生物显微技术复习-2013课后答案

附三：复习思考题

1.什么叫生物制片，它分几大类？

生物制片：就是要经过特殊手段，将所观察的材料制成体积小而又透明的薄片，使其能在显微镜下直接观察和研究。

它分切片法和非切片法两大类。

2.什么叫切片法？简述其主要过程。

切片法：就是要将新鲜的材料经过特殊的处理，用刀片切成薄片的过程。

基本过程：固定→冲洗→脱水→透明→包埋→切片→染色→分化→封片。

⒊什么叫非切片法？它有哪些方法？简述其主要过程。

非切片法：就要用物理或化学的方法，将生物体组织分离成单个细胞或薄片，或将整个生物体进行整体封藏。

非切片法包括：整体制片法、离析法、压片法、涂片法、透明法。

基本过程：固定→冲洗→整体染色→分化与退染→脱水→透明→压片。

⒋什么叫固定，固定的目的是什么？

固定：就是将所要观察的新鲜材料，从动植物体取下后立即投入某类的化学药液中，借助化学药品的作用使细胞组织的形态结构保存下来不使其改变形态和变质的一种手续。

固定的目的和作用在于：①防止组织自溶和腐败；②使细胞内的各种内含物沉淀保存下来，使其保持了与生活时相近似的形态和结构；③将各种细胞和组织成分的析光率作不同程度的改变，增强组织的析光指数，使各种染色成份更容易辨认；且有的固定剂还有助染的作用，从而使细胞的各部位更易于染色。④固定剂还兼有硬化的作用，使柔软的组织硬化而不易变形，有利于操作。

⒌简述单纯固定液乙醇、醋酸的特点。

①乙醇(alcohol) C2H5OH，通称酒精。特点：杀死快、渗透力强、可使材料变硬；可沉淀白蛋白、球蛋白和核蛋白；是还原剂。

②醋酸(acetic acid) CH3COOH，又称乙酸。穿透力极强，有软化作用，能固定核蛋白和胞质。一般可以使细胞膨胀和收缩。

⒍透明常用的透明剂有哪些？它的主要目的是什么？

常用的透明剂有：二甲苯、甲苯、苯、氯仿、香柏油和丁香油。

透明的主要目的：包埋前的材料通过透明剂的透明，使之便于透蜡包埋；染色后的透明，目的是增加透明度，不仅可以便于观察，而且可以溶解封藏剂，使

封片均匀紧密。

⒎什么叫石蜡切片法？它有哪些优点和缺点？

石蜡切片法：用石蜡包埋组织块，再进行切片和染色的制片方法。

优点：操作比较容易，能够切成较薄的（2~10um）连续切片。

缺点：脱水与浸蜡后组织易收缩，坚硬易碎和易变脆的材料以及较大的材料块不适合制作石蜡切片。

⒏石蜡切片时石蜡带出现弯曲不直，原因有哪些？如何补救？

原因：蜡块形状不规则、蜡块边缘不平行并与刀刃不平行、刀钝、刀角偏大等。补救：可修整切蜡块使上下平行且成倒梯形，刀钝需磨或移动刀口至锐利处。

⒐石蜡切片时切片分离，不能连成带状，原因有哪些？如何补救？

原因：可能是室温过低、石蜡过硬、蜡边过小或不平所致。

补救：针对具体原因，室温过低时，提高室温，可在切片机旁加点酒精灯；或加快切片速度；若是蜡块问题，可重新包埋。

⒑石蜡切片时材料发生裂隙破碎或脱落，可能的原因及补救方法有哪些？

原因：组织浸蜡不足、浸蜡温度过高、在透明剂中时间过久已发脆，此时无法补救。

⒕通过石蜡切片实验，你认为关键操作点有哪些？

1、取材与固定；

2、冲洗；

3、脱水；

4、保存；

5、染色；

6、透明；

7、封藏。⒖试说明光圈的作用。

第一，与快门一起构成曝光组合，控制光线进入相机时的强弱第。二，与焦距和摄距一起控制景深长短。光圈越大，景深越浅。光圈越小，景深越深。第三，控制镜头的相差。

⒗用闪光灯拍摄时，有时会产生“红眼病”，试分析其产生的原因及解决的方法。

原因：造成“红眼病”的原因是由于当人长时间地呆在较黑暗的环境中，瞳孔为适应视觉需要而放大，眼睛充血，这时如果闪光灯的位置与得眼睛一般高低，被摄者又是正面对着镜头，瞳孔与灯处于同一直线，那么，在拍摄时，当闪光灯的闪光透过瞳孔照在眼底时，密密麻麻的微细血管在灯光照映下显现出鲜艳的红色反射回来，在眼睛上形成“红点”的自然现象，就是所谓的“红眼”。解决方法：

①不要让被摄者长时间地处于深暗的环境中。在室内一般都可以尽量把照明灯都打开，如果环境中确实不存在较明亮的光源，可以想法再拍摄之前的短暂时间让被摄者的眼睛经受一下强光的刺激。

②适当调整闪光灯的照射角度，或高或低，或偏或斜，注意不要让灯与被摄者的双眼处于同一水平线上。

③使用无法改变方向的内置闪光灯时，可以让被摄者的脸部转动一下，不要正面朝着照相机。或者被摄者的眼神呈仰视或俯视状，也能消除“红眼”之弊。

17．说明影响景深的三大因素。

影响景深大小的因素有三点：光圈的大小、摄距的远近及镜头焦距的长短。

其规律如下：（光圈的大小：光圈大、景深小；光圈小，景深大。摄距的远近：摄距远、景深大；摄距近，景深小。镜头的焦距：焦距长、景深小；焦距短，景深大。）

18．怎样运用景深拍摄下列要求的照片？

①三个层次都清晰：即实----实-----实

使用小光圈，快门时间长，使用摄影架。

②三个层次为：虚----实----虚

使用大光圈，中长焦镜头，调焦对准中间的物像。

③两个层次为：虚----实

使用大光圈，调焦对准后面的物像。

20．物镜有哪些种类？并写出每类物镜金属外壳上的英文标识。

按其消除色差程度不同，物镜可分为以下几种：

①半复消色差物镜(FL)；②平视场物镜(Plan)；③复消色差物镜(APO)；④消色差物镜（ACH）

21.什么叫显微摄影？

利用光学显微摄影装置或数码显微摄影装置来拍摄显微镜或解剖镜视野中所观察到的物像的细微结构真实的记录下来的技术。

23．显微摄影为什么特别强调提高影像的反差？如何提高反差？

因为适当提高反差能提高照片质量。

提高措施：

①标本新鲜、色彩鲜艳；