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生物传感器
biosensor
Outline:
生物传感器概念 生物传感器类 生物传感器结构和原理 生物传感器的信号转换器 微生物传感器 生物传感器应用领域
一、what is biosensor? 1、概述
传感器是一种信息获取与处理 的装臵。 对物质成分传感的器件 就是化学传感器,它是一种小型 化的、能专一和可逆地对某种化 学成分进行应答反应的器件,并 能产生与该成分浓度成比例的可 测信号。
即感受器,具有分子识别能 三、生物传感器结构和原理 力的生物活性物质(如组织 切片、细胞、细胞器、细胞 膜、酶、抗体、核酸、有机 物分子等);
分子识别元件 主要有电化学电极(如电位、电流
的测量)、光学检测元件、热敏电阻、 场效应晶体管、压电石英晶体及表面等 离子共振器件等,从而达到分析监测的 目的。
生物传感器是一类特殊的化学传感 器,它是以生物活性单元(如酶、 蛋白质、DNA、抗体、抗原、生 物膜、微生物、细胞等)作为识别 元件,将生化反应转变成可定量 的物理、化学信号,从而能够进 行生命物质和化学物质检测和监 控的装臵。
生物传感器的发展史(1)
• 最先问世的生物传感器是酶电极, Clark 和 Lyons 最先提出组成酶电极 的设想。 • 70 年代中期,人们注意到酶电极的 寿命一般都比较短,提纯的酶价格 也较贵,而各种酶多数都来自微生 物或动植物组织,因此自然地就启 发人们研究酶电极的衍生型:微生 物电极、细胞器电极、动植物组织 电极以及免疫电极等新型生物传感 器,使生物传感器的类别大大增多; • 进入本世纪 80 年代之后,随着离子 敏场效应晶体管的不断完善,于 1980 年 Caras 和 Janafa 率先研制成功 可测定青霉素的酶FET。
1.电化学型信号转换器 电化学电极(固体电极、离子选择性 电极、气敏电极等)作为信号转换器 已广泛用于酶传感器、微生物传感器 及其他类型的生物传感器中。化学反 应与电荷变化密切相关,将待测物质 以适当形式臵于电化学反应池,测量 其电化学性质(如电位、电流和电容 等)变化可实现物质含量的测定。
1.1基本电化学概念 (1)固体电极的相间电位 将金属电极插入电解质溶液中,从 外表看,似乎不起什么变化。但 实际上,金属晶格上原子被水分 子极化、吸引,最终有可能脱离 晶格以水合离子形式进入溶液。 同样,溶液中金属离子也有被吸 附到金属表面的,最终二者达到 一个平衡。
葡萄糖氧化酶(GOD) 葡萄糖+H2O+O2 ―――――――→葡萄糖酸+H2O

• 葡萄糖氧化产生H2O2,而H2O2通过选择 性透气膜,在Pt电极上氧化,产生阳极电流。 葡萄糖含量与电流成正比,由此可测出葡萄 糖溶液浓度。 • 在Pt电极上加0.6V电压时,则产生的阳极电 流为:
H2O2
O2+2H++2e

(1)电位信号测量方法 对于一个选择性膜电极,当其他外界条 件固定时,膜电位与溶液中待测离子活度 (或浓度)的对数值呈线性关系,即符合 能斯特关系式。由于单个电极电位值是无 法测量的,通常将待测电极与一个参比电 极组成一个电池,测量其电位差值。采用 的参比电极处理可使用标准氢电极外常常 使用甘汞电极和银-氯化银电极(结构如下 图)。
酶传感器 固定化酶 固定化微生物 生物分子 识别元件 固定化抗体 免疫传感器
微生物传感器
固定化寡链核苷酸
生物组织切片
基因传感器
组织传感器
生物传感器按生物分子识别元件敏感物质分类
3、根据生物传感器的信号转化器 分:
电化学生物传感器 (bioelectrode) 半导体生物传感器 (semiconductbiosensor) 测热型生物传感 (calorimetricbiosensor) 测光型生物传感器 (opticalbiosensor) 压电晶体生物传感器 (piezoelectricbiosensor)
由于核电粒子 在界面间的净 转移而产生了 一定的界面电 位差。该类电 位主要产生于 金属为基体的 电极,它与金 属本性、溶液 性质、浓度等 有关。
固体电极的相间电位
(2)液体接界电位 (浓差电位) 其产生的条件是相 互接触的两液存在 浓差梯度,同时扩 散的离子其淌度不 同。界面两侧HCl 浓度不同,左侧的 H+和Cl-不断向右 侧扩散,同时由于 H+的淌度比Cl-淌 度大,最终界面右 侧将分布过剩正电 荷,左侧有相应的 负电荷,形成了液 体接界电位。
3.热敏电阻型信号转换器
热敏电阻是由铁、镍、钴、 钛等金属氧化物构成的半导体。 从外形上分类有珠型、片型、棒 型、厚膜型、薄膜型与触点型等。 凡有生物体反应的地方,大都可 观察到放热或吸热反应的热量变 化(焓变化)。
年代 60 特点 生物传 感器初期 研究内容 酶电极
70
发展时 期
微生物传感器, 免疫传感器, 细胞类脂质传 感器,组织传 感器,生物亲 和传感器 酶FET 酶光二极管
80
进入生物 电子学传 感器时期
生物传感器的发展史(2) 生物传感器发展的整体划 分:
• 第一代生物传感器以将生物成分截留在膜上或结合在 膜上为基础,这类器件由透析器(膜)、反应器(膜)和 电化学转换器所组成,其实验设备相当简单。 • 第二代生物传感器是指将生物成分直接吸附或共价结 合在转换器的表面上,从而可略去非活性的基质膜。 • 第三代生物传感器是把生物成分直接固定在电子元件 上,例如 FET 的栅极上,它可直接感知和放大界面物 质的变化,从而将生物识别和电信号处理集合在一起。 这种放大器可采用差分方式以消除干扰。
电解回路由工作电极和对电 极构成,电位的测量和控制由参 比电极与工作电极回路实现。测 量时采用线性扫描法、恒电位法 等方式,测量的电流信号与发生 电极氧化(或还原)的物质浓度 相关。 生物传感器中常涉及用电流法 测量O2、H2O2等其他活性物质浓 度。
1.3 特点与应用
电化学电极及相关的电化学 测试技术具有性能稳定、适用范 围广、易微型化特点,已在酶传 感器、微生物传感器、免疫传感 器、DNA传感器中得到应用。 目前,微电极技术也已应用 于探讨细胞膜结构与功能、脑神 经系统的在体研究(如多巴胺、 去甲肾上腺素在体测量)等生物 医学领域。
2.2特点与应用
FET的特点: ①结构简单,体积小,便于批量制 作,成本低: ②属于固态传感器,机械性能好、 耐震动、寿命长; ③输出阻抗低,与检测器的连接线 甚至不用屏蔽,不受外来电场干 扰,测试电路简化;
④可在同一硅片上集成多种传感器, 对样品中不同成分同时进行测量 分析。 FET的应用: 离子敏场效应晶体管可作为 酶(水解酶)、微生物传感器中 的信号转换器。
转换器(换能器transducer )
生物传感器的选择性取决于它 的生物敏感元件,而生物传感器 的其他性能则和它的整体组成有 关。
生物传感器的传感原理
化学物质 热 光 质量 介电性质 分子识别 生物功能性膜
电极、半导体等 热敏电阻 光纤、光度计 压电晶体等ຫໍສະໝຸດ Baidu表面等离子共振
电 信 号
信号转换器
四、生物传感器中的信 号转换器
2、根据生物传感器中生物分子识 别元件上的敏感物质分: 酶传感器(enzymesensor) 微生物传感器(microbialsensor) 组织传感器(tis-suesensor) 基因传感器 细胞传感器(organallsensor) 免疫传感器(immunolsensor)
生物传感器分类示意图
3).响应快,样品用量少,且由于 敏感材料是固定化的,可以反复 多次使用; 4).传感器连同测定仪的成本远低 于大型的分析仪器,便于推广普 及。
二、生物传感器分类
1、根据传感器输出信号的产生 方式: 生物亲和型生物传感器 (affinitybiosensor) 代谢型生物传感器 催化型生物传感器
葡萄糖传感器
• 工作原理
• 测量氧消耗量的葡萄糖传感器 • 测H2O2生成量的葡萄糖传感 器
工作原理
葡萄糖氧化酶(GOD) 葡萄糖+H2O+O2――――――→葡萄糖酸+H2O2
故葡萄糖浓度测试方法有三种:
①测耗量O2 ②测H2O2生成量 ③测由葡萄糖酸而产生的PH变化。
测量氧消耗量的葡萄糖 传感器
测量氧消耗量的葡萄糖传 感器
1. 氧电极构成:①由Pb阳极和Pt阴极浸入碱溶液,② 阴极表面用氧穿透葡萄糖(基质)膜覆盖 [ 特氟隆, 厚约10μm]
2. 氧电极测 O2 原理:利用氧在阴极上首先被还原的特 性。溶液中的O2穿过特氟隆膜到达Pt阴极上,当外加 一个直流电压为氧的极化电压 (如0.7V)时,则氧分子 在 Pt 阴极上得电子,被还原 : 其电流值与含 O2 浓度成 比例。 O2+2H2O+4e=======4OH-

将生物活性物质如酶固定在栅极 氢离子敏感膜(SiO2水化层)表 面,样品溶液中的待测底物扩散 进入酶膜。假设是检测酶催化后 的产物(反应速率取决于底物浓 度),产物向离子选择性膜扩散 的分子浓度不断积累增加,并在 酶膜和离子选择性膜界面达到衡 定。

通常,酶-FET传感器都含有双栅极, 一只栅极涂有酶膜,作为指示用FET, 另一支涂上非活性酶膜或清蛋白膜作 为参比FET,两个FET制作在同一芯片 上,对pH和温度以及外部溶液电场变 化具有同样的敏感性,也就是说,如 果两支FET漏电流出现了差 值,那只能是酶FET中催化反应所致, 而与环境温度pH加样体积和电场噪声 等无关,故其差值与被测产物的浓度 呈比例关系。
快速葡萄糖分析仪
血糖乳酸自动分析仪
2、生物传感器与传统的分析方法 相比,具有如下的优点:
1).生物传感器是由选择性好的生 物材料构成的分子识别元件,因 此一般不需要样品的预处理,样 品中的检测组分的分离和检测同 时完成,且测定时一般不需加入 其它试剂; 2).由于它的体积小,可以实现连 续在线监测;
2.离子敏场效应晶体管型信号 转器 ion sensitive effect transistor, 简称ISFET 2.1结构与原理
场效应晶体管结构图
场效应晶体管(FET)有四个末端, 当栅极与基-片P-Si短路时,源极与漏 极之间的电流为漏电流。如果施加外 电压,同时栅极电压对基片为正,电 子便被吸引到栅极下面,促进了源极 和漏极两个n区导通。因此栅极电压 变化将控制沟道区导电性能-漏电流的 相应变化。因此只要设法利用生物反 应过程所产生的物质来影响栅极电压, 便可设计出半导体生物传感器。氢离 子敏的FET是常用的信号转换器。
生物传感器中常涉及 用电位法测量 H+NH3、 CO2的浓度。 1.电引线 2.电极帽 3.甘汞芯 4.玻璃外壳 5.饱和KCl 6.多孔陶瓷塞 7.KCl补液口
甘汞电极
(2)电流信号测量方法
物质在电极上发生 氧化还原反应与其 自身的电极电位相 关,控制电极电位 可以有选择地使溶 液中某成分发生氧 化或还原反应。当 电路中有电流通过 时电极将发生极化 现象,使得电极电 位偏离平衡电位值。 为了有效的测量和 控制研究电极的电 位,通常可采用三 用于电流测量的三电极测量体系 电极测量体系如图 所示。
直按产生电信号方式的生物传感器
反应直接在电极表面上发生
例:Cass 等提出一种测定葡萄糖的传感器,是用二茂 络铁为电子传递体。
G、GL代表葡萄糖和葡萄糖内脂,GODox和GODred为氧化型和还原 型的葡萄糖氧化酶,而Fecp2R和Fecp2R+则为还原型和氧化型二 茂络铁。 葡萄糖被GOD氧化的同时,GOD被还原成GODred,氧化型的电子 传递体2Fecp2R+可将GODred再氧化成GODox
液体接界电位(浓差电位)
(3)膜电极电位 一个离子选择性膜 与两侧溶液相接 触,膜相中离子I+ 与溶液中I+发生交 换反应,最终在 两个界面处会形 成两个液体接界 电位(即道南电 位1和2)由于膜 较厚,膜相内也 会存在不同离子 扩散所产生的扩 散电位d,因此整 个膜电位 m=D1+D2+d
1.2 基本电化学信号测量技术
聚四氟乙烯膜(作用)
• 它避免了电极与被测液直接相接触,防止了 电极毒化;如电极Pt为开放式,它浸入含蛋 白质的介质中,蛋白质会沉淀在电极表面上 从而减小电极有效面积,使电流下降,使传 感器受到毒化。
测H2O2生成量的葡萄糖传 感器
1. Pt阳极 2. 聚四氟乙烯膜 (作用) 3. 固相酶膜 4. 半透膜多孔层 5. 半透膜致密层
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