基因工程试题及答案

2006《基因工程原理》课程试题与答案

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一、名词解释

1、寄主的修饰现象

寄主本身的DNA，由于在合成后通过甲基化酶的作用得以甲基化，使DNA得以修饰，从而免遭自身限制性酶的破坏。

２、F’细胞

以染色体外环双链质粒DNA形式存在，同时还带有细菌色体基因或DNA片段。这样的细胞叫F’细胞。

３、溶原周期

溶源周期是指在感染过程中没有产生出子代噬菌体颗粒，噬菌体DNA是整合到寄主细胞DNA上，成为它的一个组成部分。

４、内含肽：

蛋白质剪接是从前体蛋白内切除intein，并将extein以肽键连接，产生成熟蛋白质的过程。从前体蛋白中切除的部分称为内含肽。

５、cDNA文库

cDNA文库是将某种生物在某一时期所有的mRNA经反转录后形成的互补DNA( cDNA)连接进某种载体而形成的克隆集合。

６、转化

转化(transformation)是指感受态的大肠杆菌细胞捕获和表达质粒载体DNA分子的生命过程。

７、嵌套引物

利用第一轮PCR扩增产物作为第二轮PCR扩增的起始材料(DNA)，同时除使用第一轮的一对特异引物之外，另加一至两个同模板DNA结合位点是处在头两个引物之间的新引物

８、非融合蛋白

不与细菌的任何蛋白或多肽融合在一起的外源表达蛋白称为非融合蛋白。

９、酵母的复制型载体

YRp型载体是酵母的DNA片段插入到大肠杆菌质粒中构成的。其中酵母DNA片段不但提供了选择标记，还携带来自酵母染色体DNA的自主复制顺序(ARS)。因为它同时含有大肠杆菌和酵母的自主复制基因，所以能在两种细胞中存在和复制。

10、RAPD：随机引物扩增多态性，是用随机引物扩增基因组DNA，从中寻找扩增片段有差异。

11、基因组文库

将某种生物的全部基因组DNA切割成一定长度的DNA片段. B.克隆到某种

载体上而形成的集合

12、转染

感受态的大肠杆菌细胞 b.捕获和表达噬菌体DNA分子的生命过程

13、简并引物

是一类由多种寡核苷酸组成的混合物. B. 彼此之间仅有一个或数个核苷酸的差异

14、融合蛋白

与细菌的蛋白或多肽融合在一起的表达蛋白称为融合蛋白

15、酵母的整合型载体

.大肠杆菌质粒和酵母的DNA片段构成. B. 进入细胞后的YIp质粒被整合到染色体上，并随染色体一起复制。

16、受纳细胞

病毒对细胞的感染，能产生具有感染性的病毒颗粒。B.并使寄主细胞裂解

二、填空

1、目的基因获得的方法有:用机械或酶切的方法从基因组中获得基因、用逆转录酶以mRNA为模板cDNA、用化学合成的方法、从文库中筛选目的基因、用PCR获得目的基因。

2、PCR中计算引物Tm的经验公式:Tm=（G+C)4 + (A+T)2

3、与6个连续His连接在一起的融合蛋白能用＿Ni+＿层析柱分离。

4、举出一种PCR产物的克隆载体:T载体

5、确定基因文库大小的公式N＝ln[(1－P)/(1－f)]

6、为了利用 PCR 技术扩增下列染色体 DNA 片段上的虚线部分，应选用的引物顺序是＿D＿＿。

Ａ I + II

Ｂ I + III

Ｃ I + IV

Ｄ II + III

Ｅ II + IV

7 、请举出三种基因工程中所用的载体:质粒、噬菌体载体、柯斯质粒、动物病毒载体、植物载体(Ti质粒)任选三。

8、举出两种哺乳动物基因转移的遗传选择标记有:胸苷激酶(TK)、二氢叶酸还原酶(dhfr)、新霉素(neo)、氯霉素乙酰转移酶(cat).

9、分离真核mRNA是利用它的什么结构:Poly(A)

10、请举出三种重组体克隆筛选的方法:遗传检测法、物理检测法、核酸杂交筛选法、免疫化学检测法

11、请举出四种将外源基因导入受体细胞的途径:转化、转染、感染、显微注射、电穿孔五选四

12、在基因工程中使用的原核生物启动子有:Lac启动子、trp启动子、P L 或P R启动子、tac启动子任选三。

13、细菌的表达载体一般具有:启动子、SD序列、终止子、增强子四种基本结构。

14、生物技术包括:基因工程、细胞工程、酶工程、微生物发酵工程、生化工程五个方面，其中基因工程占主导地位。

15、λ噬菌体载体的包装范围在野生噬菌体范围的75% -- 105%之间.

16、基因工程中所使用的酶有：核酸酶、连接酶、聚合酶和修饰酶四种，其中在载体酶切或基因组酶切过程中所使用的酶称为限制性内切酶

17、酵母中载体有：整合型(Yip)、复制型(YRp)和附加型(YEp)

17、举出一种实验室的物理安全级别：P1、P2、P3和P4选一

18、PCR中实际复性温度选择低于Tm值：2－5度

19、pUC中p代表：质粒UC代表：单位

20、请说出基因组计划中两种图谱的名称：遗传图谱物理图谱或EST 图谱 cDNA图谱等，选二。

21、请举出一种大肠杆菌的表达载体：pKK223 或pET选一

22、基因工程中所使用的连接酶有：RNA连接酶和DNA连接酶。其中在DNA连接时公司所生产的酶主要有：大肠杆菌连接酶和T4DNA连接酶

23、与6个连续His连接在一起的融合蛋白能用＿Ni+＿层析柱分离

24、λ噬菌体的类型：插入型置换型

三、问答题

(一)　亚磷酸三酯法合成DNA的步骤？

1、将所要合成的寡聚核苷酸链的3’末端先以3'-OH与一个不溶性载体，如多孔玻璃珠(CPG)连接。

2、然后依次从3’→5’的方向将核苷酸单体加上去，所使用的核苷酸单体的活性官能团都是经过保护的。其中5'-OH用4，4—二对甲氧基三苯甲基(DMT)保护，3’端的二异丙基亚磷酸酰上的磷酸的OH用甲基或β—氰