微生物检验基本技能
2024年微生物检验教案
微生物检验教案一、教学目标1.知识目标：使学生了解微生物检验的基本概念、原理和方法，掌握微生物检验的基本操作技能。
2.技能目标：培养学生独立进行微生物检验实验操作的能力，提高学生的观察能力、分析问题和解决问题的能力。
3.情感目标：激发学生对微生物检验的兴趣，培养学生的团队协作精神和科学态度。
二、教学内容1.微生物检验的基本概念：介绍微生物检验的定义、目的和意义，以及微生物检验的基本流程。
2.微生物检验的原理：讲解微生物检验的基本原理，包括微生物的生长特性、染色特性、形态学特征等。
3.微生物检验的方法：介绍常见的微生物检验方法，如显微镜观察、染色技术、分离培养、生化试验等。
4.微生物检验的操作技能：教授学生进行微生物检验实验的基本操作技能，如显微镜的使用、染色技术、分离培养等。
5.微生物检验实验：设计并开展微生物检验实验，让学生亲自动手操作，提高实践能力。
三、教学重点与难点1.教学重点：微生物检验的基本概念、原理和方法，微生物检验的操作技能。
2.教学难点：微生物检验实验的操作技巧，如显微镜的使用、染色技术、分离培养等。
四、教学方法1.讲授法：讲解微生物检验的基本概念、原理和方法，以及实验操作步骤。
2.演示法：示范显微镜的使用、染色技术、分离培养等实验操作技巧。
3.实践法：让学生亲自动手进行微生物检验实验，提高实践能力。
4.讨论法：组织学生进行小组讨论，分析实验结果，解决实验中出现的问题。
五、教学过程1.导入：通过引入实际案例，激发学生对微生物检验的兴趣，引出本节课的主题。
2.知识讲解：讲解微生物检验的基本概念、原理和方法，让学生对微生物检验有一个整体的认识。
3.实验演示：示范显微镜的使用、染色技术、分离培养等实验操作技巧，让学生了解实验操作步骤。
4.实践操作：组织学生进行微生物检验实验，让学生亲自动手操作，提高实践能力。
5.结果分析：组织学生进行小组讨论，分析实验结果，解决实验中出现的问题。
6.总结与拓展：总结本节课的主要内容，布置课后作业，引导学生进一步学习微生物检验相关知识。
《微生物检验技术》课件
食品中常见的微生物种类：细菌 、霉菌、酵母菌等。
微生物在食品中的分布特点：食 品的种类、加工方式、储存条件 等对微生物的分布有显著影响。
微生物的来源：食品生产、加工 、运输、储存等环节中可能引入
的微生物。
食品中微生物的检测方法与操作
01
02
03
04
传统检测方法
培养法、镜检法等。
现代检测技术
免疫分析法、PCR技术、生物 传感器等。
消毒灭菌效果的监测
对医院环境、医疗器械等进行 微生物学检测，评估消毒灭菌 效果，确保医疗安全。
抗菌药物敏感性试验
通过抗菌药物敏感性试验，指 导临床医生合理选用抗菌药物 ，降低耐药性的产生。
感染暴发调查
在发生医院感染暴发时，进行 流行病学调查和溯源分析，查 找感染源和传播途径，采取有
效控制措施。
疫苗的研究与开发
病原微生物的分离与鉴定
从患者体内分离出病原微生物，并进行鉴定，为疫苗的研制提供基础 资料。
疫苗株的筛选
通过微生物检验技术对病原微生物进行筛选，选择适合作为疫苗株的 菌株或病毒株。
疫苗制备过程的监控
在疫苗制备过程中，对原材料、半成品和成品进行质量检验和安全性 评估，确保疫苗的安全性和有效性。
疫苗效果评价
微生物的生长与繁殖
微生物的生长
微生物生长是指微生物细胞数目的增加和质量的增加。其生 长过程分为迟缓期、对数生长期、稳定期和衰亡期。
微生物的繁殖
微生物繁殖是微生物生长的必然结果，繁殖方式包括二分裂 、出芽生殖、孢子生殖等。繁殖过程中，微生物的遗传物质 会复制并传递给后代。
微生物的生理生化特性
微生物的代谢
利用微生物降解污染物，处理废水、废气等，降低环境污染。
微生物检验基本操作技能—接种技术(食品微生物检验技术课件)
的环境中进行，必须严格遵守无菌操作规范。
1.接种针；2-接种环；3-接种钩；4-涂布棒；6-接种圈；7-接种锄；8-小解剖刀
高压蒸汽灭菌锅，接种环，牛肉膏蛋白胨培养基，培 养皿，试管，三角瓶，酒精灯，移液管，无菌水，灭 菌保藏菌种的试管 （三）灼烧接种环 （四）接种环接种 （五）恒温培养
1、接种环（针、铲）一定要保证其冷却后方可进行转接，以免 烫死微生物。
2、取试管棉塞时要轻缓，不宜用力过猛。棉塞一定要夹在手上 ，不能放在桌子上。
3、斜面接种时，所划直线尽可能直，不要划破培养基，也不要 使接种环触碰管壁或管口。
4、牢固树立无菌操作概念，细心体会无菌操作要领。
为什么在接种前一定要将接种环冷却？如 何灼烧过的接种环是否已经冷却？
检验师微生物检验知识点集锦
检验师微生物检验知识点集锦微生物检验是现代医学中的重要检验项目之一，主要用于检测病原微生物的存在和种类，以及对药敏试验进行评估。
作为初级检验师，你需要掌握以下几个方面的知识点：1.微生物基础知识-微生物的分类和命名规则：包括细菌、真菌、病毒和寄生虫等分类。
-微生物的形态和结构：掌握不同类别微生物的形态特征和结构组成，如细菌的形状、胞壁和胞质等。
-微生物的生长条件：了解微生物的生长条件，包括温度、湿度、pH值和营养物质等。
2.微生物检验方法-样品采集及处理：理解不同样品（如血液、尿液、分泌物等）的采集方法和处理步骤，以确保样品的准确性和可靠性。
-培养方法：熟悉不同微生物的培养方法，包括琼脂培养基的配制、接种方法和培养条件等。
-鉴定方法：了解常见微生物的鉴定方法，包括形态学鉴定、生化试验和分子生物学方法等。
-药敏试验：掌握药敏试验的原理和操作步骤，用于评估微生物对不同抗生素的敏感性，并为临床治疗提供参考。
3.常见病原微生物-常见病原菌：学习常见病原菌的分类、形态和致病特点，如大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、肺炎克雷伯菌等。
-常见病毒和真菌：了解一些常见的病毒和真菌的致病性和检测方法，例如流感病毒、念珠菌等。
-传染病的检测：学习不同传染病的检测方法，包括艾滋病、结核病和流行性感冒等。
4.质控和质量管理-质量控制：了解微生物检验中的质量控制措施，如内外质控、质量标准和质量评估等，确保结果的准确性和可靠性。
-安全措施：掌握微生物检验过程中的安全措施，如个人防护、试剂的正确使用和实验室的卫生管理等。
除了以上的基础知识，你还需要掌握实验中的仪器操作、数据分析和结果解读等技能。
微生物检验是一个综合性较强的检验项目，需要不断学习和实践，提高自己的技术水平和判断能力。
微生物限度检查标准操作规程
微生物限度检查标准操作规程一、引言。
微生物限度检查是指在制药生产过程中，对原料药、辅料、中间体、制剂等药品进行微生物检查的一项重要工作。
微生物限度检查的目的是为了保证药品的质量和安全，防止因微生物污染而引起的药品变质和危害患者健康的风险。
本操作规程的目的是规范微生物限度检查的操作流程，确保检查结果准确可靠。
二、适用范围。
本操作规程适用于制药企业进行微生物限度检查的操作人员，包括检验员、操作人员等。
三、术语和定义。
1. 微生物限度，指药品中允许存在的微生物的最大数量，通常以菌落形成单位（CFU）或细菌总数来表示。
2. 微生物限度试验，是指对药品中的微生物进行检查的一种实验方法，包括细菌总数、大肠杆菌、铜绿假单胞菌、霉菌和酵母菌等指标。
3. 标准菌株，指已经鉴定并保存在实验室中的具有代表性的微生物菌株。
四、操作流程。
1. 样品准备。
（1）取样品，按照规定的取样方法，从所检查的药品中取得代表性样品。
（2）样品处理，根据检测要求，对样品进行必要的处理，如稀释、均质等。
2. 培养基制备。
（1）准备培养基，根据检测要求，准备所需的培养基，包括琼脂培养基、液体培养基等。
（2）灭菌处理，对培养基进行高压蒸汽灭菌处理，确保培养基的无菌状态。
3. 菌种接种。
（1）接种方法，根据检测要求，选择适当的接种方法，包括平板法、涂布法等。
（2）接种数量，根据微生物限度试验的要求，按照规定的接种数量接种标准菌株。
4. 培养条件。
（1）温度控制，根据不同的微生物菌种，控制培养的温度，通常为30-35摄氏度。
（2）培养时间，根据微生物限度试验的要求，培养一定的时间，通常为24-48小时。
5. 菌落计数。
（1）观察菌落，根据培养基上的菌落形成情况，进行菌落计数。
（2）结果判定，根据菌落计数的结果，判定样品中微生物的数量是否符合规定的限度要求。
五、质量控制。
1. 内部质量控制，每批次微生物限度试验前，进行内部质量控制，确保实验条件的稳定性和可靠性。
微生物检验员主要的工作内容
微生物检验员主要的工作内容
微生物检验员是一种专业技术人员，其主要工作是进行微生物检验并分析测试结果。
其工作内容包括：
1. 样品收集与处理：微生物检验员需要从不同的来源收集样品，并进行处理，以确保样品的质量和准确性。
2. 检验和分析：检验员将样品放入培养基中进行培养，检查微生物的生长情况，并进行各种实验和测试，以确定微生物的类型和数量。
3. 报告和记录：微生物检验员需要记录测试结果，并撰写详细的报告。
他们需要准确地描述检测结果，并提供有关问题的建议和解决方案。
4. 设备和实验室维护：微生物检验员需要确保实验室和设备的清洁和卫生，以确保测试结果的准确性和可靠性。
5. 客户服务：微生物检验员需要与客户进行沟通，以了解他们的需求，并提供有关测试结果的解释和建议。
总之，微生物检验员需要具备广泛的微生物知识和实验室技能，以确保有效地检测和分析微生物，生成准确的测试结果和报告。
- 1 -。
微生物限度检查操作规程
微生物限度检查操作规程《微生物限度检查操作规程》一、目的微生物限度检查是用于确认产品是否符合微生物水平要求的一种分析方法。
本操作规程的目的是制定微生物限度检查的操作步骤，确保检查结果的准确性和可靠性。
二、适用范围本操作规程适用于所有需要进行微生物限度检查的产品，包括食品、医药和化妆品等。
三、操作步骤1. 准备工作：清洁实验室工作台面和仪器设备，准备所需的培养基和试剂，并确保仪器设备的正常运转。
2. 取样：按照产品的取样标准，从不同批次或不同位置进行取样，并确保取样的代表性。
3. 样品制备：将取样的产品进行样品制备，包括稀释、搅拌和过滤等步骤，以便于后续的微生物检查。
4. 培养：将样品接种在适当的培养基上，根据不同的微生物种类和要求进行培养，并进行恒温培养一定时间。
5. 计数：在培养一定时间后，对培养基上的菌落进行计数，并按照标准方法进行结果的记录和确认。
6. 结果判定：将检查结果与产品的微生物限度标准进行比对，根据结果作出是否合格的判定。
7. 结果记录：将微生物限度检查的结果进行记录，包括样品信息、操作步骤、检查结果和判定等信息，并将结果报告给相关部门或供应商。
四、注意事项1. 操作人员应具备一定的微生物检测知识和操作技能，严格按照操作规程执行。
2. 实验室应保持清洁、卫生，并进行定期消毒和验证。
3. 实验室设备应定期维护和校准，确保设备的准确性和可靠性。
4. 所使用的培养基和试剂应符合相关标准，存放在干燥、阴凉、避光的环境中。
5. 检查结果应及时报告，并根据结果采取相应的控制措施。
以上就是《微生物限度检查操作规程》的主要内容，希望能够帮助大家更好地进行微生物限度检查，确保产品质量和安全。
食品微生物检验岗位工作内容
食品微生物检验岗位工作内容食品微生物检验岗位是食品行业中非常重要的一环，主要负责对食品样品进行微生物检验，确保食品的卫生安全。
本文将从食品微生物检验的工作内容、意义及所需技能等方面进行详细介绍。
一、工作内容1. 样品处理：食品微生物检验岗位的首要任务是对食品样品进行处理。
这包括样品的接收、登记、分装等工作。
在样品接收过程中，要仔细核对样品的信息，确保样品的准确性和完整性。
接收完样品后，需按照规定对样品进行登记，记录样品的编号、来源、数量等信息。
接下来，将样品进行分装，确保每个样品都能被准确地检验。
2. 微生物检测方法选择：针对不同的食品样品，食品微生物检验岗位需要选择合适的检测方法。
常见的微生物检测方法包括培养法、快速检测法、PCR法等。
根据样品的特点和检测要求，选择合适的方法进行微生物检测。
3. 样品的制备和培养：在进行微生物检测之前，需要对样品进行制备和培养。
比如，对于液态食品，需进行预处理，使微生物更易于检测。
对于固态食品，需要进行样品的悬浮液制备，以便于后续的培养和检测。
4. 微生物培养和计数：微生物检验的关键环节是培养和计数。
将样品进行培养，使微生物在适宜的环境条件下进行繁殖。
培养时间和培养温度等条件需要根据具体微生物种类进行调整。
培养完成后，需要进行微生物计数，以确定样品中微生物的数量。
5. 结果判定和报告编写：根据微生物检测结果，进行结果判定。
如果样品中微生物数量超过卫生标准规定的限值，即为不合格。
合格的样品可以进行下一步的处理和销售。
检测结果需要进行报告编写，以便上级部门和其他相关人员参考。
二、意义和重要性食品微生物检验的工作内容具有重要的意义和价值。
首先，食品微生物检验能够对食品质量进行判定，保障食品的卫生安全。
微生物检验能够检测食品中是否存在致病菌、霉菌等有害微生物，及时发现和排除食品安全隐患。
食品微生物检验对于食品行业的合规性和法律法规的遵守具有重要意义。
根据国家相关法律法规，食品企业必须对食品样品进行微生物检验，以确保食品质量符合标准。
谈谈微生物检验操作技能及注意事项
谈谈微生物检验操作技能及注意事项微生物检验过程之中除了要保障检测环境的无菌以及工作器具的清洁之外，对于检测人员的技能操纵也有相当的要求。
为了全面保障实验室内检验操作的准确可信，应当从下面几个方面注意操作事项。
1.培养基的使用微生物的培养基础在于培养基的配置，每次根据不同的微生物培养要重新确定培养基的配置配方与流程。
配置前要确定其生产日期与最佳使用时段，在开瓶前检验密封性，确保未变质、吸潮、发霉的情况下进行配置使用。
培养基配置时需要保障称量准确，一定要将配置和灭菌放在同时进行，没有及时进行灭菌措施的培养基绝不能长时间放置，尤其不能隔夜，否则一律以污染物处理。
灭菌操作以恒温恒压为主要条件，维持一定的灭菌时间。
灭菌完成之后要放置冰箱进行保存，但最好当天使用。
保存时间不应当超过三天时间，对于难以确定保存时间的培养基，一律以污染物处理。
在培养基的使用之中，需要根据班次安排使用量。
水浴加热培养基为液态，先化开的培养基能够取出放在锅盖上缓慢冷却，但是所有的培养基都不能长期处于高温加热状态下。
（没懂起什么意思）微生物在检测时培养基温度通常要控制在45℃，过烫的情况下会导致菌群死亡，过冷会导致培养基凝聚，无法观察。
检测做样要集中进行，培养基每次打开都有可能提升杂菌污染几率，出现实验误差。
培养基除菌群外均要流出空白位置，方便对照观察。
1.检测环境的维持检测环境的维持分为检测室大环境的维持和超净工作台小环境的维持。
检测室大环境之中，每当微生物样本检测之前需要关闭窗户、空调与风扇，然后用酒精等杀毒药物对空间内进行消毒喷雾，避免检测室内的空气运动对超净工作台内部环境产生影响。
如果在检测室内有紫外灯，需要定期打开紫外灯进行杀毒操作。
（酒精擦拭消毒仪器设备，含氯消毒制剂擦拭消毒操作台面）在小环境超净工作台之中，需要对初效过滤器进行定期清洁与及时更换，在检测前将工作台进行全面清洁，使用医用酒精进行擦拭消毒。
超净工作台需要提前至少半个小时打开紫外光灯，对超净台内所有的环境进行杀毒操作。
生物检测技术基本知识和基本技能
八、试剂配制与保存
危险药物分类存放的原则及存放要求： ①易挥发药品：远离热源火源，于避光阴凉处保存，通风良好，
不能装满。 ②腐蚀性液体：放于底下，以免不慎跌下，洒出发生烫伤事故。 ③发生有毒气体或烟雾的药品：存于通风橱中，并在其中量取。 ④剧毒药品：锁上。 ⑤致癌药品：有致癌药品的明显标志，锁上。 ⑥互相作用的药品：隔离存放。 ⑦特别保存的物品：
生物检测涉及到生物化学技术、免 疫学技术、分子生物学和细胞生物学等 技术，这些技术大都用到很多有毒的、 易爆的、高温的及放射性的等化学试剂， 而且操作过程也十分严格，为了保证实 验过程中人身安全、仪器安全及实验结 果准确，因此需要学习这些基本知识和 技能。
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二、人员防护
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二、人员防护
1、在实验室工作时，任何时候都必须穿着连体衣、 隔离服或工作服。
2、气瓶内气体不可用尽，以防倒灌。
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五、安全用气
3、高压灭菌锅使用注意事项： ⊙应由受过良好培训的人员负责高压灭菌器的操作和
日常维护。 ⊙每次使用前，检查水位，加入蒸馏水到正常水位线。 ⊙在打开盖子前，确认压力已归于“0/npa”以下 。 ⊙所有要高压灭菌的物品都应放在空气能够排出并具
有良好热渗透性的容器中；灭菌器柜腔装载要松散， 以便蒸汽可以均匀作用于装载物。 ⊙高压灭菌液体时，由于取出液体时可能因过热而沸 腾，一定要选择慢排气，且要小心，以防被烫伤。 ⊙应当注意保证高压灭菌器的安全阀没有被高压灭菌 物品中的纸等堵塞。
生物细菌毒素污染：生物实验室的通风设备设计不完善或实验过程个人 安全保护漏洞，会使生物细菌毒素扩散传播，带来 污染，甚至带来严重不良后果。
放射性污染：同位素标记探针
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六、实验室废液处理
微生物检验基本技术—无菌技术
（2）灭菌和消毒
消毒：用较温和的物理或化学方法杀死物体上绝大 多数微生物的措施，实际上是部分灭菌。例如，酒 精擦拭。
灭菌：采用强烈的理化因素使任何物体内外所有微 生物永远丧失其生长繁殖能力的措施。
干热灭 菌 湿热灭菌
灭 菌
过滤除菌
紫外线杀菌
化学药剂杀菌
其中高压蒸汽灭菌是微生物学研究和教学中应用最广泛、 效果最好的湿热灭菌方法。
桶内消毒； ⑧操作时禁止再培养物上方移动手臂；
（2）接种 1、接种的一般流程 接种工具灭菌 防止污染标本 接种工具冷却
沾取标本
接种
接种工具灭菌 防止污染环境
2、到平板
3、斜面接种技术
斜面接种是从已生长好的菌种斜面上挑取少量菌种移植至另一新鲜斜面培养基上的接种方法。
用于好气性微生物的接种。
具体操作： ①贴标签：接种前在试管上贴上标签，注明菌名、接种日期、接种人姓名等，贴在距试管口 约2到3厘米处，也可使用记号笔标记。 ②点燃酒精灯。 ③接种： 1）手持试管 将菌种管和待接斜面的两支试管用大姆指和其他四指握在左手中，使中指位于两试管之间部 位。斜面面向操作者，并使它们位于水平位置。
斜面接种示意图
4、液体接种 具体操作： 与斜面接种基本一致，只是在将接种环送入液体培养基时使环在液体与 管壁接触的地方轻轻磨擦，使菌体分散，塞上试管塞再轻轻摇匀。 如果菌种是培养在液体培养基中时，一般用移液管或滴管接种。
5、划线接种 目的：使混合的细菌呈单个分散生长，形成单个菌落，以便获得纯菌、 活菌计数。 方法： ①分区划线法：适用于含菌量较多的标本 ②连沾有菌种的接种环伸入另一支待接斜面试管。从斜面培 养基底部向上作“Z”形来回密集划线，勿划破培养基。有时也可用接 种针仅在斜面培养基的中央拉一条直线作斜面接种，直线接种可观察不 同菌种的生长特点。
3.4细菌生化鉴定技术卫生微生物检验实验方法与技能
附录
(1) 菌种 • 大肠埃希菌、伤寒沙门
菌、产气肠杆菌、变形 杆菌。
(2) 培养基、试剂 • 微量生化反应管，KIA
斜面，MIU半固体 • 靛基质试剂、甲基红试
剂、VP试验甲/乙液。
【思考题】
• 简述IMVC组试验的原理、结果判断及应用。 • 简述KIA复合试验的原理及结果判断。
2023/12/28
1. 糖发酵试验
【原理】
– 各种细菌含有不同的分解糖（苷、醇）的酶，对糖 （苷、醇）分解能力也各不相同，有的不分解，有的 分解后仅产酸，有的分解后产酸产气，故可用来鉴别 细菌。
【方法】
– 将大肠埃希菌和伤寒沙门菌分别接种葡萄糖、乳糖发 酵管，35℃培养18-24h 观察结果。
【结果】
– 首先确定细菌是否生长，细菌生长者培养基呈混浊状： – 不分解糖，培养基顔色与接种前无变化，以“-”表示；
6. 克氏双糖铁（KIA）复合试验
【原理】
– 该培养基用酚红指示剂，在酸性时呈黄色，碱性时呈红色。 – 含葡萄糖和乳糖，前者是后者的1/10。 – 能发酵乳糖或同时发酵G，产酸量大，底层和斜面均变黄。 – 只发酵G，产酸量少，斜面部分挥发、氧化，恢复红色。
底层缺氧，酸不被氧化依然黄色。 – 产气，琼脂出现裂隙。 – 产硫化氢，遇铅或铁离子形成黑色沉淀。
VP 试验 左侧：产气肠杆菌阳性（变红）；
右侧：大肠埃希菌阴性
5. 枸橼酸盐（或柠檬酸盐）利用试验（C）
【原理】
– 当细菌可以利用铵盐作为唯一氮源，同时柠檬酸盐 为惟一碳源时，可在柠檬酸盐培养基上生长，分解 柠檬酸盐为碳酸盐，使培养基变碱，指示剂溴麝香 草酚蓝由绿色变为深蓝色为阳性，培养基不变色 （绿色）为阴性。
微生物检验技能自我评价
微生物检验技能自我评价
1. 微生物培养技术:
- 熟练掌握无菌操作技术,能够正确进行接种、划线等基本操作。
- 熟悉各种常用培养基的配制和使用方法。
- 能够正确判断和鉴定细菌的生长特征。
2. 显微镜操作技能:
- 熟练使用生物显微镜进行细菌观察和鉴定。
- 能够正确制作和观察细菌的简单染色和复染色标本。
- 具备对细菌形态特征进行描述和识别的能力。
3. 生化鉴定能力:
- 熟悉常用的生化鉴定试验,如糖发酵试验、氧化酶试验等。
- 能够正确操作和判读各种生化试验的结果。
- 具备根据生化反应特征对细菌进行初步鉴定的能力。
4. 抗菌药物敏感性测试:
- 熟练掌握各种抗菌药物敏感性测试方法,如纸片扩散法、肉汤稀释法等。
- 能够正确判读和解释抗菌谱结果。
- 了解抗菌药物的作用机制和临床应用。
5. 实验数据分析与报告撰写:
- 能够正确记录和整理实验数据。
- 具备对实验结果进行分析和讨论的能力。
- 熟练撰写实验报告,报告内容完整、逻辑清晰。
6. 实验室安全操作:
- 熟知微生物实验室的安全规程和防护措施。
- 能够正确处理和处置实验室废弃物。
- 具备应急处理能力,能够采取适当措施应对实验室意外情况。
我在微生物检验方面具备一定的基础理论知识和实操技能,但仍需要在实践中不断积累经验,提高专业水平。
微生物检验操作技能及注意事项
微生物检验操作技能及注意事项在微生物检验操作过程中，要保证检测环境(如超净台、检测室)以及所用工器具的洁净程度，同时保证人员各种操作的规范性，尽量保证其无菌性，防止因人为原因操作失误而出现误差结果，同时在适宜温度进行培养，为合理决策和指导生产提供依据。
为保证检测结果的准确性，我们应做好以下几个方面：一、培养基的灭菌及使用1.每次配制时，要注意其生产日期是否在保质期内，查看其开瓶日期及瓶口密封性，保证其未变质，并且未吸潮。
2.培养基配制时，称量要准确，包括盐水的分装要准确。
3.一定要保证现配制现灭菌，未灭菌的配好培养基不能长时间放置，更不可隔夜。
4.灭菌时要保证恒温、恒压，同时要保证有效的灭菌时间。
5.灭菌过的培养基要冰箱保存，可保存一周，一般不超过 3 天。
而且要遵循“先入先出”原则，先配制的要先使用。
6.在使用时，要根据当班次的使用量，用水浴锅先将培养基溶化为液态，然后及时调低水浴温度（先化好的可从水浴取出，放在水浴锅锅盖上）待用，千万不可长时间使培养基处于高温状态。
7.做产品微生物检测时，倾倒培养基温度在 45℃左右，不可过烫，避免将菌烫死；也不可过凉，化好的培养基又结块凝固，不便于观察结果。
8.每瓶培养基均要做空白。
9.尽量集中做样，避免频繁打开同一瓶培养基瓶塞，增大培养基的污染几率，出现误差结果。
10.培养基剩余过少时，可先将其倾倒成空白用板。
二、检测环境的维持大环境（检测室）1.检测时，窗户和空调要关闭，或用酒精对房间进行喷雾消毒，避免房间内空气流通影响超净台内部环境（最好在有通排风系统的恒温恒湿无菌间进行操作）。
2.如果在微生物检测室进行检测，要定期开启紫外灯，对房间进行杀菌。
小环境（超净工作台）1.定期清洁初效过滤器，要及时更换。
2.检测前，将超净台内部进行清洁，用 75%酒精进行擦拭消毒，并提前半小时将超净台紫外灯打开，对超净台内部环境进行杀菌。
3.关紫外灯，开风机，调整合适进风量，风量不可过低。
3.6药敏试验卫生微生物检验实验方法与技能
含药纸片 抑菌圈
2. 培养基和抗菌药物纸片
抗菌药物纸片：选择直径为6.35mm，厚1mm，吸水量为 20μl的专用药敏纸片。
培养基：水解酪蛋白（M-H）琼脂，倾注直径为90 mm的平 板，厚度 4±0.5 mm。
Hale Waihona Puke 3. 实验方法①平板制备：将在约56℃恒温的无菌M-H琼脂倾注直径为 90mm的平板，其厚度 4mm。 ②菌液准备：从平板上无菌挑取4～5个菌落，置无菌生理盐水， 混匀制成菌悬液，校正浊度为0.5麦氏浊度。
试管架、酒精灯等
2023/12/28
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一、纸片扩散法（K-B法）
1. 原理：
– 含有定量抗菌药物的纸片贴在已接种测试菌的琼脂平板上， 纸片所含的药物吸取琼脂中的水分溶解后便不断向纸片周 围区域扩散，形成递减的梯度浓度。在纸片周围抑菌浓度 范围内的细菌生长被抑制，形成透明的抑菌圈。
– 抑菌圈的大小反映测试菌对测定药物的敏感程度，并与该 药对测试菌的最低抑制浓度（minimal inhibitory concentration，MIC）呈负相关，即抑菌圈愈大，MIC愈 小。
抑菌圈直径(mm)
耐药 中介
敏感
≤13 14~16 ≥17
≤17 18~20 ≥21
≤12 13～14 ≥15
≤13 14～22 ≥23
≤15 16～20 ≥21
≤19 20~22 ≥23
相应MIC值 (μg/ml)
耐药
中介
敏感
≥32
16 ≤8
≥128
32~64 ≤16
≥16
8
≤4
≥8
1~4
≤0.5
2023/12/28
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⑤孵育：35℃培养16～18 h，对苯唑西林和万古霉素等敏感应 培养24h。
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菌落的形状、边缘和表面构造 1.圆形、边缘整齐、表面光滑；2．圆形、边缘整齐、表面有同心圆 ；3．圆形、叶状边缘、表面有放射状皱褶；4．圆形、锯齿状边缘 、表面较不光滑；5．不规则形、波浪状边缘、表面有不规则皱纹 ；6．圆形、边缘残缺不全、表面呈颗粒状；7．毛状 ；8根状
细菌在固体培养基中的生长情况
细菌生化鉴定管编码
肠杆菌科细菌生化鉴定管
非发酵细菌生化鉴定管 弧菌科细菌生化鉴定管 奈瑟氏菌细菌生化鉴定管 酵母样真菌糖同化试验鉴定管
糖发酵实验
将糖发酵管甩至两端，标记后折断，每组细菌接种 于两套糖发酵管中，倒立37℃培养24h。
药敏试验
药敏试验
药敏试验
菌种的保藏与复壮
菌种衰退的基本原因是变异，变异是不 可避免的，而减缓变异速度则是可能的。 不良环境条件能促进变异，频繁或过多 传代也是造成衰退变异的重要原因。 为菌种创造良好条件，减缓菌种衰退， 这就是菌种保藏与复壮工作。
微生物检验基本技能
微生物及免疫学科组
内 容
•
•
无菌技术
安全要求
•
•
微生物分离培养（细菌）
微生物保藏
微生物检验技术
1.形态学检测技术（染色、镜检技术） 3.基于生理生化特征的检测技术
2.培养特征检测技术（计数、生长性状） 4.致病性检测技术
5.药物敏感性检验技术 6.血清学检测技术
微生物检验技术
物理消毒灭菌法
热力灭菌法 辐射杀菌法 滤过除菌法 超声波杀菌法 干燥与低温抑菌法
热力灭菌法
干热灭菌法— 焚烧：废弃物、尸体
灼烧：接种环、试管口 干烤：玻璃器皿 红外线：医疗器械
湿热灭菌法— 巴氏消毒法：61.6-62.8 ℃30min或71.7
℃15-30s,主要用于牛乳消毒。
煮沸法 流动蒸汽消毒法 间歇蒸汽消毒法 高压蒸汽灭菌法
细菌的营养物质
二. 细菌的营养物质：水、碳源、氮源、无机盐、生长因子。
基本概念
营养物质:能够满足机体生长、繁殖和完成各种生理 活动所需要的物质。 营养:微生物获得和利用营养物质的过程。
营养物质是微生物生存的物质基础，而营养是微生 物维持和延续其生命形式的一种生理过程。
微生物的营养要求
二、营养物质及其生理功能
糖发酵试验 VP试验 甲基红试验 枸橼酸盐利用试验 吲哚试验
硫化氢试验
尿素酶试验 自动化仪器分析
细菌的代谢产物
分解代谢产物和细菌的生化反应
VP试验 糖 的 发 酵 甲基红试验 单糖发酵试验
蛋 白 质 的 发 酵
吲哚试验 其 他 试 验 尿素酶试验
硫化氢试验
枸橼酸盐利用试验
糖发酵试验
辐射杀菌法
• 紫外线
波长200-300nm的紫外线具有杀菌作用。
其主要作用于DNA，使一条DNA链上相邻的两个胸腺嘧 啶共价结合形成二聚体，导致细菌变异和死亡。
• 电离辐射
高速电子、X射线、γ射线
• 微波
波长1mm~1m
滤过除菌法
赛氏滤器 玻璃滤器 薄膜滤器
化学消毒灭菌法
消毒剂的种类：酚类、醇类、重金属盐类、氧
这是一种常用的简便方法。 放在4℃冰箱内保藏，这种温度条件下不能使菌体进入休眠， 而仅是抑制微生物的生命活动。因此，保藏时间不宜过长，一般不 超过1～2个月为宜。 本方法虽然简便，但由于菌株处于较高的水平活性下，这对保 藏株的性状是不利的，因此，生产菌种一般不采用此法保藏。
(二)低温定期移植法
斜面：把培养好的斜面菌种放在低温干燥处保存，定期移植， 一般3～6个月移植一次(视菌种特征而定)。 穿刺培养定期移植法：保藏细菌效果较好。穿刺培养是将含 0.6％～0.8％的琼脂培养基装试管灭菌后直立冷凝后，用接种针尖 挑取少量菌体，垂直刺入琼脂培养基中心，放在适当温度下培养， 待菌长好后即可放低温保存，此法较斜面保存有利，大肠杆菌可保 藏2年以上不发生明显变异。
增高，造成细胞水分外渗而大量脱水，可能使细胞死亡。
如快速降温，胞内也很快形成冰晶，胞内外渗透压基本平衡， 同时胞内冰晶较小，对细胞及原生质膜的损伤也较小，关的保藏方法，如冷冻干燥法、超低温保藏法等，都 是利用低温条件下细胞与环境的特殊平衡原理而设计的。
(一)低温保藏法
微生物的营养要求
4.生长因子
那些微生物生长所必需而且需要量很小，但微生物 自身不能合成的或合成量不足以满足机体生长需要 的有机化合物 。 微 生 物 生长因子 胆碱 硫胺素 需要量（ml-1） 6ug 0.5ng
III型肺炎链球菌 金黄色葡萄球菌
白喉棒杆菌 破伤风梭状芽孢杆菌 肠膜状串珠菌
B-丙氨酸 尿嘧啶 吡哆醛
7.免疫荧光抗体技术 8.酶联免疫技术 9.放射免疫分析技术 10.免疫金技术 11.抗体芯片技术 12.复合检测技术 免疫PCR技术 13. 微生物自动化仪器与检测技术 14. 生物传感器检测技术
微生物分子生物学检验技术
核酸探针技术， PCR技术， 环介导等温扩增技术， 荧光定量PCR技术， 固相基因芯片技术， 液相基因芯片技术。
1.5ug 0-4ug 0.025ug
微生物的营养要求
5.无机盐 为微生物细胞生长提供碳、氮源以外的多种重要 元素（包括大量元素和微量元素）的物质，多以 无机盐的形式共给。
大量元素：P、S、K、Mg、Ca、Na、Fe （10-3~10-4mol/L）
微量元素：Cu、Zn、Mn、Mo、Co （10-6~10-8mol/L）
一、菌种保藏
现行的菌种保藏方法有下列诸种: (一)低温保藏法 (二)低温定期移植法 (三)石蜡油低温保藏法 (四)干燥保藏 (五)甘油管保藏法 (六)真空冷冻干燥法 (七)液氮超低温保存
低温保藏菌种
低温是保藏菌种的重要因素，也是常用的一种简单易行的方法。 在作低温保藏时，注意尽量不损伤细胞。 在缓慢冷冻时，胞外基质一般较快结冰而形成冰晶使基质浓度
微量元素
特殊分子结构成分（Co、Mo等）
微生物的营养要求
6.水
水的生理功能（PAGE80）
①起到溶剂与运输介质的作用，营养物质的吸收与代谢产 物的分泌必须以水为介质才能完成； ②参与细胞内一系列化学反应； ③维持蛋白质、核酸等生物大分子稳定的天然构象； ④因为水的比热高，是热的良好导体，能有效地吸收代谢 过程中产生的热并及时地将热迅速散发出体外，大而有效 地控制细胞内温度的变化； ⑤通过水合作用与脱水作用控制由多亚基组成的结构，如 微管、鞭毛的组装与解离。 ⑥保持充足的水分是细胞维持自身正常形态的重要因素。
碳源 氮源 能源
无机盐 生长因子 水
微生物的碳源谱
类 型 元素水平 化合物水平 培养基原料水平 牛肉膏、蛋白胨、 花生饼粉等 一般氨基酸、明胶等
C· O· X H· N·
C· O· H· N C· O H· C· H 无 机 碳
复杂蛋白质、核酸等
多数氨基酸、简单蛋白 质等
有 机 碳
糖、有机酸、醇、脂类 等
细菌的培养基及性状观察
厌氧罐
三、细菌的分离培养及性状观察
在细菌学检验中，细菌的分离培养是重要的基本技术之一。 从混杂微生物中获得单一菌株纯培养的方法称为分离；纯培养是 指一株菌种或一个培养物中所有的细菌都是由一个细胞分裂、繁 殖而产生的后代。 分离培养的目的在于从被检材料中，或者从污染的众多杂 菌中分离出纯的病原菌。细菌分离培养应先从被检材料或病料中 分离培养单个菌落，然后钓取可疑菌落进行纯培养，再将纯培养 物移植培养。
按其物理状态分类：固体培养基、液体培养基、半固体培养基。 按其成分分类：合成培养基、天然培养基。
细菌的生长的环境因素
1. 营养物质 2. 氢离子浓度(pH) 3. 温度 4. 渗透压 5. 气体——专性需氧菌：具有完善的呼吸酶系统，仅能在有氧环境下生长。
微需氧菌：在低氧压（5%-6%）生长最好。 兼性厌氧菌：兼有有氧呼吸和无氧发酵两种功能，但以有氧时 生长较好。大多数病原菌属于此。 专性厌氧菌：缺乏完善的呼吸酶系统（氧化还原电势高的呼吸 酶、分解有毒氧基团的酶），只能在无氧环境中 进行发酵。
(二)低温定期移植法
斜面定期移植与穿刺移植法有其缺陷
容易发生遗传变异，连续传代可使一些性状 丢失或减弱，也易于污染杂菌。因此，一些 贵重菌株不宜用此法保藏。
(三)石蜡油低温保藏法
原理：是在长好的斜面菌上覆盖灭菌的 液体石蜡，达到菌体与空气隔绝，使菌处于 生长和代谢停止状态，同时石蜡油还防止水 分蒸发，在低温下达到较长期的保藏菌种的 目的。保藏温度要求在-4～4℃下。液体石蜡 法适用于不产孢子的菌种。
烃类
葡萄糖、蔗糖、各种淀粉、 糖蜜等
天然气、石油及其不同馏份、 石蜡油等
C(?)
C· O
—
CO2
—
CO2
C· X O·
NaHCO3
NaHCO3、CaCO3、等
微生物的氮源谱
类 型 元素水平 N· H· X C· O· N· H· C· O N· H 无 机 氮 化合物水平 复杂蛋白质、核酸等 培养基原料水平 牛肉膏、酵母膏、饼粕 粉、蚕蛹粉等
一、菌种保藏
微生物菌种保藏目的是要使菌种性状 保持稳定,力求把这种衰退现象推迟减缓 到最低限度。
菌种保藏
菌种保藏有许多的方法，其共同的目标是把菌株 的性状保存下来，防止退化、死亡或杂菌污染。 保藏是将获得的纯菌种以其休眠和停止生长的条 件下保藏。 微生物生长要求适宜的温度、水分、空气和营养 物质等，如将菌种处于低温、干燥、无氧和缺乏 营养的条件下，就可以使菌种暂时处于休眠状态。
一、消毒与灭菌
消毒(disinfection)：杀死物体上病原微生物的方法，并不一定 能杀死含芽胞的细菌或非病原微生物。用以消毒的药品称为消毒 剂(disinfectant)。 灭菌(sterilization)：杀灭物体上所有微生物的方法。灭菌比消 毒要求高，包括杀灭细菌芽胞在内的全部病原微生物和非病原微 生物。 抑菌(bacteriostasis)：抑制体内或体外细菌的生长繁殖。常用 的抑菌剂为各种抗生素。 防腐(antisepsis)：防止或抑制体外细菌生长繁殖的方法。细菌 一般不死亡。 无菌(asepsis)：不存在活菌。