抗体ProteinA纯化方法

抗体P r o t e i n A纯化方
法
-CAL-FENGHAI.-(YICAI)-Company One1
抗体ProteinA纯化
一．P roteinA柱子的制备
1.配制溶液；
结合／洗涤缓冲液：NaCl，；Na2HPO4，20mM ；。

配制500ml的方法：
称取NaCl ，Na2HPO4溶解于450ml的双蒸水中。

调节PH为,补加双蒸水至总体积500ml。

2. 制备空柱子
（1）先打开用过的PD-10上盖，拿掉上面的盖膜。

盖上盖子，摇晃，倒去里面的填料，用PBS清洗3次。

（2）用胶带固定好PD-10空柱子，要求垂直放置。

（3）在PD-10空柱子里加入2ml的Binding Wash buffer.结合缓冲液。

（4）ProteinA填料混匀，（10ml包装一小瓶）。

（5）加入5ml的ProteinA到柱子中。

（6）
（7）
（8）
二．纯化步骤
1.样品准备；将兔血清与结合缓冲液1：1混合，过滤（防止堵塞柱子）。

2.平衡柱子：用5-10倍体积的结合缓冲液过Protein A柱。

3.上样：将准备好的血清样品上样，根据柱子的结合能力考虑上样量的体积。

4.洗脱杂蛋白：用结合缓冲液冲洗柱子，直至结合液中不含蛋白。

5.收集抗体：用洗脱液过柱，同时收集漏出液（约3-4ml/管），直至漏出液中
不含蛋白。

测定各收集管中的蛋白含量，合并蛋白管。

（注意：收集管中需事先加入约150ul的1M Tris-HCl缓冲液，防止抗体在过酸的环境下失活）
6.柱子再生：用5-10倍体积的再生液再生柱子。

7.PBS透析收集的抗体。

三．试剂的制备
1. 结合缓冲液1000ml 500ml
甘氨酸
氯化钠
氢氧化钠调PH至
2. 洗脱缓冲液500ml
甘氨酸
用盐酸调PH至
3. 再生缓冲液500ml
甘氨酸
酸调PH至
4.称取碱，加80毫升的双蒸水，溶解后用盐酸调节，补加到水100毫升，。