植物无病毒苗的培育

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b、在旺盛分裂的细胞中,代谢活动很高,使病毒 无法进行复制。
c、在植物体内可能存在着病毒钝化系统,他在分
生组织中比其他任何区域具有更高的活性。
d、在茎尖中存在高水平内源生长素,可抑制病毒
的增殖。
茎尖培养主要用于消除病毒以及类病毒、类菌质体、
细菌和真菌等病原菌。
三、脱毒机理及方法-茎尖培养脱毒 2.茎尖培养方法
三、脱毒机理及方法-茎尖培养脱毒 3.培养基与培养方式
• (1)常用培养基: MS White、Morel • (2)提高钾盐的含量会有利于茎尖生长。在用MS培 养基时,其中有些离子的浓度过高应适当稀释。 • (3)严格控制糖浓度,一般2-4%,蔗糖、葡萄糖较 好。 • ( 4 ) 适当提高生长素( 0.1 - 0.5mg/L )与细胞分 裂素浓度。有时可加活性炭。用 NAA或 IBA, Kt或 BA, 不用2,4-D。 GA适当。
三、电子显微镜检查法 四、酶联免疫鉴定法
含义:采用酶标记抗原或抗体的定量测定 法。
方法:将抗原固定在支持 物上,加入待检血清,然 后加入酶(过氧化物酶或 碱性磷酸酶)标记的抗体, 使待检血清中与对应抗原 的特异性抗体结合,然后 用特殊分光光度计测定。
六 无病毒苗的保存和利用
一、无病毒苗的保存繁殖 1. 通常无病毒苗应种植在隔虫网内, 使用 300 目(网眼为 0.4 - 0.5mm ) 的网纱,防止蚜虫进入。栽培用的 土壤也要进行消毒。 2.通过离体培养进行繁殖和保存。
无成效。通过组织培养的方法可以脱除严重患病毒植物的病毒种类, 提高产量、质量。用组织培养方法生产无毒苗,是一个积极有效的途 径,由于排除了使用药剂,所以对减少污染,防止公害,保护环境都 有积极的意义。
2.培育途径: A.群体中未受病毒侵染的植株无性繁殖获得。
B.种子繁殖获得(有些作物种子也含病毒)。但后代往
4、珠心胚培养脱毒
柑橘类植物一般具有多胚现象,也就是说除了一个
受精胚以外,还有多个由珠心细胞形成的无性胚, 称为珠心胚。珠心胚与维管系统无联系,因此由珠心胚 产生的植株也就无病毒。但珠心胚大多不育,所以离体 培养才能发育成正常的幼苗。珠心胚培养技术对除去柑 橘主要病毒起到重要的作用。如脱除柑橘的银屑病、叶 脉突出病、柑橘裂皮病、柑橘退衰病等十分有效。
尖大小不同。
(2).培养条件:增加光照
(3).外植体的生理状态
茎尖最好在活跃生长的 芽上切取,取芽的时间最好 是在萌动期较好。
三、脱毒机理及方法-其它脱毒方式
愈伤组织培养脱毒 茎尖微体嫁接 化学疗法脱毒 珠心胚培养脱毒 花药培养脱毒
1、愈伤组织培养脱毒
原理:
(1)愈伤组织分化植株,40%单细胞含有病 毒,病毒的复制赶不上细胞的增殖速度 (2)有些细胞经过突变获得了抗病毒性。
缺陷:
后代变异的几率大;有的愈伤组织不能分 化成苗。
2、茎尖微体嫁接
木本植物茎尖培养难以生根成植株, 将实生苗砧木在人工培养基上种植培 养,再从成年无病树枝上切取微茎尖 (0.3-1.0mm) ,在砧木上进行微体嫁 接,以获得无病毒植株。果树上应用 多。
题名:红花茎尖微嫁接技术研究 作者:付宏岐 辛梅 宋金东 薛萍 史俊卿 出处:《人参研究》 2012年4期
题名:三个枣品种的微嫁接快繁体系 作者:王娜 秦子禹 刘孟军 项殿芳 出处:《河北科技师范学院学报》CAS 2009年2期
3、化学疗法脱毒
许多化学药品(包括嘌呤、嘧啶类似物、氨基酸、抗 菌素等)处理植物,进行抑制病毒的增殖或使之不活 化,整株植物用化学疗法不能除去病毒,但离体培养 和原质体培养效果明显。
(1)、材料选择、消毒:
在植株上直接取或在室内培养一段时间的植株上取顶
芽或侧芽(3-5mm),然后消毒(或不消毒)。
(2)、微茎尖的剥取:
解剖镜下剥取。注意勿损伤生长点。
三、脱毒机理及方法-茎尖培养脱毒
茎 尖 分 生 组 织 剥 离
三、脱毒机理及方法-茎尖培养脱毒 ②茎尖培养方法
(3)、接种:随剥随接,尽快接种。 ( 4 ) 、 培 养 : 25℃ 左 右 , 每 天 以 16h 、 1500 - 5000lx光照下培养。保证较高温度和充足光照时间。 (5)、继代、生根培养:同器官培养。
三、脱毒机理及方法-茎尖培养脱毒 1.茎尖培养脱毒原理
• (1).染病植株体内病毒的分布不均匀,越靠近茎顶
的感染深度越低,生长点(约 0.1 -1.0mm )几乎不
含或含病毒很少。原因可能是:
a 、分生组织中不存在无维管束,病毒只能通过胞间
连丝传递,速度慢,不及细胞不断分裂和生长的速
度。因此可利用微茎尖培养脱毒。
Plants were placed in a growth chamber under the conditions of 16 hours photoperiod at 28 º C and 8 hours dark period at 25 º C. Temperatures were raised 2 º C/ 2 days till final setting of 42 º C day and 39 º C night was obtained. Plants w e r e m a i n t a i n e d u n d e r t h e s e c o n d i t i o n s f o r a d d i t i o n a l 4 we e k s .
往会发生变异。 C.组培脱毒,既培育无病毒苗,相对保持物种遗传稳定 性。又能减少污染,防止公害,保护环境。
三、植物脱毒机理及方法-热处理脱毒(温热疗法) 热处理脱毒原理 当植物组织处于高于正常温度的环境 (35-40℃)时,组织内部的病毒部分或全部 钝化,但寄主植物的组织很少或不会受到伤 害。

(二)草本指示植物鉴定方法
1.汁液涂沫法 2.小叶嫁接法 ▼ ▼
(三)木本指示植物鉴定方法
嫁接鉴定法,常用劈接。

1.汁液涂沫法
①采取汁液
在被鉴定植物上取1-3g幼 叶,在研钵中加入 10ml 水及少量磷酸缓 冲液(PH7.0),研碎后用双层纱布过滤, 再在汁液中加入少量的 500 - 600 目金钢 砂(摩擦剂)。 ②接种 用棉球蘸取汁液在指示植物叶 面上轻轻涂沬 2 - 3 次,后用清水冲洗叶 面。 ③培养 在防蚜虫温室内培养,15-25C, 2-6天观察病症。 ▲
二、无病毒苗的利用 在生产中防止病毒再感染,一旦感染 要重新采用无病毒苗,以保证质量。
三、无病毒苗的效果 无病毒苗可以表现出明显的优良效果。
本节总结
复习思考题:
1.热处理为什么可以脱毒? 2.为什么用微茎尖组织培养形成的试管苗一 般是无毒的? 3.你知道有哪些脱毒苗已用于生产,并以此 理解组织培养在培育脱毒苗木的意义?
超低温疗法:对茎尖进行超低温保存是脱除植物病毒的一种简单、快速而有 效的方法,是植物脱毒的一种新途径。
王乔春:利用茎尖培养和冷冻疗法消除甘薯体内具有协同作用的2种病毒
王乔春 教育背景: 1978-1982年就读四川农业大学园艺系,毕业留校;1986-1988 年留学丹麦皇家农业大学与瑞典农业大学获硕士学位;1994赴奥地利维也纳大学 应用微生物系作访问学者;1995-1998年任四川农业大学林学园艺学院常务副院 长,省农科院园艺所所长;1998-2003年留学以色列西伯莱大学获博士学位并开 展博士后工作; 2003-2008年任芬兰赫尔辛基大学应用生物系访问教授。2008至 今在西北农林科技大学园艺系工作。 超低温处理茎尖脱毒这项世界尖端科研项目,被世界茎尖超低温冷冻脱除病原菌研 究的奠基人之一的王乔春从芬兰赫尔辛基“平移”到了西北农林科大。“我们目前 和国外的最前端研究处在同一水平线,植物脱毒研究保持领先。目前已开展了包括 苹果、枣、葡萄、百合、马铃薯、甘薯等多项植物材料的超低温冷冻研究。”
申请专利号
200710022803.7
专利申请日
2007.05.22
名称
一种利用草莓花药培养进行脱毒快繁的方 法
CN101049090
公开(公告)号

病毒植物的鉴定
一、指示植物法 (一)指示植物的确定 (二)草本指示植物鉴定方法 (三)木本指示植物鉴定方法
▼ ▼ ▼
Байду номын сангаас

(一)指示植物的确定
• 利用病毒在其他植物上产生枯斑作为鉴 别病毒种类的方法。 • 专门用以产生局部病斑的寄主植物即为 指示植物,又称寄主植物。它只能鉴定 靠汁液传染的病毒。 • 应根据不同的病毒选择适合的指示植物。 并且一年四季都可栽培。
三、脱毒机理及方法-茎尖培养脱毒 3培养基与培养方式 注意: 一般用琼脂培养基。对于在固体培养 基上易形成愈伤组织的须用滤纸桥。
三、脱毒机理及方法-茎尖培养脱毒 4.影响微茎尖培养的因素 (1).外植体大小:
通常以带1-3个幼叶原基的茎尖(约0.3-
0.5mm)作外植体为宜。不同植物脱毒适宜的茎
复习思考题:
4.如何鉴定茎尖培养而成的脱毒苗 确实无毒? 5.如何理解枯斑法鉴定植物是否脱 毒的作法? 6.怎样保存和利用无毒苗?
三、脱毒机理及方法-热处理脱毒(温热疗法) 热处理方法
(1)温汤(浸渍)处理:
适用于离体材料(如接穗) 和休眠器官的处理。如:在50
℃左右的温水中浸渍10min至数
小时,使病毒失活。
三、脱毒机理及方法-热处理脱毒(温热疗法) 热处理方法
(2)热风(热空气)处理:
(1)恒温处理:将生长的
盆栽植物移入温热疗室
土 豆
草莓
甘 薯
植物脱毒技术
第 章
植物无病毒苗的培育(3学时)
目的要求: 1.掌握热处理和微茎尖培养脱毒的方法、无病毒植物的鉴 定和利用; 2.一般掌握其他途径脱毒方法; 3.理解微茎尖脱毒的原理、无毒苗培养的重要意义; 4.了解无病毒苗木的保存和利用方法。 主要内容: 1.微茎尖培养脱毒技术; 2.脱毒苗的鉴定
题名:梨的试管微嫁接技术研究 作者:赵巍巍 陈蕾 曹后男 宗成文 姜淑苓 出处:《安徽农业科学》 CAS 2010年2期 基金:国家自然科学基金项目(30560091,30960231 ).
题名:薄皮核桃微嫁接技术研究 作者:苗玉青 吴松林 赵惠新 李冠 出处:《新疆农业为科学》 CAS CSCD 2009年4 期
本节内容
一、病毒在植物上的危害 二、无病毒苗培育的意义
三、植物脱毒机理及方法
一、病毒在植物上的危害
2007年,广州香蕉林近半感染病害面临绝迹危险。
1.很严重
感染巴拿马病毒的香蕉相继枯死
2.目前无药可治
3.生产损失大
二、无病毒苗培育的意义
1.意义:采用生物、物理、化学等途径防治病毒病收效甚微,甚至毫
(光照培养箱)内,一 般在35-40 ℃ 。对活 跃生长的茎尖效果较好, 处理时间因植物而异。
三、脱毒机理及方法-热处理脱毒(温热疗法) 热处理方法
(2)热风(热空气)处理:
(2)变温处理:如马铃薯每天40 ℃处理4h,可 清除芽眼中马铃薯的卷叶片病毒,而且保持芽 眼的活力。 缺陷:不能脱除所有病毒。例如在马铃薯中只 能消除卷叶病毒。 注:热处理需与其它方法配合应用
小 叶 嫁 接 法
二、抗血清鉴定法
植物病毒作为抗原,给动物注射后会在血清 之中产生的抗体称抗血清。不同的病毒产 生的抗血清有各自的特异性。用已知抗血 清可以鉴定未知病毒的种类 ,是目前最有用 的方法之一。 方法: 1、抗原的制备 2、抗血清的采收,分离 3、贮存 -15℃至-25℃的冰冻条件下。 4、鉴定 凝聚反应。
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