脂肪酸测定方法

脂肪酸组分分析（6）
提取：
1、准确称取2 g样品，用研钵研磨至细糊状，加入5 mL提取液充分匀浆，小心转
移至50 mL离心管中，残渣用15 mL提取液充分洗涤后合并至离心管中；
2、密封后40 ℃水浴条件下超声波提取30 min（期间可振荡混匀2-3次），然后室温
条件下4,000×g离心5 min；
3、将上层有机相转移至50 mL离心管中，原管再加入5 mL正己烷重复提取10 min，
加入5 mL蒸馏水，充分振荡混匀，然后室温条件下4,000×g离心5 min；
4、将上层有机相合并至50 mL离心管中，加入适量无水硫酸钠充分振荡混匀，然后
室温条件下4,000×g离心5 min；
5、将有机相转移至50 mL蒸发瓶中蒸干，加入500 μL二氯甲烷（含0.1% BHT），
用枪头轻轻吸打至完全溶解后转移至2 mL离心管中，蒸发瓶用500 μL二氯甲烷再洗涤一次，合并有机相并混匀，然后室温条件下4,000×g离心5 min备用；
甲酯化：
6、取2 mL甲酯化试剂（14% BF3-CH3OH:CH2Cl2:CH3OH=25:20:55，v/v/v；含0.1%
BHT）于带密封内衬垫的10 mL螺帽离心管中（防止有机溶剂蒸发），准确加入200 μL油脂轻轻吸打混匀，密封后100 ℃沸水浴甲酯化30 min；
7、将离心管转移至4 ℃冰箱中冷却5 min，依次加入2 mL正己烷和2 mL蒸馏水充
分振荡混匀，然后4 ℃条件下4,000×g离心5 min；
8、将上层有机相转移至2 mL离心管中，加入适量无水硫酸钠充分振荡混匀，然后
4 ℃条件下4,000×g离心
5 min，将上层有机相转移至1.5 mL GC上样瓶中备用。

提取液：正己烷:丙酮:无水乙醇=50:25:25，v/v/v；含0.1% BHT。