维生素C测定
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II实验设备及试剂
1.仪器设备
1.1.1高速组织捣碎机:8000一12000 r/min。
1.1.2分析天平。
1.1.3滴定管:25 mL、10mL。
1.1.4容量瓶:100mL。
1.1.5锥形瓶:100 mL、50 mL。
1.1.6吸管:10mL、5mL、2mL、1mL。
1.1.7烧杯:250 mL、50mL。
实验数据：
组别
体积（ml）
第一组
第二组
第三组
V（滴定样液时消耗染料溶液的体积）ml
V0（滴定空白时消耗染料溶液的体积）ml
V-V0
(体积改变量)ml
100g橙子中Vc含量mg
注释：
*偏磷酸不稳定，切勿加热。
**一般抗坏血酸纯度为99.5%以上，可不标定。如试剂发黄，则弃去不用。若要检查其纯度，可按附录B方法
2.1.3 2，6一二氯靛酚(2,6一二氯靛酚吲哚酚钠盐)溶液:称取碳酸氢钠52mg溶解在200ml热蒸馏水中，然后称取2,6一二氯靛酚50 mg溶解在上述碳酸氢钠溶液中。冷却定容至250mL，过滤至棕色瓶内，保存在冰箱中。每次使用前，用标准抗坏血酸标定其滴定度。即吸取1 mL抗坏血酸标准溶液于50 mL锥形瓶中，加入l0mL浸提剂，摇匀。同时，另取10mL浸提剂做空白试验，用2,6一二氯靛酚溶液滴定至溶液呈粉红色15s不褪色为止。
3.某些水果、蔬菜（如橘子、西红柿等）浆状物泡沫太多，可加数滴丁醇或辛醇。
实验部分
I实验原理
染料2 ,6一二氯靛酚的颜色反应表现两种特性，一是取决于其氧化还原状态，氧化态为深蓝色，还原态变为无色，二是受其介质的酸度影响，在碱性溶液中呈深蓝色，在酸性介质中呈浅红色。用蓝色的碱性染料标准溶液，对含维生素C的酸性浸出液进行氧化还原滴定，染料被还原为无色，当到达滴定终点时，多余的染料在酸性介质中则表现为浅红色，由染料用量计算样品中还原型抗坏血酸的含量。
3.2标准液滴定吸取l0mL滤液放人50mL锥形瓶中，用已标定过的2,6一二氧靛酚溶液滴定，直至溶液呈粉红色15s不褪色为止。取浸提液10mL作空白对照，结果计算。
3.3维生素C按以下公式计算:
（V-V0）×T×A
维生素C( mg/100 g)= --------------------------×100%
［6］：M. Romeu-Nadal, S. Morera-Pons, A.I. Castellote, M.C. L´opez-Sabater∗Rapid high-performance liquid chromatographic method for Vitamin C
determination in human milk versus an enzymatic methodJournal of Chromatography B, 830 (2006) 41–46
目前国内测定维生素c的常见方法有：DPPH法［2］碘滴定法［3］、紫外分光光度计法［4］，高效液相色谱法［5,6,7］，苯肼比色法【2】等。这些方法各有特点，但操作过程复杂，速度慢，仪器昂贵。根据四川农业大学现状及操作和仪器及经费上的考虑都不太理想，。因Vc易被热、碱、氧和光破坏，其测定条件较难控制，所以有必要对2，6一二氯靛酚滴定法的测定条件进行分析。本次采用2，6一二氯靛酚滴定法作为还原型Vc含量的测定实验研究，对2，6一二氯靛酚滴定法的测定条件变化对测定结果的影响作了各种条件实验分析。
【2】JOHN V. SCUD1 AND HER3liN D. RATISH, Harlem Hospital, Kew York, N. Y.A Colorimetric Method for the Determination ofAscorbic Acid。(2005) 1045–1051。
【5】Meng QiIlg—fan，Teng Le—sheng，Jiang Chao—jIlllete．First—order Derivative Spectrophotometry for theDetermination of Vitamin C in Medicament[J]．Chemical
［7］：Adrian A. Franke*, Laurie J. Custer, Christi Arakaki, Suzanne P. MurphyVitamin C and flavonoid levels of fruits and vegetables
consumed in HawaiiJournal of Food Composition and Analysis 17 (2004) 1–35
2.1.4白陶土(或称高岭土):对维生素C无吸附性。
3.测定步骤
3.1提取水洗干净整株新鲜蔬菜或整个新鲜水果，放人组织捣碎机中，加20mL浸提剂，迅速捣成匀浆。称10一40g浆状样品，加入10ml二甲苯进行萃取，用分液漏斗分离出下层溶液，吸取下层溶液10mL,移入100ml容量瓶中。并稀释至刻度，摇匀过滤。
［3］：田兴彩橙汁饮料中维生素C的测定第23卷 第5期2005 .9
［4］：赵连俊水果中维生素C含量测定的研究第37卷第6期2008年l2月
［5］：Patric Fontannaz, Tamara Kilinc?, Olivier HeudiHPLC-UV determination of total vitamin C in a wide rangeof fortified food productsFood Chemistry 94 (2006) 626–631
1.1.8漏斗。
2.试剂及材料(凡未加说明者均为分析纯)
2.1.0柑橘、圣女果、红枣、胡萝卜。
2.1.1浸提剂
2.1 .1.2偏磷酸:2%溶液(W/V)*。
2.1 .1.3草酸:2%溶液(W/V)**。
2.1.2抗坏血酸标准溶液(1 mg/mL):称取100m g(准确至0.lmg)抗坏血酸**，溶于浸提剂中并稀至100 mL,现配现用。
标定。
经费预算：
市售水果10元
标准维生素C 25g 40元
试验其他试剂50元
总额100元
实验结果分析：
参考文献：
［1］：李秋菊王亚红刘秀萍维生素C的测定方法第4卷第1期太原师范学院学报(自然科学版)
2005年3月
［2］：方敏，王耀峰，宫智勇木15种水果和33种蔬菜的抗氧化活性研究2008，V01．29，No．10 97
滴定度按下式计算:
T滴定度（mg/mL）=C×V/(V1-V2)
式中: T—每毫升2,6一二氯靛酚溶液相当于抗坏血酸的毫克数，
C—抗坏血酸的浓度，mg/mL;
V—吸取抗坏血酸的体积，mL;
V1—滴定抗坏血酸溶液所用2,6一二氯靛酚溶液的体积，mL;
V2—滴定空白所用2,6一二氯靛酚溶液的体积，mL。
W
式中:
V滴定样液时消耗染料溶液的体积，mL。
V0滴定空白时消耗染料溶液的体积，mL。
T 2, 6一二氯靛酚染料滴定度，mg/mL。
A稀释倍数。
W样品重量。
3.4平行测定的结果，用算术平均值表示，取三位有效数字，含量低的保留小数点后两位数字。
3,5平行测定结果的相对相差，在维生素C含量大于20mg/l00g时，不得超过2%，小于20mg /100g时，不得超过5%。
［8］：丁辰果蔬及制品中维生素C含量的常用检测方法1996(02)
［9］：林桂荣，郭勇，付亚文等新鲜果蔬维生素C测定方法研究北方园艺，1995（2），7
［10］：李向荣，方晓，诸爱珠等。果蔬与饮品中维生素C的碘酸钾萃取分光光度测定1993（2），93
【3】肖彦春，雷恩春，关秀杰，管晓琳，测定蔬菜中还原型维生素C两种方法的比较（2011)05—1035—03。
考虑到选择合适的提取剂可以延长VC的稳定时间、提高VC的提取效率，且VC在酸性介质中（如2%草酸，2%的偏磷酸及硫酸）相对稳定，因此，对4种水果中的VC进行提取，并用二氯靛酚溶液滴定测其含量。操作简便，快速，准确，无须特殊仪器。整个操作过程要迅速，防止还原型抗坏血酸被氧化。
2.易受所测物质中色素的干扰。许多果品中都含有花青素，叶绿素，类胡萝卜素等物质。其提取液通常有颜色，导致用2,6一二氛靛酚滴定法滴定时终点不易确定。为了解决这一问题，我们在靛酚滴定法的基础上，先采用二甲苯【3】等有机溶剂萃取色素，然后再用2，6，二氯靛酚进行滴定。用改进后的靛酚滴定法进行测定，滴定终点容易判断，测定结果稳定，数据重现性好，准确度高。
指导教师意见
指导教师签名：
年月日
注：1.选题类型：基础型、应用基础型、应用型、调研型；
2.课题来源：国家级项目、省部级项目、横向合作项目、校级项目、自选项目。
本文在文献的基础上，用国标法直接测定橙子中维生素c的含量，其方法简便、快速、结果准确。
可能出现的问题及分析：
1.维生素C包括氧化性和还原性两种［8］，但新鲜果品中主要是还原性的维生素C，还原性维生素C的测定方法也有很多【5】，除了上面所说的几种还有电位滴定法［1］，钼蓝比色法［9］，碘酸钾分光光度法［10］。但是值得注意的是，还原性的维生素C不稳定，易被氧化，所以测定时仅仅测定还原性的维生素C不够准确。在测定时尽量减少前处理时间，不要放置过久，避免还原性维生素C损失过多。滴定过程一般不超过2min。滴定所用的染料不应小于1mL或多于4mL，如果样品含维生素C太高或太低时，可酌情增减样液用量或改变提取液稀释度。提取的浆状物如不易过滤，亦可离心，留取上清液进行滴定。
实验设计题目
橙子中维生素C含量的测定
选题类型
应用基础型
课题来源
自选项目
学院
动物医学院
专业
生物工程
姓名
闫冰温啸
年级
2010级
学号
201015ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ8 20101580
开题报告（立题依据、研究的主要内容及预期目标、研究方案、论文进度安排、主要参考文献）
实验背景及目的：
维生素C又称为抗坏血酸，常存在于新鲜的蔬菜和某些水果中,特别是在橙子、枣、辣椒、苦瓜中含量丰富。是维持机体正常生理功能的重要维生素之一，具有多种重要的生理功能，广泛参与机体氧化、还原等复杂代谢过程，是蔬菜水果中的一项非常重要的营养指标。维生素C抗坏血酸在食品工业中常用做抗氧化剂，维生素C可促进胶原蛋白抗体，具有抗癌的作用；它能参与神经介质、激素的生物合成；能将胆固醇转化为胆汁酸，使高胆固醇血症患者的胆固醇下降；能将Fe抖还原为Fe，使其易于吸收，有利于血红蛋白的形成；还具有解毒的作用［1］。橙子中防治坏血病的主要物质为维生素C ,本文以市售的橙子为检测对象,对其营养成分———维生素C的含量进行测定,为人们正确补充营养素和合理膳食提供参考。维生素C为无色晶体，味酸，溶于水及乙醇，不耐热，在碱性溶液中极不稳定，日光照射后易被氧化破坏，有微量铜、铁等重金属离子存在时更易氧化分解，干燥条件下较为稳定。故维生素C制剂应放在干燥、低温和避光处保存；在烹调蔬菜时，不宜烧煮过度并应避免接触碱和铜器。
1.仪器设备
1.1.1高速组织捣碎机:8000一12000 r/min。
1.1.2分析天平。
1.1.3滴定管:25 mL、10mL。
1.1.4容量瓶:100mL。
1.1.5锥形瓶:100 mL、50 mL。
1.1.6吸管:10mL、5mL、2mL、1mL。
1.1.7烧杯:250 mL、50mL。
实验数据：
组别
体积（ml）
第一组
第二组
第三组
V（滴定样液时消耗染料溶液的体积）ml
V0（滴定空白时消耗染料溶液的体积）ml
V-V0
(体积改变量)ml
100g橙子中Vc含量mg
注释：
*偏磷酸不稳定，切勿加热。
**一般抗坏血酸纯度为99.5%以上，可不标定。如试剂发黄，则弃去不用。若要检查其纯度，可按附录B方法
2.1.3 2，6一二氯靛酚(2,6一二氯靛酚吲哚酚钠盐)溶液:称取碳酸氢钠52mg溶解在200ml热蒸馏水中，然后称取2,6一二氯靛酚50 mg溶解在上述碳酸氢钠溶液中。冷却定容至250mL，过滤至棕色瓶内，保存在冰箱中。每次使用前，用标准抗坏血酸标定其滴定度。即吸取1 mL抗坏血酸标准溶液于50 mL锥形瓶中，加入l0mL浸提剂，摇匀。同时，另取10mL浸提剂做空白试验，用2,6一二氯靛酚溶液滴定至溶液呈粉红色15s不褪色为止。
3.某些水果、蔬菜（如橘子、西红柿等）浆状物泡沫太多，可加数滴丁醇或辛醇。
实验部分
I实验原理
染料2 ,6一二氯靛酚的颜色反应表现两种特性，一是取决于其氧化还原状态，氧化态为深蓝色，还原态变为无色，二是受其介质的酸度影响，在碱性溶液中呈深蓝色，在酸性介质中呈浅红色。用蓝色的碱性染料标准溶液，对含维生素C的酸性浸出液进行氧化还原滴定，染料被还原为无色，当到达滴定终点时，多余的染料在酸性介质中则表现为浅红色，由染料用量计算样品中还原型抗坏血酸的含量。
3.2标准液滴定吸取l0mL滤液放人50mL锥形瓶中，用已标定过的2,6一二氧靛酚溶液滴定，直至溶液呈粉红色15s不褪色为止。取浸提液10mL作空白对照，结果计算。
3.3维生素C按以下公式计算:
（V-V0）×T×A
维生素C( mg/100 g)= --------------------------×100%
［6］：M. Romeu-Nadal, S. Morera-Pons, A.I. Castellote, M.C. L´opez-Sabater∗Rapid high-performance liquid chromatographic method for Vitamin C
determination in human milk versus an enzymatic methodJournal of Chromatography B, 830 (2006) 41–46
目前国内测定维生素c的常见方法有：DPPH法［2］碘滴定法［3］、紫外分光光度计法［4］，高效液相色谱法［5,6,7］，苯肼比色法【2】等。这些方法各有特点，但操作过程复杂，速度慢，仪器昂贵。根据四川农业大学现状及操作和仪器及经费上的考虑都不太理想，。因Vc易被热、碱、氧和光破坏，其测定条件较难控制，所以有必要对2，6一二氯靛酚滴定法的测定条件进行分析。本次采用2，6一二氯靛酚滴定法作为还原型Vc含量的测定实验研究，对2，6一二氯靛酚滴定法的测定条件变化对测定结果的影响作了各种条件实验分析。
【2】JOHN V. SCUD1 AND HER3liN D. RATISH, Harlem Hospital, Kew York, N. Y.A Colorimetric Method for the Determination ofAscorbic Acid。(2005) 1045–1051。
【5】Meng QiIlg—fan，Teng Le—sheng，Jiang Chao—jIlllete．First—order Derivative Spectrophotometry for theDetermination of Vitamin C in Medicament[J]．Chemical
［7］：Adrian A. Franke*, Laurie J. Custer, Christi Arakaki, Suzanne P. MurphyVitamin C and flavonoid levels of fruits and vegetables
consumed in HawaiiJournal of Food Composition and Analysis 17 (2004) 1–35
2.1.4白陶土(或称高岭土):对维生素C无吸附性。
3.测定步骤
3.1提取水洗干净整株新鲜蔬菜或整个新鲜水果，放人组织捣碎机中，加20mL浸提剂，迅速捣成匀浆。称10一40g浆状样品，加入10ml二甲苯进行萃取，用分液漏斗分离出下层溶液，吸取下层溶液10mL,移入100ml容量瓶中。并稀释至刻度，摇匀过滤。
［3］：田兴彩橙汁饮料中维生素C的测定第23卷 第5期2005 .9
［4］：赵连俊水果中维生素C含量测定的研究第37卷第6期2008年l2月
［5］：Patric Fontannaz, Tamara Kilinc?, Olivier HeudiHPLC-UV determination of total vitamin C in a wide rangeof fortified food productsFood Chemistry 94 (2006) 626–631
1.1.8漏斗。
2.试剂及材料(凡未加说明者均为分析纯)
2.1.0柑橘、圣女果、红枣、胡萝卜。
2.1.1浸提剂
2.1 .1.2偏磷酸:2%溶液(W/V)*。
2.1 .1.3草酸:2%溶液(W/V)**。
2.1.2抗坏血酸标准溶液(1 mg/mL):称取100m g(准确至0.lmg)抗坏血酸**，溶于浸提剂中并稀至100 mL,现配现用。
标定。
经费预算：
市售水果10元
标准维生素C 25g 40元
试验其他试剂50元
总额100元
实验结果分析：
参考文献：
［1］：李秋菊王亚红刘秀萍维生素C的测定方法第4卷第1期太原师范学院学报(自然科学版)
2005年3月
［2］：方敏，王耀峰，宫智勇木15种水果和33种蔬菜的抗氧化活性研究2008，V01．29，No．10 97
滴定度按下式计算:
T滴定度（mg/mL）=C×V/(V1-V2)
式中: T—每毫升2,6一二氯靛酚溶液相当于抗坏血酸的毫克数，
C—抗坏血酸的浓度，mg/mL;
V—吸取抗坏血酸的体积，mL;
V1—滴定抗坏血酸溶液所用2,6一二氯靛酚溶液的体积，mL;
V2—滴定空白所用2,6一二氯靛酚溶液的体积，mL。
W
式中:
V滴定样液时消耗染料溶液的体积，mL。
V0滴定空白时消耗染料溶液的体积，mL。
T 2, 6一二氯靛酚染料滴定度，mg/mL。
A稀释倍数。
W样品重量。
3.4平行测定的结果，用算术平均值表示，取三位有效数字，含量低的保留小数点后两位数字。
3,5平行测定结果的相对相差，在维生素C含量大于20mg/l00g时，不得超过2%，小于20mg /100g时，不得超过5%。
［8］：丁辰果蔬及制品中维生素C含量的常用检测方法1996(02)
［9］：林桂荣，郭勇，付亚文等新鲜果蔬维生素C测定方法研究北方园艺，1995（2），7
［10］：李向荣，方晓，诸爱珠等。果蔬与饮品中维生素C的碘酸钾萃取分光光度测定1993（2），93
【3】肖彦春，雷恩春，关秀杰，管晓琳，测定蔬菜中还原型维生素C两种方法的比较（2011)05—1035—03。
考虑到选择合适的提取剂可以延长VC的稳定时间、提高VC的提取效率，且VC在酸性介质中（如2%草酸，2%的偏磷酸及硫酸）相对稳定，因此，对4种水果中的VC进行提取，并用二氯靛酚溶液滴定测其含量。操作简便，快速，准确，无须特殊仪器。整个操作过程要迅速，防止还原型抗坏血酸被氧化。
2.易受所测物质中色素的干扰。许多果品中都含有花青素，叶绿素，类胡萝卜素等物质。其提取液通常有颜色，导致用2,6一二氛靛酚滴定法滴定时终点不易确定。为了解决这一问题，我们在靛酚滴定法的基础上，先采用二甲苯【3】等有机溶剂萃取色素，然后再用2，6，二氯靛酚进行滴定。用改进后的靛酚滴定法进行测定，滴定终点容易判断，测定结果稳定，数据重现性好，准确度高。
指导教师意见
指导教师签名：
年月日
注：1.选题类型：基础型、应用基础型、应用型、调研型；
2.课题来源：国家级项目、省部级项目、横向合作项目、校级项目、自选项目。
本文在文献的基础上，用国标法直接测定橙子中维生素c的含量，其方法简便、快速、结果准确。
可能出现的问题及分析：
1.维生素C包括氧化性和还原性两种［8］，但新鲜果品中主要是还原性的维生素C，还原性维生素C的测定方法也有很多【5】，除了上面所说的几种还有电位滴定法［1］，钼蓝比色法［9］，碘酸钾分光光度法［10］。但是值得注意的是，还原性的维生素C不稳定，易被氧化，所以测定时仅仅测定还原性的维生素C不够准确。在测定时尽量减少前处理时间，不要放置过久，避免还原性维生素C损失过多。滴定过程一般不超过2min。滴定所用的染料不应小于1mL或多于4mL，如果样品含维生素C太高或太低时，可酌情增减样液用量或改变提取液稀释度。提取的浆状物如不易过滤，亦可离心，留取上清液进行滴定。
实验设计题目
橙子中维生素C含量的测定
选题类型
应用基础型
课题来源
自选项目
学院
动物医学院
专业
生物工程
姓名
闫冰温啸
年级
2010级
学号
201015ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ8 20101580
开题报告（立题依据、研究的主要内容及预期目标、研究方案、论文进度安排、主要参考文献）
实验背景及目的：
维生素C又称为抗坏血酸，常存在于新鲜的蔬菜和某些水果中,特别是在橙子、枣、辣椒、苦瓜中含量丰富。是维持机体正常生理功能的重要维生素之一，具有多种重要的生理功能，广泛参与机体氧化、还原等复杂代谢过程，是蔬菜水果中的一项非常重要的营养指标。维生素C抗坏血酸在食品工业中常用做抗氧化剂，维生素C可促进胶原蛋白抗体，具有抗癌的作用；它能参与神经介质、激素的生物合成；能将胆固醇转化为胆汁酸，使高胆固醇血症患者的胆固醇下降；能将Fe抖还原为Fe，使其易于吸收，有利于血红蛋白的形成；还具有解毒的作用［1］。橙子中防治坏血病的主要物质为维生素C ,本文以市售的橙子为检测对象,对其营养成分———维生素C的含量进行测定,为人们正确补充营养素和合理膳食提供参考。维生素C为无色晶体，味酸，溶于水及乙醇，不耐热，在碱性溶液中极不稳定，日光照射后易被氧化破坏，有微量铜、铁等重金属离子存在时更易氧化分解，干燥条件下较为稳定。故维生素C制剂应放在干燥、低温和避光处保存；在烹调蔬菜时，不宜烧煮过度并应避免接触碱和铜器。