细菌的人工培养方法及意义
细菌的培养
细菌培养细菌培养是指在体外环境中使用特定培养基和其他条件来促进细菌生长的一种方法。
它可以帮助我们在有限的条件下大量培育细菌，从而进行有关细菌的研究和应用。
细菌培养是一种用人工方法使细菌生长繁殖的技术。
细菌在自然界中分布极广，数量大，种类多，它可以造福人类，也可以成为致病的原因。
大多数细菌可用人工方法培养，即将其接种于培养基上，使其生长繁殖。
培养出来的细菌用于研究、鉴定和应用。
细菌培养是一个复杂的技术。
培养时应根据细菌种类和目的等选择培养方法、培养基，制定培养条件（温度、pH值、时间，对氧的需求与否等）。
一般操作步骤为先将标本接种于固体培养基上，做分离培养。
再进一步对所得单个菌落进行形态、生化及血清学反应鉴定。
培养基常用牛肉汤、蛋白胨、氯化钠、葡萄糖、血液等和某些细菌所需的特殊物质配制成液体、半固体、固体等。
一般细菌可在有氧条件下，37℃中放18～24小时生长。
厌氧菌则需在无氧环境中放2～3天后生长。
个别细菌如结核菌要培养1个月之久。
由于细菌无处不在，因此从制备培养基时开始，整个培养过程必须按无菌操作要求进行，否则外界细菌污染标本，会导致错误结果；而培养的致病菌一旦污染环境，就会引起交叉感染。
以疾病诊断为目的进行的培养，要选择合适的标本（血、尿、便、脓液、分泌物等），并应结合临床情况解释所得结果。
以光合细菌培养方法为例。
光合细菌培养的方法，按次序分为容器、工具的消毒，培养基的制备，接种和培养管理四个步骤。
（一）容器、工具的消毒参考、此处从略。
（二）培养基的制备1．培养用水如果培养的光合细菌是淡水种，菌种培养可用蒸馏水，生产培养可用消毒的自来水（或井水）配制。
如果培养的光合细菌是海水种，则用天然海水配制培养基，注意在海水中加入磷元素时，不能用磷酸氢二钾，应用磷酸二氢钾，不然会产生大量沉淀。
2．灭菌和消毒菌种培养用的培养基应连同培养容器用高压蒸气灭菌锅灭菌。
小型生产性培养可把配好的培养液用普通铝锅或大型三角烧瓶煮沸消毒。
细菌的人工培养
人工培养细菌的意义
在医学中的应用：诊断；细菌鉴定；生物制品。 在工农业生产中的应用 ： 在基因工程中的应用
Stationary Phase
Logarithmic growth phase
Death Phase
Lag Phase
细菌在培养基中生长现象
固体培养基：菌落colony
平板接种
巧
克
杂菌污染
力
平
板
鉴别及选择培养基
EMB琼脂平板上大肠菌 SS琼脂平板上大肠菌为
菌落具有金属光泽
粉红菌落
Control organisms : Escherichia coli : Pink colonies (lactose fermentation) Proteus mirabilis : Colorless colonies ,no spreading Enterococcus sp. : No growth
Control organisms : Escherichia coli : A/A (G) Shigella flexneri : K/A Proteus vugaris : K/A, H2S Pseudomonas aeruginosa : K/N
Incubate : Aerobic 35° C, 24 hrs Shelf life : 8 weeks Price (Baht) : 5 (return tube)
Lowenstein-Jensen Medium
细菌的人工培养
大肠杆菌在不同培 养基上形成的菌落
畜禽疫病防治 第1章 疫病的病原 第一节 细菌
细菌在固体培养基中的生长情况
菌落（R型）
固体培养基中 菌落（S型）
菌苔
细菌在固体培养基中的生长情况
光滑型菌落
粗糙型菌落
粘液型菌落
液体 培养基
斜面 培养基
纯培养 (pure culture)
菌落(colony)
三、人工培养细菌的意义
畜禽疫病防治 第1章 疫病的病原 第一节 细菌
（一）病料的采集、保存及运送
采集原则
无菌采病料 适时采病料 病料中病原含量多 采集适量病料：至少 检测量的4倍 低温保存 尽快送检 做好记录
（二）细菌的形态检查
1.病料处理
将病料涂成薄而均匀的涂片→室温下自然干
燥→若为细菌培养物涂片火焰固定 常用的染色方法有：革兰染色法、美蓝染色 法、瑞氏染色法和姬姆萨染色法
OH二乙酰 + 含胍基 化合物
（—）
（ +）
红色（+）
3、甲基红(methyl
red)试验：
葡萄糖
丙酮酸 （pH值>5.4） 甲酸、乙酸（红色）
（pH<4.5）
（—）
（+）
（五）动物接种试验
意义
为了证实所分离 菌是否有致病性 本动物
脑内接种
试验动物
静脉注射 腹腔注射
2. 毒素
来源：细菌生长繁殖中产生和释放的毒性 成分
作用：可直接或间接损伤宿主细胞、组织
和器官，干扰其生理功能
种类：外毒素和内毒素
接种途径
畜禽疫病防治 第1章 疫病的病原 第一节 细菌
一、致病性与毒力
人工培养细菌
细菌的人工培养人工制备营养充足的培养基并提供适宜的温度、气体、pH等培养条件，即能使细菌在体外环境迅速生长繁殖。
细菌培养对临床上病原菌的分离鉴定、制备抗生素、制备疫苗等生物制品都是必不可少的。
一、培养基的制备原则：1、必须有充足的营养。
2、合适的酸碱度。
3、绝对无菌。
二、培养基的制备培养基是用人工方法将多种营养物质按照各类微生物生长的需要而合成的一种混合营养料。
常用的培养基有基础培养基、营养培养基、选择培养基、鉴别培养基、厌氧培养基等。
按照培养基的物理性状可分为液体，固体和半固体三类。
以下介绍常用基础培养基的制备。
（一）肉汤培养基：制法：称取营养肉汤粉1.8g（含牛肉膏0.3克g，蛋白胨1g、氯化钠0.5g）加入100ml蒸馏水中，用玻棒搅拌加热溶解。
按需要分装于三角瓶或试管，瓶口或管口塞棉塞，包装后置高压蒸汽灭菌器内，在0.11Mpa（1.05公斤/厘米2）压力下，温度达1210C，维持15～20分钟。
冷却后贴好标签，40C冰箱贮存备用。
制成后的肉汤呈浅黄色，清晰透明，pH 7.1+0.2肉汤培养基常用于增菌培养。
（二）肉汤琼脂固体培养基：在上述肉汤培养基中加入2～3%琼脂即成。
经高压灭菌后，趁热将试管斜置、冷凝，即成普通琼脂斜面培养基；或趁热取出后，稍冷，以无菌操作倾入灭菌的空培养皿，冷凝后即为普通琼脂平板。
制作琼脂平板时，每一空皿（9厘米直径）需培养基15～20ml。
普通琼脂平板用于分离培养繁殖细菌；普通琼脂斜面用于纯培养和保存菌种。
（琼脂是从石花菜等海藻类中提取的多糖物质，当温度达到98℃以上可溶化，45℃以下则凝固。
琼脂对细菌一般无营养作用，用做斜面、平板、高层等不同类型固体培养基的凝固剂。
琼脂通常呈酸性，加入液体培养基中可使酸碱度下降pH 0.2左右。
）（三）肉汤琼脂半固体培养基：在上述肉汤培养基中加入0.3～0.5％琼脂，加热溶化后，分装于小试管（10×100mm），每管约3ml，高压灭菌后直立冷凝即成。
5.第二章 细菌的生物学特性,第五节细菌的人工培养
一、培养细菌的方法
分离培养
将标本或培养物划线接种在固体培养基的表面，因划线的分散作用 ，使许多原混杂的细菌在固体培养基表面上散开，称为分离培养。
菌落
一般经过18~24小时培养后,单个细菌分裂繁殖成一堆肉眼可见的 细菌集团，称为菌落。
二、培养基
固体培养基：菌落，菌苔
二、培养基
液体培养基
半固体培养基
三、细菌在培养基中的生长现象
（一）在液体培养基中生长情况 混浊：大多数细菌 沉淀：链状生长的细菌 菌膜：专性需氧菌，如结核杆菌、枯草杆菌
三、细菌在培养基中的生长现象
（三）在半固体培养基中生长情况
通过分离培养，细菌可在固体培养 基上形成菌落。不同细菌大小、形 状、颜色、气味有助于鉴定细菌。 细菌的菌落一般分为：光滑性菌落、 粗糙性菌落和黏液性菌落。
纯培养
挑取一个菌落，移种到另一个培养基中，可生长出来的大量的纯种 细菌，称为纯培养。多用于某些菌种的扩増。
二、培养基
培养基：是由人工方法配制而成的，专供微生物生长繁殖使用的混 合营养物础培养基 增菌培养基 选择培养基 鉴别培养基 厌氧培养基
按其物理状态
液体培养基 固体培养基 半固体培养基
在工农业生产中的应用 在基因工程中的应用
本章小结
培养细菌的方法：分离培养，纯培养 培养基要求：营养物质、pH、渗透压、温度、气体 培养基的分类：营养组成和用途、物理状态 细菌培养用途：医学、工农业、基因工程
细菌的生物学特性
学习 目标
掌握 培养基的要求，菌落的概念，培养基的分类 熟悉 细菌在培养基中的生长情况 了解 人工培养细菌的用途
第五节
细菌的人工培养实验步骤
细菌的人工培养实验步骤细菌的人工培养实验步骤细菌的人工培养是微生物学研究中非常重要的实验方法，可以用于分离、鉴定和纯化细菌。
下面将详细介绍细菌的人工培养实验步骤。
一、准备实验室设备和材料1. 培养基：根据不同的研究目的选择合适的培养基，如营养琼脂、大肠杆菌选择性琼脂、血琼脂等。
2. 细菌液：从保存在冰箱或冷冻库中的细菌液中取出所需的细菌，并进行预处理。
3. 实验室设备：无菌操作台、离心机、移液器、显微镜等。
4. 无菌操作器具：无菌培养皿、试管、移液器等。
二、制备固体培养基1. 称取所需量的琼脂和其他成分，加入适量的去离子水中溶解。
2. 调整pH值，通常为7.0-7.4。
3. 加热消毒：将琼脂溶液装入无菌试管或烧杯中，用高压灭菌器或自制压力锅进行高温高压灭菌。
4. 倒制琼脂：将琼脂溶液倒入无菌培养皿中，使其均匀分布在培养皿底部。
5. 固化琼脂：将培养皿放置在平板上，待琼脂凝固后即可使用。
三、制备液体培养基1. 称取所需量的营养成分和其他添加剂，加入适量的去离子水中溶解。
2. 调整pH值，通常为7.0-7.4。
3. 加热消毒：将液体培养基装入无菌试管或烧杯中，用高压灭菌器或自制压力锅进行高温高压灭菌。
四、细菌的预处理1. 从冷冻库或冰箱中取出细菌液，并进行预处理。
通常采用离心法将细菌沉淀下来，并用生理盐水洗涤2-3次，以去除残留培养基和代谢产物等。
2. 用显微镜观察细胞形态和数量，并调整浓度至合适的范围。
五、接种细菌1. 无菌操作台上进行无菌操作，将细菌液用移液器均匀地滴在琼脂培养皿表面上。
2. 用火柴头或无菌环将细菌液均匀地涂抹在琼脂表面上。
3. 将培养皿倒置放置于恒温箱中，通常为37℃，并注意标记好培养皿的信息。
4. 观察培养皿中细菌的生长情况，并记录下来。
六、细菌的分离和鉴定1. 根据实验设计和研究目的，选择不同的方法对细菌进行分离和鉴定，如生化试验、药敏试验等。
2. 根据实验结果对细菌进行鉴定，并记录下相关信息。
实验二细菌的接种、培养及代谢产物
实验二细菌的接种、培养及代谢产物（B a c t e r i a l I n o c u l e t i o n a n d A r t i f i c a l C u l t u r e a n dM e t a b o i c p r o d u c t s）一、细菌的人工培养（A r t i f i c a l C u l t u r e o f B a c t e r i a）在适当条件下，绝大多数细菌可用人工方法培养，使其繁殖，通过人工培养，获得纯种细菌，是进一步观察研究各种细菌具有不同特性的基础。
(一)常用培养基的制备1、肉汤培养基：是常用的液体培养基，也是制备某些其他培养基的基础。
材料：（制备100m l肉汤培养基的用量）(1)培养基的成分：牛肉50g蛋白脂1g氯化钠0.5g磷酸氢二钾(K2H P04·12H20)0.1g蒸馏水100m1(2)玻皿、试剂、比色管、比色架、吸管、1N与1／20N 的N a O H、三角烧瓶、漏斗、中试管、酚红指示剂、滤纸、卷筒、天平、蒸馏水。
方法：（1）将已去筋膜脂肪并经绞碎鲜牛肉50g，加蒸馏水100m l，放入冰箱中过夜。
（2）加热45—50℃一小时，并煮沸半小时，用数层纱布或滤纸过滤，滤液用蒸馏水补足其量为100m1。
（3）于滤液中加氯化钠0.5g，蛋白脂1g、磷酸氢二钾0.1g，加热使之完全溶化。
（4）测定酸碱度并调整至P H7.6，必要时用滤纸过滤。
（5）按需要分装于试管或烧瓶内，加棉花塞并包装后，置高压蒸汽灭菌器内经15磅／寸220—30分钟灭菌。
（6）灭菌后置37℃温箱，孵育24h，无杂菌生长，即可应用。
或放冰箱备用。
2、普通琼脂培养基它是最常用的固体培养基。
材料：肉汤、琼脂方法：(1)在肉汤中加入2％琼脂，熔化后调整P H7.6，必要时用棉花纱布过滤。
(2)于琼脂凝固前，分装于试管或小烧瓶内，然后加棉塞并包装。
(3)放入高压蒸汽灭菌器内，经15磅/寸220分钟灭菌。
细菌的人工培养
任何培养基都应该具备微生物生长所需要六大营养要素：
碳源、氮源、无机盐、能源、生长因子、水
任何培养基一旦配成，必须立即进行灭菌处理；
常规高压蒸汽灭菌： 1.05kg/cm2,121.3℃15-30分钟；0.56kg/cm2,112.6℃15-30分钟
培养基制备的一般程序
调配
培养基灭菌
★ 基础培养基：121℃高压蒸汽灭菌15分钟
溶化
矫正pH
★ 含糖培养基：113 ℃灭菌15分钟 过滤澄清 ★ 鸡蛋、血清培养基：间歇灭菌3天3次 分装 灭菌 检定 ★ 不耐高温的液体成分：滤过除菌
保存
1、选用和设计培养基的原则和方法
目的明确 营养协调 理化条件适宜
经济节约
1）目的明确
根据不同的微生物的营养要求配制针对强的培养基。
培养化能自养型的氧化硫杆菌的培养基组成为： S 10g MgSO4.7H2O 0.5g NH4)2SO4 0.4g CaCl2 0.25g H2O 1000ml FeSO4 0.01g H2PO4 4g
液体培养基
不加任何凝固剂
大规模工业生产及在实验室进行微生物的 基础理论和应用方面的研究
含有一般微生物生长繁殖所 需的基本营养物质的培养基 按 用 途 不 同 划 分 基础培养基
在基础培养基中加入某些特殊营养物质制成的 一类营养丰富的培养基。特殊营养物质包括血 液、血清、酵母浸膏、动植物组织液等 在培养基中加入相应的特殊营养物质或化学物质， 用来将某种或某类微生物从混杂的微生物群体 抑制不需要的微生物的生长，有利于所需微生物 中分离出来的培养基 的生长
4）经济节约
以粗代精
以氮代朊
以野代家
以废代好 以简代繁
以纤代糖
细菌的人工培养
无菌 asepsis： 不存在活菌的意思。防止微生物进入人体 或其它物品的操作技术，称为无菌操作。
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二、物理消毒灭菌法
（一）热力灭菌法
1、干热灭菌法: 焚烧: 废弃物品、动物尸体等。 烧灼：接种环、试管口。 干烤：玻璃器皿、瓷器、玻制注射器等。 红外线：医疗器械等。
2、细菌在培养基中的生长现象
液体培养基：混浊生长、菌膜、沉淀生长 半固体培养基：沿穿刺线生长或扩散生长 固体培养基：菌落
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液体培养基：混浊生长、菌膜、沉淀生长
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半固体培养基：沿穿刺线生长或扩散生长
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固体培养基：菌落
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液体 培养基
斜面 培养基
纯培养 (pure culture)
菌落(colony) 24
一、消毒灭菌的常用术语
消毒 disinfection： 杀死物体上病原微生物的方法，并不一 定 能杀死含芽胞的细菌或非病原微生物 。
灭菌 sterilization：
杀灭物体上所有微生物的方法，包括芽
胞 在内的全部病原微生物和非病原微生
物。
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清洁 cleaning：指去除尘埃和一切污秽以减少微 生物数量的过程。
干扰细菌的酶系统和代谢 如氧化剂、重金 属盐类（低浓度）
损伤菌细胞膜 如酚类（低浓度）、表面活 性剂、脂溶剂等
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四、消毒灭菌的应用
选用的消毒剂
病人排泄物、 分泌物
20％漂白粉，5％石炭酸，2％来苏，作用2h
皮肤
2.5％碘酊，70％乙醇
粘膜
1％硝酸银，0.1％新洁尔灭
细菌培养细菌实验报告
一、实验目的1. 掌握细菌培养的基本原理和方法。
2. 学习细菌接种和纯化技术。
3. 了解细菌在不同培养基上的生长情况。
二、实验原理细菌培养是微生物学的基本实验技术之一，通过在人工配制的培养基上培养细菌，可以观察细菌的生长和代谢特征，进而对细菌进行鉴定和分类。
实验中，我们采用平板划线法将细菌接种到琼脂平板上，通过观察菌落的特征，对细菌进行分离和纯化。
三、实验材料与试剂1. 菌种：大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌2. 培养基：牛肉膏蛋白胨培养基、营养肉汤培养基3. 试剂：无菌生理盐水、无菌水、无菌滤纸、无菌接种环、无菌培养皿、酒精灯、火焰灯4. 仪器：恒温培养箱、高压蒸汽灭菌器、无菌操作台四、实验步骤1. 准备工作：将菌种从冰箱取出，恢复至室温。
将无菌生理盐水、无菌水、无菌滤纸、无菌接种环、无菌培养皿、酒精灯、火焰灯等实验器材准备好。
2. 培养基制备：按照培养基配方，将牛肉膏蛋白胨培养基和营养肉汤培养基分别称量，加入适量蒸馏水，搅拌均匀，分装到无菌培养皿中。
3. 灭菌：将培养皿放入高压蒸汽灭菌器中，121℃灭菌15分钟，取出待冷却。
4. 接种：将菌种从冰箱取出，恢复至室温。
用无菌接种环挑取少量菌种，分别接种到牛肉膏蛋白胨培养基和营养肉汤培养基中。
5. 培养：将接种后的培养皿放入恒温培养箱中，37℃培养24小时。
6. 观察与记录：观察菌落的特征，包括菌落的大小、形状、颜色、边缘、表面等。
记录菌落的特征，并对菌种进行鉴定。
五、实验结果与分析1. 大肠杆菌在牛肉膏蛋白胨培养基上生长良好，菌落呈圆形、光滑、湿润、白色、边缘整齐。
2. 金黄色葡萄球菌在牛肉膏蛋白胨培养基上生长良好，菌落呈圆形、凸起、光滑、金黄色、边缘整齐。
3. 枯草芽孢杆菌在牛肉膏蛋白胨培养基上生长良好，菌落呈圆形、粗糙、干燥、灰白色、边缘不规则。
六、实验总结通过本次实验，我们掌握了细菌培养的基本原理和方法，学会了细菌接种和纯化技术。
同时，通过观察不同菌种在不同培养基上的生长情况，加深了对细菌生长特征的认识。
微生物实验细菌的人工培养及形态学检查
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细菌的培养基：
（一）培养基的定义：
培养基是人工方法
水
碳源
配制的含有细菌生 长繁殖所需物质的 营养基质。其必须
营养物质 生长
氮源
因子
本身无菌，一般
无机盐
PH调至7.2 ~7.6。
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（二）制备原则:
1.调配营养物质：蛋白胨（氮源），牛肉膏，氯 化钠，蒸馏水。
2.调配PH：加入缓冲剂，保持PH稳定。
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2、按用途分：
(1).基础培养基：含有大多数细菌生长所需要 的基本营养成分。最常用的为肉汤培养基
(2).增菌培养基：在基础培养基中添加生长因 子（eg:血清等）或微量元素等其他营养物 质或特殊抑制剂。
如血平板：5-10%脱纤维羊/兔血， （60°C左右加入血）。巧克力平板:80°C 左右加入血。
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1、液体培养基中的生长现象
• 混浊：大多数 细菌
• 沉淀：多见于 链状排列的细 菌
• 菌膜：多见于 专性需氧菌 菌膜
菌沉淀 均匀浑浊 对照
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2、半固体培养基中的生长现象
有鞭毛细菌：在培
养基中沿穿刺线 并向外扩散生长， 穿刺线边缘模糊。
无鞭毛细菌：只沿
穿刺线生长，穿 A、有动力 B、无动力 C、空白对照 刺线边缘清晰。
③损伤细菌的细胞膜，影响细菌的化学组成， 物理结构和生理活动，从而发挥防腐、消毒灭菌
作用。
有些化学药品浓度高时能杀灭病原微生物，称 为化学消毒剂；浓度低时能抑制细菌生长，称为
防腐剂。
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（2）化学内的所有微生 物，适用于不耐热力灭菌但要进入人体内部的
人工培养细菌
细菌的人工培养人工制备营养充足的培养基并提供适宜的温度、气体、pH等培养条件，即能使细菌在体外环境迅速生长繁殖。
细菌培养对临床上病原菌的分离鉴定、制备抗生素、制备疫苗等生物制品都是必不可少的。
一、培养基的制备原则：1、必须有充足的营养。
2、合适的酸碱度。
3、绝对无菌。
二、培养基的制备培养基是用人工方法将多种营养物质按照各类微生物生长的需要而合成的一种混合营养料。
常用的培养基有基础培养基、营养培养基、选择培养基、鉴别培养基、厌氧培养基等。
按照培养基的物理性状可分为液体，固体和半固体三类。
以下介绍常用基础培养基的制备。
（一）肉汤培养基：制法：称取营养肉汤粉1.8g（含牛肉膏0.3克g，蛋白胨1g、氯化钠0.5g）加入100ml蒸馏水中，用玻棒搅拌加热溶解。
按需要分装于三角瓶或试管，瓶口或管口塞棉塞，包装后置高压蒸汽灭菌器内，在0.11Mpa（1.05公斤/厘米2）压力下，温度达1210C，维持15～20分钟。
冷却后贴好标签，40C冰箱贮存备用。
制成后的肉汤呈浅黄色，清晰透明，pH 7.1+0.2肉汤培养基常用于增菌培养。
（二）肉汤琼脂固体培养基：在上述肉汤培养基中加入2～3%琼脂即成。
经高压灭菌后，趁热将试管斜置、冷凝，即成普通琼脂斜面培养基；或趁热取出后，稍冷，以无菌操作倾入灭菌的空培养皿，冷凝后即为普通琼脂平板。
制作琼脂平板时，每一空皿（9厘米直径）需培养基15～20ml。
普通琼脂平板用于分离培养繁殖细菌；普通琼脂斜面用于纯培养和保存菌种。
（琼脂是从石花菜等海藻类中提取的多糖物质，当温度达到98℃以上可溶化，45℃以下则凝固。
琼脂对细菌一般无营养作用，用做斜面、平板、高层等不同类型固体培养基的凝固剂。
琼脂通常呈酸性，加入液体培养基中可使酸碱度下降pH 0.2左右。
）（三）肉汤琼脂半固体培养基：在上述肉汤培养基中加入0.3～0.5％琼脂，加热溶化后，分装于小试管（10×100mm），每管约3ml，高压灭菌后直立冷凝即成。
细菌培养的原理
细菌培养的原理
细菌培养是一种将细菌生长和繁殖的过程模拟在人工环境中的方法。
其原理基于细菌的生理需求和适宜生长条件。
以下是细菌培养的基本原理：
1. 选择合适的培养基：不同的细菌需要不同类型的培养基来提供所需的营养物质。
培养基通常包括碳源、氮源、矿物质和水。
例如，通常使用的液体培养基包括营养琼脂（Nutrient Agar）、大肠杆菌培养基（Luria-Bertani，LB培养基）等。
2. 提供适宜的温度：细菌对生长环境温度有一定的适应性，一般来说，常见的人体细菌在37°C左右的温度下生长最佳。
3. 创建合适的环境气氛：有些细菌需要特定的气氛条件才能生长，例如革兰氏阳性菌的生长需要富含二氧化碳的环境，而革兰氏阴性菌则需要氧气。
4. 防止污染：细菌培养需要注意避免外部环境的污染，以免其他微生物的干扰。
使用无菌技术、实验室消毒和灭菌设备等方法可以有效减少污染的发生。
5. 选择合适的培养方法：根据不同的实验目的，可以选择液体培养、平板培养和深层培养等不同的培养方法。
液体培养常用于大规模培养和生产，平板培养则用于分离和鉴定细菌，深层培养则用于研究和检测细菌的代谢能力。
通过以上原理，可以创造出适合细菌生长和繁殖的人工环境，
从而实现细菌培养的目的。
这项技术在医学、食品工业、环境科学等领域起着重要作用，可以用于检测病原体、生产抗生素等。
细菌的人工培养方法及意义(平板划线)
精品课件
高压蒸 汽灭菌
培养基的分类：
按 固体培养基
物
理
状 半固体培养基 态
不
同
划 分液体培养基来自在液体培养基中加入一定量凝固剂，使 其成为固体状态，琼脂含量一般为 1.5%-2.0%
固体培养基常用来进行微生物的分离、 鉴定、活菌计数及菌种保藏
琼脂含量一般为0.2%-0.7%
观察微生物的运动特征、分类鉴定及 噬菌体效价滴定
第三单元 细菌的人工培 养
主讲人：齐雪茹 廊坊职业技术学院动物科学系
精品课件
精品课件
人工培养细菌的意义
在医学中的应用：诊断；细菌鉴定；生物制品。 在工农业生产中的应用：细菌在培养过程产生多种代谢
产物，经过加工处理，可制成抗生素、维生素、氨基酸、有 机溶剂、酒、酱油、味精等产品。
在基因工程中的应用：制备出胰岛素和干扰素等生物制
不加任何凝固剂
用于增菌，大规模工业生产及在实验 室进行微生物的研究
精品课件
固体培养基
半固体培养基
精品课件
液体培养基
基础培养基 按 营养培养基 用 途 不 选择培养基 同 划 分 鉴别培养基
特殊培养基
含有一般微生物生长繁殖所需的基本营养物。 比如 肉汤培养基。
在基础培养基中加入某些特殊营养物质制成的一 类营养丰富的培养基。如血琼脂培养基。
在培养基中加入相应的特殊营养物质或化学 物质，抑制不需要的微生物的生长，有利于 所需微生物的生长。用来将某种或某类微生物 从混杂的微生物群体中分离出来。如SS琼脂培 养基。
利用细菌代谢产物不同而使指示剂显色反应 不同的原理，鉴别和鉴定细菌。如麦糠凯琼 脂培养基。
如厌氧培养基。用于厌氧菌的培养。
第三节 细菌的人工培养
第一篇微生物的基本知识第一章细菌第三节细菌的人工培养用人工的方法，提供细菌生长繁殖所需要的各种条件，可进行细菌的人工培养，从而进行细菌的鉴定和进一步的利用。
细菌的人工培养技术是微生物学研究和应用的重要手段。
一、培养基的概念把细菌生长繁殖所需要的各种营养物质合理地配合在一起，制成的营养基质称为培养基。
培养基的主要用途是促进细菌的生长繁殖，可用于细菌的分离、细菌的纯化、细菌的鉴定、细菌的保存和细菌制品的制造等。
二、培养基的类型由于各种细菌的营养需求不同，所以培养基的种类繁多，根据培养基的物理状态、用途等可将培养基分为多种类型。
（一）根据培养基的物理状态分类1．液体培养基将细菌生长繁殖所需的各种营养物质直接溶解于水，不加凝固剂制成的培养基为液体状态，即为液体培养基。
液体培养基中营养物质以溶质状态存在其中，利于细菌充分的接触和利用，从而使细菌更好地生长繁殖，故常用于生产和实验室中细菌的扩增培养。
实际操作中，在使用液体培养基培养细菌时进行振荡或搅拌，可增加培养基中的通气量，并使营养物质更加均匀，可大大提高培养效果。
2．固体培养基在液体培养基中加入2%～3%的琼脂，使培养基凝固成固体状态。
固体培养基可根据需要制成平板培养基、斜面培养基和高层培养基等。
平板培养基常用于细菌的分离、菌落特征观察、药敏试验以及活菌计数等；斜面培养基常用于菌种保存；高层培养基多用于细菌的某些生化试验。
3．半固体培养基在液体培养基中加入少量（通常为0.3%～0.5%）的琼脂，凝固后培养基呈半固体状态。
多用于细菌运动性观察，即细菌的动力试验，也用于菌种的保存。
（二）根据培养基的用途分类1．基础培养基尽管不同细菌的营养需求不同，但大多数细菌所需的基本营养物质是相同的。
基础培养基含有细菌生长繁殖所需要的最基本的营养成分，可供大多数细菌人工培养用。
常用的是肉汤培养基、普通琼脂培养基及蛋白胨水等。
2．营养培养基在基础培养基中加入葡萄糖、血液、血清、腹水、酵母浸膏及生长因子等，用于培养营养要求较高的细菌，常用的营养培养基有鲜血琼脂培养基、血清琼脂培养基等。
动物微生物2.3细菌的人工培养
项目二细菌任务三细菌的人工培养一、常用培养基：培养基：把细菌生长所需的营养物质调配在一起制成的用于培养细菌的人工养料叫做培养基。
1、常用培养基的类型：（1）按物理性状分类：液体培养基：是含有各种营养成分的水溶液。
例如：肉汤培养基。
固体培养基：在液体培养基中加入百分之二至百分之五的琼脂而制成的培养基。
例如：琼脂斜面培养基、琼脂平板培养基。
半固体培养基：在液体培养基中加入百分之零点三—百分之零点七的琼脂制成。
（2）按用途分类：基础培养基：还有大多数细菌生长共同需要的营养成分，包括牛肉浸液，1%蛋白胨和0.5%Nacl等，PH7.2—7.6，例如：肉汤培养基，普通琼脂培养基。
营养培养基：在基础培养基中添加血液，血清、葡糖糖、生长因子等，适合于营养要求较高的细菌。
例如：血液琼脂平板（链球菌、肺炎球菌在其上才能生长良好）增菌培养基：在基础培养基或营养培养基中加入某种细菌所需的特殊营养成分，配制出适合这种细菌生长而不适合其他微生物生长的培养基。
例如：亚硝酸盐增菌培养基用于沙门氏菌的增菌培养（用途）鉴别培养基：利用细菌对糖、蛋白质的能力与其代谢产物的不同，在培养基中加入特定的指示剂，用于鉴别细菌。
例如：糖发酵管，硫化氢、麦康凯培养基等。
选择培养基：在培养基中加入某些化学物质，以抑制某些细菌生长而促进另一些致病菌的生长，达到选择分离的目的。
例如：SS琼脂，分离肠道菌厌氧培养基：在无氧的环境中才能生长繁殖。
例如：肝片肉汤培养基（要覆盖液体石蜡）2、培养基的基本要求：一有丰富的营养物质；二PH、水分；三均匀透明，易于观察；四经过灭菌和无菌检验。
二、细菌在培养基上的生长特征（一）菌落特征将单个微生物细胞或一小堆同种细胞接种在固体培养基的表面（有时为内部），当它占有一定的发展空间并处于适宜的培养条件时，该细胞就迅速生长繁殖。
结果会形成以母细胞为中心的一堆肉眼可见，并有一定形态、构造的子细胞集团，这就是菌落。
如果菌落是由一个单细胞发展而来的，则它就是一个纯种细胞群或克隆。
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液体培养基接种
细菌的人工培养
三、细菌生长Байду номын сангаас果观察
固体琼脂平板上
菌落
菌苔
EMB琼脂平板上大肠菌 SS琼脂平板上大肠 菌落具有金属光泽 杆菌为粉红菌落
半固体培养基观察细菌动力
无运动性
有运动性
液体培养基上生长现象
沉 淀 生 长
混 浊 生 长
表 面 生 长
复习思考题：
1、培养基按用途分有哪些种类？麦糠凯琼 脂、SS琼脂分别属于哪类?分别用于那些菌 的分离培养？ 2、增菌培养用什么类型培养基？分离细菌 用什么类型培养基？ 3、什么是菌落？分离菌落的意义？ 4、人工培养细菌的意义？
在基础培养基中加入某些特殊营养物质制成的一 类营养丰富的培养基。 血琼脂培养基。 类营养丰富的培养基。如血琼脂培养基。
在培养基中加入相应的特殊营养物质或化学 物质，抑制不需要的微生物的生长， 物质，抑制不需要的微生物的生长，有利于 所需微生物的生长。 所需微生物的生长。用来将某种或某类微生物 从混杂的微生物群体中分离出来。 从混杂的微生物群体中分离出来。如SS琼脂培 琼脂培 养基。 养基。 利用细菌代谢产物不同而使指示剂显色反应 不同的原理，鉴别和鉴定细菌。 不同的原理，鉴别和鉴定细菌。如麦糠凯琼 脂培养基。 脂培养基。 如厌氧培养基。用于厌氧菌的培养。 厌氧培养基。用于厌氧菌的培养。
在基因工程中的应用： 在基因工程中的应用：制备出胰岛素和干扰素等生物制
剂。
细菌的人工培养
一、培养基 二、细菌接种技术 三、细菌生长结果观察
细菌的人工培养
一、培养基
概念: 概念 培养基是用人工方法将多种营养物质按 照各类微生物生长的需要而合成的一种混合养料。 照各类微生物生长的需要而合成的一种混合养料。 任何培养基都应该具备微生物生长所需要六大 营养要素： 营养要素：
（3）火焰边取下 两个棉塞，不能放 下；烧灼管口一周。
（4）将接种环伸 入试管内，冷却后， 轻轻挑取少量菌体， 立即将接种环抽出。
（5）火焰旁将沾有 菌种的接种环迅速伸 到斜面培养基的底部， 由里向外画蛇形细线， 线要画得细些。
6）抽出接种环后， 烧管口，塞棉塞，接 种环灭菌。
（
固体斜面培养基接种
细菌的人工培养
培养基的制备： 培养基的制备：
细菌的人工培养
二、细菌的接种技术
分离培养接种法——平板划线法、平行划线法 纯种细菌接种法 ——固体斜面培养基接种法 液体培养基接种法 半固体培养基接种法
细菌的人工培养
平板划线分离培养法
菌落
平行划线法
固体斜面接种法
（1）用左手大姆 指、食指和无名指 夹住菌种试管和待 接种和斜面试管， 右手拧松棉塞、不 取下。 （2）右手拿接种 环，在火焰上烧灼 灭菌，特别是箍处。
第三单元 细菌的人工培养
主讲人：齐雪茹 廊坊职业技术学院动物科学系
人工培养细菌的意义
在医学中的应用：诊断；细菌鉴定；生物制品。 在医学中的应用：诊断；细菌鉴定；生物制品。 在工农业生产中的应用：细菌在培养过程产生多种代谢 在工农业生产中的应用：
产物，经过加工处理，可制成抗生素、维生素、氨基酸、 产物，经过加工处理，可制成抗生素、维生素、氨基酸、 有机溶剂、 有机溶剂、酒、酱油、味精等产品。 酱油、味精等产品。
观察微生物的运动特征、 观察微生物的运动特征、分类鉴定及 噬菌体效价滴定 不加任何凝固剂 不加任何凝固剂 用于增菌， 用于增菌，大规模工业生产及在实验 室进行微生物的研究
固体培养基 半固体培养基
液体培养基
含有一般微生物生长繁殖所需的基本营养 肉汤培养基。 物。比如 肉汤培养基。
基础培养基 按 用 途 不 同 划 分 鉴别培养基 特殊培养基 选择培养基 营养培养基
碳源、氮源、无机盐、能源、生长因子、 碳源、氮源、无机盐、能源、生长因子、水 任何培养基一旦配成， 任何培养基一旦配成，必须立即进行灭菌处理
高压蒸 汽灭菌
培养基的分类： 培养基的分类： 按 物 理 状 态 不 同 划 分
液体培养基 半固体培养基 固体培养基
在液体培养基中加入一定量凝固剂， 在液体培养基中加入一定量凝固剂，使 其成为固体状态， 其成为固体状态，琼脂含量一般为 1.5%1.5%-2.0% 固体培养基常用来进行微生物的分离、 固体培养基常用来进行微生物的分离、 鉴定、 鉴定、活菌计数及菌种保藏 琼脂含量一般为0.2%-0.7% 琼脂含量一般为