生化分析仪原理
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2
分立式自动分析仪的主要部件
加样系统 比色系统 分光系统 供排水系统 清洗系统 操作控制与数据处理系统
3
4
5
6
7
8
源自文库
加样系统
试剂仓 样品转盘、进样架系统（样本放入区、条码扫描通道、
测定缓冲区、样本回收区） 样品取样单元 试剂取样单元 混合部件
9
比色系统
光源 比色杯
16
终点法
终点法 终点法可根据试剂原理不同设置为（一点）终点法和两 点终点法。
对于单一试剂，在加入标本后，反应即可进行，在反应 达到终点后，读取反应点（吸光度），故一般选用一点 终点法。
对于两种以上的试剂，加入第一试剂，主要起缓冲或者 消除干扰等作用，此时可读取初始反应点，加入第二 （或第三）试剂后，在反应达到终点后，读取结束反应 点。此即两点终点法。
被测物质（反应底物）在化学反应过程中完全被消耗或 转换，即反应达到平衡（终点），通过测定产物（反应 生成物）的多少来定量测定被测底物的含量。
终点法一般用来检测代谢物的浓度，通过测定标准液 （校准液）的反应吸光度，建立一条浓度与吸光度变化 的标准曲线。
通过检测标本的吸光度与标准液的吸光度进行比较，计 算出该标本中待测物的浓度。
浓度
29
2点定标的标准曲线
30
定标方法——多点定标
多点定标：采用两个以上的标准液来建立一条标准曲线。 该曲线的特征一般为非线性，即吸光度与浓度的变化不 是直线关系。计算方式在自动生化仪上可选择为： SPLINE或LOGIT-LOG法。
对于一些通过（胶乳增强）免疫比浊法测定的试剂，多 为此方法。因为抗原抗体反应形成的浊度的线性范围较 窄。
分立式比色转盘 比色杯恒温
水浴、空气浴、恒温液循环间接加热 比色杯类型
硬质石英/玻璃、塑料，永久、半永久、一次性。
10
分光系统
干涉滤光片 光栅分光式
无相差蚀刻凹面光栅 后分光集束式光路系统
11
关于双波长检测的优点
通过计算两个波长之间的差值，可纠正样品中脂血、溶 血和黄疸干扰的影响；也可补偿电压波动的影响，从而 获得稳定的测定结果。
31
多点定标的标准曲线
吸光度
21000 18000 15000 12000 9000 6000 3000
0 0
主波图（340nm)
50 100 150 200 250 300 350
浓度
32
多点定标的标准曲线
33
多点定标的标准曲线
34
自动生化分析仪的操作控制系统
仪器操作和控制软件的功能： （1）设置系统参数 （2）设置项目参数 （3）设置试剂参数 （4）设置校准品和质控品参数 （5）实施校准和质控测试 （6）进行样品测试 （7）结果查询 （8）反应全程监控 （9）执行维护
酶促反应，在一定条件和测定范围内，当Km〉〉底物浓 度，符合零级速率法，底物消耗/生成的速率只与催化反 应的酶的活性有关，为正比例关系，直线的斜率为定值 （即K值或factor）
23
连续监测速率法的反应曲线
24
两点速率法
两点速率法适用于反应吸光度随时间的变化而变化，在 一定时间内无到达终点的趋势，该反应的变化规律为在 一定时间内反应的趋势为直线或接近于直线。
生化分析仪原理
检验科 吴 迪
2020/4/3
1
临床生化自动分析仪分类
按运行速度： 1．大型生化仪速度600 test / 小时以上 2．中型生化仪速度300-600 test / 小时 3．小型生化仪速度300 test /小时以下
按仪器结构： 1．流动式自动生化分析仪 2．离心式自动生化分析仪 3．分立式自动生化分析仪
12
自动生化分析仪的工作程序
样 本
试 剂 1
搅 拌
延迟
比比比 色色色 杯杯杯
试 剂 2
搅 拌
反应
比比 色色 杯杯
比 色
光电感应器检测
传 输
打印机打印结果 传输 计算机进行计算
13
14
自动分析仪的基本分析方法
终点法 （1点）终点法和2点终点法
速率法 速率法和2点速率法（固定时间法）
15
终点法
21
终点法反应曲线举例（双试剂免疫比浊法）
吸光度值
APOB 反应曲线
6800 5800
4800 3800
2800 1800
800
-200 0
5 10 15 20 25 30
测光点
22
速率法
速率法分为：连续监测速率法和两点速率法（固定时间 法）。
连续监测速率法：在可见光区(GGT、ALP：405nm黄色) 或紫外（HBDH 、LDH、ALT： 340nm）在一段时间内连 续监测某一物质的生成 (或消耗的) 速率，计算待测物的活 性，一般用于样本中酶活性的检测。
本质均为终点法。
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终点法反应曲线举例（单试剂）
6000 5000 4000 3000 2000 1000
0 0
5
10
15
20
25
30
18
终点法反应曲线举例（单试剂）
19
终点法反应曲线举例（双试剂）
吸光度
反应曲线 1000
800
600
400
200
0
0
5
10
15
20
25
30
点数
20
终点法反应曲线举例（双试剂）
26
定标方法
对于终点法和两点速率法，必须通过使用标准液，建立 一条标准曲线。
速率法检测的酶类可以采用理论因数法（K因数或Factor 法），不过目前，大多数实验室对酶类（速率法）测试 亦采用标准液校正Factor的方式，以消除仪器和试剂的系 统误差。
27
定标方法——2点定标
两点定标：以水作为零点，标准液作为另一点，建立标 准曲线。此方法适用于浓度随吸光度变化呈线性变化的 试剂。曲线的方程为：Y=AX
对于一些特殊试剂如：K，Na，CL，因水中痕量离子浓 度的存在或者线性范围限制，一般不以水作为零点，而 采用定值的高、低两个标准液，建立标准曲线。曲线的 方程为：Y=AX+B。
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吸光度*10000
2点定标的标准曲线
工作曲线
20000 15000 10000 5000
0 -0.1 0.2 0.5 0.8 1.1 1.4 1.7 2 2.3
设定参数时选择在直线上的两个点作为检测点。
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速率法的吸光度计算
速率法吸光度计算： 如读点为21-26 ; 用最小二乘法，得到测光点21-26间每分钟吸光度的变化量。 两点速率法吸光度计算: 如读点为21-26 ; T 为：(26-21) 点间隔的时间 [(A26+A25)/2-(A21+A20)/2]/T
分立式自动分析仪的主要部件
加样系统 比色系统 分光系统 供排水系统 清洗系统 操作控制与数据处理系统
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源自文库
加样系统
试剂仓 样品转盘、进样架系统（样本放入区、条码扫描通道、
测定缓冲区、样本回收区） 样品取样单元 试剂取样单元 混合部件
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比色系统
光源 比色杯
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终点法
终点法 终点法可根据试剂原理不同设置为（一点）终点法和两 点终点法。
对于单一试剂，在加入标本后，反应即可进行，在反应 达到终点后，读取反应点（吸光度），故一般选用一点 终点法。
对于两种以上的试剂，加入第一试剂，主要起缓冲或者 消除干扰等作用，此时可读取初始反应点，加入第二 （或第三）试剂后，在反应达到终点后，读取结束反应 点。此即两点终点法。
被测物质（反应底物）在化学反应过程中完全被消耗或 转换，即反应达到平衡（终点），通过测定产物（反应 生成物）的多少来定量测定被测底物的含量。
终点法一般用来检测代谢物的浓度，通过测定标准液 （校准液）的反应吸光度，建立一条浓度与吸光度变化 的标准曲线。
通过检测标本的吸光度与标准液的吸光度进行比较，计 算出该标本中待测物的浓度。
浓度
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2点定标的标准曲线
30
定标方法——多点定标
多点定标：采用两个以上的标准液来建立一条标准曲线。 该曲线的特征一般为非线性，即吸光度与浓度的变化不 是直线关系。计算方式在自动生化仪上可选择为： SPLINE或LOGIT-LOG法。
对于一些通过（胶乳增强）免疫比浊法测定的试剂，多 为此方法。因为抗原抗体反应形成的浊度的线性范围较 窄。
分立式比色转盘 比色杯恒温
水浴、空气浴、恒温液循环间接加热 比色杯类型
硬质石英/玻璃、塑料，永久、半永久、一次性。
10
分光系统
干涉滤光片 光栅分光式
无相差蚀刻凹面光栅 后分光集束式光路系统
11
关于双波长检测的优点
通过计算两个波长之间的差值，可纠正样品中脂血、溶 血和黄疸干扰的影响；也可补偿电压波动的影响，从而 获得稳定的测定结果。
31
多点定标的标准曲线
吸光度
21000 18000 15000 12000 9000 6000 3000
0 0
主波图（340nm)
50 100 150 200 250 300 350
浓度
32
多点定标的标准曲线
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多点定标的标准曲线
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自动生化分析仪的操作控制系统
仪器操作和控制软件的功能： （1）设置系统参数 （2）设置项目参数 （3）设置试剂参数 （4）设置校准品和质控品参数 （5）实施校准和质控测试 （6）进行样品测试 （7）结果查询 （8）反应全程监控 （9）执行维护
酶促反应，在一定条件和测定范围内，当Km〉〉底物浓 度，符合零级速率法，底物消耗/生成的速率只与催化反 应的酶的活性有关，为正比例关系，直线的斜率为定值 （即K值或factor）
23
连续监测速率法的反应曲线
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两点速率法
两点速率法适用于反应吸光度随时间的变化而变化，在 一定时间内无到达终点的趋势，该反应的变化规律为在 一定时间内反应的趋势为直线或接近于直线。
生化分析仪原理
检验科 吴 迪
2020/4/3
1
临床生化自动分析仪分类
按运行速度： 1．大型生化仪速度600 test / 小时以上 2．中型生化仪速度300-600 test / 小时 3．小型生化仪速度300 test /小时以下
按仪器结构： 1．流动式自动生化分析仪 2．离心式自动生化分析仪 3．分立式自动生化分析仪
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自动生化分析仪的工作程序
样 本
试 剂 1
搅 拌
延迟
比比比 色色色 杯杯杯
试 剂 2
搅 拌
反应
比比 色色 杯杯
比 色
光电感应器检测
传 输
打印机打印结果 传输 计算机进行计算
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自动分析仪的基本分析方法
终点法 （1点）终点法和2点终点法
速率法 速率法和2点速率法（固定时间法）
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终点法
21
终点法反应曲线举例（双试剂免疫比浊法）
吸光度值
APOB 反应曲线
6800 5800
4800 3800
2800 1800
800
-200 0
5 10 15 20 25 30
测光点
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速率法
速率法分为：连续监测速率法和两点速率法（固定时间 法）。
连续监测速率法：在可见光区(GGT、ALP：405nm黄色) 或紫外（HBDH 、LDH、ALT： 340nm）在一段时间内连 续监测某一物质的生成 (或消耗的) 速率，计算待测物的活 性，一般用于样本中酶活性的检测。
本质均为终点法。
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终点法反应曲线举例（单试剂）
6000 5000 4000 3000 2000 1000
0 0
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终点法反应曲线举例（单试剂）
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终点法反应曲线举例（双试剂）
吸光度
反应曲线 1000
800
600
400
200
0
0
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10
15
20
25
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点数
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终点法反应曲线举例（双试剂）
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定标方法
对于终点法和两点速率法，必须通过使用标准液，建立 一条标准曲线。
速率法检测的酶类可以采用理论因数法（K因数或Factor 法），不过目前，大多数实验室对酶类（速率法）测试 亦采用标准液校正Factor的方式，以消除仪器和试剂的系 统误差。
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定标方法——2点定标
两点定标：以水作为零点，标准液作为另一点，建立标 准曲线。此方法适用于浓度随吸光度变化呈线性变化的 试剂。曲线的方程为：Y=AX
对于一些特殊试剂如：K，Na，CL，因水中痕量离子浓 度的存在或者线性范围限制，一般不以水作为零点，而 采用定值的高、低两个标准液，建立标准曲线。曲线的 方程为：Y=AX+B。
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吸光度*10000
2点定标的标准曲线
工作曲线
20000 15000 10000 5000
0 -0.1 0.2 0.5 0.8 1.1 1.4 1.7 2 2.3
设定参数时选择在直线上的两个点作为检测点。
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速率法的吸光度计算
速率法吸光度计算： 如读点为21-26 ; 用最小二乘法，得到测光点21-26间每分钟吸光度的变化量。 两点速率法吸光度计算: 如读点为21-26 ; T 为：(26-21) 点间隔的时间 [(A26+A25)/2-(A21+A20)/2]/T