荧光偏振免疫分析PPT课件
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0
Instrument Placements
AxSYM RxL HM ACS 180
Access Immuno 1 Elecsys 2010 Immulite 2000
Centaur ECI
Source: Information Dynamics 2000
AxSYM 分析项目的发展
▪ 目前在AxSYM上可提供的项目有超过80项 ▪ 使用的技术有MEIA, FPIA, Ion Capture和REA
克隆酶供体免疫分析 CEDIA
cloned enzyme donor immunoassay
酶放大免疫测定技术EMIT
enzyme-mutiplied immunoassay technique
酶：６－磷酸葡萄糖脱氢酶（Ｇ－６－ＰＤ） 底物： ６－磷酸葡萄糖
６－磷酸葡萄糖
６－磷酸葡萄糖酸
Ｇ－６－ＰＤ
甲状腺功能 三碘甲状腺原氨酸 甲状腺素 游离三碘甲状腺原氨酸 游离甲状腺素 超敏促甲状腺素 促甲状腺素 3.0 甲状腺摄取 抗-TPO 抗-Tg PTH
生殖/内分泌 总B人绒毛膜促性腺激素 促黄体生成素 促卵泡生成素 雌二醇 孕酮 催乳素 睾酮
心血管急诊 肌酸激酶(MASS) 心肌钙蛋白-I 心肌红蛋白 同型胱胺酸酸 BNP
J&J
Mar. 2003 AxSYM/
Centaur/
i2000/i2000 sr
ACS180
美国
4000+/100+/ >800/>700 100+
Access/ Access 2
>1500/>25 0
Immulite/
Immulite 2000/100
--/--/100
Vitros ECi --
时间分辨荧光免疫测定 荧光免疫测定分析技术： 检测体液中微量物质 荧光偏振免疫测定(FPIA)
定义：
荧光偏振免疫测定 (fluorescence polarization immunoassay，FPIA)，为一种 均相荧光免疫测定方法，其利用荧光物质在溶液 中被单一平面的偏振光照射后，可吸收光能而产 生另一单一平面的偏振发射荧光，该荧光强度与 荧光 标记物质在溶液中旋转的速度与分子大小呈 反比，常采用抗原-抗体竞争反应原理，适用于小 分子半抗原（如药物浓度）的检测。
90 80 70 60 50 40 30 20 10 20
0 1994
44 1996
48 1998
49 2000
80 2002
AxSYM可提供之肝抗体 甲肝抗体(定量) 乙肝表面抗原确证 乙肝表面抗原 乙肝表面抗体(定量) 乙肝核心抗体 乙肝核心抗体-IgM 乙肝e抗原 乙肝e抗原(定量) 乙肝e抗体 丙肝抗体(第三代) 爱滋抗体 艾滋抗原/抗体
均相酶免疫测定
沈富兵
概述
用于小分子激素和半抗原（如药物）的测定
原理 酶标记物与相应的抗原或抗体结合后，标
记酶的活性会发生改变，不用分离结合和 游离酶标记物，通过测定标记酶的活性的 改变，而确定抗原或抗体的含量。
最具代表性的两种技术
酶放大免疫测定技术EMIT
enzyme-mutiplied immunoassay technique
治疗药物 地高辛 茶碱 普鲁卡因 乙酰普鲁卡因酰胺 奎尼丁 卡马西平 苯巴比妥 丙戊酸 洋地黄 妥布霉素 庆大霉素 万古霉素 环孢霉素
滥用药物 苯妥英钠 酒精 三环类抗抑郁药 醚沙酮 安菲他明 天使尘 巴比妥类药物 安定 水杨酸盐药物 可卡因 鸦片类 AMP/METH 大麻类药物
代谢 铁蛋白 胰岛素 B12 叶酸 考的松
FPIA的评价：
操作简便：避免多次洗涤步骤； 快速：各物质混匀，孵育数分钟后即可测定； 环保； 有颜色和浑浊的溶液不干扰检测结果。
美国雅培制药有限公司 诊断产品中国部
跨世纪全自动免疫发光系统
CAP TODAY 调查结果-
2003
产品(台数) Abbott
Bayer
Beckman DPC
先天性疾病 风疹病毒-IgG 风疹病毒-IgM 弓形体-IgG 弓形体-IgM 巨细胞病毒-IgG 巨细胞病毒-IgM
肿瘤标志物 甲胎蛋白 癌胚抗原 前列腺特异性抗原 糖类抗原125 糖类抗原153 糖类抗原199 游离前列腺特异性抗原 总前列腺特异性抗原 B-2微球蛋白 PepsinogenⅠ/Ⅱ
非美国
15000+/120 >2000/>20 >2500/>12 >5000/>200 >1000
0+/1200+ 00
5
0/200
Roche 2010/1010/ E170
600/200/50
4000/2000/ 300
20000
18000 16000 14000
全球自动化免
12000
美国
10000 8000 6000
485nm 偏振光
485nm 偏振光
产生强偏振荧光 产生偏振荧光吗？
荧光偏振免疫分析的特征： ➢AgF分子小，转动速度快，偏振荧光弱; ➢AgF-Ab分子大，转动速度慢，偏振荧光强; ➢若待检抗原多，则AgF-Ab少，AgF多，偏 振荧光弱; ➢待检抗原含量与偏振荧光强度成反比。
485nm 偏振光
非美国 总数
疫系统接受最多
4000
2000 0
AxSYM CentaurA/cAcCeSs1s8/I02mmulitVei/t2r0o0s02E0c1i0/1010/170
的仪器AxSYM :有近 20000台!
AxSYM®在全美的仪器拥有量最 多，大于4000台
5000 4000 3000 2000 1000
辅酶Ⅰ（ＮＡＤ）
还原型辅酶Ⅰ（ＮＡＤＨ） 340nm处最大吸收峰
克隆酶供体免疫分析 CEDIA cloned enzyme donor immunoassay
荧光偏振免疫测定
(fluorescence polarization immunoassay，FPIA)
荧光免疫分析法
荧光抗体技术:检测组织或细胞中抗原
原理：
➢ 光的本质是电滋波，光是各个方向电滋波的混合 物，当光线通过偏振滤光片后，形成只有一个方 向的电滋波，称之为偏振光。荧光物质经单一平 面的偏振光（蓝色光，485nm）激发后，可吸收 光能跃入激发态，在其恢复至基态时，释放能量 并发射出单一平面的偏振荧光（绿色光，525nm ～550nm） 。
Instrument Placements
AxSYM RxL HM ACS 180
Access Immuno 1 Elecsys 2010 Immulite 2000
Centaur ECI
Source: Information Dynamics 2000
AxSYM 分析项目的发展
▪ 目前在AxSYM上可提供的项目有超过80项 ▪ 使用的技术有MEIA, FPIA, Ion Capture和REA
克隆酶供体免疫分析 CEDIA
cloned enzyme donor immunoassay
酶放大免疫测定技术EMIT
enzyme-mutiplied immunoassay technique
酶：６－磷酸葡萄糖脱氢酶（Ｇ－６－ＰＤ） 底物： ６－磷酸葡萄糖
６－磷酸葡萄糖
６－磷酸葡萄糖酸
Ｇ－６－ＰＤ
甲状腺功能 三碘甲状腺原氨酸 甲状腺素 游离三碘甲状腺原氨酸 游离甲状腺素 超敏促甲状腺素 促甲状腺素 3.0 甲状腺摄取 抗-TPO 抗-Tg PTH
生殖/内分泌 总B人绒毛膜促性腺激素 促黄体生成素 促卵泡生成素 雌二醇 孕酮 催乳素 睾酮
心血管急诊 肌酸激酶(MASS) 心肌钙蛋白-I 心肌红蛋白 同型胱胺酸酸 BNP
J&J
Mar. 2003 AxSYM/
Centaur/
i2000/i2000 sr
ACS180
美国
4000+/100+/ >800/>700 100+
Access/ Access 2
>1500/>25 0
Immulite/
Immulite 2000/100
--/--/100
Vitros ECi --
时间分辨荧光免疫测定 荧光免疫测定分析技术： 检测体液中微量物质 荧光偏振免疫测定(FPIA)
定义：
荧光偏振免疫测定 (fluorescence polarization immunoassay，FPIA)，为一种 均相荧光免疫测定方法，其利用荧光物质在溶液 中被单一平面的偏振光照射后，可吸收光能而产 生另一单一平面的偏振发射荧光，该荧光强度与 荧光 标记物质在溶液中旋转的速度与分子大小呈 反比，常采用抗原-抗体竞争反应原理，适用于小 分子半抗原（如药物浓度）的检测。
90 80 70 60 50 40 30 20 10 20
0 1994
44 1996
48 1998
49 2000
80 2002
AxSYM可提供之肝抗体 甲肝抗体(定量) 乙肝表面抗原确证 乙肝表面抗原 乙肝表面抗体(定量) 乙肝核心抗体 乙肝核心抗体-IgM 乙肝e抗原 乙肝e抗原(定量) 乙肝e抗体 丙肝抗体(第三代) 爱滋抗体 艾滋抗原/抗体
均相酶免疫测定
沈富兵
概述
用于小分子激素和半抗原（如药物）的测定
原理 酶标记物与相应的抗原或抗体结合后，标
记酶的活性会发生改变，不用分离结合和 游离酶标记物，通过测定标记酶的活性的 改变，而确定抗原或抗体的含量。
最具代表性的两种技术
酶放大免疫测定技术EMIT
enzyme-mutiplied immunoassay technique
治疗药物 地高辛 茶碱 普鲁卡因 乙酰普鲁卡因酰胺 奎尼丁 卡马西平 苯巴比妥 丙戊酸 洋地黄 妥布霉素 庆大霉素 万古霉素 环孢霉素
滥用药物 苯妥英钠 酒精 三环类抗抑郁药 醚沙酮 安菲他明 天使尘 巴比妥类药物 安定 水杨酸盐药物 可卡因 鸦片类 AMP/METH 大麻类药物
代谢 铁蛋白 胰岛素 B12 叶酸 考的松
FPIA的评价：
操作简便：避免多次洗涤步骤； 快速：各物质混匀，孵育数分钟后即可测定； 环保； 有颜色和浑浊的溶液不干扰检测结果。
美国雅培制药有限公司 诊断产品中国部
跨世纪全自动免疫发光系统
CAP TODAY 调查结果-
2003
产品(台数) Abbott
Bayer
Beckman DPC
先天性疾病 风疹病毒-IgG 风疹病毒-IgM 弓形体-IgG 弓形体-IgM 巨细胞病毒-IgG 巨细胞病毒-IgM
肿瘤标志物 甲胎蛋白 癌胚抗原 前列腺特异性抗原 糖类抗原125 糖类抗原153 糖类抗原199 游离前列腺特异性抗原 总前列腺特异性抗原 B-2微球蛋白 PepsinogenⅠ/Ⅱ
非美国
15000+/120 >2000/>20 >2500/>12 >5000/>200 >1000
0+/1200+ 00
5
0/200
Roche 2010/1010/ E170
600/200/50
4000/2000/ 300
20000
18000 16000 14000
全球自动化免
12000
美国
10000 8000 6000
485nm 偏振光
485nm 偏振光
产生强偏振荧光 产生偏振荧光吗？
荧光偏振免疫分析的特征： ➢AgF分子小，转动速度快，偏振荧光弱; ➢AgF-Ab分子大，转动速度慢，偏振荧光强; ➢若待检抗原多，则AgF-Ab少，AgF多，偏 振荧光弱; ➢待检抗原含量与偏振荧光强度成反比。
485nm 偏振光
非美国 总数
疫系统接受最多
4000
2000 0
AxSYM CentaurA/cAcCeSs1s8/I02mmulitVei/t2r0o0s02E0c1i0/1010/170
的仪器AxSYM :有近 20000台!
AxSYM®在全美的仪器拥有量最 多，大于4000台
5000 4000 3000 2000 1000
辅酶Ⅰ（ＮＡＤ）
还原型辅酶Ⅰ（ＮＡＤＨ） 340nm处最大吸收峰
克隆酶供体免疫分析 CEDIA cloned enzyme donor immunoassay
荧光偏振免疫测定
(fluorescence polarization immunoassay，FPIA)
荧光免疫分析法
荧光抗体技术:检测组织或细胞中抗原
原理：
➢ 光的本质是电滋波，光是各个方向电滋波的混合 物，当光线通过偏振滤光片后，形成只有一个方 向的电滋波，称之为偏振光。荧光物质经单一平 面的偏振光（蓝色光，485nm）激发后，可吸收 光能跃入激发态，在其恢复至基态时，释放能量 并发射出单一平面的偏振荧光（绿色光，525nm ～550nm） 。