动物生物学实验指导(第2版)

实验一 细胞的制片与观察和细胞大小的测量 [作业思考 作业思考] 作业思考 1、绘人口腔黏膜上皮细胞结构图，注明各部 、绘人口腔黏膜上皮细胞结构图， 包括线粒体)名称 分(包括线粒体 名称。 包括线粒体 名称。 2、根据实验结果判断，你的制片中口腔黏膜 、根据实验结果判断， 细胞是活细胞还是死细胞？为什么？ 细胞是活细胞还是死细胞？为什么？ 3、将目镜测微尺校正结果填入表，为什么换 、将目镜测微尺校正结果填入表， 用不同倍数目镜或物镜时，须重新校正目尺？ 用不同倍数目镜或物镜时，须重新校正目尺？
实验二 动物组织的制片及观察
实验二 动物组织的制片及观察
网状结缔组织
实验二 动物组织的制片及观察
实验二 动物组织的制片及观察
血液
实验二 动物组织的制片及观察
神 经 组 织
实验三 原生动物系列实验
[目的要求 目的要求] 目的要求 1、学习在显微镜下对运动活泼的微型动物的 、 观察和实验方法。 观察和实验方法。 2、认识原生质的应激性。 、认识原生质的应激性。 3、认识和理解原生动物的单个细胞是一个完 、 整的能独立生活的有机体。 整的能独立生活的有机体。 4、认识一些常见的原生动物。 、认识一些常见的原生动物。
实验一 细胞的制片与观察和细胞大小的测量
3、细胞内DNA和RNA的显示 、细胞内 和 的显示 材料尽可能新鲜。 材料尽可能新鲜。 涂片时，不宜将肝块切面在玻片同一处反复多次涂抹。 涂片时，不宜将肝块切面在玻片同一处反复多次涂抹。 涂片后立即晃动玻片，使材料迅速风干后即刻固定， 涂片后立即晃动玻片，使材料迅速风干后即刻固定，以尽 可能保持细胞原有形态结构。 可能保持细胞原有形态结构。 水洗时，水流细缓，以免将玻片上的材料冲掉。 水洗时，水流细缓，以免将玻片上的材料冲掉。 分色时间必须掌握好，避免时间过长，色差消失， 分色时间必须掌握好，避免时间过长，色差消失，以致难 以观察到DNA和RNA的分布。 的分布。 以观察到 和 的分布 二甲苯有毒，染色缸必须及时加盖。 二甲苯有毒，染色缸必须及时加盖。 本实验所用染料为碱性，应用中性树胶封片。 本实验所用染料为碱性，应用中性树胶封片。 4、细胞大小的测量 、 当换用不同倍数的目镜或物镜时，目尺需重新校正。 当换用不同倍数的目镜或物镜时，目尺需重新校正。 测量细胞大小时所用目镜和物镜的倍数必须与校正目尺时 所用目镜和物镜的倍数一致。 所用目镜和物镜的倍数一致。
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实验一 细胞的制片与观察和细胞大小的测量
[实验原理 实验原理] 实验原理 1、线粒体活体染色法 、 线粒体内膜和嵴膜含有细胞色素氧化酶系统，用詹纳斯绿B 线粒体内膜和嵴膜含有细胞色素氧化酶系统，用詹纳斯绿 对线粒体进行专一性活体染色时， 对线粒体进行专一性活体染色时，线粒体内的细胞色素氧化 酶可使詹纳斯绿B染料始终处于氧化态而呈蓝色 染料始终处于氧化态而呈蓝色， 酶可使詹纳斯绿B染料始终处于氧化态而呈蓝色，而线粒体周 围细胞质中的詹纳斯绿B被还原呈无色 被还原呈无色。 围细胞质中的詹纳斯绿B被还原呈无色。 2、细胞内 、细胞内DNA和RNA的显示 和 的显示 核酸均为酸性，对碱性染料派诺宁和甲基绿具有亲和力。 核酸均为酸性，对碱性染料派诺宁和甲基绿具有亲和力。用 这两种染料混合液处理细胞时，由于DNA和RNA聚合程度不 这两种染料混合液处理细胞时，由于 和 聚合程度不 甲基绿分子有两个相对的正电荷， 同，甲基绿分子有两个相对的正电荷，与聚合程度较高的 DNA分子有较强的亲和力，可使 分子有较强的亲和力， 分子染成蓝绿色， 分子有较强的亲和力 可使DNA分子染成蓝绿色，而派 分子染成蓝绿色 诺宁分子中仅一个正电荷，可与低聚分子RNA结合使其染成 诺宁分子中仅一个正电荷，可与低聚分子 结合使其染成 红色。这样细胞中的DNA和RNA便被区别开来。 红色。这样细胞中的 和 便被区别开来。 便被区别开来
实验一 细胞的制片与观察和细胞大小的测量
[操作要点 操作要点] 操作要点 1、涂片法制备人口腔黏膜上皮细胞玻片标本及观察 、涂片法制备人口腔黏膜上皮细胞玻片标本及观察 取材 用无菌牙签在口腔颊部轻轻刮取口腔黏膜细 勿将深部细胞刮下。 胞，勿将深部细胞刮下。 材料均匀分散，细胞不重叠，以易于观察。 涂片 材料均匀分散，细胞不重叠，以易于观察。 镊子夹住盖玻片的一侧， 加盖玻片 镊子夹住盖玻片的一侧，将另一侧首先 接触载玻片和溶液，然后慢慢放下盖玻片， 接触载玻片和溶液，然后慢慢放下盖玻片，避免产 生气泡。 生气泡。 2、口腔黏膜细胞活体染色显示线粒体 、 涂布口腔黏膜细胞后即刻染色，以保证活细胞染色。 涂布口腔黏膜细胞后即刻染色，以保证活细胞染色。
实验二 动物组织的制片及观察
[操作要点 操作要点] 操作要点 1、制作蛙肠系膜平铺片（铺片法） 、制作蛙肠系膜平铺片（铺片法） 完好地剪取肠系膜并平铺于载玻片上是本实验成 功的关键。当用眼科剪剪取肠系膜时， 功的关键。当用眼科剪剪取肠系膜时，应用镊子 夹住剪开的膜的边缘，防止膜皱缩成团。 夹住剪开的膜的边缘，防止膜皱缩成团。用镊子 将膜放置于载玻片上后，再用解剖针将膜铺平。 将膜放置于载玻片上后，再用解剖针将膜铺平。 玻片洁净。 载（盖）玻片洁净。 2、制作蝗虫骨骼肌装片（分离法） 、制作蝗虫骨骼肌装片（分离法） 用解剖针分离肌丝时越细越好。 用解剖针分离肌丝时越细越好。
实验一 细胞的制片与观察和细胞大小的测量 [目的要求 目的要求] 目的要求 1、学习掌握涂片法制作动物细胞显微玻片标 、 本。 2、学习掌握线粒体活体染色法和显示细胞内 、 DNA和RNA的方法。 的方法。 和 的方法 3、学习掌握测量细胞大小的基本方法。 、学习掌握测量细胞大小的基本方法。 4、了解动物细胞的基本结构。 、了解动物细胞的基本结构。
涂片法制备口腔黏膜上皮细胞玻片标本
口腔黏膜细胞活体染色显示线粒体
细胞内DNA和RNA的显示 和 细胞内 的显示
实验二 动物组织的制片及观察
[目的要求 目的要求] 目的要求 1、掌握动物组织平铺片、分离片等临时装片 、掌握动物组织平铺片、 和涂片的一般制作方法。 和涂片的一般制作方法。 2、掌握动物的四类基本组织结构特点，理解 、掌握动物的四类基本组织结构特点， 组织结构与功能的密切关系。 组织结构与功能的密切关系。 [实验原理 实验原理] 实验原理 采用一定的制片方法， 采用一定的制片方法，将动物组织制 备成玻片标本， 备成玻片标本，在显微镜下观察动物组织 的形态结构。 的形态结构。
实验一 细胞的制片与观察和细胞大小的测量 3、细胞大小的测量 、 镜台测微尺(台尺 台尺)是中央部分刻有精确等 镜台测微尺 台尺 是中央部分刻有精确等 分线的载玻片，一般是将1mm等分为 等分为100 分线的载玻片，一般是将 等分为 每格长10µm，专用于校正目镜测微尺 格，每格长 ， (目尺 每格的相对长度。目尺是一块可放在 目尺)每格的相对长度 目尺 每格的相对长度。 目镜内隔板上的圆形小玻片， 目镜内隔板上的圆形小玻片，其中央有精 确的等分刻度，有等分为50小格和 小格和100小格 确的等分刻度，有等分为 小格和 小格 两种，用以测量经显微镜放大后的细胞物 两种， 像。
实验二 动物组织的制片及观察
[作业思考 作业思考] 作业思考 1、绘下图之一并注明图中各部分名称：单层 、绘下图之一并注明图中各部分名称： 扁平上皮，三种肌肉组织， 扁平上皮，三种肌肉组织，一个多极神经 元。 2、在组织切片标本上如何区别各种类型结缔 、 组织？ 组织？
实验二 动物组织的制片及观察
实验三 原生动物系列实验
[材料与用品 材料与用品] 材料与用品 大草履虫培养液、 大草履虫培养液、草履虫横分裂及结合生殖 的装片、显微镜、体视显微镜、秒表、镊子、漏 的装片、显微镜、体视显微镜、秒表、镊子、 斗架、试管架、载玻片、盖玻片、试管、滴管、 斗架、试管架、载玻片、盖玻片、试管、滴管、 毛细滴管、玻棒、烧杯、量筒、 移液管、 毛细滴管、玻棒、烧杯、量筒、1ml移液管、滴 移液管 漏斗、滤纸、精密PH试纸 试纸（ － ， 瓶、漏斗、滤纸、精密 试纸（0.5－5.0，5.0 ）、吸水纸 －7.0，5.5－9.0）、吸水纸、脱脂棉、橡皮吸球、 ， － ）、吸水纸、脱脂棉、橡皮吸球、 牙签、蓝黑墨水、冰醋酸、 ％甲基绿、 牙签、蓝黑墨水、冰醋酸、1％甲基绿、洋红粉 末、1％氯化钠溶液、碘液、鸡蛋清、甘油、蒸 ％氯化钠溶液、碘液、鸡蛋清、甘油、 馏水
实验二 动物组织的制片及观察
[材料用品 材料用品] 材料用品 蝗虫浸制标本、 蝗虫浸制标本、动物各组织的玻片标 显微镜、解剖器具、蜡盘、载玻片、 本、显微镜、解剖器具、蜡盘、载玻片、 盖玻片、烧杯、染色缸、大头针、棉花、 盖玻片、烧杯、染色缸、大头针、棉花、 0.65％生理盐水、1％硝酸银溶液、甘油、 ％生理盐水、 ％硝酸银溶液、甘油、 香柏油、 ％亚甲基蓝、甲醇、 香柏油、0.1％亚甲基蓝、甲醇、吉姆萨染 色液、蒸馏水、 色液、蒸馏水、乙醚
实验一 细胞的制片与观察和细胞大小的测量 [实验内容 实验内容] 实验内容 1.制备口腔粘膜细胞标本，观察细胞形态结 制备口腔粘膜细胞标本， 制备口腔粘膜细胞标本 构和线粒体的活体染色显示。 构和线粒体的活体染色显示。 2.细胞中 细胞中DNA和RNA的显示。 的显示。 细胞中 和 的显示 3.利用显微镜测微技术测量鸡红细胞、草履 利用显微镜测微技术测量鸡红细胞、 利用显微镜测微技术测量鸡红细胞 虫及其细胞核直径， 虫及其细胞核直径，计算细胞核质比 。
实验三 原生动物系列实验
[实验原理 实验原理] 实验原理 草履虫是原生动物的代表动物， 草履虫是原生动物的代表动物，是生 命科学基础理论研究的理想材料， 命科学基础理论研究的理想材料，在细胞 生物学、 生物学、细胞遗传学研究中尤其具有科学 价值。 价值。草履虫的形态结构和生命活动充分 展现了单细胞原生动物作为一个完整的、 展现了单细胞原生动物作为一个完整的、 独立的动物有机体所具有的各种特征， 独立的动物有机体所具有的各种特征，而 且草履虫对各种刺激的反应也说明应激性 是原生质的普遍特性。 是原生质的普遍特性。
实验二 动物组织的制片及观察
3、制备蛙血涂片标本（推片法） 、制备蛙血涂片标本（推片法） 涂血片后，及时晃动玻片，使血片迅速干燥即固定； 涂血片后，及时晃动玻片，使血片迅速干燥即固定；空气 中干燥时间过长细胞易变形，影响观察和测量。 中干燥时间过长细胞易变形，影响观察和测量。 推片时应保持一定的速度和两片间的角度，连续推进， 推片时应保持一定的速度和两片间的角度，连续推进，不 要中断，以免血片厚薄不一。 要中断，以免血片厚薄不一。 血片的厚薄，可由血滴大小、 血片的厚薄，可由血滴大小、推片速度和两片间夹角的大 小来调节。血滴小，推进速度慢，两片间夹角角度小， 小来调节。血滴小，推进速度慢，两片间夹角角度小，则 血片薄；反之则厚。厚的血片适于做血细胞分类， 血片薄；反之则厚。厚的血片适于做血细胞分类，容易找 到白细胞。 到白细胞。 4、上皮组织 、 观察上皮组织时，应根据其位置特点， 观察上皮组织时，应根据其位置特点，先在低倍镜下 找到所要观察的上皮后，再移至视野中央， 找到所要观察的上皮后，再移至视野中央，转高倍镜仔细 观察其结构特点。 观察其结构特点。
实验二 动物组织的制片及观察
[实验内容] 实验内容] （一）制片和观察 单层扁平上皮的制片和观察 1、单层扁平上皮的制片和观察 2、骨骼肌的制片和观察 血液涂片标本的制备 3、血液涂片标本的制备 动物四大组织玻片标本观察、示范、 （二）动物四大组织玻片标本观察、示范、多媒体 演示 1、上皮组织 2、肌肉组织 3、神经组织 4、结缔组织
实验一 细胞的制片与观察和细胞大小的测量 [材料用品 材料用品] 材料用品 人口腔粘膜细胞、大鼠、鸡血涂片标本、 人口腔粘膜细胞、大鼠、鸡血涂片标本、 显微镜、镜台测微尺、目镜测微尺、 显微镜、镜台测微尺、目镜测微尺、无菌 牙签、解剖器具、染色缸、染色架、 牙签、解剖器具、染色缸、染色架、载玻 盖玻片、滴管、吸水纸、 ％ 片、盖玻片、滴管、吸水纸、0.9％生理盐 水、0.1％碘液、0.02％詹纳斯绿、醋酸洋 ％碘液、 ％詹纳斯绿、 红染液、甲基绿-派洛宁染液 派洛宁染液、 红染液、甲基绿 派洛宁染液、卡渃氏固定 液、丙酮、二甲苯、中性树胶、蒸馏水、 丙酮、二甲苯、中性树胶、蒸馏水、 水