小肠结肠炎耶尔森氏菌的快速分离、鉴定、分型及基础性研究
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征。
（． ２ ． ５ ） — ０ 的温度范围内， Ｔ． ６ ７ ７。 ３ ＂ ２ ４ 在４ Ｃ 它们的生长速率都随着温度的升 高而增加． 而在４ ＂ ５７ Ｃ到１．＂ Ｃ之间时， 耶氏菌０：４清型的生长速率大于耶 ３ 氏菌 ０：４ 清型 ， ｌ ．— Ｏ ９ 在 ５７ ３ ℃之 间时 ， 耶 氏菌０：４清型 的生 长速率 大 则 ９
１ 从南京市肉联厂屠宰场共采集猪扁桃体， ） 猪屠体 ， 地面污水 ， 砧板， 围裙等２２ ２份样 ， 检测了小肠结肠炎耶尔森 氏菌在上述样本中的污染状况， 并对分离到的菌株进行血清型、 生物型分布研究。
２采集农贸市场散装生鲜猪、 羊肉． ） 牛、 鲜鱼， 冷藏冷冻禽肉， 生禽肉
共９ 份检测该菌 ， ５ 并对检出的菌株进行进行血清和生化分型。 ３ 聚合酶链反应（ Ｒ） ＰＣ 技术对上述所有分离到的菌株进行ａｌ ｙｔ ｉ ｓ ， Ａ， ｙｔ ｙ ｄ ｓＢ， ａ Ａ，Ⅵｒ毒力基因检测， Ｆ 研究本地区该菌毒力基因主要分布特
２２ 创 新 点、 术意义及 应 用价值 学
７ 采南京市屠宰场猪扁桃体样４份 ， ） ０ 采用不同方法增菌及Ｓ ｓ，麦康 凯 ，Ｉ 等平板分别培养， ＣＮ， 对不同方法的检验结果进行比较。 ２ 主 要研 究 成 果 、 创新 点 、 术意 义 及应 用 价 值 学 ２ １ 主要 研究 成果 ． ２ １１ 首先 ， ．． 南京地区猪屠宰场来源的猪屠体、 猪扁桃体、 环境样本 中４肠结肠炎耶尔森氏菌总体血清型分布以Ｏ：、 ７８Ｏ：，０Ｏ： ，７ 、 ９Ｏ：，、 ６３ 、 ５２ 及Ｏ：为主。 ３ 其中， 血清型Ｏ：、 ５２ 仅从猪分离出， ３Ｏ：，７ 环境样中未能检出这 两种血清型。 血清型Ｏ：、 ７８Ｏ：，０ ９Ｏ：，、 ６３ 从猪和屠宰场环境样中均有检出。 其次， 猪来源的（ 猪屠体、 猪扁桃体） 本菌Ｏ：４清型的生物型以低致病ｌ ９ Ａ型 为主而非以３ 型为主，２ ２株猪来源的Ｏ：菌中有ｌ株为Ｉ ９ ９ Ａ型， 仅有３ 株为３ 型。 第三。 从猪屠体样 中检出ｌ 株生物４ 型Ｏ：菌， ３ 这在国内尚属首次报道 。 实验 结果提示可能本菌在本地 区致病性与在其它地 区有一定差异 。 本研究分离出的小肠结肠炎耶尔森氏菌的血清型共有ｌ ， ９ ２种 除０：、 Ｏ：， 、 ６ ３ 、 ５ ２及０：外 ， ７８０：，００：，７ ３ 还有 Ｏ：０ Ｏ：４ Ｏ１ ，９ Ｏｔ ，、 ２ 、 １ 、 １、 ６ ２ ， ９８ ０ ５ ０１ ，５０ ５ 种非致病血清型。 ２２ 、 ５等７ 另有７ 株菌与已有的全套因子血清均不凝 集。 提示本地区本菌的血清型分布范围广 ， 致病性比较复杂。
究。 氏菌Ｏ：血清型的最低生长温度为 一１．＂ 耶 氏菌Ｏ：血清型的最 耶 ３ ．８ ７ Ｃ， ９ 低生长温度为一ｌ ．３ 在增菌液ＭＴ Ｂ中的生长模型：耶氏菌Ｏ：４ ０ ℃， Ｓ ３ 清型为ｖＭ ＝００ ３ （—２５ １６ ）耶 氏菌Ｏ：４清型为 Ｍ ＝００ ７ ／ ．１４Ｔ ５ ．８６ ， ９ ．１３
某 一温 度下 关于Ｐ Ｈ的生 长预测 模型 。
ＣＮ琼脂上有最好的分离效果。 Ｉ 增菌后碱处理是非常必要的。Ｓ Ｓ培养基及
麦康凯培养基不推荐用于该菌的分离。 培养基上小肠结肠炎耶尔森 氏 Ｓ Ｓ 菌 菌落无色， 与某些杂菌相似， 生长较差。 在麦康凯培养基上生长更差。 Ｉ Ｃ Ｎ平
板上２ｈ ４ 即菌落特征明显 ， 培养时间为２ｈ ６ ￣ 宜， ４ 到３ｈ￥ ３ ＇ 不能超过４ ｈ 在Ｓ ８。 ｓ 培养基和麦康凯培养基上培养时间以３到４ ｈ ６ ８ 为宜。
４了解南京地区从不同来源分离的Ｏ ３ ： ） ： 和Ｏ ９ 血清型小肠结肠炎耶尔 森氏菌的随机扩增多态性Ｄ ＮＡ （ Ａ Ｄ） Ｒ Ｐ 分型结果。
５研究小肠结肠炎耶尔森 氏菌（ ） 以下简称耶 氏菌） ３ Ｏ：和Ｏ：４清型在 ９ 增菌液ＭＴ Ｂ 酵母浸膏胰胨大豆肉汤） Ｓ（ 中关于温度的生长模型 。 ６ 了解Ｐ ） Ｈ对小肠结肠炎耶尔森 氏菌生长繁殖的影响 ， 推导出该菌在
于耶 氏菌０：４清型。 ３ ２ １６ 我们用不同增菌方法和培养基分离４份扁桃体标本中的小 ．． Ｏ 肠结肠炎耶尔森 氏菌 （ 比较增菌方法、 增菌后是否碱处理 ． 各种分离培养 基）结果表明， 良 Ｓ 。 改 ＰＢ 缓冲液４Ｃ ＂增菌２ ｄ ５ ｔ或２ ＂ Ｃ增菌２ 后用碱处理 ， ｄ 在
（． １南京市 白下 区疾病 预防控制 中心
【 中图分类号 】 １５６ ２ Ｒ５． ． ＋
１ 研 究 、 验方 法 或技 术 路线 试
２０２ ；． １０ ９ ２ 南京市疾病预 防控制 中心
２００ ） １０ ９
【 献标识 码 】 文 Ａ
【 文章编号 】 ６２ ２２（ ０ ） ００ ６— ２ １７— ５ ３２ １ １－ ３７ ０ １
《 求医问药 》 下半月刊 Ｓｅ ＭｅｉａＡ ｄＡｓ ｈ Ｍｅ ｉｎ ２ １ 年第 ９ ｅｋ ｄｃｌ ｎ ｋＴ ｅ ｄｃ ｅ ０ １ ｉ 卷 第 １ 期 Ｏ
３７ ６
பைடு நூலகம்
小 肠 结肠 炎 耶 尔 森 氏 茵 的 快 速 分 离 、鉴 定 、 分 型 及 基 础 性 研 究
杜巧玲 １ 陈晓蔚 ｚ
．
２２１ 本 实验首次 证明在 南京地 区猪屠 宰场来 源的本菌 流行状况 与 ．． 欧美 、 日本及我国已有报道的结果均有不同。 欧洲国家从猪扁桃体分离的 ４肠结肠炎耶尔森氏菌主要生物血清型为４ Ｏ：，其次为２ ０：， 、 ／ ３ ／ ９美国和
加拿大从猪扁桃体而来的分离株￣４ ｏ：和２ Ｏ：，７ Ａ ／ ３ ／ ５２ 为主， 本报道既有 日 ４ Ｏ：， ｊ／ ３而我国目前的报道从猪粪便分离出的本菌均为３ ０：， ／ ３￣ ＇ Ｏ：。 ３ ／ ３ 其次为３ ０：。 ／ ９ 我们的研究表明： 首先 ， 南京地区猪屠宰场来源的本菌总 体血清型分布 以Ｏ：、 ７ ８Ｏ：，０Ｏ：，７ ９Ｏ：，、 ６ ３ 、 ５ ２及Ｏ：为主。 ３ 其次， 猪来源的 （ 屠体 、 猪 猪扁桃 体） 本菌Ｏ： 清型 的生物 型 以低 致病 ｌ ９ 血 Ａ型为 主而非 以３ 型 为主 ｔ 。 ３ 第三 Ｏ：血清型菌以生物３ 型为主 ， 但从猪屠体样中检出ｌ 株生物４ 型 Ｏ：菌 ， 国 内尚属首次 报道 。 ３ 这在 实验结 果提示 可 能本菌在本地 区致病 性与 在其它地区有一定差异。 ２２２ 在江苏省 内首次对该菌在生鲜肉食品中的污染状况进行调 ．．
（． ２ ． ５ ） — ０ 的温度范围内， Ｔ． ６ ７ ７。 ３ ＂ ２ ４ 在４ Ｃ 它们的生长速率都随着温度的升 高而增加． 而在４ ＂ ５７ Ｃ到１．＂ Ｃ之间时， 耶氏菌０：４清型的生长速率大于耶 ３ 氏菌 ０：４ 清型 ， ｌ ．— Ｏ ９ 在 ５７ ３ ℃之 间时 ， 耶 氏菌０：４清型 的生 长速率 大 则 ９
１ 从南京市肉联厂屠宰场共采集猪扁桃体， ） 猪屠体 ， 地面污水 ， 砧板， 围裙等２２ ２份样 ， 检测了小肠结肠炎耶尔森 氏菌在上述样本中的污染状况， 并对分离到的菌株进行血清型、 生物型分布研究。
２采集农贸市场散装生鲜猪、 羊肉． ） 牛、 鲜鱼， 冷藏冷冻禽肉， 生禽肉
共９ 份检测该菌 ， ５ 并对检出的菌株进行进行血清和生化分型。 ３ 聚合酶链反应（ Ｒ） ＰＣ 技术对上述所有分离到的菌株进行ａｌ ｙｔ ｉ ｓ ， Ａ， ｙｔ ｙ ｄ ｓＢ， ａ Ａ，Ⅵｒ毒力基因检测， Ｆ 研究本地区该菌毒力基因主要分布特
２２ 创 新 点、 术意义及 应 用价值 学
７ 采南京市屠宰场猪扁桃体样４份 ， ） ０ 采用不同方法增菌及Ｓ ｓ，麦康 凯 ，Ｉ 等平板分别培养， ＣＮ， 对不同方法的检验结果进行比较。 ２ 主 要研 究 成 果 、 创新 点 、 术意 义 及应 用 价 值 学 ２ １ 主要 研究 成果 ． ２ １１ 首先 ， ．． 南京地区猪屠宰场来源的猪屠体、 猪扁桃体、 环境样本 中４肠结肠炎耶尔森氏菌总体血清型分布以Ｏ：、 ７８Ｏ：，０Ｏ： ，７ 、 ９Ｏ：，、 ６３ 、 ５２ 及Ｏ：为主。 ３ 其中， 血清型Ｏ：、 ５２ 仅从猪分离出， ３Ｏ：，７ 环境样中未能检出这 两种血清型。 血清型Ｏ：、 ７８Ｏ：，０ ９Ｏ：，、 ６３ 从猪和屠宰场环境样中均有检出。 其次， 猪来源的（ 猪屠体、 猪扁桃体） 本菌Ｏ：４清型的生物型以低致病ｌ ９ Ａ型 为主而非以３ 型为主，２ ２株猪来源的Ｏ：菌中有ｌ株为Ｉ ９ ９ Ａ型， 仅有３ 株为３ 型。 第三。 从猪屠体样 中检出ｌ 株生物４ 型Ｏ：菌， ３ 这在国内尚属首次报道 。 实验 结果提示可能本菌在本地 区致病性与在其它地 区有一定差异 。 本研究分离出的小肠结肠炎耶尔森氏菌的血清型共有ｌ ， ９ ２种 除０：、 Ｏ：， 、 ６ ３ 、 ５ ２及０：外 ， ７８０：，００：，７ ３ 还有 Ｏ：０ Ｏ：４ Ｏ１ ，９ Ｏｔ ，、 ２ 、 １ 、 １、 ６ ２ ， ９８ ０ ５ ０１ ，５０ ５ 种非致病血清型。 ２２ 、 ５等７ 另有７ 株菌与已有的全套因子血清均不凝 集。 提示本地区本菌的血清型分布范围广 ， 致病性比较复杂。
究。 氏菌Ｏ：血清型的最低生长温度为 一１．＂ 耶 氏菌Ｏ：血清型的最 耶 ３ ．８ ７ Ｃ， ９ 低生长温度为一ｌ ．３ 在增菌液ＭＴ Ｂ中的生长模型：耶氏菌Ｏ：４ ０ ℃， Ｓ ３ 清型为ｖＭ ＝００ ３ （—２５ １６ ）耶 氏菌Ｏ：４清型为 Ｍ ＝００ ７ ／ ．１４Ｔ ５ ．８６ ， ９ ．１３
某 一温 度下 关于Ｐ Ｈ的生 长预测 模型 。
ＣＮ琼脂上有最好的分离效果。 Ｉ 增菌后碱处理是非常必要的。Ｓ Ｓ培养基及
麦康凯培养基不推荐用于该菌的分离。 培养基上小肠结肠炎耶尔森 氏 Ｓ Ｓ 菌 菌落无色， 与某些杂菌相似， 生长较差。 在麦康凯培养基上生长更差。 Ｉ Ｃ Ｎ平
板上２ｈ ４ 即菌落特征明显 ， 培养时间为２ｈ ６ ￣ 宜， ４ 到３ｈ￥ ３ ＇ 不能超过４ ｈ 在Ｓ ８。 ｓ 培养基和麦康凯培养基上培养时间以３到４ ｈ ６ ８ 为宜。
４了解南京地区从不同来源分离的Ｏ ３ ： ） ： 和Ｏ ９ 血清型小肠结肠炎耶尔 森氏菌的随机扩增多态性Ｄ ＮＡ （ Ａ Ｄ） Ｒ Ｐ 分型结果。
５研究小肠结肠炎耶尔森 氏菌（ ） 以下简称耶 氏菌） ３ Ｏ：和Ｏ：４清型在 ９ 增菌液ＭＴ Ｂ 酵母浸膏胰胨大豆肉汤） Ｓ（ 中关于温度的生长模型 。 ６ 了解Ｐ ） Ｈ对小肠结肠炎耶尔森 氏菌生长繁殖的影响 ， 推导出该菌在
于耶 氏菌０：４清型。 ３ ２ １６ 我们用不同增菌方法和培养基分离４份扁桃体标本中的小 ．． Ｏ 肠结肠炎耶尔森 氏菌 （ 比较增菌方法、 增菌后是否碱处理 ． 各种分离培养 基）结果表明， 良 Ｓ 。 改 ＰＢ 缓冲液４Ｃ ＂增菌２ ｄ ５ ｔ或２ ＂ Ｃ增菌２ 后用碱处理 ， ｄ 在
（． １南京市 白下 区疾病 预防控制 中心
【 中图分类号 】 １５６ ２ Ｒ５． ． ＋
１ 研 究 、 验方 法 或技 术 路线 试
２０２ ；． １０ ９ ２ 南京市疾病预 防控制 中心
２００ ） １０ ９
【 献标识 码 】 文 Ａ
【 文章编号 】 ６２ ２２（ ０ ） ００ ６— ２ １７— ５ ３２ １ １－ ３７ ０ １
《 求医问药 》 下半月刊 Ｓｅ ＭｅｉａＡ ｄＡｓ ｈ Ｍｅ ｉｎ ２ １ 年第 ９ ｅｋ ｄｃｌ ｎ ｋＴ ｅ ｄｃ ｅ ０ １ ｉ 卷 第 １ 期 Ｏ
３７ ６
பைடு நூலகம்
小 肠 结肠 炎 耶 尔 森 氏 茵 的 快 速 分 离 、鉴 定 、 分 型 及 基 础 性 研 究
杜巧玲 １ 陈晓蔚 ｚ
．
２２１ 本 实验首次 证明在 南京地 区猪屠 宰场来 源的本菌 流行状况 与 ．． 欧美 、 日本及我国已有报道的结果均有不同。 欧洲国家从猪扁桃体分离的 ４肠结肠炎耶尔森氏菌主要生物血清型为４ Ｏ：，其次为２ ０：， 、 ／ ３ ／ ９美国和
加拿大从猪扁桃体而来的分离株￣４ ｏ：和２ Ｏ：，７ Ａ ／ ３ ／ ５２ 为主， 本报道既有 日 ４ Ｏ：， ｊ／ ３而我国目前的报道从猪粪便分离出的本菌均为３ ０：， ／ ３￣ ＇ Ｏ：。 ３ ／ ３ 其次为３ ０：。 ／ ９ 我们的研究表明： 首先 ， 南京地区猪屠宰场来源的本菌总 体血清型分布 以Ｏ：、 ７ ８Ｏ：，０Ｏ：，７ ９Ｏ：，、 ６ ３ 、 ５ ２及Ｏ：为主。 ３ 其次， 猪来源的 （ 屠体 、 猪 猪扁桃 体） 本菌Ｏ： 清型 的生物 型 以低 致病 ｌ ９ 血 Ａ型为 主而非 以３ 型 为主 ｔ 。 ３ 第三 Ｏ：血清型菌以生物３ 型为主 ， 但从猪屠体样中检出ｌ 株生物４ 型 Ｏ：菌 ， 国 内尚属首次 报道 。 ３ 这在 实验结 果提示 可 能本菌在本地 区致病 性与 在其它地区有一定差异。 ２２２ 在江苏省 内首次对该菌在生鲜肉食品中的污染状况进行调 ．．