观赏鱼粪便中细菌对养殖水体pH的影响

云南农业大学

2011级水产微生物学

实验报告

实验题目：观赏鱼粪便中细菌对养殖水体pH的影响

学院名称：动物科学技术学院

专业（班级）：水产养殖学___姓名：_______

学号：_________________________________

起止日期：2013、4、8——2013、6、2

指导教师：李___________

目录

2011级水产微生物学实验报告 (1)

目录- (2)

一、目的要求 (3)

二、基本原理 (3)

三、材料与仪器 (4)

四、操作步骤 (4)

（1）.培养基的制备与灭菌 (5)

（2.）鱼体解剖 (5)

（3.）病料的采集及分离 (5)

1.采集病料 (5)

2.平板划线分离 (6)

(4).细菌的移植及纯培养 (6)

(5.)细菌的生化实验 (6)

1.糖发酵试验 (6)

2.甲基红试验 (6)

3.V-P试验 (6)

4.吲哚试验 (7)

5.硫化氢试验 (7)

6.尿素酶试验 (7)

7.枸橼酸盐利用试验 (8)

五、结果结果及相关照片 (8)

六、注意事项 (9)

七、心得体会 (10)

八、参考文献 (10)

九、致谢-------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------—10—

观赏鱼粪便中细菌对养殖水体

pH的影响

【摘要】随着物质生活的丰富和水平的提高,人们更要求充裕的精神生活方式，日益从温饱型向享受型发展。当今世界各国,不论发达国家与发展中家,都在兴起一种观赏鱼热，使人们业余生活充满了美的享受。若管理不善，鱼体粪便中的细菌大量增殖必然会引起水体pH的改变，从而降低观赏价值。

【关键词】观赏鱼；观赏价值；粪便；pH改变

[Abstract]With a rich material life and higher level,more people require plenty of spiritual life, increasingly from subsistence to enjoy the type of development.In today's world,both developed countries and developing countries,are on the rise of an ornamental fish hot,make people amateur life is full of beauty.If not properly managed,fish fecal bacterial proliferation will cause water pH changes,thereby reducing the ornamental value.

[K eyword]ornamental fish;ornamental value;feces;pH changes

一、目的要求

1.了解及掌握培养基制备的基本原则和要求；

2.学会病料的采集

3.了解并掌握细菌分离及纯纯化过程中的钓菌、纯培养及移植技术等操作的基本要领；

4.学习并掌握细菌抹片的制备及革兰氏染色的步骤，了解显微镜油镜的原理并掌握其使用方法，

学会通过镜检判定革兰氏染色结果；

5.了解细菌的生化实验并学会能通过结果判断不同细菌的生理生化状况及其对水体的影响。

二、基本原理

通过在平板上划线，将混杂的细菌在琼脂平板表面充分的分散开，使单个细菌能固定在一点上生长繁殖，形成单个菌落，以达到分离纯种的目的。细菌培养是一种用人工方法使细菌生长繁

殖的技术。培养时应根据细菌种类和目的等选择培养方法、培养基，制定培养条件（温度、PH 值、时间、对氧的需求与否等）。菌落是由单个细菌细胞或同种的多个细胞在适宜固体培养基表面或内部生长繁殖，形成肉眼可见的子细胞群落，有一定形态、构造等特征的子细胞的集团，称之为菌落。纯培养是指一株菌种或一个培养物中所有的细菌都是由同一个细菌分裂、繁殖而产生的后代。

三、材料与仪器

1.配制普通营养琼脂培养基的材料：牛肉浸膏(0.3%～0.5%)、蛋白胨(1%)、氯化钠(0.5%)、磷酸氢二钾(0.05%)、琼脂(2%)、蒸馏水(95.95％～96.15％)；试管、培养皿、电炉、量筒、耐高温容器、天平、PH试纸、酸和碱、过滤装置、棉塞、棉线、湿热高压灭菌锅

2.解剖用具﹙剪刀、镊子、解剖刀、解剖盘、酒精灯、烧杯、蒸馏水﹚；

3.普通营养琼脂平板、接种环、普通营养琼脂斜面、37℃恒温培养箱

4.载玻片、接种棒、95％酒精、甲醇、冰醋酸；革兰氏染色液；显微镜、香柏油、二甲苯、擦镜纸等；

5.分离纯化后的待检样品以及用于生化实验的培养基；

6.菌种：观赏鱼鱼粪便

四、操作步骤

（1）.培养基的制备与灭菌

1.选择配方，准确称量

2.溶解、融化（注意补充水分）

3.调节PH值

4.过滤、分装

5.塞棉塞及包扎

6.湿热高压灭菌

7.倒平板，摆放斜面

8.无菌检查

（2.）鱼体解剖

1.准备一条新鲜健壮的鲤鱼；

2.左手握鱼，右手持解剖剪，先在肛门前方剪一小的横切口，然后将解剖剪镦头插入，沿腹中线向前剪开直至鳃盖下方，然后自臀鳍前缘向左侧背方体侧剪上去，沿脊柱下方向前剪到鳃盖后缘，将左体侧全部剪下去，呈显内脏。再用解剖针将肠分离出来，后用解剖剪将肠剪开，提取出肠粘膜并放入试管中，加入无菌蒸馏水，充分震荡，制成悬液，将悬液移植到已准备好的培养皿中进行培养。

（3.）病料的采集及分离

1.采集病料

将鱼粪溶解于装有少量蒸馏水的试管中，取上清液

2.平板划线分离

由接种环以无菌操作沾取少许待分离的材料，在无菌平板表面进行平行划线

（1）.将接种环放在火焰上，由下至上灼烧灭菌；（2）.在火焰旁冷却接种环，打开待分离材料容器；（3）.将试管口通过火焰；（4）.将冷却的接种环伸入菌液中，沾取一环菌液；（5）.将试管口通过火焰，并塞上棉塞；（6）.左手持平皿，用拇指、食指及中指将皿盖打开一侧（以角度小为佳，以免空气中的细菌污染），将沾有被检材料的接种环伸入平皿，并涂于培养基一侧，然后自涂抹成30～40°角，以腕力在平板表面轻轻地分区划线；（7）.划线完毕，将平板倒置，放入培养箱中培养。

(4).细菌的移植及纯培养

1.将划线分离培养37℃，24h的平板从温箱中取出，挑取单个菌落，经涂片、染色(革兰氏染色的步骤1.草酸铵结晶紫溶液染色1-3分钟、水洗

2.革兰氏碘液染色1分钟、水洗

3.95%酒精脱