天然药物抗疱疹病毒的研究进展

天然药物抗疱疹病毒的研究进展

【摘要】疱疹病毒（Herpesvirus，HV）可侵犯人体多种组织，引起皮肤、粘膜、淋巴、生殖系统、神经系统或肝，肺等脏器感染。临床常见且危害比较大的有生殖器疱疹、带状疱疹、单纯疱疹、汗疱疹。本文按照新药研发的一般程序，从天然药物抗HV的作用机理、药物活性筛选、体外实验、动物模型和临床治疗研究等方面综述了天然药物抗HV的研究进展。

【Abstract】HV can encroach tissues of human body and provoke infections in skin、mucosae、lymph、genital system、nervous system、liver and lung. Genital herpes、herpes zoster、herpes simplex and pompholyx are common symptoms and of more dangerous in clinic.In this article, the literatures concerning of natural pruducts in anti-herpes virus were reviewed and summarized into categories of anti-herpes virus of mechanism、medicine activity screening、natural products in vitro、animal model、clinical therapy according to the sequence of drug discovey and development.

【Key words】natural products; anti- herpes virus; progress

据WHO统计，世界范围内有60%~95% 的人群感染过至少一种疱疹病毒（HV）[1]。HV是感染生物体后并能引起蔓延性皮疹的一大类DNA病毒，与人类相关的疱疹病毒称为人类疱疹病毒，分为8型，其中单纯疱疹病毒1型(HSV21)、单纯疱疹病毒2型(HSV22)、水痘2带状疱疹病毒(VZV)、巨细胞病毒(CMV)、Epstein2 Barr病毒(EBV)、人类疱疹病毒8型(HHV28)等六种人类疱疹病毒将是今后抗HV的研究重点。HV自内向外依次为：双链DNA病毒核心、核衣壳、皮层、包膜和包膜糖蛋白（图1）。处于潜伏期的HV，其基因组的表达受到抑制，不增殖和破坏宿主细胞，病毒与宿主细胞暂时处于平衡状态，一旦宿主机体抵抗力下降时，病毒便被激活，转为显性感染，主要通过呼吸道、皮肤和粘膜密切接触进行传播，但宿主感染后对其产生的免疫应答的机制尚不清楚。

在充分了解HV作用机理的基础上，人们设计了抗HV的药物和相关疫苗，目前，美国国家过敏和传染病研究院与葛兰素史克制药公司联合研制的，历时8年的HSV-2疫苗在Ⅲ期临床试验中以失败告终[2]，其他的疫苗正在研究中；因此，目前药物治疗是抗HV的主要手段，有阿昔洛韦、利巴韦林、膦甲酸钠等，其中一线药物阿昔洛韦(Acyclovir，ACV)是临床中广泛应用的抗HV药物，但是仍然不尽人意：除了HV对ACV产生耐药性之外[3]，它不能控制单纯疱疹病毒(HSV)的潜伏感染及其复发，也未能降低HSV-2感染再活化所致的血浆和生殖器人体免疫缺损病毒-1(HIV-1)水平升高[4]。

传统中草药是中华文明的瑰宝，几千年的临床实践业已证明，它们具有毒副作用轻微、疗效确切等优点；随着天然药物分离分析技术水平的提高和抗HV筛选方法研究的进步，天然药物在抗HV新药研究中的作用和地位日渐突出，因此，从天然药物中寻找高效低毒抗HV活性成分是获取先导化合物（lead compound）的一条捷径，对研制、开发拥有自主知识产权的抗HV新药具有重要意义。下面

从机理研究、活性筛选、体外实验、动物实验到临床应用等新药研发的一般程序，并重点阐述机理研究和体外实验方面天然药物抗HV的研究进展。

1天然药物抗HV的作用机理

同其它病毒一样，HV复制周期分为吸附、穿入、脱壳、生物合成及装配释放等五个步骤，所以抑制其中任一个环节便可阻断病毒的形成。目前抗HV药物主要针对其DNA复制的相关酶而设计的；抑制或干扰HV吸附、穿入、脱壳、转录后修饰、核酸及蛋白合成、病毒装配，受体配体结合、离子通道、RNA干扰作用过程相关的多靶点药物将是未来的研究热点。Cullen BR等[5]发现HSV1促使潜伏阶段和活跃阶段之间切换的是病毒休眠期的唯一产物—LATRNA(潜伏核糖核酸)的基因物质，因此通过药物抑制LATRNA的活化，阻断病毒自我复制系统的启动，HSV引起的唇疱疹可能成为过去式。这些积极的探索将为抗HV 的新靶点的出现提供宝贵线索。确定治疗的疾病目标和作用的环节和靶标，是创制新药的出发点，也是以后施行的各种操作的依据。目前抗HV机制探讨不够深入、靶点过于单一，当前的药物大都针对DNA的合成，不能抑制HV的早期基因或早期裂解基因如Zta、Rta等的表达，而这些基因可促进病毒裂解周期的再现，这也可能是抗病毒药物停药后病毒复活和疾病复发的原因。RNAi可有效地抑制病毒复活的起始及必要阶段，从根本上抑制病毒的复活[6]。随着HV病原生物学的渗透和分子生物学技术的应用，天然药物抗HV的机理研究将从基础变成前沿。

天然药物种类繁多、结构多样，是开发新的抗HV多靶点药物的理想源泉。例如，从植物酸模中丙酮-水提取液(R2)有非常强的抗HSV作用，其SI接近100。R2及其R2的一个主要的低聚原花色素---表儿茶精-3-O-棓酸酯-(4β→8)-表儿茶精-3-O-没食子酸酯，在人体三维皮肤感染模型中，可以促进糖蛋白gD中的包膜蛋白的寡聚化，阻止HSV-1的吸附到宿主细胞[7]。Azardirachta indica L树皮的水提物被称为HSV-1吸附和穿入宿主细胞的抑制剂，因为它可阻断糖蛋白介导的细胞融合和多核细胞的形成[8]。柳宗涛等[9]用不同剂量的诱导表达的重组蓝藻抗病毒蛋白N(CV-N)作用于病毒复制周期的各个阶段，发现CV-N抗HSV-1作用靶点主要在于抑制感染细胞内病毒的生物合成,其次是抑制病毒的吸附。Suzutani 等发现[10]黑穗醋栗的提取物稀释液可以完全抑制HSV-1吸附到宿主的细胞膜上，黑穗醋栗主要通过阻碍HV的蛋白合成来抑制HSV-1、HSV-2和水痘-带状疱疹病毒早期感染的细胞内病毒复制。姜黄通过一个不依赖p300/CBP组蛋白乙酰转移酶活性的机制将病毒反式作用蛋白VP16-介导的RNA聚合酶募集到基因启动子，从而阻断HSV-1的感染和基因的表达[11]。

2天然药物抗HV 活性筛选

HV作用机理的发现为药物筛选研究提高效率和提供新的思路。通过组织培养法，傅强等[12]利用497 种中草药进行了抗HSV研究，经过初筛（细胞毒性、同时法）、复筛( 同时法、治疗法,预防法,管外法)、细筛法来综合评价药效指数，显示海藻[13]、四季菜、商陆、夏枯草、野鸦春等具有较强的抗HV作用。另外，选用HSV-1中2种AC耐药细胞株---KOS 和29-R，用MTT试验和CPE(细