HIV-1病毒载量测定及质量保证指南

HIV-1 病毒载量测定及质量保证指南
（2013 版）
Guideline for HIV-1 Viral Load Testing and Quality
Assurance
中国疾病预防控制中心
2013年1月
前言
随着HIV-1 病毒载量检测在艾滋病临床辅助诊断、抗病毒治疗监测及相关科研工作中的广泛应用，我国开展该项检测工作的实验室日益增多。

自1997 年艾滋病实验室首次引进HIV-1 病毒载量检测技术以来，截至2012 年底全国已经配备115 台HIV-1 病毒载量检测仪，覆盖疾控、医院、检疫、军队等系统，艾滋病流行重点地区及少数县级实验室均已配备HIV-1 病毒载量检测仪，每年检测量已达13 万人份以上。

由于HIV-1 病毒载量检测质量对艾滋病的早期诊断及治疗有重要影响，因此急需加强该领域的培训和质量控制，规范实验室操作，以保证检测结果的准确性和可靠性。

自2008 年开始实施《HIV-1 病毒载量测定及质量保证指南》（试行，以下简称《指南》）以来，参与HIV-1 病毒载量能力验证工作的实验室从2007 年的29家增加到2012年的107 家，占已开展工作实验室的百分之九十以上。

通过综合分析近几年能力验证发现的问题与检测技术发展的实际情况，考虑各种试剂的检测要求，结合专家意见和一线实验室工作人员的经验与需求，对本指南进行了适当修改、调整和补充，主要修改内容包括：（1）增加“人员要求”章节；（2）修改“常用HIV-1 病毒载量检测方法”；（3）修改“ HIV-1 病毒载量检测能力验证（PT）”；（4）补充常见问题分析和处理等内容。

修订后的《指南》共分八章，包括：总则，人员要求，实验室环境与设施，样品的采集、处理保存运输，常用检测方法简介，室内质量控制，实验室检测能力验证（PT），实验室生物安全，以及四个附表。

本指南在修改过程中，接纳了国内专家、同行的意见和建议，经过多次修改编写成《指南》（2013）版。

本指南由中国疾病预防控制中心性病艾滋病预防控制中心艾滋病参比实验室组织有关专家撰写，由中国疾病预防控制中心批准执行，并在HIV-1 病毒载量检测实验室网络内发布实施。

由于国内各实验室条件不同，不能采纳所有实验室的建议，因此本指南主要提出一些原则上的参考建议，其中定有不妥之处，希望广大同仁提出意见，以便不断完善。

本指南在2008 年颁布的《指南》（试行）的基础上修订，在此对编写
试行版过程中给予帮助的国际组织和专家表示感谢。

对本次修订过程中提出建议的
全国HIV-1 病毒载量检测实验室基层工作人员表示衷心的感谢。

本指南的解释权属于中国疾病预防控制中心性病艾滋病预防控制中心。

本指南编写主持人：蒋岩
本指南编写人员：潘品良蒋岩李敬云钟平尚红李太生李繁本指南审核咨询专家及技术人员：邵一鸣汪宁王佑春郭志宏肖瑶邱茂锋邢文革姚均朱红秦光明徐建青本指南编写联系人：潘品良
本指南适用于全国HIV-1 病毒载量检测实验室本指南编写单位：中国疾病预防控制中心性病艾滋病预防控制中心本指南自发布之日实施，同时终止2008年颁布的《HIV-1 病毒载量测定及质量保证指南》（试行）。

HIV-1 病毒载量测定及质量保证指南
目录
第一章总则
第二章人员要求
第三章实验室环境与设施
第四章样品的采集、处理、保存、运输
第五章常用检测方法简介
第六章室内质量控制
第七章实验室检测能力验证（PT）
第八章实验室生物安全
附表1 常见问题分析和处理
附表2 HIV-1 病毒载量检测样品送检及接收单
附表3 HIV-1 病毒载量检测能力验证样品接收专用单附表4 HIV-1 病毒载量检测报告单
参考文献
缩略语
第一章总则
1.1意义
HIV-1 病毒载量是指每毫升血浆中病毒颗粒的数量，是艾滋病防治工作中一项重要的实验室检测指标。

HIV-1 病毒载量检测主要用于抗病毒治疗监测，包括治疗时机判定、治疗效果评估、耐药预警；还可用于HIV 感染的辅助诊断，包括窗口期、病程晚期、婴儿感染、疑难样本等的诊断；也可用于血液筛查。

为了保证检测结果的准确性和可靠性，必须对开展HIV-1 病毒载量检测的实验室进行规范化管理和质量控制。

1.2目的
指导HIV-1 病毒载量检测工作，规范实验室质量控制与管理。

1.3适用范围
适用于我国开展HIV-1 病毒载量检测工作的所有实验室。

第二章人员要求
HIV-1 病毒载量检测人员分为检验人、复核人、签发人。

2.1培训实验室在使用新方法前，须对技术人员进行上岗培训，获得资格后方可开展相应工作。

上岗培训内容至少应包括：HIV 检测相关基础知识，HIV-1 病毒载量检测技术及管理要求，实验操作，质量保证与质量控制，生物安全。

2.2检验人
进行HIV-1 病毒载量检测的人员须具有艾滋病检测实验室的上岗资格，接受过省级以上的实验操作技术及艾滋病实验室生物安全培训及厂家的技术操作培训。

所有相关检验人员需经公司工程师操作培训，能独立熟练地操作，并经考核合格，持证上岗。

2.3复核人、签发人应具备对检测过程进行分析、解决问题的能力。

复核人负责对原始数据查阅、结果核对，签发人核实结果正确后对外签发报告。

第三章实验室环境与设施
除了HIV-1 病毒载量检测仪器，合理地、充分地配备实验室环境、设施、辅助设备是保证HIV-1 病毒载量检测质量的重要方面。

3.1实验室环境
HIV-1 病毒载量实验室应符合分子生物学实验室基本要求，包括试剂准备区、样品处理区、扩增产物分析区。

实验室设置总体原则为各区独立、控制风向、因地制宜、方便工作。

具体要求：
3.1.1各区必须是相互独立的，有条件各区内可分别设置缓冲间，以保证不同区之间完全分隔开。

3.1.2各区的仪器设备与各种物品必须为专用，避免交叉污染。

3.1.3试剂准备区和样品处理区内须保持低度正压（或常压）状态，使空气流向始终由室内向外，以避免扩增污染物进入此区域。

3.1.4扩增产物分析区内须保持低度负压状态，使空气流向始终由室外向内，以防止扩增产物通过气溶胶流出，造成与其他区域的交叉污染。

实验室可安装排风扇或其他排风装置。

3.1.5扩增产物分析区可以设在远离其他各区的地方。

3.1.6工作时必须遵循单一工作流向，即只能从试剂准备区开始，到样品处理区，然后到扩增产物分析区。

3.2实验室设施
各种HIV-1 病毒载量检测方法除病毒载量检测仪外，还需要配备相应的辅助设备才能完成检测。

HIV-1 病毒载量检测实验室设备分布示意图提供为HIV-1 病毒载量检测实验室不同区内必备的辅助设备及耗材。

辅助设备应根据不同检测方法作相应变化。

3.2.1样品处理区：
生物安全柜：二级
离心机（32000g，适合1.5mL 离心管）
冰箱：2-8 ℃，-20 ℃，-70 ℃以下
水浴箱：误差范围小于0.5 ℃
加样器1 套（20μL、200μL、1000μL）
3.2.2 试剂准备区：
超净工作台（或密闭工作台）
加样器 1 套（20μL 、200μL 、1000μL ） 离心机（ 18000g ，适合
1.5mL 离心管） 冰箱： 2-8 ℃， -20 ℃
计时器
旋涡振荡器，震动频率可调 带滤芯的一次性吸头（无 DNA 、 RNA 酶） 1.5mL 离心管（无 DNA 和 RNA 酶）及相应试管架
一次性工作服、帽、口罩、无粉手套、鞋套
3.2.3 扩增产物分析区：
带滤芯的一次性吸头（无 DNA 和 RNA 酶），1.5mL 离心管（无 DNA 和 RNA 酶） 及相应试管架
计时器
旋涡振荡器：震动频率可调
一次性工作服、帽、口罩、无粉手套和鞋套
HIV-1 病毒载量检测实验室设备分布示意图
病毒载量
仪 生物安全柜
加样器
超净工作台 扩增产物分析区
漩涡振
荡器 漩涡振 荡器
冰
箱
2-8
℃ 样品处理区 冰
箱
-70
℃ 冰 箱 2-8 ℃ 试剂准备区
冰
箱
-
20
℃
HIV-1 病毒载量检测仪
加样器1 套（20μL、200μL、1000μL）
冰箱：2-8 ℃，-20 ℃ 旋涡振荡器，震动频率可调一次性工作服、帽、口罩、无粉手套和鞋套带滤芯的一次性吸头（无DNA、RNA酶）
第四章样品的采集、处理、保存和运输
样品的采集、处理、保存和运输要求保证满足不同HIV-1 病毒载量检测方法对样品性质的，并保证生物安全。

因此需按照所使用检测方法的要求严格执行抗凝、分样时间、运输包装、保存温度、冻融记录。

用于HIV-1 病毒载量检测的样品须采用抗凝血浆。

4.1样品的采集
4.1.1采样器材：一次性抗凝真空采血管、持针器、蝶形针等。

4.1.2抗凝剂：通常采用EDTA（乙二胺四乙酸）或ACD（枸橼酸钠），须符合不同检测方法对样品的要求。

4.1.3样品标识：在采血管上贴唯一性样品编号。

4.1.4样品采集量：通常采集全血8-10ml, 采集的样品量应与定量采血管的刻度要求一致，避免血液凝固或稀释。

4.1.5样品混匀：采集血液后，立即轻轻上下颠倒抗凝管10 次，使血液与抗凝剂充分混匀。

4.1.6其它信息：HIV-1 病毒载量检测样品送检及接收单（附表2）的备注栏内需注明采集对象的基本信息和流行病学资料、抗病毒药物使用情况、最近一次的实验室病毒载量检测结果。

4.2样品的处理
4.2.1要求在采血后6 小时内离心样品，室温下使用离心力为800-1200g （1500-3000rpm）离心10 分钟后，吸出血浆, 分装到无菌的聚丙烯螺口冻存管中，并注明分装时间，冻存管应提前贴上耐冻的样品编号标签。

4.2.2血浆样品不能灭活。

4.2.3做好样品处理记录，包括冰箱温度变化、样品存取。

4.3样品的保存
4.3.1保存条件：根据血浆检测时间而定，4 天内可在4℃暂时保存，3 个月内应冻存于-20 ℃以下，3 个月以上应置于-70 ℃以下。

不能使
用自动除霜冰箱。

4.3.2血浆样品冻融不应超过3 次。

4.3.3监控并记录保存温度以及样品状态的变化
4.3.4防止样品变质、泄漏及污染。

4.4样品的运输根据《可感染人类的高致病性病原微生物菌（毒）种或样
本运输管理规
定》的要求运输，并严格控制运输的冷冻状态，避免样品融化。

4.5样品的发送和接收
4.5.1发送样品时, 需详细填写样品HIV-1 病毒载量检测样品送检及接收单（附表2）。

4.5.2接收样品时，按HIV-1 病毒载量检测样品送检及接收单（附表2）核对样品数量，检查样品状况。

4.5.3样品管破损造成样品溢出、出现明显溶血、凝血的样品，不宜作HIV-1
病毒载量检测；如果样品已经融化，可以4℃保存并尽快检测，记录冻融一次。

第五章常用检测方法简介
HIV-1 病毒载量检测根据方法的原理不同，分为不同系列仪器，目前常用的HIV 病毒载量的测定方法有：核酸序列依赖性扩增(NASBA) 技术，代表产品为实时荧光技术NucliSens EasyQ仪；分枝DNA信号放大系统( bDNA)技术，代表产品为bDNA4 40 分析仪；实时荧光定量PCR扩增技术(real-time PCR)，包括Cobas Amplicor Taqman 检测系统、M2000检测仪与国产试剂盒均属此类技术。

5．1 核酸序列依赖性扩增(NASBA)技术最早产品为NucliSens ECL 定量RNA测定方法，已经被NucliSens EasyQ 新一代实时分子信标定量扩增所取代。

所采用的NASBA技术是一种等温扩增系
统，其扩增基础在于系统内的混合酶系统，此系统内含有逆转录酶AMV-RT和T7-DNA多聚酶在体外模拟逆转录病毒体内复制过程。

Nuclisens EasyQ 结合NASBA技术、BOOM核酸提纯技术与分子信标探针技术( Molecular Beacon)检测血浆中的HIV RNA水平。

这种结合方法使用实时扩增分析( real-time amplification assay)，提高对诊断质量的要求。

此方法可分为三个步骤：核酸提取、扩增和等温检测。

NucliSens EasyQ HIV-1 的检测是利用靶特异的分子信标进行，分子信标的DNA寡核苷酸片段包含一段可特异结合靶RNA的序列。

当RNA互补链不存在时，分子信标维持内部发夹结构，使猝灭基团处于非常接近荧光素的位置，荧光信号被猝灭。

当分子信标与互补靶序列结合，发夹打开释放荧光信号，报告靶序列的存在。

NucliSens EasyQ HIV-1 使用两个不同的分子信标，一个是针对野毒株HIV-1 RNA 的扩增子，另一个针对内标物RNA(calibrator) 的扩增子，各使用不同荧光染料( 野毒株使用6-FAM，内标物使用6-ROX)，从而实现靶序列和内标物RNA两个扩增过程的各自跟踪。

荧光信号的动力学分析可以显示野毒株和内标物RNA的转录速率，因此可以计算出原样本中HIV-1 RNA 含量。

5．2 分枝DNA(bDNA)技术
分枝DNA测定技术基于其独特的信号放大系统，即分枝DNA信号放大系
统，为一个人工合成的分枝DNA，分枝DNA的分枝可结合多个酶标记物，
从而将病毒的信号放大，以便进行检测。

此检测系统不涉及核酸扩增反应。

方法定量系统中没有内标记物，每次实验设置一系列外部标记，通过实验样品反应强度与外部标记样品强度的比较确定待检样品的病毒拷贝数。

bDNA检测通常包括以下步骤：（1）将患者血清或血浆连同含有特异的合成寡聚核苷酸靶探针的裂解液加到微孔中；（2）孵育，释放病毒核酸，降解RNA 酶或使DNA变性, 然后靶探针结合到靶RNA或DNA并固定在固相板上；（3）冷却洗板；（4）加信号放大探针（bDNA）到各孔内；（5）孵育，使bDNA杂交到靶探针的相应部位；（6）冷却洗板；（7）加标记探针到各孔内；（8）孵育，使酶标记的探针杂交到bDNA上；（9）冷却洗板；（10）加化学发光底物到各孔中；（11）孵育，酶和底物相互作用，产生化学发光信号。

发射的光强以相对光量值（RLUs）表示。

产生的光强直接
与各样品中病毒RNA或DNA的拷贝数成正比。

各样品中病毒核酸的含量由与样品一同处理的标准所制作的标准曲线计算获得。

bDNA440病毒载量检测仪较bDNA340在孵育、冲洗和加样步骤由手动操作转变为自动化，减少污染，更便于操作节省实验时间。

5．3 实时（real-time ）荧光定量PCR扩增
实时荧光定量PCR技术，是指在PCR反应体系中加入荧光基团，利用荧光信号积累实时监测整个PCR进程，最后通过标准曲线对未知模板进行定量分析的方法。

每个反应管内的荧光信号到达设定的域值时所经历的循环数Ct 值与该模板的起始拷贝数的对数存在线性关系。

利用已知起始拷贝数的标准品可作出标准曲线，其中横坐标代表起始拷贝数的对数，纵坐标代表Ct 值）。

因此，只要获得未知样品的Ct 值，即可从标准曲线上计算出该样品的起始拷贝数。

实时荧光定量PCR扩增的实验检测过程可分为：（1）样品制备, 抽提和浓缩目标RNA分子，并除去可能存在的抑制因子。

（2）Real-time
PCR ，检测PCR的产物使用荧光标记的寡核苷酸探针。

检测的原理基于荧
光信号增长曲线与循环数相关。

（3）RT-PCR反应，病毒RNA利用逆转录酶将RNA逆转录为cDNA，然后通过DNA 聚合酶对特定片段进行扩增。

（4）
扩增产物的检测，基于检测阈值的设定，当病毒载量高时，低循环数即能检测到荧光信号，当病毒载量低时，高循环数时才能检测到荧光。

循环数与样品病毒载量成线性关系。

利用标准品制作循环数与病毒载量的标准曲线就能对样品病毒载量进行定量检测。

目前此原理已为多种HIV-1病毒载量检测的的主要方法，包括Cobas Amplicor Taqman检测系统、M2000检测仪和国内产品凯杰、达安以及正研制的定量检测试剂均属于该技术。

Cobas Amplicor Taqman 检测系统是全自动化的实时荧光定量PCR病毒载量平台, 具有样品进-- 结果出(sample-in, result-out) 的特点。

此方法的检测过程为：装待测样品、放试剂和耗材、核酸提取、PCR 反
应体系制备、实时荧光定量PCR。

Taqman荧光定量技术是以Taqman荧光探针为基础，Taqman荧光探针为一寡核苷酸，两端分别标记一个荧光发射基团和一个荧光淬灭基团。

探针完整时，发射基团发射的荧光信号被淬灭基团吸收；PCR扩增时，Taq酶的5'－3'外切酶活性将探针酶切降解，使荧光发射基团和荧光淬灭基团分离，从而荧光监测系统可接收到荧光信号，即每扩增一条DNA链，就有一个荧光分子形成，实现了荧光信号的累积与PCR产物形成完全同步，从而实现定量。

M2000利用RT-PCR法，在开始制备样本时，对每个样本加入与HIV-1 目标序列无关的RNA序列。

这种不相关的RNA序列通过RT-PCR被同时扩增，从而充当内部质控品( IC)。

在m2000rt 仪器上，每个扩增循环中存在的HIV-1 目标序列总量通过含荧光标记的寡核苷酸探针测定。

m2000rt 系统通过样品制备、试剂制备和反应板装置、扩增、检测四个步骤，检测到荧光信号的扩增循环与初始样本中存在的HIV-1 RNA 浓度对数成比例。

国内产品匹基、达安试剂盒的原理步骤与上述类似，为开放式试剂，可以使用多款实时荧光定量PCR检测仪。

5．4 不同方法检测结果间相互关系
病毒载量的检测单位有拷贝数(CP)/ml 和国际单位(IU)/ml ，且同一样本不同方法的病毒载量检测结果不同，另外，不同方法间检测结果并无固
定的转换关系，与病毒亚型、试剂不同版本有关，因此评估同一病人的治疗效果需用同一种方法检测，并且考虑试剂版本的更新情况。

第六章室内质量控制
内部质量控制是在良好实验室整体环境支持下，从样品接收到发出报告整个过程每个环节的管理过程，包括：（1）人员；（2）实验室分区和环境；（3）仪器；（4）检测过程（试剂、操作过程、质控品使用）；（5）数据报告。

6.1人员
HIV-1 病毒载量检测人员分为检验人、复核人、签发人。

6.1.1所有相关检验人员需经操作培训，能独立熟练地操作，并经考核合格，持证上岗。

6.1.2复核人、签发人应具备对检测过程进行分析、解决问题的能力。

6.2实验室分区和环境
6.2.1实验室分区的功能
HIV-1 病毒载量检测实验室原则上应分为三个独立工作区：试剂准备区、样品处理区、扩增产物分析区，并设在不同房间。

不同检测方法的分区功能和要求可有所不同。

6.2.1.1试剂准备区：扩增试剂的配制、分装和保存；
6.2.1.2样品处理区：样品登记、分装，核酸提取、保存和加样；
6.2.1.3扩增产物分析区：产物扩增的测定、结果分析、登记及报告。

严格要求三区的单一空气流向：从试剂准备区到样品处理区，然后到扩增产物分析区，不能逆向流动。

实验室的设置及辅助设备的具体要求参见第三章。

6.2.2实验室环境的要求
6.2.2.1实验室有足够的空间；
6.2.2.2采光好，应避免阳光直射设备；
6.2.2.3室温控制在18~25℃；
6.2.2.4室内相对湿度控制在30~70%；
6.2.2.5电源稳定，HIV-1 病毒载量检测仪应配备稳压电源；
6.2.2.6室内保持干净整洁，无灰尘；
6.2.2.7实验前后，用75%乙醇或0.1%次氯酸钠及时处理操作台面。

6.3仪器设备质控
6.3.1加样器、温湿度计须经计量部门校准，每年一次，每半年期间核查一次。

6.3.2HIV-1 病毒载量检测仪及其配套仪器可以委托公司校准，每年一次。

6.3.3离心机可以委托计量部门或公司校准，每年一次。

6.3.4冰箱、水浴箱用校准合格的温度计测量温度，每次做好记录。

6.4检测过程质控
6.4.1试剂质控
6.4.1.1使用经国家食品药品监督管理局注册的试剂。

6.4.1.2所有试剂盒须严格按要求条件保存。

6.4.1.3试剂盒拆封时，要记录拆封时间，所有试剂严格控制在有效期内使用。

6.4.2实验用水：要求使用无DNA和RNA酶的去离子水。

6.4.3操作过程质控
按照试剂盒要求与实验室的条件及时更新标准操作程序（SOP），并严格执行，不得擅自修改。

6.4.4质控品的使用
每次实验按照试剂盒说明书的要求使用试剂盒提供的质控品，并满足质控要求。

同时使用外部质控品（HIV病毒载量值为5000-15000 拷贝/ 毫升质控品），如果试剂盒没有阴性质控品，需加一个阴性质控品。

6.4.4.1外部质控品的制备、定值及使用
（1）制备
对用于制备质控品的大样本血浆样品，要求用EDTA抗凝剂抗凝，新鲜抗凝血离心分离，得到透亮血浆。

然后用孔径为0.2 微米的滤膜过滤除菌，充分混匀。

按各自方法对样品量的需求，用无菌冻存管定量分装，标记，封口，冻存于-70 ℃以下非自动除霜冰箱内，避免反复冻融。

按实际使用量的要求配制足够量外部质控品（推荐每次配置量可使用两年）。

（2）定值
从制备好的外部质控品中随机选出5 管，严格按照实验室的各自方法标准操作程序进行HIV-1 病毒载量检测，将测得结果的拷贝值或IU 值换算成Log10 值，计算其算术平均值（M）和标准偏差（S）。

（3）质控图的绘制和使用
根据测得值，在坐标图上画出平均值、± 2S、± 3S 线图，作质控图
使用。

每次检测都应带一个外部对照，将得到的外部质控品Log10 值标在上述质控图上。

每次质控品测得值在平均值± 2.0s 内方为有
效。

使用新批次的外部对照质控品时，必须重新绘制质控图。

（4）质控品不宜使用稀释方法制备。

6.5 数据分析、结果报告
6.5.1在试剂盒及外部质控品结果满足要求的前提下，对样品进行分析。

6.5.2外部质控品不合格，样品需要重新检测。

6.5.3结果超过检测上限的样品应稀释以后重新检测。

6.5.4复核人对检测结果进行仔细复核并对结果提出结论、签字。

6.5.5签发人对结果的结论进行审核、分析、总结、签字。

6.5.6按不同方法的要求，以拷贝/ 毫升或国际单位/毫升为单位报告样品的HIV-1 病毒载量值。

第七章实验室检测能力验证（PT）
HIV-1 病毒载量检测的外部质量控制可以通过参加外部质量评价，提高实验结果的可比性，发现系统误差，改进实验室工作，提高检测质量。

HIV-1 病毒载量检测实验室须参加艾滋病/ 丙肝参比实验室或有资质的国内外机构组织的HIV-1 病毒载量检测能力验证来实施外部质量控制。

7.1PT 组织
艾滋病/丙肝参比实验室为HIV-1 病毒载量检测能力验证（PT）的组织者，负责制定国内HIV-1 病毒载量检测能力验证的计划并组织实施。

国内所有从事HIV-1 病毒载量检测的实验室须参加该PT 项目，在规定时间内使用有效试剂与实验样品一起检测，填写HIV-1病毒载量检测报告单（附表4），上报艾滋病/ 丙肝参比实验室。

鼓励有条件的实验室参加有资质的国内外机构组织的PT 活动。

7.2PT 实施
7.2.1PT 样品组成：每次5 份。

包括阴性、不同拷贝数的阳性样品。

可以根据实验室的考核目的制备考核盘。

7.2.2PT 频率：一年2 次。

7.2.3PT样品的接收与保存：要求参加PT的实验室收到考核样品后，立即进行核对、检查，填写HIV-1 病毒载量检测能力验证样品接收专用单（附表3），3 天内传回艾滋病/ 丙肝参比实验室。

如发现考核样品缺失、量不足、空管等情况，及时书面回报，艾滋病/ 丙肝参比实验室负责补寄或更换。

收到样品后应及时检测或在-70 度以下保存。

7.2.4PT 样品的检测：要求将考核样品同实验室常规样品一起检测，由常规检测人员进行。

7.2.5PT结果的报告和处理：参加PT 的实验室必须在规定的时间内，用电子邮件或书面报告实验结果，并将HIV-1 病毒载量实验结果报告单和打印的仪器原始记录一起上报给艾滋病/ 丙肝参比实验室，艾滋病/丙肝参比实验室将负责结果录入和处理。

有任何原因不能按时上报者，需有单位盖
章的书面申请。

7.2.6评分原则
将参与实验室反馈结果换算成对数值（Lg），再按同一种方法与同一个考核品的的所有实验室结果进行统计，算出平均值（M）和标准偏差（S）。

7.2.6.1成绩判定：根据每个参与考核实验室一年两次所有考核品的结果进行综合评分（每一个考核品的评判标准依照7.2.6.2 与 7.2.6.3 条款），判定标准为：
①优秀：所有考核品没有问题；
②良好：有一个考核品满足7.2.6.2 中的条款；
③合格：两个考核品满足7.2.6.2 中的条款④不合格：至少有三个考核品满足7.2.6.2 中的条款或至少一个考核品出现7.2.6.3 中的条款。

7.2.6.2样品结果在M+2.0S～M+3.0S 内；样品结果在M-2.0S～M-3.0S 内；考核结果报告没及时上报；没按要求上报原始记录。

7.2.6.3样品结果超过>M+3.0S；样品结果<M-3.0S；假阳性；假阴性；无效结果。

7.2.7评估结果反馈：艾滋病/ 丙肝参比实验室根据各实验室的两次考核结果，及时反馈每次评估结果。

每年反馈最后的评估结果，并发证书。

7.2.8抱怨和申诉：参评实验室如对评估结果或其它方面存有异议，可以在收到结果后10天内向艾滋病/丙肝参比实验室提出异议，后者在核实情况后予以答复。

7.2.9现场督导：根据考核情况的需要，艾滋病/ 丙肝参比实验室组成技术专家组对不合格实验室进行现场检查。

检查内容包括：实验原始数据、实验室布局、仪器运行状况、辅助设备校准状况、实验耗材质量、样品保存、试剂盒使用状态、人员培训状况、质量保证和质量控制等。

给实验室
反馈督导报告，现场实验室按相关建议作出整顿。

第八章实验室生物安全
8.1相关依据
《病原微生物实验室生物安全管理条例》、《实验室生物安全通用要。