NF-kappaBp50基因敲除小鼠子宫内膜异位症模型的建立及其研究

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胎盘生长因子抑制剂治疗子宫内膜异位症的实验研究

胎盘生长因子抑制剂治疗子宫内膜异位症的实验研究何春妮;李雪梅【期刊名称】《中国妇幼健康研究》【年(卷),期】2014(000)003【摘要】目的：初步探讨胎盘生长因子（ PLGF）抑制剂对大鼠子宫内膜异位症（ EMS）的影响。

方法用EMS患者分泌期子宫内膜配成组织悬液接种于雌性严重联合免疫缺陷（ SCID）小鼠腹壁以建立EMS动物模型，按照病灶面积分成2组，每组16只，实验组给予PLGF单克隆抗体50mg· kg-1· d-1，腹腔注射，连续注射10d；对照组给予磷酸缓冲液20mL· kg-1·d-1腹腔注射，连续注射10d。

结果实验组异位病灶面积小于对照组（t＝3．6，P＜0．05），实验组病理学评分小于对照组（t＝16．2，P＜0．05），实验组血管密度小于对照组（t＝16．4，P＜0．05）。

结论 PLGF对血管生成有抑制作用，可以用来治疗大鼠子宫内膜异位症。

【总页数】3页(P386-387,407)【作者】何春妮;李雪梅【作者单位】南京军区福州总医院，福建福州350025;南京军区福州总医院，福建福州350025【正文语种】中文【中图分类】R711.71;R392.11【相关文献】1.氧化型低密度脂蛋白对胎盘生长因子及抑制剂的影响 [J], 赵映;张清华;蒋知新;张世俊;高德禄;龙炫辉2.NF-κB抑制剂PDTC治疗大鼠子宫内膜异位症的实验研究 [J], 陈洪琴;郭铭川;曾莉;肖雪;石钢3.胎盘生长因子抗体对大鼠子宫内膜异位症模型的治疗作用 [J], 曾昭智;张锦红;陆少君4.血清激活素A、卵泡抑素和胎盘生长因子在子宫内膜异位症中的临床价值 [J], 张璐;王婷;丁晶文5.胎盘生长因子(PLGF)及其受体血管内皮生长因子受体-1(VEGFR-1)在子宫内膜异位症中的表达及意义 [J], 王竹辉;何福仙因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

核转录因子(NFκB)信号通路与子宫内膜异位症发病关系的研究及针对性治疗

doi:10.3969/j.issn.1000⁃484X.2019.04.026核转录因子(NF⁃κB )信号通路与子宫内膜异位症发病关系的研究及针对性治疗李　楠　陈　璐　冯晓玲　(黑龙江中医药大学附属第一医院妇科二科,哈尔滨150001) 中图分类号　R711.71 文献标志码　A 文章编号　1000⁃484X (2019)04⁃0509⁃06作者简介:李　楠,女,硕士,主要从事子宫内膜异位症㊁复发性流产㊁不孕症等妇科方面的研究㊂通讯作者及指导教师:冯晓玲,女,博士,教授,博士生导师,主要从事子宫内膜异位症㊁复发性流产㊁不孕症等妇科方面的研究,E⁃mail:doctorfxl@㊂[摘　要]　子宫内膜异位症是常见的妇科疾病,可以导致妇女痛经㊁不孕等,具有类似肿瘤的浸润㊁转移及复发的恶性行为,发病机制尚不完全明确㊂近年来研究表明异位的子宫内膜浸润与转移调节涉及多条信号转导通路,其中核转录因子NF⁃κB 信号通路与子宫内膜异位症的发生与发展有密切关系,其参与子宫内膜异位症的发生㊁发展㊁作用机制等可能与调节炎症反应和黏附㊁侵袭㊁血管生成一系列生物学行为相关因子的表达有关㊂基于此机制,目前学者们也针对子宫内膜异位症开始研究针对作用于NF⁃κB 信号通路的新的治疗方法及治疗药物㊂[关键词]　子宫内膜异位症;病理机制;NF⁃κB 信号转导通路Relationship between nuclear factor⁃kappaB (NF⁃κB )signaling pathway and pathogenesis of endometriosis and targeted therapyLI Nan ,CHEN Lu ,FENG Xiao⁃Ling .The Second Department of Gynecology ,the First Affiliated Hospital of Heilongjiang University of Chinese Medicine ,Harbin 150001,China[Abstract ]　Endometriosis is a common gynecological disease.It can cause dysmenorrhea and infertility in women.It hasmalignant behavior similar to tumor invasion,metastasis,and recurrence.The pathogenesis is still not completely clear.Recent studies have shown that ectopic endometrium infiltration and metastasis involve multiple signal transduction pathways,and the nuclear factor kappa signal pathway is closely related to the occurrence and development of endometriosis.The occurrence,development,and mechanism of action of its involvement in EMS may be related to the regulation of inflammatory responses and the expression of related factors of adhesion,invasion,and angiogenesis.Based on this mechanism,scholars have also begun to study new therapeutic methods andtherapeutic drugs targeting NF⁃κB signaling pathways for EMS.[Key words ]　Endometriosis;Pathological mechanism;NF⁃κB signaling pathway 子宫内膜异位症(Endometriosis,EMS)又称为内异症,它表示为具有活性的子宫内膜腺体㊁间质组织等出现在子宫内膜以外部位,从而导致的一种疾病㊂异位部位以宫骶韧带㊁子宫直肠陷凹㊁卵巢最为常见,是生育期女性常见的一种妇科疾病㊂EMS 是导致育龄期妇女痛经㊁不孕的首要原因,目前仍然以子宫内膜种植学说为EMS 病理机制的主导理论㊂信号转导是细胞对外界某些刺激产生反应,最终引发特异性生物学行为的有效方式,如今已经发现有多条信号转导通路参与EMS 的发生与发展,其中核转录因子(Nuclear factor kappaB,NF⁃κB)信号通路起到一定作用㊂NF⁃κB 是1986年美国麻省生物医学研究所的Rwiansen 与麻省理工学院癌症研究中心Blitimore 共同发现的,是由NF⁃κB Rel 蛋白家族中的两个亚单位P50和RelA(p65)构成的二聚体复合物㊂1　NF⁃κB 的激活和调节在大多数的静息细胞中,NF⁃κB 与人核因子κB 抑制蛋白(Nuclear factor kappaB inhibitor,IκB)结合,IκB 通过其锚6蛋白与位于NF⁃κB 的Rel 同源结构域区域末端的核定位信号结合,并遮蔽核定位信号使NF⁃κB 呈非活性状态滞留于包浆中㊂在IL⁃1㊁TNF⁃α和正常T 细胞表达和分泌的细胞因子㊁生长因子等信号刺激下,通过特异的激酶使IκB 磷酸化,导致了IκB 的降解,游离的P50/P65二聚体移位到细胞核,结合到靶基因启动子区域的κB 位点并且调节靶基因的表达,参与相关基因及细胞因子的转录调控和细胞凋亡调控㊂㊃905㊃李　楠等　核转录因子(NF⁃κB)信号通路与子宫内膜异位症发病关系的研究及针对性治疗　第4期机体内NF⁃κB的活化的调节方式主要为两种途径的反馈调节:一种为经细胞内㊁外的负反馈调节,脂多糖㊁IL⁃1㊁TNF⁃α等在细胞外可刺激白介素⁃10(Interleukins⁃10,IL⁃10)的生成,而IL⁃10能阻碍NF⁃κB的活化㊂另一种为经细胞外的较为复杂的正反馈途径,NF⁃κB活化后,可增强TNF⁃α和IL⁃1的转录,从而使细胞产生和释放的TNF⁃α和IL⁃1增多,二者再次激活NF⁃κB,并使IL⁃6㊁IL⁃8等促炎症细胞因子的产生和释放量增多,如此反复,形成NF⁃κB活化的正反馈,结果导致最初的炎症信号进一步放大;两种调节方式往往同时进行,而NF⁃κB的活化状态则取决于哪一种调节方式占优势㊂2　NF⁃κB与EMS的关系NF⁃κB活化进入核内,结合细胞核内DNA,与多种炎症因子启动子区域中κB序列结合,引起靶基因转录,促进IL㊁TNF⁃α㊁基质金属蛋白酶(Matrix metalloproteinase,MMPS)㊁巨噬细胞移动抑制因子(Macrophage migration inhibitory factor,MIF)㊁血管内皮生长因子(Vascular endothelial growth factor, VEGF)㊁黏附分子(Intercellular adhesion molecule, ICAM)等表达,参与启动并调节机体免疫和炎症反应㊁凋亡及细胞的增殖分化㊂我们设想NF⁃κB可能对EMS发病起到宏观调控作用㊂有研究表明,NF⁃κB在正常的子宫内膜组织中微弱表达,而EMS患者在位及异位内膜中有异常的高表达,说明在正常子宫内膜中,NF⁃κB处于不断激活和失活有序调控中,而在EMS患者内膜中,NF⁃κB异常激活㊂以上结果都提示NF⁃κB在EMS的发病机制中占很重要的作用,但具体机制仍然需要进一步研究㊂NF⁃κB对EMS的作用可能是通过:①调节与炎症细胞向靶器官趋化㊁浸润有关的因子的基因表达,从而在炎症反应及免疫反应中发挥重要作用㊂这些因子包括趋化因子㊁黏附分子㊁细胞因子㊁酶等㊂②上调IL㊁TNF⁃α㊁MMPS㊁MIF㊁VEGF㊁ICAM 等与黏附㊁侵袭㊁血管生成及抗凋亡有关的因子,促进细胞增殖,这些因子参与了EMS的发生㊂根据2005年朗景和教授提出的 3A”学说,内膜细胞必须完成黏附⁃侵袭⁃血管形成三部曲”㊂2.1　子宫内膜炎症反应:IL㊁NF⁃κB与EMS　NF⁃κB可以诱导多种白介素(如IL⁃1㊁2㊁3㊁6㊁12)的产生,以IL⁃1为例,研究表明IL⁃1可以影响免疫系统T细胞的激活,并且刺激单核吞噬细胞分泌趋化因子,刺激血管内皮细胞,表达白细胞黏附分子,在EMS的发病中起关键作用㊂IL⁃1具有激活NF⁃κB 的作用,活化的NF⁃κB作用于靶基因,产生各种生物学效应,分泌多种细胞因子,如MIF等,参与EMS 的发病㊂2.1.1　(IL⁃1)⁃(NF⁃κB)⁃(MIF)通路　MIF是1966年Bloom等[1]在活化的T淋巴细胞中发现的一种可溶性细胞因子,有很多的生物学活性㊂MIF是一种蛋白质,其启动子上有一个NF⁃κB部位GGCCTTCCCT㊂MIF为人类内皮细胞的有丝分裂因子,能促进血管形成和组织重建㊂MIF能抑制巨噬细胞游走,促进其在炎症局部浸润增生㊂Akoum 等[2]研究显示,正常子宫内膜的腺体细胞㊁血管内皮细胞以及基质细胞都分泌MIF,MIF的表达为月经周期所依赖㊂有相关研究表明,EMS患者腹腔液中MIF浓度和促血管生成活性明显高于对照组,说明异位内膜可以释放MIF㊂Morin等[3]研究表明高浓度MIF使得巨噬细胞聚集在异位内膜的细胞周围,加强腹腔炎症环境,并且促进其他炎性因子聚集㊂Veillat等[4]研究发现异位子宫内膜细胞中IL⁃1诱导的MIF表达与NF⁃κB途径有关㊂Cao等[5]研究发现,IL⁃1刺激子宫内膜基质细胞合成分泌MIF,且与MIF蛋白的分泌与mRNA合成量呈剂量与时间依赖关系,所以,IL⁃1通过NF⁃κB介导MIF基因转录㊂MIF的高表达使得异位内膜具有很强的黏附㊁植入与生长能力,易于在盆腹腔腹膜进一步种植㊂此外,MIF还可以抑制P53引起的细胞凋亡,异位内膜逃避免疫系统㊂2.1.2　(IL⁃1)⁃(NF⁃κB)⁃(RANTES)通路　正常的T淋巴细胞表达和分泌的受激活调节因子(Regulated upon acti⁃vation normal T cell expressed and secreted,RANTES)是一种有效的具有选择性单核细胞㊁T淋巴细胞㊁巨噬细胞的化学趋化因子㊂有研究表明RANTES在EMS腹腔液中的表达升高㊂张喜等[6]认为IL⁃1促进RANTES mRNA转录是通过RANTES基因启动子上的NF⁃κB作用元件实现的,IL⁃1激活NF⁃κB后,又与RANTES基因启动子上两个特异性NF⁃κB位点相结合,能够促进EMS病灶基质细胞产生RANTES,假设实验RANTES启动子上的NF⁃κB作用元件突变,研究发现会抑制IL⁃1的这种作用㊂2.2　子宫内膜定植:TNF⁃α㊁NF⁃κB与EMS　TNF⁃α是一类具有多种生物活性的细胞因子,主要由活化的单核㊁巨噬细胞产生,为多效细胞因子㊂有研究发现TNF⁃α与受体结合后引发一系列信号传递,细胞内蛋白质磷酸化和脱磷酸化,激活细胞核内NF⁃κB,形成连级反应,使NF⁃κB的靶基因表达增加,大量㊃015㊃中国免疫学杂志2019年第35卷炎症细胞因子和趋化因子合成增加,促进异位内膜和基质细胞增殖㊁炎症细胞浸润㊁形成异位病灶㊂Khan等[7]研究发现脂多糖通过NF⁃κB途径,刺激子宫内膜的异位基质细胞产生大量TNF⁃α和IL⁃8㊂2.2.1　(TNF⁃α)⁃(NF⁃κB)⁃(IL⁃6)通路　IL⁃6能够促使单核细胞向巨噬细胞分化,使异位内膜细胞的可溶性细胞间黏附分子脱落增加,从而逃避腹腔免疫监视㊂Yamauchi等[8]发现,TNF⁃α通过激活NF⁃κB,促进异位病灶基质细胞产生IL⁃6㊂Wickiewicz 等[9]研究也认为IL⁃6基因启动子上有NF⁃κB结合位点,是NF⁃κB下游基因之一,可以诱导IL⁃6生成,令EMS患者腹腔液IL⁃6水平升高,促进炎症反应㊂2.2.2　(TNF⁃α)⁃(NF⁃κB)⁃(IL⁃8)通路　IL⁃8是非常有用的血管生成因子,Sakamoto等[10]研究发现, TNF⁃α可以通过激活NF⁃κB,改变腹腔液环境,促进EMS基质细胞产生IL⁃8㊂IL⁃8在EMS患者腹腔液中明显升高,它介导中性粒细胞和T细胞募集和活化,使得大量炎性细胞进入病灶参与急慢性炎症反应㊂有研究表明它通过刺激T细胞凋亡使得异位子宫内膜逃避腹膜腔免疫系统对其识别及吞噬,导致EMS的发生㊂2.3　子宫内膜黏附性:ICAM⁃1㊁NF⁃κB与EMS　ICAM⁃1被认为是存在于细胞表面并且介导细胞相互作用的标志物㊂子宫内膜间质细胞有较多ICAM⁃1,进入腹腔内的异位内膜首先是黏附,积聚成团,躲避了免疫监视,才有可能成功地种植生长㊂有研究表明,EMS患者腹腔液中ICAM⁃1水平高于对照组且发现活体组织发生发展过程跟NF⁃κB途径有关, TNF⁃α诱导NF⁃κB活化(IKBα磷酸化降解,NF⁃κB 核异位和NF⁃κB蛋白DNA绑定活动),NF⁃κB抑制剂可减少ICAM⁃1的表达㊂2.4　子宫内膜侵袭性:MMPS㊁NF⁃κB与EMS　通过调节基质MMPS的表达,NF⁃κB可以促进子宫内膜异位细胞侵入并黏附到腹膜表面的能力增加㊂女性的子宫内膜中可以分泌很多种MMPS,且有较高活性㊂女性月经血中也含有一定程度的MMPS㊂研究表明MMPS具有降解细胞外基质的能力,而基底膜的降解是EMS发生过程中必须攻克的生理屏障,因此MMPS增强了内膜细胞的侵袭力,使得内膜细胞易于植入㊂MMP⁃2即基质金属蛋白酶2,它是一种促血管生长因子㊂谭毅等[11]对47例EMS不孕症患者及对照组研究用酶联免疫吸附法发现中度及重度内异症患者外周血中MMP⁃2水平较对照组高㊂有相关研究表示[12],高浓度的MMP⁃2腹腔内环境发生了改变,进一步令MMP⁃2与金属蛋白酶抑制物⁃2之间的平衡被打破㊂MMP⁃9又称为Ⅳ型胶原酶,可特异降解和重塑细胞外基质的动态平衡,从而破坏细胞正常骨架结构[13]㊂MMP⁃9是NF⁃κB的靶基因,NF⁃κB的激活是MMP⁃9上调的必需条件,NF⁃κB可以上调MMP⁃9的表达,促进血管生成,影响组织的侵袭性㊂有研究表明,腹腔液中高浓度MMP⁃9也使得腹腔液内环境发生了改变,使腹腔液MMPS 与金属蛋白酶抑制物⁃2比例失调,导致卵巢排卵稀发或不排卵㊂2.5　新生血管形成:VEGF㊁NF⁃κB与EMS　异位病灶在腹膜种植成功之后,进一步的发展有赖于新生的血管提供血液,而血管的生成受到很多因子的调控,研究表明VEGF能够刺激血管内皮细胞的移动㊁增殖和分裂,增加微血管的通透性,在血管生成中起到重要的枢纽作用,为血管形成的刺激因子㊂有研究表明在EMS患者腹腔液中VEGF的含量远远高于对照组,表明在内异症中VEGF起到主要作用㊂Donnnez等[14]发现,EMS在位与异位内膜均有VEGF的表达,在分泌晚期原位内膜腺上皮表达增强,此外在月经周期各个阶段,新鲜红色病灶的VEGF含量大于黑色病灶表明在内异症初始阶段, VEGF起到重要作用㊂王芳等[15]研究,NF⁃κB可能对VEGF以及其他与新生血管形成相关的细胞因子起到中枢性调控作用㊂Li等[16]研究认为异位内膜细胞中NF⁃κB的DNA结合活性㊁p50,P65,VEGF的表达显著提高,激活的NF⁃κB上调VEGF表达,促进血管形成,降解周围基质,对异位内膜起到促进作用㊂众多研究表明,内异症患者VEGF呈现高表达,与病灶的侵袭活力正相关㊂当具有血管形成能力的子宫内膜组织碎片随着经血逆流入腹腔,能够促进新生血管的形成,使内膜组织在异位存活生长,这种现象增加内异症发生的可能性㊂综上所述,NF⁃κB 在EMS发生发展过程中可能参与调控与炎症反应,黏附㊁侵袭㊁血管形成等相关因子的表达㊂3　针对NF⁃κB通路治疗药物由于EMS病因不清,临床上治疗EMS的药物疗效不明显,随着人们对NF⁃κB通路的了解,有望通过抑制NF⁃κB通路,减少相关炎症因子的表达,抑制炎症反应,从而达到减轻甚至治愈EMS的作用㊂现将国内外近几年作用于NF⁃κB信号通路治疗EMS的药物罗列如下:3.1　来曲唑　Roghaei等[17]及Alborzi等[18]进行了随机对照实验,证明来曲唑可以有效缓解经传统治疗无效的EMS患者盆腔痛症状,且治疗后复发率㊁㊃115㊃李　楠等　核转录因子(NF⁃κB)信号通路与子宫内膜异位症发病关系的研究及针对性治疗　第4期妊娠率与促性腺激素释放激素治疗结果相类似,有较少的副作用及较高的患者依从性㊂王康等[19]研究发现来曲唑通过降低异位病灶局部雌激素水平抑制细胞因子NF⁃κB表达,降调TNF⁃α㊁IL⁃6表达,影响异位子宫内膜局部芳香化酶启动,抑制异位内膜增生㊂通过抑制细胞增殖及促进凋亡,阻碍EMS 发展[20⁃22]㊂3.2　米非司酮　Trentini等[23]研究发现,NF⁃κBp65是骨桥蛋白下游的信号分子,骨桥蛋白识别细胞表面受体整合素后能使NF⁃κBp65从NF⁃κB IKBS复合物中解离,转位进入细胞核后能够调节下游MMPS的表达㊂谢伟等[24]研究表明米非司酮组患者子宫内膜异位病灶内骨桥蛋白,NF⁃κBp65含量显著低于对照组,说明米非司酮对子宫内膜异位病灶内多种侵袭基因表达具有抑制作用,通过抑制侵袭基因的表达抑制异位内膜细胞侵袭,有利于病灶清除㊂3.3　孕酮㊁IL⁃10　低剂量孕酮和IL⁃10处理子宫内膜异位细胞的研究中提出[25],低剂量孕酮抑制子宫内膜细胞系中性激素17⁃β⁃羟甾类固醇脱氢酶表达,低剂量的孕酮和IL⁃10抑制NF⁃κBp65核定位㊂表明联合应用可能代表一种新的治疗EMS的方法㊂Horie等[26]研究表明孕酮㊁地屈孕酮等可以抑制TNF⁃α对NF⁃κB的激活作用,削弱EMS病灶基质细胞IL⁃8的表达,降低炎症反应㊂3.4　脯氨酸二硫代氨基甲酸酯　许多研究表明,不同刺激因素均通过一种常见的第二信使反应性氧原介质诱导IκB磷酸化㊂IκB在IκB激酶作用下发生磷酸化并降解,NF⁃κB失去IκB严格控制而被激活,并移位进入细胞核内,从而启动基因转录,诱导基因表达㊂脯氨酸二硫代氨基甲酸酯为一种氧化剂,通过清除第二信使反应性氧原介质,抑制NF⁃κB活化,减少NF⁃κB IκB磷酸化和解离,进一步抑制NF⁃κB生物活性㊂陈洪琴等[27]研究表明脯氨酸二硫代氨基甲酸酯可令EMS大鼠异位病灶显著缩小,及血清中IL⁃1及TNF⁃α表达降低㊂其毒副作用可能与用药剂量,持续时间有关,作用机制仍需进一步研究㊂3.5　双硫仑　Celik等[28]实验研究测试DSF对实验性诱导子宫内膜异位症大鼠子宫内膜异位种植的影响,实验组用双硫仑处理21d,与对照组相比,实验组IL⁃1和TNF⁃α浓度较对照组显著降低,且双硫仑处理动物中植入物NF⁃κB平均H值显著低于对照组,结论为通过减少NF⁃κB表达,血管生成,细胞增殖,阻止子宫内膜异位植入物的生长㊂3.6　肝再生磷酸酶抑制剂　相关研究表明其通过调节MMP⁃9表达改变异位子宫内膜间质细胞骨架结构,从而影响细胞的迁移和侵袭能力,证明了肝再生磷酸酶抑制剂在内异症异位病灶发生发展过程中有重要作用[29],解除肝再生磷酸酶,可以下调MMP⁃9的表达㊂3.7　姜黄素　有研究表明[30],IL⁃1通过NF⁃κB介导MIF基因转录,NF⁃κB抑制药姜黄素可以抑制NF⁃κB 活化,抑制MIF分泌㊂我们还检查了姜黄素是否具有通过调节MMP⁃3和凋亡途径来消退子宫内膜异位症的效力㊂将小鼠造模为EMS模型,在第15天观察到稳定子宫内膜发育随MMP⁃3表达增加,推测增加的MMP⁃3活性可能参与细胞凋亡㊂姜黄素治疗通过抑制NF⁃κB易位和MMP⁃3表达消退子宫内膜异位症㊂它还主要通过细胞色素C介导的线粒体途径加速子宫内膜瘤的细胞凋亡㊂姜黄素通过P53依赖性和独立诱导方式诱导细胞凋亡,证明了姜黄素作为有效抗子宫内膜异位化合物的新作用㊂3.8　甘草酸　已知甘草酸从甘草根及根茎分离的三萜烯,有抗炎作用㊂相关研究表示,甘草甜素会显著抑制脂多糖诱导的TNF⁃α㊁IL⁃1的产生,且显著减弱了NF⁃κB的活化㊂表明甘草酸通过抑制小鼠子宫内膜上皮细胞的NF⁃κB信号途径来抑制脂多糖诱导炎症反应㊂所以,甘草酸可作为治疗子宫内膜异位症的潜在药剂㊂3.9　老化黑蒜己烷提取物　研究表明ICAM⁃1和血管细胞黏附分子⁃1在EMS病理过程中有关键作用㊂Kim等[31]研究老化黑蒜己烷提取物对TNF⁃α激活的人子宫内膜间质细胞中ICAM⁃1和血管细胞黏附分子⁃1的增殖和表达的影响㊂研究结果显示老化黑蒜己烷提取物通过抑制NF⁃κB转录因子的激活,有效抑制TNF⁃α诱导的ICAM⁃1和血管细胞黏附分子⁃1转录物和蛋白质表达㊂表明老化黑蒜己烷提取物可以预防和治疗EMS㊂3.10　艾蒿提取物　Ji⁃Hyun等[32]研究了艾蒿提取物对EMS细胞生长和凋亡的影响,结果表明艾蒿提取物显著抑制人子宫内膜异位症上皮细胞的活力㊂用其处理抑制了NF⁃κB的活化和抗凋亡因子的表达㊂表明艾蒿提取物为一种潜在抗EMS的药物,通过调节NF⁃κB途径诱导子宫内膜细胞凋亡㊂3.11　穿心莲内酯　Zheng等[33]研究通过在大鼠EMS模型中,评价穿心莲内酯治疗对细胞增殖和细胞周期的影响,NF⁃κB的DNA结合活性和组织因子㊁环加氧酶⁃2的表达,结果表明穿心莲内酯依赖性抑制子宫内膜基质细胞增殖和细胞周期进程,减弱NF⁃κB的DNA结合活性,并可以明显抑制异位内膜体外及体内生长,缓解EMS患者疼痛症状,穿㊃215㊃中国免疫学杂志2019年第35卷心莲内酯可能成为EMS患者的有效药物㊂4摇总结一些外在因素的刺激(TNF⁃α㊁ICAM㊁VEGF等)或内在因素(机体免疫缺陷㊁基因异常等)可使子宫内膜和NF⁃κB表达上调,子宫内膜形状改变,进一步刺激NF⁃κB表达,改变盆腔微环境,易于异位内膜黏附和种植㊂所以,通过了解NF⁃κB对EMS的作用,发生变化的关键时间点及调控机制,为新药开发提供靶点,发展NF⁃κB抑制药等,结合传统或新型药物,为EMS患者提供一种更有前景的治疗策略㊂参考文献:[1]　Bloom 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浅论二 ■ 英对小鼠异位子宫内膜影响的分子机制研究

浅论二■ 英对小鼠异位子宫内膜影响的分子机制研究【摘要】【目的】探讨四氯二苯并二■英(TCDD)对子宫内膜异位症小鼠模型的影响及其分子学机制。

【方法】采用小鼠自体子宫内膜移植法建立小鼠子宫内膜异位症模型，分别给予TCDD 0、l、3、10 μg/kg 剂量灌胃，每21 d 1次，于建模术后3、6、9周处死，鉴定异位病灶的形成，测量异位病灶体积。

采用免疫组化法和RT-PCR法检测各组小鼠异位子宫内膜组织中芳香烃受体(AhR)和细胞色素P450 1A1(CYP1A1)表达水平。

【结果】①染毒组小鼠异位病灶体积的增加与染毒剂量和时间具有明显的正相关性(r = 为、，均P );②染毒组小鼠异位子宫内膜AhR蛋白较对照组增强(P );且随染毒剂量增加和染毒时间延长，AhR蛋白表达相应增加(r分别为、，均P );③随染毒剂量增加，CYP1A1蛋白表达相应增加(r = ，P )，对照组未检测到CYP1A1蛋白表达;④染毒组小鼠异位子宫内膜AhR mRNA较对照组增强(P )。

随染毒剂量增加和暴露时间延长，AhR mRNA表达相应增加(r分别为、，P );⑤随染毒剂量的增加，CYP1A1 mRNA表达明显增加(r = ，P )，对照组小鼠异位子宫内膜病灶中未检测到CYP1A1mRNA。

【结论】 TCDD可促进小鼠模型异位子宫内膜病灶的发展，其机制可能与AhR及其下游基因CYP1A1激活有关。

AhR及CYP1A1的表达增强是二■英暴露的生化指标。

【关键词】四氯二苯并二■英; 子宫内膜异位症; 小鼠; AhR; CYP1A1Abstract：【Objective】 To investigate the effect of 2，3，7，8-tetrachlorodibenzo-p-dioxin (TCDD) on development of endometriosis in a mouse model from perspective of molecular mechanism. 【Methods】 The endometriosis mouse model was established with autotransplantation of endometrium. Twenty-one days prior to induction surgery which produces endometriosis， female mice werepretreated with 2，3，7，8-tetrachlorodibenzo-p-dioxin (TCDD) at 0， 3， or 10 mg TCDD/kg. Animals were treated again at the time of surgery and at 3， 6， and 9 weeks following surgery. Evaluation of ectopic focuses diameter were made at 3， 6， 9 weeks post surgery. The AhR and CYP1A1 expression on ectopic endometrium were identified by immunohistochemistry and RT-PCR assays. 【Results】①With increased time and dose of TCDD exposure， it produced a dose-dependent increase in endometriotic site diameter when all time points were pooled within each dose in mice (r = and respectively， both P ). ②The expression of AhR protein on ectopic focuses in mice were higher in the TCDD exposure group than those in control group， and presented time-dose dependent increase (r = and ， both P ). ③The higher dose of exposureincreased， the higher CYP1A1 protein expressions enhanced (r = ， P ). ④As compared with the control group， the expression of AhR mRNA in ectopic focuses of mice were higher in the TCDD exposure group， and show time-dose dependent increase (r = and ， both P ). ⑤The higher dose of exposure increased， the higher CYP1A1 mRNA expression enhanced (r = ， P ). 【Conclusion】 TCDD can promote progression of ectopic focus of endometriosis in the mouse 子宫内膜异位症(endometriosis，EMS)是育龄妇女的常见病，但其发病机制尚不清楚。

一种子宫内膜异位症纤维化动物模型构建方法及其应用[发明专利]

专利名称：一种子宫内膜异位症纤维化动物模型构建方法及其应用
专利类型：发明专利
发明人：俞超芹,毕艳丽,倪喆鑫,李溪
申请号：CN201811570304.6
申请日：20181221
公开号：CN109568325A
公开日：
20190405
专利内容由知识产权出版社提供
摘要：本发明涉及一种子宫内膜异位症纤维化动物模型构建方法和应用，属于动物模型技术领域。

所述子宫内膜异位症纤维化动物模型的制备方法是通过对SPF级BALB/c雌小鼠颈背部皮下注射雌激素联合腹腔注射子宫内膜组织碎片，从而构建出子宫内膜异位症纤维化动物模型。

其优点表现在：该模型与子宫内膜异位症临床病理特征符合度高，操作简便，造模周期短，造模成功率高，为子宫内膜异位症研究提供了一种高效的造模方法。

同时可作为探索子宫内膜异位症纤维化的发病机制及有效诊治策略的理想模型。

申请人：上海长海医院
地址：200433 上海市杨浦区长海路168号
国籍：CN
代理机构：上海卓阳知识产权代理事务所(普通合伙)
代理人：周春洪
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ERβ对子宫内膜异位症小鼠模型的影响

ERβ对子宫内膜异位症小鼠模型的影响关铮;李亚里;宫庭钰;晏红;高贞贞【期刊名称】《中国实验动物学报》【年(卷),期】2009(17)4【摘要】目的通过建立子宫内膜异位症小鼠模型探讨雌激素β受体对子宫内膜异位症的影响.方法利用雌激素β基因敲除小鼠建立自体子宫内膜异位模型;应用人不同的组织在SCID小鼠建立子宫内膜异位症模型后,注射雌激素β受体激动剂WAY-200070,观察其对异位病灶生长的影响.结果比较30只雌激素β受体基因敲除小鼠及22只同源未敲除小鼠异位病灶生长及组织细胞形态无明显差异(P>0.05);雌激素β受体激动剂WAY-200070对不同类型的SCID小鼠内异症病灶生长影响无明显差异(P>0.1).结论雌激素β受体对子宫内膜异位病灶的形成影响作用微弱.【总页数】5页(P270-274)【作者】关铮;李亚里;宫庭钰;晏红;高贞贞【作者单位】中国人民解放军总医院妇科,北京,100853;中国人民解放军总医院妇科,北京,100853;中国人民解放军总医院妇科,北京,100853;中国人民解放军总医院妇科,北京,100853;中国人民解放军总医院妇科,北京,100853【正文语种】中文【中图分类】R-71【相关文献】1.二恶英对小鼠模型子宫内膜异位症的影响 [J], 刘娟;任慕兰2.子宫内膜异位症中ER-α和ER-β研究进展 [J], 龙晓宇;关咏梅;傅松滨3.ERα、ERβ、pS2及其在子宫内膜异位症中表达的研究现状 [J], 卢静;冯鸽;迟小岩4.ERα、ERβ、pS2及其在子宫内膜异位症中表达的研究现状 [J], 卢静; 冯鸽; 迟小岩5.子宫内膜异位症患者在位和异位内膜上皮细胞ER-α、ER-β的检测 [J], 龙晓宇;关咏梅因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

靶向NF—kB的siRNA抑制人子宫内膜异位种植的实验研究

靶向NF—kB的siRNA抑制人子宫内膜异位种植的实验研究1024?广东医学2009年7月第30卷第7期GuangdongMedicalJournalJu1.2009,V o1.30,No.7靶向NF—KB的siRNA抑制人子宫内膜异位种植的实验研究术刘木彪,何援利,钟洁南方医科大学珠江医院妇产科(广州510282)【摘要】目的观察NF—KBp65siRNA对人子宫内膜异位种植于裸鼠的影响,以明确NF—KB在子宫内膜异位症(EMs)发生发展的作用,为EMs治疗探索新的途径.方法将EMs患者在位子宫内膜组织分别注入30只裸鼠,随机分为3组,每组10只,3d后分别给予生理盐水,NF—KBp65siRNA和阴性siRNA干预,观察各自子宫内膜种植成功率及内膜的病理特点.结果NF—KBp65siRNA干预组子宫内膜种植成功率(20%)低于其他两组(80%,70%)(P<0.05);且成活的异位内膜腺体发育不良,组织中NF—KB,VEGF及ICAM一1表达亦减少,与其他两组差异有显着性(P<0.05);单纯接种组与阴性干预组间比较差异则无显着性(P>0.05).结论NF—KB参与调控EMs的发生发展,沉默NF—KB基因可以显着抑制异位病灶的种植和生长;NF—KB是通过降调VEGF及IcAM一1等发挥作用的.【关键词】子宫内膜异位症;动物模型;NF—KB;RNA干扰;siRNA SmallinterferenceRNAtargetingNF—xBinhibitshumanendometrioticgrowthinnudemiceLIUMu—biao,HEYuan—li,ZHONG 此.DepartmentofObstetricsandGynecology,ZhujiangHospital,SouthernMedicalUniver sity,Guangzhou,510282,China【Abstract】ObjectiveToinvestigatetheprocessesregulatedbyNF—KBintheinitialdevelopmentofendometri—oticlesionsinvivobymeansofsiRNAtargetingNF—KBinterferingwiththegrowthofendometrium.MethodsMenstrual endometriumofwomenwithendometriosiswasinjectedintotheperitonealcavitiesof30nud emice.NF—KBp65siRNAwasgivenintraperitoneallyondays3and6,andmicewerekilled.Thenumber,diameterandm orphometryofendometri—otielesionswerequantified.NF—KB,V ascularepithelialgrowthfactor(VEGF)andintercellularadhesionmolecule (ICAM)一1expressionwereevaluatedbyimmunohistochemicalanalyses.ResultsNF—KBp65siRNAwassignificantly reducedinlesiondevelopmentcomparedtocontrolmice.Endometrialglandgrewimmaturel yintreatedmice.Inaddition,NF—KBactivation,VEGFandICAM一1expressionofendometrioticlesionsweresignificantlyreduced.ConclusionNF—KBpathwayisinvolvedintheinitialdevelopmentofendometriosisinvivo.andmayserveasat argetforendometriosistreatment.【Keywords】endometriosis;animalmodel;NF—KB;RNAi;siRNA子宫内膜异位症(endometriosis,EMs)病因至今不明,学说众多,但其中子宫内膜异位种植学说为大家所公认.然而子宫内膜要想在异位成功种植生长,必须经过黏附,侵袭和血管生成.因此,如果能对这一过程进行阻断,则可以抑制EMs的发生发展.NF—KB作为一个决定性的核转录因子,参与调控细胞间相互作用,细胞间通道,细胞聚集与移动,原始的病原信号的扩增与蔓延,肿瘤发生的启动与加速等早期应答基因的表达,在阻止凋亡,促进肿瘤生长,激活炎症反应中起着重要作用.近年来研究还发现NF—KB活性的失控可导致EMs的发生,而使用NF—KB抑制剂可以促进异位内膜病灶的凋亡,减少EMs的发生发展.本研究采用小分子RNA干扰技术(RNAi)靶向抑制裸鼠体内的NF—KB,以观察其对人子宫内膜异位种植生长的影响.广州市科技计划项目(编号:20o8J1一C131)1材料与方法1.1材料1.1.1裸鼠选择BALB/C健康雌性裸小鼠30只,6～8周龄,体重l8—20g,由中山大学实验动物中心提供,SPF级环境下饲养.1.1.2人子宫内膜制备将新鲜的人体晚分泌期子宫内膜(排卵后8～12d)用无菌Dlxlbeceo'S冷磷酸盐缓冲液清洗2遍以去除细胞碎片,再粗制成小片,悬于磷酸盐缓冲液中,加入适量青霉素,链霉素,并平均分装于3mL针管内备用.1.1.3试剂兔抗人NF—KB多克隆抗体购自北京中山生物公司,为即用型工作液.鼠抗人细胞间黏附分子一1(ICAM—1)单克隆抗体购自福建迈新生物公司,工作浓度为1:50;鼠抗人血管内皮生长因子(VEGF)单克隆抗体购自福建迈新生物公司,工作浓度为1:50;即用型SABC免疫组化染色试剂盒购自博士德公司,主要成分为正常山羊血清封闭液,山羊抗兔[查垦堂兰!旦笙堂笙!塑竺!竺:.!.1025.IgG及SABC.NF—KBp65SiRNA试剂盒,由广州锐博公司设计合成;lipofectamine2000脂质体为美国in. vitrogen公司产品.1.1.4NF—KBp65siRNA—LipofectimineTM2000混合物的制备为提高转染率,根据Lipofectimine..2000试剂盒说明对NF—KBp65siRNA和Lipofectimine 2000的用量进行了优化实验,最终选用siRNA的浓度为50pmol/L,室温保温20min备用.同法制备阴性对照siRNA—LipofectimineTM2000混合物.1.2方法1.2.1分组及给药将30只裸鼠随机分为单纯接种,阳性于预及阴性干预3组,每组1O只.每只裸鼠的腹腔均注入备用的人子宫内膜3mL,操作过程在取材后60min内完成.饲养3d后,单纯接种组给予腹腔注射生理盐水1mL,3d后再重复1次;阳性干预组腹腔注射NF—KBp65SiRNA—Lipofectimine2000混合物1mL,3d后再重复1次;阴性干预组则腹腔注射阴性对照siRNA—LipofectimineTM2000混合物1mL, 3d后再重复1次.于注射子宫内膜后的14d,将小鼠用断颈法处死,切开腹壁,全面检视腹腔,有病灶生长者摘取送病理检查,并送免疫组化(sP法)分析.1.2.2结果判断子宫内膜种植成功判断标准:肉眼观种植物直径I>2rain,表面被结缔组织覆盖并有血管形成;镜下病理证实种植物中均有子宫内膜上皮细胞,腺体和间质的生长.免疫组化判断标准:低倍镜下观察5个视野,取其平均值作为每张切片的观察结果,根据染色强度和范围做出每张切片的分级.NF—KB, ICAM一1和VEGF均以细胞胞质中出现棕黄色颗粒为判断标准.染色强度分级:(1)阴性(一):细胞无着色或阳性细胞数<5%;(2)弱阳性(+):细胞轻度着色呈淡黄色,阳性细胞数5%～25%;(3)阳性(++):细胞着色呈深黄色,阳性细胞数25%～50%;(4)强阳性(+++):细胞明显着色,呈棕黄色,阳性细胞数>50%.结果判断在双盲下进行,每张切片由两名病理科医生分别计数.1.3统计学方法采用SPSS13.0统计软件行Kruskal—WallisTest秩和检验及检验,检验水准定为Ot<0.05.2结果2.1各组人子宫内膜异位种植成功率及种植物的病理检查病灶多位于盆腹腔的腹壁,肠系膜,肠管和肝表面,大小约2.0mln×2.0mm×2.0mill左右,呈清亮水疱样结构,表面有小血管爬行,部分可见粘连带与腹壁相连;3组子宫内膜异位种植成功的例数分别为8(80%),2(20%)和7(70%),差异有显着性('c=8.136,P=0.017).其中阳性干预组存活率明显低于其他两组(P=0.009);但单纯接种组和阴性干预组间无差异(P=0.615).于光镜下,非阳性干预组存活的异位内膜可以看到完整的腺体及间质结构,与种植前的子宫内膜极为类似.而阳性干预组亦可见腺体及间质结构,但部分可见发育不良或坏死,见图1.圈A:裸鼠肠管及肝脏表面子宫内膜异位种植病灶;B:非阳性干预组子宫内膜异位病灶,腺体及问质完好(HEx200);C:阳性干预组子宫内膜腺体发育不良甚至部分坏死(HE×200)图1子宫内膜腹腔种植肉眼及镜下观2.2各组异位种植灶中NF—KB,VEGF,ICAM—l的表达强度所有异位种植病灶中均可检测到NF—KB,VEGF,ICAM—l的表达,且主要表达于3组内膜的腺上皮细胞.阳性干预组种植物中NF—KB,VEGF,ICAM—l表达强度低于其他两组(P<0.05),而单纯接种组和阴性干预组间则差异无显着性(P>0.05),见表1.表l3组种植子宫内膜的NF—KB,VEGF及ICAM一1表达强度比较例3讨论对于EMs发生机制,现多数学者认可Sampson的经血逆流子宫内膜种植学说,但经血逆流现象非常普遍,发生率可高达76%～90%,而实际发病率仅约10%,说明经血逆流最多只是发病的基础,而随经血逆流的异位内膜细胞具备的转移,种植,生长等类似肿瘤转移的生物学行为才是发病的关键….然而子宫内膜要想在异位成功种植生长,必须完成黏附,侵袭和血管生成.因此,如何抑制和阻断这一进程,已经开始成为治疗子宫内膜异位症研究的方向之一.但目前大部分研究局限于控制该进程的某一阶段,比如单纯抗黏附或抗血管生成,其中抗血管生成研究最为成熟.NF—KB是一类具有多向性转入调节作用的蛋白质因子家族,主要成员有NF—KB1(p50/p105),NF—KB2(p52/p100),RelA(p65),RelB和C—Rel这五种亚基.其中p50和p65亚基在细胞中广泛存在.通常所说的NF—KB蛋白是指p5O/p65异二聚体,其中p65相对分子量为65×10,是NF—KB家族的重要成员,只有p65在蛋白的c末端含有转入激活域,能直接作1026?广东医学2009年7月第30卷第7期GuangdongMedicalJournalJu1.2009,V o1.30,No.7用并激活转入过程.NF—KB是一种重要的核转录因子,它存在于多种细胞,并参与炎症,免疫,细胞增殖和细胞凋亡等多种生理,病理过程的基因转录调控.国内外多项研究均显示,多种刺激使NF—KB激活后,可促进细胞增殖和抗凋亡的能力,并可以上调许多与肿瘤生长,浸润以及新生血管形成有关的因子的表达及功禽皂,女ⅡICAM一1,MMPs,VEGF,ELAM一1,IL一6, VCAM一1及IL一8,从而增强肿瘤细胞的黏附,侵袭及血管生成能力;而采用多种措施抑制NF—KB的活性后,细胞凋亡明显增加,增殖减少,且上述多种因子的表达及活性均显着下降,并可以削弱许多由这些因子介导的病理过程J.由此可见,如果抑制NF—KB基因的表达,就有可能在黏附,侵袭及血管形成这三阶段全方位地拮抗EMT的发生发展.最近已有学者于体外及体内实验证实NF—KB抑制剂BAY11—7085或SN一50等可以抑制人子宫内膜异位症裸鼠模型中异位内膜病灶的生长.然而,由于蛋白治疗具有一些难以克服的缺陷,如治疗剂量大,血药浓度维持时间短,需反复注射,所需疗程长以及可能传播毒性和感染颗粒等,造成蛋白治疗严重受限.而基因治疗则可克服这些缺点,与机体自然生理过程比较吻合,因此,基因治疗是未来治疗的重要趋势.RNA干扰技术因其可以特异性剔除或关闭基因的表达,且具备经济,快捷,高效,高稳定性及可扩散性等诸多优势,已广泛应用于探索基因功能,传染性疾病及肿瘤等的基因治疗.本研究利用小干扰RNA对NF—KBp65进行基因沉默,发现子宫内膜异位种植成功概率明显下降,存活的异位病灶亦存在不同程度的发育不良或坏死,而其他两组没发现类似现象,证实NF—KB确实参与调控了子宫内膜的异位种植,通过调控NF—KB即有可能调控EMT的发生发展.实验结果同时显示,对NF—KB进行RNA干扰后,病灶内的VEGF以及ICAM一1亦同时下调,表明NF—KB是经由VEGF和ICAM一1信号通路来调控异位内膜细胞,从而发挥其抗黏附,侵袭和血管生成的作用.VEGF和ICAM一1分别作为关键性的血管形成刺激因子和细胞黏附因子,其表达的上调与外界因素导致内皮细胞,上皮细胞等细胞内NF—KB激活有关.正常情况下NF—KB与抑制性蛋白hoB相结合,处于未活化状态.TNF,IL一1,LPS等细胞外信号可激活一个或多个信号传递系统,导致IKB发生磷酸化而与NF—KB解离,NF—KB随即从细胞质进入细胞核,与VEGF,ICAM一1启动子的-cB位点结合,从而启动两者的转录].EMs具有类似肿瘤细胞侵袭与转移的恶性行为,其发生发展必须通过黏附一侵袭一血管生成这一过程,siRNA靶向抑制NF—KB成功抑制子宫内膜的异位种植和生长,提示了这一策略的可行性,但其相应的不良反应尚需进一步的研究.参考文献,[1]GIUDICELC,TAZUKESI,SWIERSZLT.Statusofcurrentre- searchonendometriosis[J].JReprodMed,1998,43(3Sup—p1):252—262.[2]KARINM,LINA.NF—kappaBatthecrossroadsoflifeand death[J].Nat.Immunol,2002,3(3):221—227.[3]GoNZALEz—RAMOSR,V ANLANGENDONCKTA.Agent blockingthenuclearfactor—-kappaBpathwayareeffectiveinhibi?- totsofendometriosisinaninvivoexperimentalmodel[J].Gyne—colObstetInvest,2008,65(3):174—186.[4]AWWADJT,SAYEGHRA,TAOXJ,eta1.TheSCIDmouse:Anexperimentalmodelforendometriosis[J].HumReprod,1999,14(12):3107—3111.[5]SARKARFH,LIY.NK—kappaB:apotentialtargetforcancer chemopreventionandtherapy[J].FrontBiosci,2008,13(1):2950—2959.[6]NASUK,NISHIDAM,UEDA T,eta1.Applicationofthenucle—arfactor—BinhibitorBAYll一7085forthetreatmentofendome.triosis:aninvitrostudy[J].AmJPhysiolEndocrinolMetab,2007,293(1):El6一E23.[7]CAOY.Endogenousangiogenesisinhibitorsandtheirtherapeuticim-plications[J].IntJBiochemCellBiol,2001,33(4):357—369.[8]DVORAKHF,BROWNLF,DETMARM,eta1.V ascularper-meabilityfactor/vascularendothelialgrowthfactor,microvascular hyperpermeability,andangiogenesis[J].AmJPathol,1995,146(5):1029—1039.[9]LOCKYERJM,COLLADAYJS,ALPERIN—LEAwL,eta1. Inhibitionofnuclearfactor—-kappaB—-mediatedadhesionmolecule expressioninhumanendothelialcells[J].CircRes,1998,82(3):314—320.(收稿日期:2009—02—06编辑:王冰)欢迎订阅2009年《广东医学》杂志《广东医学》杂志创刊于1963年,月刊,大16开,每期160页.《广东医学》已全部进入国内(外)自然科学主要的评价体系并得到权威的评定:进入2004年,2008年版《中文核心期刊要目总览》,连续被美国《化学文摘》(CA)收录;是中国科技论文统计源期刊(核心期刊),被中国科技期刊引证报告(CJCR)和中国科学引文数据库(CSCD)列为源期刊.本刊设有述评,专题报道,诊疗新进展,基础研究,临床研究,调查研究,临床用药研究,中医?中西医结合,综述?讲座,临床护理,短篇报道,病例报告等栏日.适合从事临床,科教,医技等各级医药卫生技术人员阅读和参考.本刊2009年每册定价10元,全年120元.邮发代号:46—66,国灯统一刊号:CN44—1192/R,国际标准刊号:ISSN1001—9448,国外发行:中国国际图书贸易总公司(北京399信箱),国外发行代号:M6308.欢迎广大读者,作者到各地邮政局订阅,漏订者可直接-b本刊编辑部联系.编辑部地址:(510180)广州市惠福西路进步里2号之6:网址:http://www.gdyx.ell;E—mail:****************;电话:020—81906074;传真:020—81865066.。

子宫内膜异位症动物模型研究进展

ｍｏｅｓｈｓａｔｌａｒｖｄｕｄｎｅｆｒｕｓｎｎｍａｄｌｅｅｔｅｙ，ａｄｉｗｉｅｍｏｅｂｎｆｃａｒｉｖｓｉａｉｎｏｄｌ，ｔｉｒｉｅｃｎｐｏｉｅａｇｉａｃｏｉｇａｉｌｍｏｅｓｓｌｃｉｌｃｖｎｔｌｂｒｅｅｉｆｎｅｔｔｎｌｉｌｏｇｏｅｄｍｅｒｏｉｎｏｔｉｓｓ．
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子宫内膜异位症（ｎｏｅｉｉ，Ｅ是指具有ｅｄｍｔｏｓＭ）ｒｓ
植内膜的成活及周期性变化极为有利，建立模型多选用ｓＤ大鼠或Ｗｉａ大鼠，ｓｒｔ国内外均有相关的建模
２０年２月０９
中国实验动物学报
ＡＣＡＬＢ０Ｒ０ＲＩＴＡＴＵＭＡＮＩＬＳＳＩＴＡＳＮＩＡＭＡＩＣＥＮＩＩＣ
Ｆｂｕｒ，０９ｅｒａｙ２０Ｖｎ．７Ｎ１Ｉ１ｏ．
第１７卷
第１期
生长功能的子宫内膜出现于子宫腔以外的部位而发
生的病变。其发病率达１％～１％，有逐渐增加０５且的趋势¨ 。该病的发病机制仍未完全明确，由于伦理学等方面的问题，不能够直接在人体进行研究，所以人们不停地在探索能够复制该疾病的模型。动物
（ｄｃｌＣｌｇｆａｇｈｕＵｉｅｓｙ，Ｙｎｚｏ２０１ｈｎ）ＭｅｉａｏｌｅｏｎｚｏｎｖｒｔｅＹｉａｇｈｕ２５０，Ｃｉａ

基因敲除小鼠研究方案

基因敲除小鼠研究方案基因敲除小鼠研究方案一、研究目标：通过基因敲除小鼠研究，探究目标基因在小鼠发育、生长、免疫系统等方面的功能和调控机制。

二、实验设计：1. 基因敲除小鼠模型的构建：选择合适的基因敲除技术，如CRISPR/Cas9系统，通过设计合适的sgRNA（single guide RNA）序列，引导Cas9核酸酶定点切割目标基因的DNA序列。

进而引发DNA修复机制，导致目标基因的插入、缺失或突变。

将CRISPR/Cas9系统构建为可表达载体，转染入小鼠胚胎干细胞中，克隆筛选敲除成功的细胞系。

2. 小鼠胚胎干细胞培养及注射：将敲除成功的小鼠胚胎干细胞注射到早期胚胎中，制备敲除小鼠模型。

养育敲除成功的小鼠。

3. 小鼠品系和样本采集：选择合适的小鼠品系，如C57BL/6小鼠品系。

在小鼠发育、生长、免疫等关键时期，如出生后不同天数、特定时间点等，采集合适的器官或细胞样本。

4. 小鼠表型分析：对敲除小鼠与野生型小鼠进行比较，通过外观、体重、行为、生理指标等方面的观察和实验测定，分析目标基因在小鼠生长发育等方面的影响。

5. 组织学和免疫组化分析：采集目标器官样本，进行组织学和免疫组化实验。

通过病理学检测、免疫组织化学染色等方法，观察目标基因在组织结构和免疫功能调控方面的作用机制。

6. 分子生物学实验分析：采集样本进行基因表达、蛋白质表达水平和分子机制等方面的实验分析，如实时定量PCR、Western blot等方法，研究目标基因对其他基因和信号通路的影响。

7. 数据分析：对实验获得的生物学数据进行统计学和生物信息学分析，建立基因敲除小鼠模型的相关数据库，以及通过差异分析、基因功能注释等方法，进一步探究目标基因的功能和相关调控网络。

三、预期结果：通过上述研究方案，可以获得目标基因敲除小鼠模型，并通过多个方面的分析来研究该基因对小鼠生长发育、组织结构、免疫系统等方面的功能和调控机制。

预期结果包括但不限于：敲除小鼠的表型差异和诱导的特异性疾病模型；目标基因调控的重要信号通路；基因与其他相关基因间的调控网络等。

子宫内膜异位症动物模型研究进展

子宫内膜异位症动物模型研究进展
赖秋红;杨兆荣;钱静
【期刊名称】《中国实验动物学报》
【年(卷),期】2009(17)1
【摘要】为研究子宫内膜异位症的病因、发病机制、治疗和预防对策,需要构建实验动物模型.本文通过分析各种模型的优点和缺点,为选择性应用动物模型提供指导,从而更利于对该病的研究.
【总页数】3页(P80-82)
【作者】赖秋红;杨兆荣;钱静
【作者单位】扬州大学医学院,扬州,225001;扬州大学医学院,扬州,225001;扬州大学医学院,扬州,225001
【正文语种】中文
【中图分类】R-332
【相关文献】
1.子宫内膜异位症动物模型研究进展 [J], 苏晓华
2.子宫内膜异位症动物模型研究进展 [J], 金济云;夏亲华
3.子宫内膜异位症动物模型研究进展 [J], 崔阳阳;孙伟伟;赵瑞华
4.子宫内膜异位症动物模型研究进展 [J], 冯雪;黄薇
5.子宫内膜异位症动物模型的研究进展 [J], 肖晓霞;夏亲华
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子宫内膜异位症裸鼠模型子宫内膜的雌、孕激素受体表达

子宫内膜异位症裸鼠模型子宫内膜的雌、孕激素受体表达冯雪;宋永;周敏;肖丽;朱慧莉;黄薇【期刊名称】《现代妇产科进展》【年(卷),期】2016(25)2【摘要】目的:建立子宫内膜异位症裸鼠模型,观察子宫内膜的雌激素受体(ERs)、孕激素受体(PRs)及其亚型的表达情况,为进一步探讨内异症子宫内膜孕激素抵抗的发生机制提供研究模型。

方法:建立子宫内膜异位症裸鼠模型,分别于造模后1月、2月、3月取裸鼠子宫内膜,利用RT-qPCR和Western blot法检测其孕激素受体(PRA、PRB)和雌激素受体(ERα、ERβ)表达情况。

结果:与对照组相比,内异症组裸鼠内膜的PRB和ERα表达降低,在造模后3月最明显;PR和ERβ表达升高,PRB/PRA和ERα/ERβ比值降低,均在造模后3月最明显。

结论:子宫内膜异位症裸鼠模型是研究内异症的理想模型之一,造模后的裸鼠内膜存在孕激素抵抗。

【总页数】5页(P112-115)【关键词】子宫内膜异位症;裸鼠;动物模型;孕激素抵抗【作者】冯雪;宋永;周敏;肖丽;朱慧莉;黄薇【作者单位】四川大学华西第二医院【正文语种】中文【中图分类】R711.6【相关文献】1.子宫内膜异位症模型大鼠子宫内膜雌、孕激素受体表达的变化 [J], 郑辉;李洪义;王自能;金海燕2.外源性雌、孕激素对裸鼠人子宫内膜异位症病灶中MMP-2、TIMP-2及VEGF 蛋白表达的影响 [J], 夏玉芳;郭新华;娄艳辉;高萍;于云鹏3.人子宫内膜异位症裸鼠模型的建立及雌、孕激素受体的表达 [J], 王丹波;张淑兰;牛慧彦;陆景明4.外源性雌孕激素对人子宫内膜异位症裸鼠模型早期病灶中MMP_1和TIMP_1表达的影响 [J], 姜华;娄艳辉;郭新华5.雌、孕激素对子宫内膜异位症裸鼠模型异位病灶中间隙连接蛋白26、32、43表达的影响 [J], 王佳;唐良萏;石全红;明雪因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

二(噁)英对小鼠异位子宫内膜影响的分子机制研究

二(噁)英对小鼠异位子宫内膜影响的分子机制研究沈杨;刘娟;任慕兰【期刊名称】《中山大学学报（医学科学版）》【年(卷),期】2010(031)005【摘要】[目的]探讨四氯二苯并二(噁)英(TCDD)对子宫内膜异位症小鼠模型的影响及其分子学机制.[方法]采用小鼠自体子宫内膜移植法建立小鼠子宫内膜异位症模型,分别给予TCDD 0、1、3、10μg/kg剂量灌胃,每21 d 1次,于建模术后3、6、9周处死,鉴定异位病灶的形成,测量异位病灶体积.采用免疫组化法和RT-PCR法检测各组小鼠异位子宫内膜组织中芳香烃受体(AhR)和细胞色素P4501A1(CYP1A1)表达水平.[结果]①染毒组小鼠异位病灶体积的增加与染毒剂量和时间具有明显的正相关性(r=为0.727、0.553.均P<0.05):②染毒组小鼠异位子宫内膜AhR蛋白较对照组增强(P<0.05);且随染毒剂量增加和染毒时间延长,AhR蛋白表达相应增加(r分别为0.687、0.442,均P<0.01);③随染毒剂量增加,CYP1A1蛋白表达相应增加(r=0.640,P<0.01),对照组未检测到CYP1A1蛋白表达;④染毒组小鼠异位子宫内膜AhR mRNA较对照组增强(P<0.05).随染毒剂最增加和暴露时间延长,AhR mRNA表达相应增加(r分别为0.565、0.635,P<0.01);⑤随染毒剂量的增加,CYP1A1 mRNA表达明显增加(r=0.659,P<0.01),对照组小鼠异位子宫内膜病灶中未检测到CYP1A1mRNA.[结论]TCDD可促进小鼠模型异位子宫内膜病灶的发展,其机制可能与AhR及其下游基因CYP1A1激活有关.AhR及CYP1A1的表达增强是二(噁)英暴露的生化指标.【总页数】6页(P608-613)【作者】沈杨;刘娟;任慕兰【作者单位】东南大学附属中大医院妇产科,江苏,南京,210009;东南大学附属中大医院妇产科,江苏,南京,210009;东南大学附属中大医院妇产科,江苏,南京,210009【正文语种】中文【中图分类】R713.5【相关文献】1.二噁英对小鼠异位子宫内膜中IL-1β表达的影响 [J], 刘娟;任慕兰2.二恶英对小鼠模型子宫内膜异位症的影响 [J], 刘娟;任慕兰3.二噁英与子宫内膜异位症相关性的研究进展 [J], 方庆仙;林俊;张信美4.二(噁)英与子宫内膜异位症发病关系的研究进展 [J], 柳玲5.二噁英暴露和子宫内膜异位症相关性 [J], 刘娟;陈灿明;徐杨;张玮;张磊因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

子宫内膜异位症模型大鼠NF-KB及炎性因子、粘附因子变化及对细胞侵袭和凋亡的影响

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人子宫内膜异位症纤维化动物模型的建立

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Ｃｈｉｎａ
【Ａｂｓｔｒａｃｔ］ＯｂｊｅｃｔｉｖｅＴｏｅｓｔａｂｌｉｓｈａｉｆｂｒｏｔｉｃｎｕｄｅｍｏｕｓｅｍｏｄｅｌｏｆｈｕｍａｎｅｎｄｏｍｅｔｒｉｏｓｉｓｂｙｔａｋｉｎｇａｄｖａｎｔａｇｅｏｆｅｎ —

靶向NF-κB的siRNA治疗子宫内膜异位症的基础实验研究的开题报告

靶向NF-κB的siRNA治疗子宫内膜异位症的基础
实验研究的开题报告
一、研究背景和意义
子宫内膜异位症是一种常见的妇科疾病，其主要表现为经期腹痛、痛经、不孕等症状，严重影响女性生活质量和生育能力。

NF-κB是一种重要的转录因子，可以调节多种细胞生长、炎症反应和免疫应答。

研究表明，NF-κB在子宫内膜异位症的发生和发展中起到了重要的调节作用，抑制NF-κB的表达可以抑制子宫内膜异位症的发生和发展。

因此，开展靶向NF-κB的siRNA治疗子宫内膜异位症的研究意义重大，可为临床治疗子宫内膜异位症提供新的治疗策略和思路。

二、研究内容和方法
本研究将采用体外细胞实验和动物模型实验相结合的方式，探究靶向NF-κB的siRNA对子宫内膜异位症的影响及其机制。

具体内容和方法如下：
1.体外细胞实验
利用子宫内膜异位症患者及正常人体子宫内膜细胞进行体外培养，分为对照组、负对照组、空白组和干扰组，对干扰组进行NF-κB靶向siRNA干扰，对各组细胞的增殖情况和细胞周期进行检测和比较，探讨NF-κB的干扰对子宫内膜异位症细胞的影响。

2.动物模型实验
采用大鼠子宫内膜异位症模型，将实验组大鼠进行NF-κB靶向siRNA干扰，对比实验组和对照组的子宫内膜异位症病灶的大小和数量，以及实验组和对照组大鼠子宫内膜细胞的增殖情况和细胞周期的变化。

三、预期结果和意义
通过本研究的实验结果，预期将能够验证NF-κB在子宫内膜异位症的发生和发展中的作用，并且发现靶向NF-κB的siRNA具有一定的治疗子宫内膜异位症的效果，为开展基于siRNA的精准治疗子宫内膜异位症的研究提供了新的思路和方向，具有重要的临床意义和推广价值。

雌激素受体β基因敲除小鼠子宫内膜异位症模型的建立

维普资讯
２００８年４月
中国实验动物学报
ＡＣＢＴＡＬＡ０ＲＡＴＯＲＩＵＭＡＮＩＭＡＵＳＳＥＮＩＩＩＡＣＩＴＡＳＮＣ
Hale Waihona Puke Ａｐｉ，０８ｒ２０ｌＶ１１ＮＯ２ｏ．６．
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矿产

矿产资源开发利用方案编写内容要求及审查大纲
矿产资源开发利用方案编写内容要求及《矿产资源开发利用方案》审查大纲一、概述
㈠矿区位置、隶属关系和企业性质。

如为改扩建矿山, 应说明矿山现状、
特点及存在的主要问题。

㈡编制依据
(1简述项目前期工作进展情况及与有关方面对项目的意向性协议情况。

(2 列出开发利用方案编制所依据的主要基础性资料的名称。

如经储量管理部门认定的矿区地质勘探报告、选矿试验报告、加工利用试验报告、工程地质初评资料、矿区水文资料和供水资料等。

对改、扩建矿山应有生产实际资料, 如矿山总平面现状图、矿床开拓系统图、采场现状图和主要采选设备清单等。

二、矿产品需求现状和预测
㈠该矿产在国内需求情况和市场供应情况
1、矿产品现状及加工利用趋向。

2、国内近、远期的需求量及主要销向预测。

㈡产品价格分析
1、国内矿产品价格现状。

2、矿产品价格稳定性及变化趋势。

三、矿产资源概况
㈠矿区总体概况
1、矿区总体规划情况。

2、矿区矿产资源概况。

3、该设计与矿区总体开发的关系。

㈡该设计项目的资源概况
1、矿床地质及构造特征。

2、矿床开采技术条件及水文地质条件。

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膜异位症动物模型，检测建模后异位病灶大小、免疫组化检测异位病灶、在位内膜以及阴道磷酸化ｐ５（．６）６ｐｐ５、
ＰｅｓｏＫＣｐｉｎ和ＴＰｌＲＶ１的表达。结果ｐ０基因敲除小鼠异位病灶明显减小，５并且，５因敲除小鼠异位病灶，ｐ０基ＮＦｋｐａ５．ａｐＢｐ０亚单位在子宫内膜异位症的在位内膜，以及阴道的Ｐｐ５ｎＰＣｐｉｎ的表达也下降。结论 —６ｄＫｅｓｏａｌ
入相应的二抗染色，抗为ＨＰ记的００６０１２０７９Ｏ７，组间表达二Ｒ标．５、．、．１和．０各９０ＴＰ主要表达与神经元，ＲＶ１近年的研
相应针对一抗种属的抗体，工作浓度差异显著（＝．Ｏ）而ＴＰ在各组究也提示可能表达于人支气管上皮细胞、ＰＯ５；ＯＲＶ１
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１％石切通信作者：孙群燕，Ｅｉｕｑｎａ织，０甲醛固定，蜡包埋，片。ｍａ：ｓｎｕｙｎｌ
１８＠）ｈｏｃｍ．９８，ｏ．ｃａｏａ
１．手术步骤．２２
ｃｍ，ａ参照文献［］１０（ｂ５０，ａ６０３ＡｂａＣｍ．３，０ａｌ５５ｂ３８：
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６４・５
ＭｏｅＰｒｃｉａＭｅｉｉｅＪｎ２２Ｖｏ１２，ｏ６ｄｍａｔｃｌｄｃｎ，ｕｅ０１，．４Ｎ．
ｔｅＣｏｈａｅＲｅｉｗａｃｎｒｒｐｎｏｈｃｒｎｖｅｏｔａｙｏｉｉｎ
ｔｍｙｃｉｉｌｏｓｅａｉｎ［．Ａｄｏ，ｏ：ｎｃｎｉｒｔｓＪＪｎｒｌｌａｃｄｏ］
Hale Waihona Puke ［＿ｕｏ，０６４（）５ —６．ＪＥｒ】Ｕｒｌ２０，９２：８２３２民军医出版社，０３２６２９２０：８．８．
１材料与方法１１动物．
／０丝线缝合腹部伤口。术内膜移植到ｐ０因敲除小鼠腹腔，＞腹膜上。用３５基Ｋ
ｗ组是指ｐ０因敲除小鼠子宫内膜移后用２ｍｇＬ１１雌二醇溶液（国西格５基／７．３美植到野生型小鼠腹腔，组各８只。建玛公司）天喂食小鼠，两周，用青每每共并
因此，５ｐ０可作为药物靶标，可开ｂｉｅＵ）一抗工作浓度稀释１：５，组间表达差异显著（＝．４；作用，ｒｇ，Ｋ，ｄ０Ｐ００）２
１：０，２０一抗４孵育过夜。１０１：０， ℃ 加Ｐｅｓｏ在各组的表达分别为：发新的治疗药物。ＫＣｐｉｎｌ
１：０稀释。３１０７℃ ，ｈＢ１。ＰＳ洗涤后，的表达分别为：００６．３．２．、０１、００和脑、９２９肾和表皮的角质细胞。然而内异症中，
用ＤＢ溶液显色，Ａ室温３～５ｉ，ａｒｎ自来００７各组问表达无显著差异（＝．）ＴＰ过表达究竟起到何种作用仍然不．，８尸０５。ＲＶ１９水冲洗后作Ｈ＆Ｅ染色，度乙醇二甲苯在４组小鼠中，Ｐｅｓｏ梯ＫＣｐｉｎ表达与Ｐ明确，其过表达可能刺激前炎症因子ｌ．
作者单位：３５０浙江省慈溪，慈溪１３０市人民医院
Ｓ７，－６鼠的异位病灶个数及大小（。收集ＢＡ封闭３ ℃ １ｈ加入一抗ｐｐ５ｍｍ）
每只小鼠异位病灶、在位内膜及阴道组（３３，ｅｉａｉｅｈｏｏｙＢ — ＃０７ＣｌＳｇｌｇＴｃｎｌｇ，ｅｌｎｎ
过交叉移植基因敲除小鼠（ＫＯ）和野生进行建模。建模小鼠共分为４组：Ｋ＞因敲除小鼠及野生型小鼠的盆腹腔腹
型小鼠（Ｔ的子宫内膜建立内异症模Ｋ组是指ｐ０基因敲除小鼠子宫内膜移膜。Ｋ＞ｗ组中，基因敲除小鼠的ｗ）５在将５Ｗ型，通过建模后检测内异症病灶大小以植到ｐ０基因敲除小鼠腹腔，＞Ｗ是子宫内膜缝合在野生型小鼠的盆腹腔腹在将野生型小鼠的及基因ｐｐ５ＴＰ和Ｐｅｓｏ－６、ＲＶ１ＫＣｐｉｎ的指野生型小鼠子宫内膜移植到野生型小膜上。ｗ＞Ｋ组中，ｌ表达，索ｐ０亚单位在内异症发生中鼠腹腔，＞Ｋ组是指野生型小鼠子宫子宫内膜缝合在基因敲除小鼠的盆腹腔探５Ｗ的作用。现报道如下。
．３２纵测量异位病灶的１．免疫组化性Ｎ－ａｐＢｐ０基因敲除小鼠（５，鼠，形剖开小鼠腹腔，Ｆｋｐａ（５）ｐ０Ｂ；２Ｐ＿ｆｂ６１９２Ｎｌ１ｒ
Ｄｘｎ４（１。记录每只小后，檬酸缓冲液煮沸做抗原修复，０柠１％野生型对照小鼠（６２Ｐ２Ｊ均购自美病灶大小（。Ｄｘ／）１）Ｂ１９Ｆ／）
参照文献【】４ｐ石４，－ｍ
０００／防感染。ｄ预本实验中所用１６只成年雌模４周后，通过颈椎脱臼法处死建模小霉素钠４０Ｕｄ肌注５）ｌ和６只成年雌性两个径线（。０按照文献报道计算异位蜡切片经二甲苯及梯度乙醇脱蜡复水Ｄ，，Ｄ
ｃｌｓ］Ｊｏ，９５１４５：７２１５．ｅｅ［．ｌ１９，５（）５．７５ＪＵｒ１
［】ＦｃｒａＣｅｒｔ３ｉａｒｒｏＭＡ，ｉｕｒＧｅａ．ｕＬｇｏｉ，ｔ１
Ｔｒａｍｅｔｏｖｒｃｃｌｕｆｒｉｅｍｅｅｔｎｆａｉｏｅｅｉｓｂｅｔｎ：ｎｌ
收稿日期：０２０．７２１．３０
（任编辑：美春）责钟
ＮＦｋｐａ５ —ａｐＢｐ０基因敲除小鼠子宫内膜异位症模型的建立及其研究
孙群燕
【要】摘目的利用ＮＦｋｐａ５因敲除小鼠建立子宫内膜异位症模型探索Ｎ．ａｐＢｐ０亚单位在子宫内 —ａｐＢｐ０基Ｆｋｐａ５膜异位症发生发展中的作用。方法利用子宫内膜移植法建立Ｐ０基因敲除小鼠及野生型对照小鼠的子宫内５
２０，５５：４ —４．０４２（）０７３７ＢｅｔｒｃｉｏｉｉｓｏｌｆｒｌｙＪ．ｓｐａｔｅｐｌｅｒｅｅｔｉ［］ｃｃｆｍａｉｔＪｏ，０５１（０：９．９．ｌ２０，２１）８２８８Ｕｒ
【】郭应禄，４李宏军．男性不育症［．：Ｍ］北京人【］ＪｒｗＪ，ｈｒｉＢｅｅ６ａｏＰＳａｌＩｐＤ，ｌｒｋＡＭ．ｔ１ｅ．ａ
发生发展中起重要作用，能是潜在的治疗靶标。可
【键词】动物，关实验；宫内膜异位症；．ａｐＢ；５单位；因敲除小鼠子ＮＦｋｐａｐ０亚基
ｄｉ０３６／ｉｎ１７－８０２１．．９ｏ：．９９．ｓ．１００．２００１ｊｓ６０６２
【图分类号】Ｒ３；７１１【献标志码】Ａ中３２Ｒ１．文７
【章编号】１７—８０２１）６３０文６１０ｏ（０２０５．３