葛根含量测定方法(葛根素)

葛根含量测定方法（葛根素）

葛根为豆科植物野葛Pueraria lobata(Willd.)Ohwi的干燥根。2005版《中国药典》一部采用高效液相色谱法测定其葛根素的含量。

一、高效液相色谱法

2005版《中国药典》葛根含量测定项下：

色谱条件与系统适用性试验：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-水（25：75）为流动相；检测波长为250nm。理论板数按葛根素峰计算应不得低于4000。

供试品溶液的制备：取本品粉末约0.1g，精密称定，置锥形瓶中，精密加入30%乙醇50ml，称定重量，加热回流30分钟，放冷，再称定重量，用30%乙醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

HPLC法测定葛根及其制剂中葛根素的含量时，使用最多的流动相系统为甲醇-水系统，另外还有甲醇-水，加醋酸调节pH等。

A：以甲醇-水为系统的，常见的比例及实验条件为：

①Waters2695/ 2996/ Empower 色谱系统；色谱柱Symmetry C18 柱( 3.9mm×150mm, 5μm)；流动相：甲醇-水(25：75)；DAD检测波长254nm；柱温35℃。

②SP8800 型高效液相色谱泵；Hypersil ODS (4.6mm×250mm,5μm大连依利特科学有限公司)；流动相：甲醇-水(30：70)；柱温40℃；检测波长250nm。

③Waters高效液相色谱仪；十八烷基硅烷键合硅胶色谱柱（4.6mm×250mm,5μm）；甲醇-水（40：60）为流动相；检测波长为250nm；柱温30℃。

④美国Spectra-Physics 液相色谱仪；色谱柱Lunm C18 (150mm×4.6mm, 5μm ) 不锈钢柱(美国Phenom enex 公司)；流动相为甲醇-水(28：72)；检测波长250nm；柱温30℃。 B：乙腈-水系统：

①LC-10ATvp高效液相色谱仪；Hypersil ODS 色谱柱(4.6mm×150mm,5μm)；乙腈-水(15：85)为流动相；检测波长250nm。

②TSP 高效液相色谱仪；色谱柱Turner C18H37（5μm，4.6mm×150mm）；流动相：乙醇-水(43：207)；柱温30℃；检测波长250nm。

C：加酸调节的，如：

①LC-10A高效液相色谱仪；色谱柱为ODSC18柱（5μm，4.6mm×150mm）；流动相为甲醇-水（35：65），内含0.01%醋酸；柱温35℃；检测波长251nm。

②SP-8800高效液相色谱仪；色谱柱ODS-C18柱(4.6mm×250mm,5μm)；流动相：甲醇-1.4%醋酸溶液( 22：78 )；柱温室温；测定波长: 250nm。

③美国Beckman公司高效液相色谱仪；Hypersil ODS柱（2.5μm，4.6mm×250mm）；流动相为甲醇-氯仿-1.5%冰醋酸（22：1：77）；检测波长250nm。

④SP1000 高效液相色谱泵；色谱柱YMC C18不锈钢柱(4.6mm×150mm,5μm)；流动相：甲醇-水醋酸(42∶100：0.2)；检测波长250nm；柱温:室温。

其它如：吕竹芬等测定心血宁滴丸中葛根素的含量，采用高效液相色谱法，Dikma piamonsil C18色谱柱(4.6mm×200mm,5μm)，以甲醇-乙腈-水(30：2 ：65)为流动相，流速为1.0mL/min，检测波长250nm。

颜春华等测定脑得生片中葛根素的含量，采用日本岛津LC-4A高效液相色谱仪；色谱柱DiamonsilTM (钻石) C18(200mm×4.6mm,5μm)；流动相：乙腈-甲醇-0.1%枸橼酸溶液(5：25：75)；紫外检测波长250nm；柱温室温。

制备样品溶液时，一般以30%乙醇、50%乙醇、乙醇、甲醇、流动相或盐酸溶液（9→1000）等为溶剂，采用超声法提取。

二、其它

杨振林等测定葛根冲剂中葛根素含量，采用薄层- 紫外分光光度法，751GD 型分光光度计(上海分析仪器总厂)。薄层层析硅胶G板,以氯仿-甲醇-水(7：28：0.2)为展开剂,在紫外灯(365nm)下定葛根素位置,刮下斑点,用甲醇洗脱,测定波长为251±1nm。

崔小兵等测定通脉颗粒剂中葛根素及阿魏酸的含量，采用双波长(λ1= 250nm ,λ2=313nm) 梯度洗脱法。Waters 2690 型高效液相色谱仪；色谱柱Kromasil C18柱(4.6mm×250mm，5μm)；柱温为30℃,甲醇-1%醋酸水梯度洗脱；检测波长为250nm；柱温30℃。

方崇波等采用离子络合紫外分光光度法测定葛根素及其制剂的含量，采用UV4/2401 紫外分光光度计(岛津)。方法：:在pH=4.0条件下,葛根素和Al3+形成络合物,在339.8 nm波长处通过测定吸收度的改变来测定含量。