动物生理学实验三 鱼类血液涂片制作与血细胞计数ppt课件

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多种多样的血液检测仪
动物生理学实验三 鱼类血液涂片制作与血细胞计数
血液检测能够辅助疾病诊断
动物生理学实验三 鱼类血液涂片制作与血细胞计数
血涂片的显微检查是血液细胞学检查的基本方法,也是 生物显微制片的基本方法之一,临床上应用极为广泛,特别 是对于各种血液病的诊断具有重要的价值。制备厚薄适宜, 分布均匀,染色良好的血涂片是血液学检查的重要基本技术 。
动物生理学实验三 鱼类血液涂片制作与血细胞计数
3、推片 取一块边缘光滑的载片做推片。将其一端 刮取血滴,迅速使血液均匀分散在推片与载片的接触处。 然后使推片与载片呈30°~40°,向另一端平稳地推出,涂 片推好后,放置于空气中使之自然干燥。
(1)将采出的血液滴在载片上
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不良血涂片
动物生理学实验三 鱼类血液涂片制作与血细胞计数
4、血涂片染色 先将干燥血片用甲醇固定3-5分钟,将固定的血片置于
被pH 6.4-6.8磷酸盐缓冲液稀释10-20倍的吉姆萨染液中, 浸染5分钟(标本较少可用滴染法),取出用蒸馏水冲洗, 再用伊红复染1分钟,用蒸馏水冲洗,待干后镜检。
动物生理学实验三 鱼类血液涂片制作与血细胞计数
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2、血液的采集 将准备好的2mL注射器,抽动活塞用肝 素钠溶液将注射器内湿润,为血液的采集做好准备工作。血 液的采集按实验2的采血方法进行,采好的血液保存于1.5 mL离心管中待用。
3、充液 取干净的计数板平放于实验桌上,将盖玻片置 入计数板正中央。用毛细血管吸取已稀释混匀后的血细胞悬 浮液,并将管尖轻轻斜置于盖玻片边缘,让血细胞悬液缓慢 流出,借毛细管现象而自动流入计数室内。
动物生理学实验三 鱼类血液涂片制作与血细胞计数
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4、静置 血细胞悬液充入计数室后,静置2~3分钟 ,待细胞不再浮动后,于低倍镜下观察计数室内待计数 的血细胞分布是否均匀,分布均匀者,方可计数。
(2)另一张边缘光滑的双凹片,斜置于血滴的前缘 ,先向后稍移动轻轻触及血滴,使血液沿玻片端展开成线 状。
动物生理学实验三 鱼类血液涂片制作与血细胞计数
(3)两玻片的角度以30-45°为宜,轻轻将双凹片向 前匀速推进,即涂成血液薄膜。
动物生理学实验三 鱼类血液涂片制作与血细胞计数
(4)血涂片
动物生理学实验三 鱼类血液涂片制作与血细胞计数
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涂片经瑞氏-吉姆萨染色液染色后,相应各类细胞呈 现不同的着色,从而达到辨别其形态特征的目的。一般细 胞的细胞核嗜碱性,能被碱性燃料染成蓝色,而细胞质基 质嗜酸性,能被酸性燃料染成红色。
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血细胞计数法是将小量待测样品血液的悬浮液置于一 种特别的具有确定面积和容积的载玻片上(又称细胞计数 板),于显微镜下直接计数,根据血液稀释的倍数,进一 步推算出血液中血细胞数的一种方法。
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血液涂片技术在水产动物疾病检测过程中也有非常重 要的作用,比如细菌感染、病毒感染以及血液寄生虫疾病 的检测。目前该技术已成为水产技术从业人员的必备技能, 也是执业资格考试的重点内容。
动物生理学实验三 鱼类血液涂片制作与血细胞计数
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6、计算 计完数后,需换算出每ml悬液中的细胞数。 由于计数板中每一方格的面积为0.01 cm2,高为0.01 cm,这 样它的体积为0.0001 cm3,即0.1 mm3。由于1 ml=1000 mm3,所以每一大方格内细胞数×10000=细胞数/ml,故可 按下式计算:
细胞悬液细胞数/ml=4个大格细胞总数/4×10 000 如计数前已稀释,可再乘稀释倍数。
动物生理学实验三 鱼类பைடு நூலகம்液涂片制作与血细胞计数
动物生理学实验三 鱼类血液涂片制作与血细胞计数
1、血液稀释 用10微升移液枪取10微升血液于一新的 1.5mL离心管中,再用1000微升移液枪吸990微升生理盐水 于离心管中(稀释100倍),轻轻颠倒混匀。
2、计数板处理 用无水乙醇或95%乙醇溶液擦拭计数板 后,用绸布擦净,另擦净盖玻片一张,把盖片覆在计数板上 面。
涂片干燥后加吉姆萨染液染色5分钟
冲洗后滴加少量伊红,染色1分钟
直接流水冲洗1分钟 (切勿先倒掉染液)
涂片经水洗干燥后镜检
动物生理学实验三 鱼类血液涂片制作与血细胞计数
二、血细胞计数
❖ 血细胞计数板的结构 ❖ XB-K-25为计数板的型号和规格,表示此计数板分25个中格。
0.1mm为盖上盖玻片后计数室的高;1/400mm2表示计数室面 积是1mm2 ,分为400个小格,每小格面积是1/400mm2。
动物生理学实验三 鱼类血液涂片制作与血细胞计数
血细胞计数换算公式: 16×25:计数个数×400×10000÷100×稀释倍数
动物生理学实验三 鱼类血液涂片制作与血细胞计数
5、按图计算计数板的四角大方格(每个大方格又分 16个小方格)内的细胞数。计数时,只计数完整的细胞, 若聚成一团的细胞则按一个细胞进行计数。在一个大方格 中,如果有细胞位于线上,一般计下线细胞不计上线细胞 ,计左线细胞不计右线细胞。
动物生理学实验三 鱼类血液涂片制作与血细胞计数
血液:是一种由血浆和血细胞组成的流体组织,由心脏 搏动推动在心血管系统中不断循环流动,具有运输、防御和 免疫、维持内环境的相对稳定和参与体液调节等多种功能。
动物生理学实验三 鱼类血液涂片制作与血细胞计数
血液具有维持生物体内环境稳态的作用,正常情况下血 液中的的各项生理指标处于相对稳定的状态,同时各项指标 也能够反映一个生物个体的健康程度,因而血液检测已成为 疾病检测最基本的技术。
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