洁净室(区)沉降菌检测标准操作规程

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目的

制定标准的洁净室（区）沉降菌的测试方法，指导沉降菌的测试工作。

范围

适用于洁净室（区）沉降菌的测定和验证。

责任

QC微生物室检验员负责洁净室（区）沉降菌的测试，QC主管和QA部门负责对测试的数据进行统计分析。

程序

定义

菌落：微生物培养后，由一个或几个微生物繁殖而形成的微生物集落，简称CFU。沉降菌：通过自然沉降原理收集在空气中的活微生物粒子，通过专用的培养基，在适宜的条件下让其繁殖到可见的菌落数。

动态测试：洁净室（区）已处于正常生产状态设备在指定的方式下进行，并且有指定的人员按照规范操作的状态。

测试方法

测试过程

设备和培养基：恒温培养箱、购买预灌装TSA平皿或者自制TSA平皿。

测试条件

洁净室（区）的温度和相对湿度应与其生产及工艺要求相适应（无特殊要求时，温度在18~26℃，相对湿度在45%~65%为宜）。

风速、压差应在合格范围内。

动态测试。

测试方法

将准备好的培养皿按采样点要求放置或放在沉降架上（约）。将采样台面取样位置或采样辅助设施表面消毒，打开培养皿，将培养皿盖置于已消毒位置，将培养皿置于培养皿盖上，使培养基表面充分暴露后，将培养皿盖盖上后倒置。

在每一只培养皿上标记好具体的取样位置及取样日期，将所有培养皿在QC微生物室进行培养观察。

培养观察计数

全部采样结束后，将培养皿倒置于恒温培养箱中培养，在20~25℃培养箱中培养3天，30~35℃培养箱中培养2天后观察计数。

每批培养基应有阴性对照试验，检验培养基本身是否污染。可每次选定2只培养皿作对照培养。

计算

平均菌落数M= M1＋M2＋…MN

N

M1＝1号培养皿菌落数

M2＝2号培养皿菌落数

Mn＝n号培养皿菌落数

n＝培养皿总数

结果判定

最终结果采用平均值。但每个碟的菌落数亦不得多于标准规定。

如有一个碟的菌落数超过标准规定，平均却符合规定，也以不合格论。

静态测试时，若某洁净室（区）内的平均菌落数超过评定标准，则必须对此区域先进行消毒，然后重新采样两次，测试结果均须合格。

注意事项

若培养皿上有2个或2个以上的菌落重叠，可分辨时仍以2个或2个以上菌落计数。

采取一切措施防止人为因素对样本的污染。

由于细菌种类繁多，差别甚大，计数时一般用透射光于培养皿背面或正面仔细观察，不要漏计培养皿边缘生长的菌落，并须注意细菌菌落与培养基沉淀物的区别，必要时用显微镜鉴别。

采样前应仔细检查每个培养皿的质量，如发现变质、破损或污染的应剔除。

对于沉降菌测试，符合最少采样点数时，还必须符合最小培养皿数。最少采样点数与最少培养皿见附表。

日常监控

对于沉降菌的监控，宜设定纠偏限和警戒限，以保证洁净室（区）的微生物浓度受到控制。应定期检测以检查微生物负荷以及消毒剂的效力，并做趋势分析。静态动态监控都可以采用此方法。

对于沉降菌的取样频次。如果出现下列情况应考虑修改，在评估以下情况后，也应确定其他项目的检测频次：

连续超过纠偏限和警戒限

停工时间比预计长

关键区域内发现污染存在

在生产期间，空气净化系统进行任何重大的维修

日常操作记录反映出倾向性的数据

消毒规程的改变

引起生物污染的事故等

当生产设备有重大维修或增加设备时

当洁净室（区）结构或区域分布有重大变动时

洁净车间采样点分布图详见《洁净区洁净度监控管理规程》。

微生物实验室采样点分布图详见《微生物实验室环境测试规程》。