微生物来源的昆虫几丁质酶抑制剂的筛选与分离纯化

微生物新药物的筛选流程

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产几丁质酶的筛选及活力测定

产几丁质酶的筛选及活力测定一、实验材料1.菌种：白僵菌，或其他菌种及土壤采样等(菌种接种于PDA斜面上，28℃，80％RH 培养14 d后分别置于4℃和20℃备用。

)2.试剂：DNS试剂:（称取3，5-二硝基水杨酸3．15 g，加水500 mL。

，搅拌5 s，水浴至45。

然后逐步加入100 mL 0．2g/mL的氢氧化钠溶液，同时不断搅拌。

直到溶液清澈透明(注意：在加入氢氧化钠过程中，溶液温度不要超过48℃)。

再逐步加入四水酒石酸钾钠91．0 g苯酚2．5 g和无水亚硫酸钠2．5 g。

继续45"C水浴加热，同时补加水300 mL，不断搅拌，直到加入的物质完全溶解。

停止加热，冷却至室温后，用水定容至1000 mL。

用烧结玻璃过滤器过滤，取滤液，储存在棕色瓶中，避光保存。

室温下存放7 d后可以使用。

) 几丁质酶基础培养基(g／L)：葡萄糖5．09，蛋白胨5．09，KH2P04、KCI、MgS04·7H20各0．59，FeS04·2H20 0．1 g，pH 7．0。

几丁质酶诱导培养基(g／L)：蛋白胨5．09，KH2P04、KCI、MgS04·7H20各0．59，ZnS04·7H202 0．01 g，胶体几丁质10 ml，pH 7．0。

（胶体几丁质固体培养基。

0.5 g K2HPO4，0.5 gKH2PO4，0.5 g MgSO4·H2O，0.1 g FeSO4·7H2O，0.1 gZnSO4·7H2O 500 ml 1%胶体几丁质，500 ml蒸馏水，15 g 琼脂，pH7.2，121℃灭菌15 min，冷却至50℃左右倒平板）马铃薯培养基(PDA)；去皮的马铃薯200 g切块，沸水煮30 min，纱布过滤，20 g蔗糖，209琼脂，加热至全部溶解，定容至1 L。

二、筛选1.初筛采用平板透明圈法。

用0．1 mL孢子悬液(1×107／mL)滴于几丁质平板的中央(每个样品重复3次)，28℃培养7d，其菌落周围有透明圈出现。

微生物药物学试题及答案

微生物药物学试题及答案一、单项选择题（每题2分，共40分）1. 微生物药物学是研究（）的科学。

A. 微生物的分类和鉴定B. 微生物的生理和生态C. 微生物的致病性和防治D. 微生物来源的药物答案：D2. 下列哪项不是微生物药物的特点（）。

A. 生物活性强B. 来源广泛C. 化学结构简单D. 作用机制多样答案：C3. 微生物药物学的主要研究内容包括（）。

A. 微生物药物的筛选B. 微生物药物的制备C. 微生物药物的药理作用D. 以上都是答案：D4. 微生物药物的筛选不包括（）。

A. 菌种的分离和鉴定B. 菌种的培养和发酵C. 菌种的基因工程改造D. 药物的临床试验答案：D5. 下列哪项不是微生物药物的制备过程（）。

A. 菌种的筛选B. 发酵过程的控制C. 药物的提取和纯化D. 药物的临床试验答案：D6. 微生物药物的药理作用研究不包括（）。

A. 药物的体内外活性评价B. 药物的作用机制研究C. 药物的毒理学研究D. 药物的生产工艺研究答案：D7. 下列哪项不是微生物药物的分类（）。

A. 抗生素B. 免疫调节剂C. 激素类药物D. 抗肿瘤药物答案：C8. 抗生素是一类具有（）的微生物次级代谢产物。

A. 抗菌活性B. 抗病毒活性C. 抗肿瘤活性D. 免疫调节活性答案：A9. 下列哪项不是抗生素的特点（）。

A. 低毒B. 高效C. 广谱D. 耐药性答案：D10. 下列哪项不是抗生素的作用机制（）。

A. 抑制细菌细胞壁合成B. 干扰细菌蛋白质合成C. 破坏细菌核酸结构D. 促进细菌生长答案：D11. 免疫调节剂是一类具有（）的药物。

A. 抗菌活性B. 抗病毒活性C. 调节免疫反应活性D. 抗肿瘤活性答案：C12. 下列哪项不是免疫调节剂的作用机制（）。

A. 增强机体免疫功能B. 抑制机体免疫功能C. 调节细胞因子的产生D. 促进细胞分裂答案：D13. 抗肿瘤药物是一类具有（）的药物。

A. 抗菌活性B. 抗病毒活性C. 抗肿瘤活性D. 免疫调节活性答案：C14. 下列哪项不是抗肿瘤药物的作用机制（）。

几丁质合酶抑制剂作为抗真菌药物的研究进展

几丁质合酶抑制剂作为抗真菌药物的研究进展
代猛;裘娟萍;汪琨
【期刊名称】《科技通报》
【年(卷),期】2017(33)3
【摘要】近几十年来,致病真菌的种类越来越多,对人类的威胁越来越大。

随着抗真菌药物的不断发展,几丁质合酶作为一个安全有效的作用靶点也进行了深入研究,虽然几丁质合酶抑制剂作为抗真菌药物并未有效地应用于临床,但是前景巨大。

目前国内外对几丁质合酶抑制剂的筛选、鉴定都十分重视,并对其作为抗真菌药物的发展及可行性做出了很多努力。

【总页数】6页(P71-76)
【关键词】几丁质合酶抑制剂;抗真菌;筛选;合成
【作者】代猛;裘娟萍;汪琨
【作者单位】浙江工业大学生物工程学院
【正文语种】中文
【中图分类】Q939.9
【相关文献】
1.药学——药物化学——芳基β-二酮酸类HIV-1整合酶抑制剂研究进展 [J], 王超;赵桂森
2.环氧合酶/5-脂氧合酶双效抑制剂研究进展 [J], 任小姗;陈志涛;陈刚
3.环氧合酶/5-脂氧合酶双重抑制剂的研究进展 [J], 李海涛;仲伯华
4.环氧合酶-2抑制剂类抗肿瘤药物研究进展 [J], 黄晓静;姚和权;吴晓明;除进宜
5.抗真菌药物靶标及其抑制剂的研究进展 [J], 徐波;蒋琰;张万年;盛春泉
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中国鲎几丁质酶的酶学性质研究

中国鲎几丁质酶的酶学性质研究林建城;王丽英;林娟娟【摘要】以中国鲎为材料,自内脏中提取几丁质酶(EC3.2.1.14),研究其酶学性质.结果表明,中国鲎几丁质酶的最适pH为5.4,最适温度为55℃;酶在pH4.6～6.0区域较为稳定,在20～60℃内具有较好的热稳定性.以胶体几丁质为底物测得中国鲎几丁质酶的米氏常数为2.175 m g/m L,最大反应速度为1.456μmol/(mL·min).金属离子Li+、Na+、K+、Mg2+和Fe2+对几丁质酶活力无影响;Ca2+和Ba2+对酶有微弱的激活作用;Co2+、Cu2+和Fe3+在低浓度时对酶有激活作用,随浓度增大则表现为抑制作用;Ni2+、Mn2+、Al3+、Cd2+、Pb2+、Zn2+和Hg2+对酶均具有不同程度的抑制作用,以Hg2+的抑制作用最显著,10 mmol/L Hg2+会使几丁质酶失活83.0％.甲醇、乙醇、异丙醇和正丙醇对几丁质酶的抑制作用均呈浓度效应,甲醇对酶的抑制作用较强;丙酮对酶有激活作用,而二氧六环和二甲亚砜在低浓度下对酶有微弱的激活作用,随浓度升高则表现为抑制作用.说明中国鲎几丁质酶活力易受环境中酸碱度、金属离子和有机溶剂的调控.【期刊名称】《水产科学》【年(卷),期】2019(038)005【总页数】8页(P702-709)【关键词】中国鲎;几丁质酶;酶学性质;金属离子;有机溶剂【作者】林建城;王丽英;林娟娟【作者单位】莆田学院环境与生物工程学院 ,福建省新型污染物生态毒理效应与控制重点实验室 ,福建莆田351100;莆田学院环境与生物工程学院 ,福建省新型污染物生态毒理效应与控制重点实验室 ,福建莆田351100;莆田学院环境与生物工程学院 ,福建省新型污染物生态毒理效应与控制重点实验室 ,福建莆田351100【正文语种】中文【中图分类】S917Broadway等[1]根据几丁质酶作用机理不同，认为其至少包含内切几丁质酶(EC3.2.1.14)、外切几丁质酶和具外切酶性质的N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶(EC3.2.1.52，NAGase)等3种组分。

几丁质合成与水解酶的抑制剂及抑制机理

几丁质合成与水解酶的抑制剂及抑制机理农业虫害和病害威胁着农业生产与食品安全。

高效且环境友好的农药是治理农业病虫害的必然选择。

几丁质是植物致病真菌、寄生线虫和农业害虫在生长发育过程中所必需的结构多糖,但是几丁质不存在于高等植物和哺乳动物体内。

如果通过小分子化合物抑制几丁质合成或水解过程中的关键酶,可以干扰病虫害的几丁质代谢,但是不影响高等植物和哺乳动物,从而实现对农作物的保护。

几丁质的合成与水解需要β-N-乙酰己糖胺酶、几丁质酶和几丁质合酶等一系列几丁质代谢关键酶参与。

本论文分别针对昆虫β-N-乙酰己糖胺酶、线虫几丁质酶和真菌几丁质合酶进行了抑制剂的筛选与抑制机理研究,并取得以下主要成果:1)真菌几丁质合酶抑制剂及抑制机理:真菌是重要的植物致病微生物。

论文以模式真菌酿酒酵母几丁质合酶为对象,建立了真菌几丁质合酶抑制剂筛选的方法,筛选得到了一系列新型几丁质合酶抑制剂。

其中,化合物S-16对酿酒酵母几丁质合酶较经典几丁质合酶抑制剂尼克霉素Z的抑制活性高出了 2.5倍。

并且,这些几丁质合酶抑制剂在100 μg/mL浓度下均表现出了对禾谷镰孢菌(Fusarium graminearum)、灰葡萄孢菌(Botrytis cinerea)和葫芦科刺盘孢菌(Colletotrichum lagenarium)等植物致病真菌的抑制活性。

接着,根据同源蛋白纤维素合酶BcsA/B与UDP的复合物晶体结构,本论文建立了酿酒酵母几丁质合酶ScCHS1与UDP的结构模型。

进而,基于几丁质合酶抑制剂与几丁质合酶底物UDP-GlcNAc的结构相似性,推测了抑制剂与几丁质合酶活性中心的结合方式,即构成抑制剂骨架结构的尿苷-酰腙基团、GlcNAc模拟基团和疏水烷基基团三个基团,分别作用于几丁质合酶催化中心的UDP结合位点、GlcNAc结合位点和受体寡糖结合通道的疏水入口。

2)昆虫β-N-乙酰己糖胺酶抑制剂及抑制机理:亚洲玉米螟(Ostrinia furnacalis)是重要的农业害虫。

昆虫微生物分离方法

昆虫微生物分离方法
昆虫微生物分离方法主要包括以下步骤：
1. 选择适当的培养基：根据需要分离的微生物的特性，选择适合该微生物生长的培养基。

2. 采集昆虫样品：从昆虫体表、肠道等部位采集样品。

3. 制备昆虫微生物悬液：将采集的昆虫样品放入无菌的容器中，加入适量的无菌水或生理盐水，用玻璃棒搅拌均匀，制备成悬液。

4. 分离微生物：将悬液倒入适宜的培养基中，培养一段时间后，观察是否有微生物生长。

若微生物生长，则进行下一步纯化。

5. 纯化微生物：在分离出初步的微生物后，可以通过划线分离法、涂布分离法等方法进行纯化，使微生物的纯度提高。

6. 鉴定微生物：通过形态观察、生理生化实验、分子生物学等方法对分离得到的微生物进行鉴定，确定其种类和特性。

7. 保存微生物：将分离纯化得到的微生物在适宜的培养基中培养，并进行低温或冷冻保存，以备后续的研究或生产使用。

需要注意的是，昆虫体表的微生物种类和数量较多，分离过程需要注意无菌操作，避免污染。

同时，不同种类的昆虫可能携带不同的微生物，因此在进行昆虫微生物分离时，需要根据具体的昆虫种类和实验目的进行操作。

昆虫Ⅱ家族几丁质酶的生理功能、结构特征及其抑制剂研究进展

昆虫Ⅱ家族几丁质酶的生理功能、结构特征及其抑制剂研究进
展
谢慧杰;丁艺;胡雪;杨青;刘田
【期刊名称】《农药学学报》
【年(卷),期】2024(26)2
【摘要】昆虫几丁质酶可以降解昆虫体壁和围食膜中的几丁质,在昆虫蜕皮等生命活动中发挥重要功能。

作为参与昆虫几丁质降解系统的关键酶,Ⅱ家族几丁质酶(ChtII)是少见的多结构域、性质复杂的几丁质酶。

对昆虫中编码ChtⅡ的基因沉默会导致昆虫蜕皮失败及死亡率增加。

对ChtⅡ的生化性质及晶体结构分析表明,其在几丁质降解系统中起到了“先锋及攻坚”的作用。

因此,ChtⅡ有望成为新的杀虫剂靶标。

本文综述了近年来关于ChtⅡ的生理功能、结构特征及其抑制剂的研究成果,可为基于昆虫几丁质酶的新杀虫剂创制提供参考。

【总页数】10页(P224-233)
【作者】谢慧杰;丁艺;胡雪;杨青;刘田
【作者单位】大连理工大学生物工程学院;中国农业科学院农业基因组研究所农业农村部基因组分析实验室;中国农业科学院植物保护研究所植物病虫害生物学国家重点实验室
【正文语种】中文
【中图分类】TQ453
【相关文献】
1.微生物来源的昆虫几丁质酶抑制剂的筛选与分离纯化
2.由真菌产生的大分子昆虫几丁质酶抑制剂的筛选和活性鉴定
3.昆虫几丁质酶基因家族功能研究进展
4.昆虫几丁质合成酶及其抑制剂
5.几丁质脱乙酰酶的生物学功能、三维结构及其抑制剂的研究进展
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土壤中微生物的分离与鉴定实验报告

Sdu微生物大实验土壤微生物的分离纯化与鉴定【实验目的】1、从各地区土壤中筛选含几丁质酶的真菌及含果胶酶的菌株；2、通过从土壤中分离纯化菌株，掌握培养基的制备与灭菌技术、微生物的筛选、分离纯化方法和无菌操作技术。

3、复习以前学过的各种染色方法，掌握生理生化试验的原理与方法。

4、掌握微生物的鉴定技术、菌种保藏技术。

【实验原理】1、微生物的分离与纯化：从混杂的微生物群体中获得只含有某一种或某一株微生物的过程称为微生物的分离与纯化。

此次实验采取平板分离法，该方法操作简便，普遍用于微生物的分离与纯化，其基本原理主要包括两个方面：a.选择适合于待分离微生物的生长条件或加入某种抑制剂造成只利于待分离微生物生长，而抑制其它微生物生长的环境，从而淘汰大部分不需要的微生物。

b.微生物在固体培养基上生长形成的单个菌落可以是由一个细胞繁殖而成的集合体，因此可通过挑取单菌落而获得一种纯培养。

获得单菌落的方法可通过稀释涂布平板法或平板划线法等技术来完成。

微生物的观察可以用显微镜观察其细胞形态，也可以用肉眼观察其菌落形态。

前者是微生物的显微镜观察技术，后者是微生物的肉眼观察技术。

2、霉菌：霉菌可产生复什分枝的菌丝体，分基内菌丝和气生菌丝，气生菌丝生长到一定阶段分化产生繁殖菌丝，由繁殖菌丝产生孢子。

霉菌菌丝体（尤其是繁殖菌丝）及孢子的形态特征是识别不同种类霉菌的重要依据。

霉菌菌丝和孢子的宽度通常比细菌和放线菌粗得多（约 3-10μm ），常是细菌菌体宽度的几倍至几十倍，因此，用低倍显微镜即可观察。

观察霉菌的形态有多种方法，常用的有直接制片观察法、载玻片培养观察法和玻璃培养观察法三种方法，本实验采用载玻片培养观察法。

3、果胶酶筛选培养基：配制以果胶为唯一碳源的筛选培养基，在该培养基上，只有能分解利用果胶的菌株才能够生长，依此来从土壤中筛选出能够产果胶酶的菌株。

刚果红（Congo Red,简称CR）是一种染料，它可与果胶形成红色复合物，但并不和果胶水解后的产物发生这种显色反应，在含有果胶的培养基中加入刚果红时，刚果红能与培养基中的果胶形成红色复合物。

生化分离技术考试题目

第一章1.1何谓生化分离技术的集成化概念？请举例加以说明。

1) 利用已有的和新近开发的生化分离技术，将下游过程中的有关单元进行有效组合(集成);2) 或把两种以上的分离技术合成为一种更有效的分离技术，达到提高产品收率、降低过程能耗和增加生产效益的目标；例子⑴多种分离、纯化技术相结合，包括新、老技术的相互渗透与融合，形成所谓融合技术；⑵生化分离技术（下游技术）与发酵工艺（上游技术）相结合或称耦合，形成系统工程；1.2说明生化分离的主要步骤并指出胞内产物和胞外产物的分离纯化流程不同之处①材料及处理来源丰富，含量相对较高，杂质尽可能少②目的物的提取将目的物从材料中以溶解状态释放出来，方法与存在部位及状态有关③分离纯化核心操作，须据目的物的理化性质，生物性质及具体条件定④浓缩，结晶，干燥⑤保存整个过程应有快速灵敏准确的分析方法来衡量效果（收率、纯度）（胞内外的区别就是在于破壁）2.1简要说明常用细胞破碎的主要方法、原理、特点、适用范围及细胞破碎今后的发展方向。

①胞捣碎法，原理：机械运动产生剪切力适用于动植物组织②高速匀浆法，破碎程度较上法好，且机械剪切力对生物大分子的破坏较小，处理量大。

原理：利用高压使细胞悬浮液通过针型阀，由于突然的减压和高速冲击撞击环使细胞破碎。

适用于：较柔软、易分散的组织细胞。

③研磨法和珠磨法适用于微生物与植物细胞④挤压瓶适用于细菌（G-）⑤超声破碎⑦物理法（反复冻融动物材料、渗透压冲击细胞壁脆弱的微生物、急冷骤热（细菌病毒等热不敏感的物质））⑧干燥法（热空气干燥法适用于酵母，真空干燥法适用于细菌，冷冻干燥法适用于不稳定的酶）⑨化学法，1、溶剂处理法丙酮、氯仿、甲苯等脂溶性溶剂可溶解胞膜上脂质化合物，使细胞结构破坏。

2、表面活性剂法添加如十二烷基磺酸钠、去氧胆酸钠等，通过破坏细胞膜而破碎细胞，释放目的物。

此法常需与其它方法结合应用⑩酶解法，1．自溶法，将欲破碎细胞在一定条件（pH、T）下保温一定时间，通过细胞本身存在的酶系的作用，将细胞破坏，使胞内物质释放。

几丁质酶防治害虫的原理

几丁质酶防治害虫的原理1. 前言大家好，今天咱们聊聊几丁质酶这个神奇的东西，它可不是啥高大上的科学名词，而是咱们在防治害虫时的“秘密武器”。

说到害虫，那可真是让人头疼的存在，尤其是农民朋友，辛辛苦苦种出来的庄稼，一不小心就被那些小虫子给糟蹋了。

简直是心里有一万只草泥马在奔腾啊！不过，别担心，几丁质酶就像是白衣骑士，冲上去帮我们解决这个大问题。

下面，就让我们一起探讨一下它的原理和效果吧！2. 几丁质酶的基本知识2.1 什么是几丁质酶？几丁质酶，听起来有点绕口，其实它就是一种能分解几丁质的酶。

几丁质是一种天然的多糖，存在于很多昆虫的外骨骼里。

想象一下，昆虫的外壳就像是他们的“铠甲”，而几丁质酶就像是能削弱这铠甲的超级英雄。

一旦几丁质被分解，昆虫的外骨骼就会变得脆弱，甚至无法生存。

这就是几丁质酶防治害虫的原理，简单明了，是吧？2.2 几丁质酶的来源那么，这个几丁质酶从哪儿来的呢？其实，它可以从一些微生物、真菌和植物中提取。

比如某些细菌和真菌在分解有机物时，就会产生这种酶。

真是大自然的鬼斧神工，居然给我们提供了这么好的防虫工具！而且，几丁质酶是天然的，使用后不会对环境造成伤害，环保又安全，真是“事半功倍”啊！3. 几丁质酶的防虫效果3.1 如何使用几丁质酶？使用几丁质酶其实也不复杂。

咱们可以把它制成喷雾剂，喷在植物上，或者直接加入土壤里。

这样一来，植物就能吸收这个“超级战士”，而那些小虫子则会自讨苦吃。

有的朋友可能会担心，这样会不会对其他昆虫有影响？其实，不用担心，几丁质酶主要针对那些害虫，对其他有益昆虫几乎没有影响，就像是“只打小偷，不伤无辜”的侠义之举。

3.2 效果如何？说到效果，那可是杠杠的！很多农民朋友在使用几丁质酶后，发现自己的庄稼长势喜人，虫害明显减少。

就像是“柳暗花明又一村”，经过几丁质酶的“洗礼”，庄稼不仅抗虫能力增强，还能提高产量。

用它来防治害虫，就像是给庄稼穿上了防虫的“铠甲”，既能抵御外敌，又不影响自身的成长，真是一举两得！4. 总结总之，几丁质酶防治害虫的原理简单明了，效果又十分显著。

微生物几丁质酶的应用研究进展

的特点。同时微生物几丁质酶在生物防治、医药等领域
也有广泛应用。
物不以几丁质代谢作为生命活动必需系统，故以几丁质酶作为靶点的生物杀虫剂和抗真菌药物具有对人畜无害
的优点。至今已报道的几丁质酶抑制剂主要有：Ａｌａｌｓ．ｏｍｄｎｒｆ、Ａｇｄｉ、Ａｇｎｒｉｉｉｉａｎ和Ｄｍｔｌａｉｎ等 ’ ｅｅａｏｍｄｙｓｉｌ。据
．
Ｋｅｒ：Ｃｈｔａｅ；Ｆｉｒｔｎ；ＣａａｔｒｓｉｓＡｐｌｃｔｏｙｗｏｄｓｉｉｓｎｈａｉｏｈｒｃｅｔｃ；ｉｐｉａｉｎ
近年来，有关几丁质衍生物如几丁寡糖、壳聚糖等
的研究与开发在国内外引起了普遍关注，它们在医药、食品、环保等众多领域的应用显示出广阔的应用前景。采用生物酶降解法生产几丁寡糖和壳聚糖是理想的途
１微生物几丁质酶
自从Ｂｎｃｅ首次报导溶几丁质芽孢杆菌Ｂｃｌｅｅｋａｉｕｌｓ
ｃｉｏｉｕ能生产几丁质酶以来，已发现了许多产几ｈｉｖｏｓｔｒｎ丁质酶的微生物，包括细菌、放线菌和真菌等。产几丁
质酶的菌株有海洋弧菌ＶｂｏＦｒｉｉｉｉｈｒｙ，ｉｉｕｎｓ，Ｖｒａｖｉｒｓｉｂｏｅ
径，与化学生产法相比具有反应条件温和、不污染环境
２微生物几丁质酶的应用现状
２１在害虫防治中具有增效作用．由于几丁质酶在真菌出芽生殖和昆虫蜕皮过程中发挥了极为重要的作用，使得几丁质酶可能成为生物杀虫剂和抗真菌药物专一性作用的靶点一。同时由于哺乳动

《发酵工程》练习

《发酵工程》练习一、选择题1．微生物的纯培养包括配置培养基、灭菌、接种、分离和培养等步骤，下列操作中，操作方法和操作目的对应正确的选项是（）A．A B．B C．C D．D2．利用细胞培养技术生产名贵中药成分人参皂苷的大致流程如图所示，下列有关叙述正确的是（）A．用于离体培养的根切块，可叫作外植体B．图中愈伤组织与根切块细胞的遗传信息相同，但分化程度更高C．与诱导愈伤组织不同、搅拌式悬浮培养需要用固体培养基D．人参皂苷为人参细胞的初生代谢物3．传统发酵技术是直接利用原材料中天然存在的微生物，或利用前一次发酵保留下来的面团、卤汁等发酵物中的微生物进行发酵，制作食品的技术。

下列相关叙述正确的是（）A．酿酒过程中密封的时间越长，酵母菌产生的酒精量就越多B．制作泡菜时坛口要密封，主要是为了避免外界杂菌的污染C．利用酵母菌制作馒头时，馒头松软与酵母菌产生的酒精有关D．在制作果醋的过程中，若条件适宜，则醋酸菌可将葡萄汁中的糖分解成乙酸4．某动物研究所利用体外受精和胚胎移植技术进行良种猪的培育，下列叙述正确的是（）A．雄性个体产生的精子体外培养获得能量后才可以受精B．将受精卵培育成原肠胚后要移植到同种的、生理状态相同的代孕母体内C．体外受精需人工模拟体内环境，营养、温度、pH等均适宜D．胚胎体外培养液在使用前高压蒸汽灭菌效果好于抗生素灭菌5．粗饲料经过微生物发酵后，其富含的纤维素、半纤维素和果胶等物质被降解为小分子，易于被畜禽采食和消化吸收。

用于饲料发酵的益生菌包括乳酸菌和酵母菌等。

生产发酵饲料的大致过程为：将适量粗饲料、益生菌和清水等拌匀，放入发酵池或容器中，然后密封发酵。

已知乳酸菌产生的乳酸能溶解碳酸钙，以下相关说法错误的是（）A．发酵过程中粗饲料可为益生菌的生长提供碳源B．发酵池应该留有排气口，防止乳酸菌发酵产生大量气体导致爆炸C．酵母菌和乳酸菌在发酵液中的位置不同，酵母菌偏向上层D．可用含有碳酸钙的固体培养基，并根据透明圈初步筛选出益生菌中的乳酸菌6．某生物兴趣小组利用酵母菌在适宜条件下培养来探究种群大小的动态变化，该实验中酵母菌数量估算值如表所示。

几丁质酶抑制剂筛选模型的建立及应用

活化后的菌株接种于液体培养基细菌３７＂Ｃ振荡培养２ｄ，放线菌２８＂Ｃ振荡培养５ｄ，培养液
５０００ｒ／ｍｉｎ离心１０ｍｉｎ，取上清检测活性。２．５几丁质酶抑制物的检测方法２．５．１初筛：平板透明圈法把酶液与筛选菌株培养液按ｌ：２的比例混合，在几丁质酶抑制化合物筛选平板上打孔，取
混合液３０此加样于孔中，观察平板透明圈的大小。在检测过程中以缓冲液作为空白对照。
剂１２】。到目前为止，比较有效的几丁质酶抑制剂主要还是ａｌｌｏｓａｍｉｄｉｎｔ３Ｊ和环五肽（ａｒｇｉｆｉｎｔ４】和
ａｒｇａｄｉｎＮ）等天然化合物，因为它们都是属于在纳摩尔浓度下就能有效发挥抑制作用的酶抑制剂。随着组合化学和天然化学的发展，化合物的数量增长巨大。在新药研究发现过程中，筛选越来越多占有重要地位１６ｊ。建立相应的药物筛选模型是大规模筛选的重要环节。本研究直接从蚕蛹中提取酶，建立以平板透明圈法为初筛法和ＤＮＳ比色法为复筛方法，从我国丰富的微生物资源中获得几丁质酶抑制化合物的生产菌株，以其从中发现对几丁质酶具有良好抑制作用的化合物，为开发具有新型作用点的杀虫抗真菌药物奠定基础。
以Ｎ．乙酰．Ｄ．氨基葡萄糖的生成速度测定酶活性大小。４５＂Ｃ下，以Ｎ乙酰．Ｄ．氨基葡萄糖为
标准，每小时产生Ｉｐ．ｍｏｌＦＬＮ．乙酰．Ｄ．氨基葡萄糖所需的酶量为一个活力单位（ＩＵ）。
胶体几丁质＋几丁质酶＿Ｎ．乙酰．Ｄ．氨基葡萄糖
在装有预热至４５＂Ｃ的０．５ｍＬ１％胶体几丁质和Ｏ．５
ｍＬ
０．１ｍｏｌ／Ｌ磷酸缓冲液（ｐＨ６．０）比色管
ＥｓｔａｂｌｉｓｈｍｅｎｔａｎｄＡｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｏｆａＳｃｒｅｅｎｉｎｇＡｓｓａｙｆｏｒＣｈｉｔｉｎａｓｅｅｓａｎｉｔｈＣ（ｉｂｈｎＩＩｎｈｉｂｉｔｏｒ

几丁质酶抑制化合物研究进展几丁质酶抑制化合物研究进展

几丁质酶抑制化合物研究进展几丁质酶抑制化合物研究进展【摘要】几丁质酶抑制化合物作为一种可开发成具有新型作用靶标的生物农药早已引起国内外生物学家地广泛关注。

近年发现几丁质酶抑制剂allosamidin对哮喘病具有一定疗效，为几丁质酶抑制化合物在医学领域的应用奠定了一定的基础。

本文就几丁质酶抑制化合物的种类、抑制机制，几丁质酶抑制化合物活性测定方法以及相关研究领域的发展前景等做一综述。

【关键词】几丁质酶抑制化合物抑制机制Advances in chitinase inhibitorsABSTRACT As a kind of novel pesticides, chitinase inhibitors have attracted many biologists′ interest. It was discovered that chitinase inhibitor, allosamidin, had certain therapeutic efficacy to asthma, which laid a foundation for chitnase inhibitorapplication in medical domain. This paper introduces several chitinase inhibitors and their repression mechanism, activity determination methods and looks forward to the development of the related research territory.KEY WORDS Chitinase; Inhibitor; Repression mechanism1 几丁质酶抑制化合物研究概况几丁质是乙酰氨基葡萄糖以β，4键连接起来的生物多聚物，是真菌细胞壁、细胞隔膜、昆虫外骨骼的主要组成成分［1］。

由真菌产生的大分子昆虫几丁质酶抑制剂的筛选和活性鉴定

由真菌产生的大分子昆虫几丁质酶抑制剂的筛选和活性鉴定吴　霞　编译几丁质酶是昆虫蜕皮过程中的一个关键酶,人们一直努力尝试将几丁质酶抑制剂开发成为具有生物合理性的昆虫生长调节剂。

先前曾有文献报道阿洛氨菌素(allosamidin)或其他一些低活性化合物为几丁质酶抑制剂,但都未进入商业化使用阶段。

因此,科研人员在积极寻求开发新颖的昆虫几丁质酶抑制剂。

在前期研究中,日本Okayama大学的T eruhiko Nitoda等人研制出一种对斜纹夜蛾(Spodoptera litu2 ra)几丁质酶抑制活性的测试方法,可应用于昆虫几丁质酶抑制剂的快速、灵敏筛选。

使用该测试方法,他们对一系列真菌培养物进行了筛选。

试验菌株生长于静止培养基中,以充分利用它们产生不同次级代谢产物的能力。

本文主要报道了对776个真菌菌株的静止培养物的筛选结果,以及有5个活性菌株产生的昆虫几丁质酶抑制剂的鉴定。

1　材料和方法111　概要阿洛氨菌素由日本东京大学的S.Sakuda博士提供。

取自S.litura蛹的几丁质酶溶液,其制备方法按照文献指导进行。

胶体几丁质亦按文献方法通过几丁质粉(日本Osaka Wako纯化学工业株式会社生产)制备得到。

几丁质酶来源于灰色链霉菌(Streptomyces griseus),糖苷酶来源于角蝾螺(Turbo cornutus),链霉蛋白酶P分别从Sigma、日本东京Seikagaku和K aken化学公司购买。

其他所用化学品均可从市场采购。

112　真菌菌株的分离真菌菌株从土样或植株叶片开始分离。

每份土样被分成3份,各自通过下列3种处理方式加以选择性分离:(1)去除细菌(在40℃下加热24h),(2)诱导孢子萌发(在50%乙醇中浸泡15min),(3)去除孢子(滗析水悬浮液)。

经过处理后的土样制成无菌蒸馏水悬浮液,然后在下述4种不同的琼脂培养基的平板上涂皿,并于20℃下进行培养。

将植株叶片上切割成1cm左右见方,用90%乙醇进行表面灭菌处理70sec,随后用1%次氯酸钠处理5min,在无菌蒸留水中漂洗。

矿产

矿产资源开发利用方案编写内容要求及审查大纲
矿产资源开发利用方案编写内容要求及《矿产资源开发利用方案》审查大纲一、概述
㈠矿区位置、隶属关系和企业性质。

如为改扩建矿山, 应说明矿山现状、
特点及存在的主要问题。

㈡编制依据
(1简述项目前期工作进展情况及与有关方面对项目的意向性协议情况。

(2 列出开发利用方案编制所依据的主要基础性资料的名称。

如经储量管理部门认定的矿区地质勘探报告、选矿试验报告、加工利用试验报告、工程地质初评资料、矿区水文资料和供水资料等。

对改、扩建矿山应有生产实际资料, 如矿山总平面现状图、矿床开拓系统图、采场现状图和主要采选设备清单等。

二、矿产品需求现状和预测
㈠该矿产在国内需求情况和市场供应情况
1、矿产品现状及加工利用趋向。

2、国内近、远期的需求量及主要销向预测。

㈡产品价格分析
1、国内矿产品价格现状。

2、矿产品价格稳定性及变化趋势。

三、矿产资源概况
㈠矿区总体概况
1、矿区总体规划情况。

2、矿区矿产资源概况。

3、该设计与矿区总体开发的关系。

㈡该设计项目的资源概况
1、矿床地质及构造特征。

2、矿床开采技术条件及水文地质条件。