《植物组织培养》PPT课件
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植物组织培养ppt课件
1946年：罗士韦在菟丝子茎尖培养地观察到花的形成，为试管 受精奠定了基础
1948年：Skoog和崔真培养烟草茎段时，发现腺嘌呤或腺苷可解 除生长素对芽生长的抑制作用。
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42
1952-1953年：美国科学家Steward F.C. 用胡萝卜根的细胞悬浮 培养，发现单个细胞能象受精卵发育成胚一样的途径，发育成完 整植抹，证实了植物细胞全能性学说。
1952年：Morel和Martin首次报道茎尖分生组织的离体培养，获 得无病毒大丽花植株。
1954年：Muir将烟草愈伤组织置于固体培养基上，在其上放一 片滤纸，再在滤纸片上放上一 个烟草体细胞，单细胞培养成功。
1956年：Miller分离出Kinetin，Kinetin/激动素
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43
组织培养的奠基人
植物组织培养是由于人为控制培养条件，
根据不同植物不同部位的不同要求而提供不同
的培养条件，因此生长较快。另外，植株也比
较小，往往20-30天为一个周期。所以，虽然植 物组织培养需要一定设备及能源消耗，但由于 植物材料能按几何级数繁殖生产，故总体来说
成本低廉，且能及时提供规格一致的优质种苗
或脱病毒种苗。
细胞全能性的高低：
受精卵>生殖细胞>体细胞
植物细胞>动物细胞
分化程度低的细胞>分化程度高的细胞
细胞分化的实质：基因的选择性表达。
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16
②全能性的表达
少数体细胞在发育过程中可能丢失一部分遗传物质, 因而失去全能性。如筛管细胞,它在发育过程中失去细胞 核,因而没有全能性。
目前还无法使所有的离体植物细胞都实现其全能性。
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44
3、 迅速发展阶段（1960-1980）
1948年：Skoog和崔真培养烟草茎段时，发现腺嘌呤或腺苷可解 除生长素对芽生长的抑制作用。
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1952-1953年：美国科学家Steward F.C. 用胡萝卜根的细胞悬浮 培养，发现单个细胞能象受精卵发育成胚一样的途径，发育成完 整植抹，证实了植物细胞全能性学说。
1952年：Morel和Martin首次报道茎尖分生组织的离体培养，获 得无病毒大丽花植株。
1954年：Muir将烟草愈伤组织置于固体培养基上，在其上放一 片滤纸，再在滤纸片上放上一 个烟草体细胞，单细胞培养成功。
1956年：Miller分离出Kinetin，Kinetin/激动素
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组织培养的奠基人
植物组织培养是由于人为控制培养条件，
根据不同植物不同部位的不同要求而提供不同
的培养条件，因此生长较快。另外，植株也比
较小，往往20-30天为一个周期。所以，虽然植 物组织培养需要一定设备及能源消耗，但由于 植物材料能按几何级数繁殖生产，故总体来说
成本低廉，且能及时提供规格一致的优质种苗
或脱病毒种苗。
细胞全能性的高低：
受精卵>生殖细胞>体细胞
植物细胞>动物细胞
分化程度低的细胞>分化程度高的细胞
细胞分化的实质：基因的选择性表达。
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16
②全能性的表达
少数体细胞在发育过程中可能丢失一部分遗传物质, 因而失去全能性。如筛管细胞,它在发育过程中失去细胞 核,因而没有全能性。
目前还无法使所有的离体植物细胞都实现其全能性。
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3、 迅速发展阶段（1960-1980）
植物组织培养 PPT
5、移栽锻炼 将生根的苗从锥形瓶中移至草炭土或蛭石中，用玻璃罩或 塑料布保持80%以上的湿度，2-3天后打开玻璃罩逐渐降 低湿度进行锻炼，直到将罩全部打开处于自然湿度为止。
6、定植 苗健壮后移至土中培养（定植），即可长成植株并开花。
例题：右图是实验室进行植 物组织培养的一般过程。请 回答下列问题：
(3)基本过程
①愈伤组织：由离体的植物组织或细胞经 脱分化 形成的一 种 相对没有分化 的活的薄壁细胞团组成的新生组织。 ②脱分化：又叫去分化，是由_高__度__分__化___的植物组织或细胞产 生_愈__伤___组__织__的过程。 ③再分化：愈伤组织继续培养，重新分化成_根__或___芽__等器官的 过程。
2、下面是宁夏农林科学院进行苹果试管苗培养的一般过程:
⑴请填写a～c所表示的内容。a. 脱分化 ； b. 愈伤组织 ；c. 再分化 。
⑵实验室一般使用保存的培养基母液来制备MS固体培养基,配制母液 时, 大量元素 、 微量元素 和有机物要浓缩5～10倍。 细胞分 ⑶该过程中a、c的启动关键在于培养基中所加 生长素 和 裂素 的浓度配比。
MS培养基中各成分的作用
植物激素和人工合成的植物激素
植物中存在的天然激素都有相应的使之分解的酶，这样，天 然激素在植物体内作用和存在的时间就较短，而人工合成的 激素在植物中没有相应分解它的酶，所以作用和存在的时间 长，作用效果明显。
大家应该也有点累了，稍作休息
大家有疑问的，可以询问和交流
生长素和细胞分裂素在植物组织培养中的相互作用
诱导芽的形成 愈伤组织不分化 诱导根的形成
菊花组织培养操作步骤:
生芽 生根
消毒
无菌水
1
酒精灯火焰 封口膜
生芽
《植物组织培养技术》课件
04 植物组织培养技术的应用实例
快速繁殖技术
快速繁殖技术是指利用植物组 织培养技术，快速、大量繁殖
植物种苗的一种方法。
该技术广泛应用于花卉、果树 、林木等植物的快速繁殖，能 够大大缩短繁殖周期，提高繁
殖系数。
快速繁殖技术还可以通过控制 培养条件，实现植物的定向繁 殖，如矮化、无病毒等。
快速繁殖技术具有高效、环保 、可重复利用等优点，是现代 农业和林业生产的重要手段之 一。
濒危植物保护与复壮是保护生 物多样性和维护生态平衡的重 要手段之一，具有深远的社会 意义和生态意义。
05 植物组织培养技术的挑战与前景
技术瓶颈与解决方案
技术瓶颈
目前植物组织培养技术面临的主要瓶颈包括培养基的优化、外植体的选择与处 理、污染控制以及基因转化效率等。
解决方案
针对这些问题，研究者们正在探索新型的培养基成分、优化外植体的选择标准 、开发新型的消毒方法以及改进基因转化技术，以期提高植物组织培养的效率 和成功率。
指任何一个植物细胞都包含该物种的 全套遗传信息，具有发育成完整个体 的潜在能力。
植物细胞全能性证明
植物细胞全能性的应用
植物组织培养技术利用植物细胞的全 能性，通过离体培养获得完整的植株 ，广泛应用于植物繁殖、品种改良、 基因工程等领域。
许多植物细胞如胡萝卜、烟草、草莓 等在适宜条件下能够发育成完整的植 株，证明了植物细胞的全能性。
技术发展趋势与展望
发展趋势
随着生物技术的不断发展，植物组织培 养技术也在不断进步和完善。未来，该 技术将更加注重与基因编辑、合成生物 学等新兴技术的结合，以实现更为精准 和高效的植物育种和种质资源保护。
VS
展望
未来，植物组织培养技术有望在农业、园 艺、林业等领域发挥更大的作用，为解决 全球粮食安全、生态恢复等问题提供有力 支持。
植物组织培养 植物组织培养技术认识护理课件
该技术通过无菌操作，将植物组织或 细胞接种在人工培养基上，在适宜的 环境条件下进行培养，诱导其分裂、 分化并发育成完整的植株。
植物组织培养技术的发展历程
1902年，德国植物学家哈伯兰 特首次提出了植物细胞具有全能
性的理论。
1958年，斯图尔德成功地将胡 萝卜根部的细胞培养成完整的植 株，标志着植物组织培养技术的
THANKS
感谢观看
基因编辑与组织培养结合
利用基因编辑技术对植物进行精确改 良，提高组织培养效率。
智能化与自动化
引入智能化和自动化技术，实现植物 组织培养的精准控制和高效生产。
生物反应器应用
利用生物反应器大规模培养植物细胞 ，为药物生产、生物燃料等领域提供 原料。
06
植物组织培养技术的伦理和社会影响
植物知识产权保护问题
培养条件与观察记录
培养条件
提供适宜的光照、温度、湿度等环境 条件，以满足植物生长需求。
观察记录
定期观察植物生长情况，记录生长数 据，及时发现问题并采取相应措施。
04
植物组织培养技术的实践应用
快速繁殖与育种
快速繁殖
通过植物组织培养技术，可以在短时间内快速繁殖大量植物，提高繁殖效率，缩短生长周期。
生物多样性
植物组织培养技术可能对生物多样性产生影 响，尤其是当某些人工繁殖的植物品种取代 野生种时，可能导致某些物种的消失或濒临 灭绝。
技术应用的伦理规范和法规
要点一
伦理原则
要点二
法规监管
植物组织培养技术的应用应遵循伦理原则，尊重生命、保 护环境和生态平衡，同时保障育种者的权益。
政府应制定相关法规和监管措施，规范植物组织培养技术 的研发和应用，确保技术的可持续发展和社会效益的发挥 。
植物组织培养技术的发展历程
1902年，德国植物学家哈伯兰 特首次提出了植物细胞具有全能
性的理论。
1958年，斯图尔德成功地将胡 萝卜根部的细胞培养成完整的植 株，标志着植物组织培养技术的
THANKS
感谢观看
基因编辑与组织培养结合
利用基因编辑技术对植物进行精确改 良，提高组织培养效率。
智能化与自动化
引入智能化和自动化技术，实现植物 组织培养的精准控制和高效生产。
生物反应器应用
利用生物反应器大规模培养植物细胞 ，为药物生产、生物燃料等领域提供 原料。
06
植物组织培养技术的伦理和社会影响
植物知识产权保护问题
培养条件与观察记录
培养条件
提供适宜的光照、温度、湿度等环境 条件，以满足植物生长需求。
观察记录
定期观察植物生长情况，记录生长数 据，及时发现问题并采取相应措施。
04
植物组织培养技术的实践应用
快速繁殖与育种
快速繁殖
通过植物组织培养技术，可以在短时间内快速繁殖大量植物，提高繁殖效率，缩短生长周期。
生物多样性
植物组织培养技术可能对生物多样性产生影 响，尤其是当某些人工繁殖的植物品种取代 野生种时，可能导致某些物种的消失或濒临 灭绝。
技术应用的伦理规范和法规
要点一
伦理原则
要点二
法规监管
植物组织培养技术的应用应遵循伦理原则，尊重生命、保 护环境和生态平衡，同时保障育种者的权益。
政府应制定相关法规和监管措施，规范植物组织培养技术 的研发和应用，确保技术的可持续发展和社会效益的发挥 。
植物组织培养PPT课件
在植物体内
限制
游离
表现
植物体的任何一个细胞，都有长成完整个体的潜在能力
.
5
01
培养基
在组织细胞生长过程中提供所需的营养物质
.
6
02
组培苗的生长过程
.
7
02
组培苗的生长过程
转苗
出瓶
.
8
03
植物组织培养的意义
.
9
03
快速繁殖
稀有植物 繁殖能力低或不能用种子繁殖的植物 受地理环境及季节因素限制的植物
.
10
04
组培的实验条件
.
11
04
超净工作台
提供无菌无尘的工作环境
照明灯
紫外线灯
风机
视频介绍
.
12
04
培养室
控制光照、温度，并 保持相对的无菌环境
.
13
05
转苗操作步骤
.
14
05
操作步骤
准备工作 01
1.将操作时需要用到的物品（酒精灯、一对镊子、托盘、培养基等） 放于超净工作台台内喷洒70%酒精后开启超净台紫外灯照射消毒 30min左右 2.戴口罩，70%酒精消毒双手 3.取一对镊子于酒精灯火焰的外焰灼烧约1-2min后放置至恢复室温 备用
.
18
05
每瓶接7-10株
接苗深度：将根部插入培 养基，露出根茎结合部 （过深不利于苗的生长） 尽量使苗直立固定
.
19
The end 希望同学们学有所成
.
20
1.取适量的苗于托盘中后，将培养瓶盖上盖子 （盖前同样转动灼烧瓶口） 2.左右手各持一把镊子，将托盘里的苗分成一株 株同时把夹带的培养基、枯叶等杂质与苗分开
植物组织培养技术PPT讲座
4、用70－75％旳酒精拭擦台面并消毒双手。试 验用具也应该用酒精消毒。点燃酒精灯，将金属器 械在其火焰上灼烧，冷却待用。 注意：全部操作应在火焰近处并经过灼烧进行。金 属器械不能过分灼烧，以防退火。移液管不能灼烧， 培养瓶口、塑料材料、橡胶材料过火焰不能时间太 长。
5、取流水冲洗（至少30min）过旳外植体，用一 定旳消毒剂浸泡消毒，用无菌水冲洗3~4次，放入 无菌培养皿中，置于酒精灯火焰下方，用无菌旳接 种器械进行分离、切割或其他处理。
（5）火焰灼烧灭菌
用火焰灼烧到达灭菌目旳，合用于 接种器皿旳灭菌。
（6）消毒剂
合用外植体、试验器皿、操作表面、皮肤等。 几种常用消毒剂旳效果比较
消毒剂
乙醇 新洁尔灭 氯化汞
使用浓度(%)
消毒时间 (min.)
效果
70-75 10～20
0.1～1
0.1-3 5～30
2～15
好 好
最 佳
很
残液 清除 难易
C、 塑料器皿旳清洗
聚乙烯、聚丙烯等制成旳塑料器皿，在生物化学 试验中已用旳越来越多。第一次使用塑料器皿时， 可先用8mol/L尿素（用浓盐酸调pH = 1）清洗，接 着依次用无离子水、1 mol/L KOH和无离子水清洗， 然后用10—3 mol/L EDTA 除去金属离子旳污染，最 终用无离子水彻底清洗，后来每次使用时，可只用 0.5％旳去污剂清洗，然后用自来水和无离子水洗净 即可。
培养室应配有培养架、转床、摇床、光照培养箱、 生化培养箱、自动控时器等。日光灯一般用40W，固定 在培养架旳侧面或搁板旳下面，每层有两支日光灯，距 离在20cm，光照强度为2023-3000lx。
2．辅助试验室
2.1鉴定室
细胞学鉴定室 其功能是对培养材料进行细胞学鉴定 和研究。要求清洁、明亮、干燥，使多种光学仪器 不受潮湿和灰尘污染。应配置多种显微镜、摄影系 统等。
植物组织培养技术课件
•《植物组织培养技术》
•《植物组织培养技术》
•《植物组织培养技术》
•《植物组织培》
•《植物组织培养技术》
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植物的组织培养技术(共27张PPT)
➢按培养方法分为
固体培养 液体培养
看护培养 微室培养
按培养过程分为
初代培养
继代培养
离体的植物器官、组织、细胞 将植物的器官如胚、胚乳、珠心、子房、根、茎、叶、花和幼果的部分组织接种在无菌培养基上进行培养。
初代培养 继代培养 运用组织培养的途径，一个单株一年可以繁殖几万到几百万个植株，而且均来自一单一的个体，遗传性状一致。
再分化：经脱分化的组织或细胞在一定的培养条件 下可有转变为各种不同细胞类型的能力。
4.植物组织培养分类
➢按材料的类别分
愈伤组织培养 细 胞 培养
器 官 培养
原生质体培养
最为常见的组织培养
悬浮细胞培养 单细胞培养
胚、胚乳、珠心、子房、根、茎、叶、 花和幼果的部分组织的培养
⑴愈伤组织培养
将外植体接种在人工培养基上，由于植物生长调节剂的存 在，而其细胞脱分化形成愈伤组织，然后通过再分化形成再 生植株。它是最为常见的。
1.组织培养定义
组织培养是指用
无菌方法使植 物体的离体器
官、组织和细胞 在人为提供的条 件下生长和发育 的所有培养技术 的总称，也称之 为离体培养。
（二）奠基阶段（从20世纪30
年代末到50年代中）：
1934年，White 用番茄根尖 建立起第一个活跃生长的无性繁 殖系，从而使非胚器官的培养首 先获得成功。
脱 分 化
离体的植物器官、 组织、细胞
愈伤组织
植物全能性 的表达
根、芽
胚状体 再生植株
游离单细胞 或原生质体
人工种子
培养条件：基 本培养基和适 宜的植物生长 调节物质，适 宜的温度、空 气、无菌环境、 适合的PH、 适时光照等。
脱分化：将分化组织的已停止分裂的细胞从植物体 部分的抑制性影响下解脱出来，恢复细胞的分裂活性。
植物组织培养学PPT课件
20
• 培养室：培养室是将接种的材料进行培养生长的场所。培养室的大小可根
据需要培养架的大小、数目、及其他附属设备而定。其设计以充分利用空 间和节省能源为原则。高度比培养架略高为宜，周围墙壁要求有绝热防火 的性能。
培养材料放在培养架上培养。培养架大多由金属制成，一般设5层，最 低一层离地高约lOcm，其他每层间隔30cm左右，培养架即高1．7m左右。 培养架长度都是根据日光灯的长度而设计， 如采用40W日光灯，则长 I．3m，30W的长lm，宽度一般为60cm。
• ②生长周期短，繁殖率高 植物组织培养是由于人为控制培养条件，根据不同植物不同部位的不同要求 而提供不同的培养条件，因此生长较快。另外，植株也比较小，往往20— 30d为一个周期。所以，虽然植物组织培养需要一定设备及能源消耗，但由 于植物材料能按几何级数繁殖生产，故总体来说成本低廉，且能及时提供 规格一致的优质种苗或脱病毒种苗。
13
植物细胞全能性的表达
• 脱分化（dedifferentiation)：将来自已分 化组织的已停止分裂的细胞从植物体部 分的抑制性影响下解脱出来，恢复细胞 的分裂活性。
• 再分化（redifferentiation):经脱分化的组 织或细胞在一定的培养条件下可有转变 为各种不同细胞类型的能力。
14
接种室宜小不宜大，一般7～8平米，要求地面、天花板 及四壁尽可能密闭光滑，易于清洁和消毒。配置拉动门，以 减少开关门时的空气扰动。
接种室要求干爽安静，清洁明亮。在适当位置吊装1～2 盏紫外线灭菌灯，用以照射灭菌。最好安装一小型空调，使 室温可控，这样可使门窗紧闭，减少与外界空气对流。
接种室应设有缓冲问，面积1m2为宜。进入无菌操作室 前在此更衣换鞋，以减少进出时带入接种室杂菌。缓冲间最 好也安一盏紫外线灭菌灯，用以照射灭菌。
• 培养室：培养室是将接种的材料进行培养生长的场所。培养室的大小可根
据需要培养架的大小、数目、及其他附属设备而定。其设计以充分利用空 间和节省能源为原则。高度比培养架略高为宜，周围墙壁要求有绝热防火 的性能。
培养材料放在培养架上培养。培养架大多由金属制成，一般设5层，最 低一层离地高约lOcm，其他每层间隔30cm左右，培养架即高1．7m左右。 培养架长度都是根据日光灯的长度而设计， 如采用40W日光灯，则长 I．3m，30W的长lm，宽度一般为60cm。
• ②生长周期短，繁殖率高 植物组织培养是由于人为控制培养条件，根据不同植物不同部位的不同要求 而提供不同的培养条件，因此生长较快。另外，植株也比较小，往往20— 30d为一个周期。所以，虽然植物组织培养需要一定设备及能源消耗，但由 于植物材料能按几何级数繁殖生产，故总体来说成本低廉，且能及时提供 规格一致的优质种苗或脱病毒种苗。
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植物细胞全能性的表达
• 脱分化（dedifferentiation)：将来自已分 化组织的已停止分裂的细胞从植物体部 分的抑制性影响下解脱出来，恢复细胞 的分裂活性。
• 再分化（redifferentiation):经脱分化的组 织或细胞在一定的培养条件下可有转变 为各种不同细胞类型的能力。
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接种室宜小不宜大，一般7～8平米，要求地面、天花板 及四壁尽可能密闭光滑，易于清洁和消毒。配置拉动门，以 减少开关门时的空气扰动。
接种室要求干爽安静，清洁明亮。在适当位置吊装1～2 盏紫外线灭菌灯，用以照射灭菌。最好安装一小型空调，使 室温可控，这样可使门窗紧闭，减少与外界空气对流。
接种室应设有缓冲问，面积1m2为宜。进入无菌操作室 前在此更衣换鞋，以减少进出时带入接种室杂菌。缓冲间最 好也安一盏紫外线灭菌灯，用以照射灭菌。
植物组织培养PPT课件
1978年，Melchers等进行了番茄和马铃薯的体细胞杂交。
1979年，Marton提出了利用植物原生质体和土壤农杆菌共培养的方法进行转化。 1981年，Larkin和Scowcroft引入“体细胞无性系变异（Somaclonal variation）”这一术语。 1982年，Krens等的工作证明，原生质体可以摄入裸露的DNA，表明可以用外源DNA对原生 质体进行遗传转化。 1982年，Zimmermann利用电刺激进行原生质体融合。 1985年，Horsch等用土壤农杆菌对叶盘进行感染和转化，并得到再生的转化植株。
1948年，Skoog等通过对烟草茎段和髓培养发现，不定芽和不定根的发生由生长素/腺嘌呤的比例决 定。
1950年，Ball从红杉愈伤组织培养中再生获得器官。
1952年，Morel和Martin通过分生组织培养获得大丽花的脱毒植株，同年，首次应用微型嫁接技 术。
1953年，Tuleche首次从花粉培养中获得银杏的单倍体愈伤组织。
蒜等。
茎尖培养脱毒
virus-free tissue
脱毒马铃薯种薯生物反应器液体培养
2、用于植物遗传育种
包括种质资源离体保存；花粉花药培养产生单倍体；胚乳培 养产生三倍体；胚培养拯救杂种胚克服远缘杂交障碍；原生质 体培养进行体细胞杂交；植物体细胞无性系变异诱导和筛选； 用于植物基因转移操作等。
2、植物组织培养技术的初步形成（1930-1960年）
1933年，我国植物生理学家李继侗培养银杏胚胎，并发现银杏胚乳提取液可促进离体胚的生长。
1937年，White发现B族维生素对离体根培养的重要性。并指出IAA对植物生长发育的控制起重要 作用。
1937,1938年，Gantheret在培养基中加入上述生长因子，使得柳树形成层诱导形成的愈伤组织连续 生长。Nobecomt对烟草种间杂种茎段的形成层细胞培养也得到了类似的结果。
1979年，Marton提出了利用植物原生质体和土壤农杆菌共培养的方法进行转化。 1981年，Larkin和Scowcroft引入“体细胞无性系变异（Somaclonal variation）”这一术语。 1982年，Krens等的工作证明，原生质体可以摄入裸露的DNA，表明可以用外源DNA对原生 质体进行遗传转化。 1982年，Zimmermann利用电刺激进行原生质体融合。 1985年，Horsch等用土壤农杆菌对叶盘进行感染和转化，并得到再生的转化植株。
1948年，Skoog等通过对烟草茎段和髓培养发现，不定芽和不定根的发生由生长素/腺嘌呤的比例决 定。
1950年，Ball从红杉愈伤组织培养中再生获得器官。
1952年，Morel和Martin通过分生组织培养获得大丽花的脱毒植株，同年，首次应用微型嫁接技 术。
1953年，Tuleche首次从花粉培养中获得银杏的单倍体愈伤组织。
蒜等。
茎尖培养脱毒
virus-free tissue
脱毒马铃薯种薯生物反应器液体培养
2、用于植物遗传育种
包括种质资源离体保存；花粉花药培养产生单倍体；胚乳培 养产生三倍体；胚培养拯救杂种胚克服远缘杂交障碍；原生质 体培养进行体细胞杂交；植物体细胞无性系变异诱导和筛选； 用于植物基因转移操作等。
2、植物组织培养技术的初步形成（1930-1960年）
1933年，我国植物生理学家李继侗培养银杏胚胎，并发现银杏胚乳提取液可促进离体胚的生长。
1937年，White发现B族维生素对离体根培养的重要性。并指出IAA对植物生长发育的控制起重要 作用。
1937,1938年，Gantheret在培养基中加入上述生长因子，使得柳树形成层诱导形成的愈伤组织连续 生长。Nobecomt对烟草种间杂种茎段的形成层细胞培养也得到了类似的结果。
组织培养PPT课件
自来水
75%酒精 10～30s
无菌水冲洗2～3次
2 ～10% NaClO3 10～15min
0.1～0.2% HgCl2 5～10min
无菌水冲洗4～5次
无菌滤纸吸干
切割
.
36
（2）.果实、种子
自来水
75%酒精
果实：2% NaClO3 10min 无菌水清
洗数次 剖出种子或组织
种子： NaClO3 20—30min～几小时 视种皮的硬度而定，种皮太硬的，先去
从植物体上获取外植体后，要先用自来水冲洗
10min[表面不光滑的，需冲洗1～2h，可用洗衣粉/洗洁
精清洗，必要时可用毛刷]
滤纸吸干水分 消毒[可
先在70%的酒精溶液中浸泡30s]
.
34
1）.常用的消毒剂
消毒剂
用法&用量
处理时间
优缺点
漂白粉 饱和液取上清
酒精
70～75%
H2O2
6～12%
升汞（HgCl2） 0.1～0.2%
KCl 0.4～0.8mol/L
甘露醇： 0.4～0.6mol/L
山梨醇 ：0.8～1.2mol/L
.
47
四.植物组培的培养基
1）.组成 ①.激素
生长素：IAA、NAA、2，4-D、IBA
分裂素：KT 6-BA 玉米素
用量：0.1～10mg/L
②.无机盐 总浓度 25mmol/L 左右
NO3- 25～40mmol/L
0.5×0.3×0.2㎝3 易产生Callus
大蒜蒜瓣
0.2×0.2×0.1 ㎝3 较少/不产 生
.
32
3）.分离原生质体（Protoplast）
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分化程度低的细胞>分化程度高的细胞
细胞分化的实质：基因的选择性表达。
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②全能性的表达
少数体细胞在发育过程中可能丢失一部分遗传物质, 因而失去全能性。如筛管细胞,它在发育过程中失去细胞 核,因而没有全能性。
目前还无法使所有的离体植物细胞都实现其全能性。
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条件
离体状态
营养物质
无机营养 有机营养
人为提供一定的温度、光照、湿度、营养、激 素等条件，既利于高度集约化和高密度工厂化 生产，也利于自动化控制生产。它是未来农业 工厂化育苗的发展方向。它与盆栽、田间栽培 等相比省去了中耕除草、浇水施肥、防治病虫 害等一系列繁杂劳动，可以大大节省人力、物
力及田间种植所需要的土地。
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二、植物组织培养的基本原理
根据不同植物不同部位的不同要求而提供不同
的培养条件，因此生长较快。另外，植株也比
较小，往往20-30天为一个周期。所以，虽然植 物组织培养需要一定设备及能源消耗，但由于
植物材料能按几何级数繁殖生产，故总体来说
成本低廉，且能及时提供规格一致的优质种苗
或脱病毒种苗。
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③管理方便 ，利于工厂化生产和自动化控制 植物组织培养是在一定的场所和环境下，
➢ 细 胞 培 养 单细胞培养
➢器
官
培
养
胚、胚乳、珠心、子房、根、茎、 叶、花和幼果的部分组织的培养
➢ 原生质体培养
➢ 分生组织培养 茎尖精、选课根件尖等
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愈伤组织(callus)原指植物体的局部受到创伤刺激后， 在伤口表面新生的组织。它由活的薄壁细胞组成， 可起源于植物体任何器官内各种组织的活细胞。
（6）染色体和DNA的变化对细胞分化影响较大。
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3、脱分化（Dedifferentiation） ①概念：
也称去分化，指离体条件下生长的细胞、组织 或器官经过细胞分裂或不分裂逐渐失去原来的结构 和功能而恢复分生状态，形成无组织结构的细胞团 或愈伤组织的过程。
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②影响脱分化的主要因素
（1）损伤。 切割损伤的刺激，促使细胞增殖。 （2）激素。在诱导愈伤组织时常加入生长素类，同时配
合细胞分裂素的效果可能更好。 （3）光照。弱光或黑暗条件有利于脱分化中的细胞分裂。 （4）细胞位置。外植体本身的各类细胞可能对培养条件
的刺激有不同的敏感性。 （5）外植体的生理状态。不同生理年龄和不同季节都会
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3、植物组织培养特点
①培养条件可以人为控制 组织培养采用的植物材料完全是在人为提供的培
养基质和小气候环境条件下进行生长，摆脱了大自然 中四季、昼夜的变化以及灾害性气候的不利影响，且 条件均一，对植物生长极为有利，便于稳定地进行周 年培养生产。
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②生长周期短，繁殖率高
植物组织培养是由于人为控制培养条件，
有不同的培养反应。 （6）植物种类的差异。 一般双子叶植物比单子叶植物
及裸子植物容易。
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4、愈伤组织（Callus）培养
①愈伤组织生长过程
在脱分化的过程中，多形成Callus, 其细胞结构无明 显极性。
• （1）诱导期：细胞准备进行分裂， 细胞大小几乎不变，
生理生化变化大，迅速合成蛋白质和核酸。
激素
生长素 细胞分裂素
适宜外界条件
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在离体培养的选材上，尽可能选取分生组织的部 位。
将实验目的与外植体生长发育状态相结合，创造 良好的离体条件。
合理使用生长调节物质。
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2
①概念
（1） 分化：是指植物体各个部分出现异质性的现象，
• （2）分裂期：外层细胞分裂，中间细胞常不分裂，形成
小芯。细胞分裂快，结构疏松，颜色浅而透明。在原培养 基上，细胞会发生分化，及时转移，其可无限制地进行细 胞分裂，维持不分化状态。
• （3）分化期：细胞发生生理代谢变化，出现形态和功能
各异的细胞。
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②愈伤组织的生长特性
（1）生长：诱导期后，外植体外层细胞分裂，在受伤 组织表面形成一层愈伤组织， Callus的细胞数目迅速增 多，表层细胞平均重量下降，体积变小；降低温度，可 以使细胞生长速度减慢，平均大小可增加。
包括细胞分化、组织分化和器官分化。
（2）细胞分化：指同一来源的细胞逐渐产生出形态结 构、功能特征各不相同的细胞类群的过程，其结果是 在空间上细胞产生差异，在时间上同一细胞与其从前 的状态有所不同。
细胞分化是组织分化和器官分化的基础，是植株离 体再生的基础。
细胞分化的实质：基因的选择性表达。
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第二章 植物组织培养
第一节 植物组织培养原理及应用 第二节 植物组织培养的基本条件 第三节 外植体的选择与消毒 第四节 无菌技术
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1
百合
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2
蝴蝶兰
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3
马铃精薯选课件
4
草莓
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5
葡萄
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6
新疆无花果
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7
第一节 植物组织培养原理及应用
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一、植物组织培养定义及特点
1、定义
指在无菌条件下，将植物体的任何
一部分（外植体），如器官、组织、细 胞以及原生质体等，培养在人工配制的 培养基上，并给予合适的培养条件，使 之发育成完整植物体的过程。由于组织 培养是在脱离母体的条件下进行的，所 以也称作离体培养。
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2、植物组织培养的类型
➢ 愈伤组织培养 最为常见的组织培养
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②植物细胞分化的某些规律和机理
（1） 细胞分化基本分为形态结构分化和生理生化分化 两类，生理生化分化在形态结构分化之前。
（2）分化与极性（Polarity）关系密切。
（3）生理隔离或机械隔离在细胞分化中有促进作用。
（4） 细胞分裂对细胞分化具有重要作用。
（5）植物生长调节剂有明显调节作用。如生长素与分 裂素比值，高，促进生根；低，促进长芽。
（2）质地类型：松脆和致密两种。 高浓度生长素，可 使Callus变得松脆（非胚性愈伤组织）；高浓度细胞分 裂素，则可使其致密（胚性愈伤组织） 。
1、植物细胞全能性（Totipotency）
①植物细胞全能性：1902年由Haberlandt提出，即植 物细胞在适当的条件下，具有不断分裂和繁殖、发育成 完整植株的能力。
从
一
个
细
胞
发
育
成
一
个
植
株
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基础：细胞内具有该物种发育所需的全部遗传物质。
细胞全能性的高低：
受精卵>生殖细胞>体细胞
植物细胞>动物细胞