游离三碘甲状腺原氨酸操作规程

1 检验申请

单独检验项目申请：游离三碘甲状腺氨酸测定 (缩写FT3)；组合检验项目申请：甲状腺功能检查组合；临床医生根据需要提出检验申请。

2 标本采集与处理

2.1标本采集

2.1.1常规静脉采血约2ml，不抗凝，置普通试管中。或采用含分离胶的真空采血管。

2.1.2检验申请单和血标本试管标上统一且唯一的标识符。

2.1.3急诊标本采集后，在检验申请单上填写标本采集时间。

2.1.4标本采集后与检验申请单一起及时运送至检验科。专人负责标本的接收并记录标本的状态，对不合格标本予以拒收。

2.1.5 下列标本为不合格标本

2.1.5.1标本量不足：少于0.3ml的全血标本，或少于0.1ml的血清或血浆。

2.1.5.2对于测定和吸样有干扰的标本：如近期使用鼠源性单克隆抗体诊断后采取。

2.1.5.3无法确认标本与申请单对应关系的。

2.1.5.4其他如标识涂改、标本试管破裂等。

2.2标本保存

2.2.1接收标本后在30min内将标本离心分离出血清, 避免溶血。

2.2.2标本保存时间：室温（15～25℃）下可稳定8h，普通冰箱中（2～8℃）稳定48h。需较长时间保存应将血清存放于-20℃。冰冻标本仅可冻融一次。为避免标本中水分挥发使血清浓缩，对保存时间超过1d的标本均加塞密闭或覆盖湿巾。

2.2.3已完成测试的标本保持完整的识别号，置2～8℃冰箱内保存7d。

2.3标本采集的注意事项

2.3.1采血前使受检者保持平静、松弛、避免剧烈活动。

2.3.2采血后应使血液充分凝固，离心后的血清中不能含有颗粒物或微量纤维蛋白；可使用选用肝素、EDTA抗凝的血液标本。

3 方法原理

采用竞争结合化学发光免疫分析法，其检测原理如下：

第一步：将样本-碱性磷酸酶标记的T3抗体加入反应管中，经过孵育，样本中的FT3与标记抗体结合；

第二步：将链霉亲和素包被的磁珠及生物素化的T3加入反应管中，经过孵育，样本中FT3和生物素化T4竞争性的结合标记抗体，形成生物素化的T3-标记抗体复合物，前者可以通过生物与磁珠上链霉亲和素特异性结合，从而被固定在固相上，而其余未结合物质到固相上的物质则通过下一步的清洗步骤除去；

第三步：将化学发光物添加到反应管内，发光底物（AMPPD）被碱性磷酸酶所分解，脱去一个磷酸基，生成一个不稳定的中间产物，该中间产物通过分子内

发态返回基态时，产生化学发光，再通过光电倍增管对反应中所产生的光子数进行测量。所产生光子数与样本内的游离三碘甲状腺原氨浓度成正比。样本内分析物的量油校准曲线来确定。

4 试剂及其他用品

4.1试剂：专用游离三碘甲状腺原氨测定试剂盒，由深圳迈瑞公司出品。未打开的试剂包保存于2～8℃避光保存，可稳定18个月。开启的试剂包载入系统中可使用28d。

4.2试剂盒组分

4.2.1剂盒组分试剂1（Ra）：

组分：包被着链霉亲和素的超顺磁性微粒，悬浮于缓冲液，含防腐剂。

原料及含量：包被着链霉亲的超顺磁性微粒，0.1g/L；HEPES缓冲液，50mmol/L;Proclin300,0.5g/L;叠氮钠，1g/L。

4.2.2试剂2标记物（Rb）

组分：抗三碘甲状腺原氨-碱性磷酸酶标记物,稀释于缓冲液，含防腐剂。

原料及含量：三碘甲状腺原氨抗体-碱性磷酸酶结合物，>1mg/l；StablizymeAP,50mmol/L;Proclin300,0.5g/L;叠氮钠，1g/L。

4.2.3试剂2缓冲液（Rc）

组分：三碘甲状腺原氨与生物素结合物稀释于缓冲液，含防腐剂。

原料及含量：生物素化T3,0.08mg/L；磷酸盐缓冲液,50mmol/l；Proclin300,0.5g/L；叠氮钠，<1g/L。

4.2.4试剂2缓冲液（Rd）

组分：缓冲液，含防腐剂。

原料及含量：MES缓冲液，1g/L；Proclin300,0.5g/L；叠氮钠，<1g/L。

4.2.5 试剂包即开即用，临用时轻柔颠倒混匀数次,无须特殊准备

4.3其他试剂与用品

4.3.1 化学发光底物：通用发光剂底物液。

4.3.2 清洗缓冲液、反应杯等。

5 校准品与校准模式

5.1校准品:深圳迈瑞公司提供的FT3校准液，需贮2～8℃。5个浓度。有校准卡片。

5.2校准类型和校准点数目：非线性模式，6个校准点。

5.3校准周期：在同一批号试剂的使用效期内校准曲线有效，但在间隔14d后需要重新校准。每当：①更换试剂批号或出现质控漂移时；②仪器进行全面保养后；③仪器的重要零件更换后，进行一次校准。

5.4校准液重建方法：液体试剂，直接使用。

6 质控品与室内质控规则

6.1质控品：采用深圳迈瑞公司提供配套的质控品。

6.2质控液重建方法：液态质控血清，即开即用，无需特殊准备。

6.3质控品测定：在每一批标本中测定质控血清一次。

出。

6.5如出现失控情况，按室内质控标准操作程序采取各种有效的纠正措施及时纠正，并在确认重新回复到控制状态后开始标本检测。

7 适用仪器

深圳迈瑞公司CL-1200i自动发光免疫分析仪。

8 标本检测步骤

装载试剂→进行校准→进行质控→输入标本检测项目→加载标本→标本测定→结果复核→报告

9 主要分析参数

无须输入操作参数，仪器根据预设的分析项目参数和试剂条码的信息自动进行分析。标本量30µL。

10 结果计算

仪器根据校准曲线自动给出每个标本测定结果。测定结果单位以pg/mL 表示。

11 检验结果的报告及范围

11.1结果的报告

11.1.1结果经审核后，确认准确无误后发出报告。

11.1.2报告单上标明结果的计量单位、参考区间、报告日期、时间、操作者和审核者签名，并有与申请单相同的医学信息。

11.1.3如收到标本的质量可能对测定结果有影响的也在报告单上指出。

11.2报告范围：2.30 ~ 4.00 pg/ml ，超过此范围的标本应当报告为>30.0 pmol/L。对高值标本不作稀释后重测，因为稀释会干扰标本中游离激素和总激素之间的平衡。

12 操作性能

12.1精密度：批内CV＜12.5％。

12.2 分析范围：0.3 ~ 30.0 pg/ml 。

12.3灵敏度：0.88 pg/ml。

2.4方法的有限性及干扰因素：胆红素≤20mg/dL、TG ≤2000m g/dL、Hb≤500 mg/dL,测试结果的干扰偏差±10%范围内。

13 参考范围及医学决定水平

参考值（血清）： 2.30 ~ 4.00 pg/ml

14 临床意义

14.1 F T3是血液中主要的具有生理活性的甲状腺素，甲状腺素结合蛋白浓度正常时，FT3水平与TT3相关。

14.2 当甲状腺素结合蛋白或血清白蛋白的浓度低下时，如 T T3的浓度有改变，测定F T3就很有意义。大约有5%甲亢患者有单独的F T3增高。

14.3 当甲状腺机能亢进时，FT3浓度水平通常升高，这是区分甲状腺机能正常与中毒的界限，也是确认甲状腺机能亢进症及对其的治疗监测的良好指标。

14.4当甲状腺机能减退时，FT3浓度水平有减低趋势，但是这种减低并不能为诊断提供充分明确的信息。