cDNA获取方法

索取条款

本着科研工作者之间互通有无的原则，非营利性质的研究机构的科研人员可向本实验室索取我们收集的人类全长cDNA，请在索要cDNA前，详细阅读本索取条款。

1.索取人不得将cDNA转让于第三方或用于商业用途。

2.按照本实验室提供的方法，索取人可以使用PCR方法方便快速地克隆相应

基因，但我们不能保证所提供的cDNA一定能够满足索取人的实验要求，不过我们欢迎索取人的反馈。

3.本实验室收集的cDNA数量众多，信息繁杂，不便查询，无法提供除cDNA

序列以外的任何信息，请勿询问。

4.本实验室对提供cDNA不收取任何费用，请索取人自付邮资（邮资到付）。

此外，因本实验室人力有限，索取的样品一般情况下不能多于10个/次，如有特殊需求，可以直接跟我们联系协调。本实验室每周寄出一至两次样品，在寄出样品后，我们会邮件通知。本校实验室凭打印的邮件直接来本实验室领取。

5.通过该网站仅能索取我们收集的cDNA，如需要我们发表的文章中所用到的

质粒，请另外来信索取。

6.请严格按该方法通过PCR来扩增cDNA，否则可能将无法得到需要的cDNA。

cDNA获取方法

本实验室提供的cDNA样品为100 μL含抗生素的菌液。收到菌液后，请先确认菌液是否浑浊，若菌液澄清，请先在37度摇床上过夜培养后再使用。另外，由于我们在建库时，每管中可能含有不只一种cDNA，因此不推荐将菌液在平板上划线后挑取单克隆进行扩增。根据我们的测试，使用此方法获取目的cDNA的概率达95%以上。

具体方法如下：

1.取1 μL菌液为模板，PCR扩增全长cDNA。我们网站上的核酸序列为cDNA的实际序列，因此设

计引物时，请严格按照我们提供的序列设计引物。

PCR体系一定要有去污剂（如，Triton X-100），我们推荐的PCR体系如下：

菌液模板 1 μL

10× PCR buffer 5 μL

10 mM dNTP mix 1 μL

10 μM Forward Primer 1 μL

10 μM Reverse Primer 1 μL

Taq 2.5 U

H2O 至总体积50 μL

提示：

1)实际上，很多（但不是全部）商业化的高保真酶同样可以用来扩增该cDNA，但是必须确保反应的体系中含有去污剂。

2)若使用其它PCR反应体系无法得到所需cDNA，请按上述推荐体系重新进行一次PCR。

3)若使用上述推荐体系仍无法得到所需cDNA，在我们实验室，我们采用北京全式金生物技术有限公司的TransStart Taq DNA

Polymerase（货号AP141），按照公司附带的说明书使用，可以获得很好的效果。

4)若用以上方法仍无法扩增出所需cDNA，可取10 μL菌液接菌至1.5 mL含抗生素的LB中过夜培养后提取质粒，再进行PCR。

5)若仍无法得到所需的cDNA，请更换另一种DNA聚合酶或PCR缓冲液重新尝试，或更改PCR引物。

2.用琼脂糖凝胶电泳回收PCR产物，即可获得全长cDNA。