• 18岁的格尔辛基（Jesse Gelsinger）因临床试验的某些 失误而于1999年9月17日死亡。格尔辛基是世界上首位由 基因治疗导致丧生的患者。他患先天性鸟氨酸甲酰氨基转 移酶（OTC）缺乏症（X连锁性遗传病）病症，在男性身 上较严重，往往引起新生男婴患者的死亡。
–光促生物素标记核酸 –酶促生物素标记核酸 –寡核苷酸的生物素末端标记 –酶标DNA –酶标寡核苷酸 –DNA半抗原标记
核酸分子杂交方法
• 核酸分子杂交可按作用环境大致分为固相杂 交和液相杂交两种类型
• 固相杂交是将参加反应的一条核酸链先固定 在固体支持物上，一条反应核酸链游离在溶 液中，固体支持物有硝酸纤维素滤膜、尼龙 膜、乳胶颗粒、磁珠和微孔板等。
胞培养。从1982年起采取妊娠8-12周的绒毛DNA 作产前诊断使产前基因诊断的时间提前。由于 PCR技术的应用，甚至在胚胎植入前(受精6d)也可 作产前诊断。
《基因检测》课件
遗传性疾病、基因突变
详细描述
遗传性疾病基因检测是通过检测人类基因突变，对遗传性疾病进行诊断和预测的一种方法。该方法能够检测出多 种遗传性疾病，如先天性代谢缺陷、遗传性神经性疾病等，为患者及家庭提供早期干预和治疗方案，降低疾病对 个人和家庭的影响。
肿瘤基因检测
总结词
肿瘤、基因突变、个性化治疗
详细描述
报告撰写
撰写详细的检测报告，包括样本信 息、实验方法、结果分析和临床建 议。
04
基因检测的挑战与前景
基因检测的挑战
技术限制
当前基因检测技术仍存在一些局限性 ，如检测灵敏度、特异性及检测范围 等方面的问题。
伦理和隐私
基因检测涉及个人隐私和伦理问题， 如何保护个人基因信息不被滥用和侵 犯是一个重要挑战。
便携式基因检测设备
便携式基因检测设备将更加普及，方便个人随时随地接受基因检测。
人工智能和机器学习在基因检测中的应用
人工智能和机器学习技术将应用于基因检测数据的分析和解读，提高 准确性和可靠性。
多组学整合分析
未来基因检测将与其他组学技术（如蛋白质组学、代谢组学等）进行 整合分析，提供更全面的生物信息。
对于不同的疾病和样本类型， 需要选择合适的基因检测技术 ，以达到最佳的检测效果。03ຫໍສະໝຸດ 基因检测流程样本采集
01
02
03
血液样本
采集静脉血液，用于检测 血液中的基因变异和遗传 性疾病。
组织样本
采集病变组织或肿瘤组织 ，用于检测组织中的基因 变异和肿瘤相关基因。
口腔拭子
采集口腔黏膜细胞，用于 检测遗传性疾病和某些单 基因遗传病。
精准医疗
根据个体的基因信息，制定个 性化的治疗方案，提高治疗效 果。
详细描述
遗传性疾病基因检测是通过检测人类基因突变，对遗传性疾病进行诊断和预测的一种方法。该方法能够检测出多 种遗传性疾病，如先天性代谢缺陷、遗传性神经性疾病等，为患者及家庭提供早期干预和治疗方案，降低疾病对 个人和家庭的影响。
肿瘤基因检测
总结词
肿瘤、基因突变、个性化治疗
详细描述
报告撰写
撰写详细的检测报告，包括样本信 息、实验方法、结果分析和临床建 议。
04
基因检测的挑战与前景
基因检测的挑战
技术限制
当前基因检测技术仍存在一些局限性 ，如检测灵敏度、特异性及检测范围 等方面的问题。
伦理和隐私
基因检测涉及个人隐私和伦理问题， 如何保护个人基因信息不被滥用和侵 犯是一个重要挑战。
便携式基因检测设备
便携式基因检测设备将更加普及，方便个人随时随地接受基因检测。
人工智能和机器学习在基因检测中的应用
人工智能和机器学习技术将应用于基因检测数据的分析和解读，提高 准确性和可靠性。
多组学整合分析
未来基因检测将与其他组学技术（如蛋白质组学、代谢组学等）进行 整合分析，提供更全面的生物信息。
对于不同的疾病和样本类型， 需要选择合适的基因检测技术 ，以达到最佳的检测效果。03ຫໍສະໝຸດ 基因检测流程样本采集
01
02
03
血液样本
采集静脉血液，用于检测 血液中的基因变异和遗传 性疾病。
组织样本
采集病变组织或肿瘤组织 ，用于检测组织中的基因 变异和肿瘤相关基因。
口腔拭子
采集口腔黏膜细胞，用于 检测遗传性疾病和某些单 基因遗传病。
精准医疗
根据个体的基因信息，制定个 性化的治疗方案，提高治疗效 果。
基因诊断ppt课件
合成原料：dNTP
(Polymerase Chain
反应过程：
（20-35个循环）
引物：一对
变性：95℃ 10-45s
高温DNA聚合酶： Taq
酶
退火：55-643;
H2O
精品课件
延伸: 72 ℃ 30-60s 23
3’ 5 ‘
3’ 5’
3’ 5’
5’ 3’
5’ 3’
• 外源基因的入侵
（感染性疾病）
精品课件
5
基因诊断的定义与特点
• 定义：
利用分子生物学技术，从DNA/RNA水 平检测基因的存在、分析基因的结构变异 和表达状态，从而对疾病作出诊断。
精品课件
6
• 特点：
1.直接检测导致疾病发生的基因改变，特异性强
2.应用PCR等信号放大技术，灵敏度高，需样品量少
硝酸纤维素膜（NC膜） 尼龙膜 PVDF膜等
(1) DNA印渍技术：
Southern Blotting
(2) RNA印渍技术：
Northern Blotting
(3) 蛋白质印渍技术：
Western Blotting
精品课件
13
探针的制备 样品的制备 电泳分离
预杂交 杂交
封闭样品中非特异性的结合位点 鲑精DNA、脱脂奶粉
转膜 杂交 结果检测
➢种类：DNA, RNA, 寡核苷酸 ➢标记物：
放射性核素，生物素，地高辛，荧 光素 ➢制备方法:
(1)化学法 (2) 酶促法： 精品课件末端标记；切口平移法；随10机引 物法
探针的制备
样品的制备
电泳分离 转膜 杂交
组织中提取：
基因组DNA/限杂交（in situ
(Polymerase Chain
反应过程：
（20-35个循环）
引物：一对
变性：95℃ 10-45s
高温DNA聚合酶： Taq
酶
退火：55-643;
H2O
精品课件
延伸: 72 ℃ 30-60s 23
3’ 5 ‘
3’ 5’
3’ 5’
5’ 3’
5’ 3’
• 外源基因的入侵
（感染性疾病）
精品课件
5
基因诊断的定义与特点
• 定义：
利用分子生物学技术，从DNA/RNA水 平检测基因的存在、分析基因的结构变异 和表达状态，从而对疾病作出诊断。
精品课件
6
• 特点：
1.直接检测导致疾病发生的基因改变，特异性强
2.应用PCR等信号放大技术，灵敏度高，需样品量少
硝酸纤维素膜（NC膜） 尼龙膜 PVDF膜等
(1) DNA印渍技术：
Southern Blotting
(2) RNA印渍技术：
Northern Blotting
(3) 蛋白质印渍技术：
Western Blotting
精品课件
13
探针的制备 样品的制备 电泳分离
预杂交 杂交
封闭样品中非特异性的结合位点 鲑精DNA、脱脂奶粉
转膜 杂交 结果检测
➢种类：DNA, RNA, 寡核苷酸 ➢标记物：
放射性核素，生物素，地高辛，荧 光素 ➢制备方法:
(1)化学法 (2) 酶促法： 精品课件末端标记；切口平移法；随10机引 物法
探针的制备
样品的制备
电泳分离 转膜 杂交
组织中提取：
基因组DNA/限杂交（in situ
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34
（六）生物芯片（biochip）
2021/3/7
26
PCR-SSCP分析原理
2021/3/7
27
PCR-SSCP分析 －
+
正常人
纯合突变 杂合突变
2021/3/7
28
（四）限制性片段长度多态性分析
（restriction fragment length polymorphism, RFLP）
由于DNA 变异产生新的酶切位点或原有 的酶切位点消失，在用限制性核酸内切酶消 化时产生不同长度或不同数量的片段。
5. AS-PCR（allele specific PCR）
等位基因特异PCR：根据引物3´端 的互补与否，设计一对与正常或突变模 板配对的特异引物
2021/3/7
25
（三）单链构象多态性分析（single-strand conformation polymorphism， SSCP）
DNA 的突变造成DNA片段中碱基序列 不同，变性为单链后在中性聚丙烯酰胺凝胶 中的构象不同（单链构象多态性），利用迁 移率的差别可使各种序列不同的单链分离开 来。
2021/3/7
20
1. RT-PCR
2021/3/7
21
2.荧光定量PCR
荧光标记引物
2021/3/7
22
3.多重PCR
多重PCR示意图 A：普通PCR；B：多重PCR
2021/3/7
23
4. PCR-ASO
G
ASO1 ASO2
A
G C
N
A C
H
A T
G
M
T
2021/3/7
24
N：正常基因；H：杂合子基因；M：突变基因
2021/3/7
7
（一）核酸分子杂交 Nucleic acid hybridization
指两条单链核酸在一定条件（温度、盐离 子和有机溶剂浓度）下，按碱基互补的原则 重新配对形成双链的过程。
2021/3/7
8
核酸分子杂交流程
待测核酸制备
滤膜上核酸固化
杂交 去除未杂交的探针
检测杂交信号
2021/3/7
2021/3/7
11
3. 斑点杂交（dot blotting）
将RNA或DNA变性后直接点样 于硝酸纤维素膜或尼龙膜上，用于 基因组中特定基因及其表达产物的 定性及定量的研究。
2021/3/7
12
4.反向斑点杂交
先将探针固定于硝酸纤维素膜或尼 龙膜上，将样品RNA或DNA标记变性后 进行杂交。改变了传统杂交方法中一次 杂交只能检测一种样品的局限，大大提 高了基因诊断的效率。
2021/3/7
17
固相夹心杂交法示意图
2021/3/7
18
（二） 聚合酶链式反应
(polymerase chain reaction, PCR）
变性
延伸
模板 引物
dNTP Mg2+ Taq DNA聚合酶
退火
2021/3/7
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基因诊断中常用的PCR衍生技术
RT-PCR 荧光定量PCR 多重-PCR PCR-ASO AS-PCR PCR-SSCP PCR-RFLP
核酸探针制备 探针标记
加入标记探针
9
1. Southern 印迹杂交
提取DNA→限制性内切酶消化DNA 以产生特定长度的片段→凝胶电泳分离 →变性处理→DNA转印到膜上并使其牢 固结合→将标记的探针与膜上DNA片段 杂交，分析杂交信号。
2021/3/7
10
2. Northern印迹杂交
RNA经变性琼脂糖凝胶电泳后，转 移到固相支持物上，通过分子杂交检测 特定的mRNA分子的含量与大小。
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等位基因特异性寡核苷酸
(allele specific oligonucleotide, ASO）
寡核苷酸中的碱基错配会大大影响杂交 分子的稳定性，可用人工合成的针对正常和 突变ASO探针进行反向斑点杂交，检测点突 变，大大提高检测结果的可靠性。
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5.原位分子杂交
CTTAAG
AB C
－
＋
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D
E
－
D
E F C B
A
G＋
FG
C +D E F B A G
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（五） DNA序列测定（DNA sequencing）
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DNA序列测定原理(双脱氧末端终止法)
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序列分析用于基因诊断
左侧：正常；右侧：突变
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可借助核酸分子杂交或PCR进行检测。
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PCR-RFLP
设计适当的扩增引物，使扩增片段包 括某一个或数个限制性内切酶识别序列，在 PCR 扩 增 后 用 该 限 制 酶 切 割 PCR 产 物 ， 根 据电泳后酶切片段长度变化，即可作出诊断。
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EcoR Ⅰ限制性内切酶位点的变化 GAATTC
Yuet 2021/3/7 Wai Kan 1936～
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• 基因诊断的特点：
✓ 高特异性 ✓ 高灵敏性 ✓ 早期诊断性 ✓ 应用广泛性
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二、基因诊断中常用的分子生物学技术
核酸分子杂交（Nucleic acid hybridization） 聚合酶链式反应(PCR) 单链构象多态性（SSCP） 限制性片段长度多态性（RFLP） DNA序列测定（DNA sequencing） 生物芯片（biochips） Western免疫印迹（Western blot） 免疫组织化学诊断
本章内容提要
第一节 基因诊断的技术和方法 第二节 遗传病的基因诊断 第三节 传染病的基因诊断 第四节 肿瘤的基因诊断 第五节 基因诊断在法医学上的应用
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第一节 基因诊断的技术和方法
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基因诊断之父—简悦威
1976年加州大学华裔科 学家 Kan YW用核酸分 子杂交技术首次对一例 α地中海贫血进行诊断。
荧光原位杂交 (fluorescence in situ hybridization, FISH）
挂锁FISH (FISH with padlock)
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荧光原位杂交（FISH）
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6. 固相夹心杂交法 (sandwich hybridization)
待测靶基因序列上两个相邻但不重叠的 DNA片段（A、B片段），分别作为捕捉探针 （不标记的A片段）和检测探针（标记的B片 段），同时与靶基因杂交。先将捕捉探针吸附 于固相支持物上，与靶基因序列A部分杂交， 再加入标记的检测探针，检测探针与靶基因序 列B部分杂交，检测杂交信号。