临床微生物检验_实验第五周(第二天)
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①巧克力平板上金菌葡落点观种察或划、线涂片干燥固定革兰染色
卫星试验（1个小血平板/人）
②
因子试验（1个MH平板/人） ③转种巧克力平板（2个/组）
部分接种流感，部 分接种副流感
一个接种流感嗜血杆菌， 一个接种副流感
第二天实验内容
1. 嗜血杆菌：①观察分区划线结果，观察菌落特点 ②卫星现象结果观察 ③因子试验结果观察
③痰涂片见到的细菌培养大量生长（占所 分出细菌的50%以上）
绿
色
色
素
血
、
平
金 属
板
光 泽
、
特
殊
气
味
、
β-
溶 血 环
麦 康 凯 平 板
巧 克 力 平 板
铜绿假单胞菌菌落形态
巧克力平板： 菌落圆形、大小不一、边缘不整、 扁平、湿润、常呈融合态，特殊气味、色 素不易观察到。
血平： 类似巧克力琼脂上菌落，绿色色素、特殊 气味，有金属光泽、有β溶血。
非发酵菌微量编码系统结果判断
DNA
() ()
I
II
III
IV
葡
葡 氧 枸麦
精 甘 木硝
乙
萄
萄
糖
糖 化 橼芽
氨露
酸
酰
厌
需
酸
氧
氧 酶 盐糖
酸 醇 糖盐
胺
2
1
4
21
4
2
14 2
1
0
1
4
2
0
4
2 wk.baidu.com4 0
1
1
6
7
5
菌落特征: 巧克力平板上无色或灰白色半透明小菌落 卫星试验：金葡菌能合成释放V因子，在金葡菌菌落
周围，流感嗜血杆菌菌落较大，远离则小 因子试验：MH平板上贴上X、V、X＋V因子纸片，
不同嗜血杆菌会在所需因子纸片周围生长
副流感嗜血杆菌
流感 嗜血 杆菌
卫星试验（血平板）
流感嗜血杆菌（密 集涂布于平板上）
原理：精氨酸经两次水解后,生成鸟氨酸、氨及二氧化碳。 鸟氨酸又在脱羧酶的作用下生成腐胺。氨及腐胺均为碱性物 质，故可使培养基变碱，用指示剂指示出来。
• 乙酰胺利用试验
原理：许多非发酵菌产生一种脱酰胺酶，可使乙酰胺经脱 酰胺作用释放氨，使培养基变碱。
• DNA酶试验
原理：甲基绿与长链DNA结合呈绿色，而短链的寡核苷酸 不与甲基绿结合，呈灰白色。
铜绿假单胞菌
G-b、菌体 长短不一 、
球杆状或长 丝状
革兰染色
可疑菌落（痰培养中优势菌）
涂片革兰染色 革兰阴性杆菌
氧化酶(+) 非发酵菌鉴定系统鉴定到种
非发酵菌微量生化鉴定系统
第三天实验内容
1. 不发酵菌微量编码系统结果判断 2. 痰标本鉴定结果报告
非发酵菌微量生化鉴定系统
• 精氨酸双水解酶试验 （在非发酵菌鉴定中不加石蜡油）
主要试剂：X、V、X＋V因子纸片，氧化酶试剂， 革兰染色液 不发酵细菌微量生化编码管
第一天实验内容
1. 模拟痰标本 ①分离培养：接种（1个大血平/人+1个Mac/人+1 个巧克力/人） ②涂片干燥固定后革兰染色
2. 流感嗜血杆菌或副流感嗜血杆菌： ①菌落观察、涂片干燥固定后革兰染色 ②卫星试验（1个小血平板/人）
临床微生物学检验 第五个实验周
2013检本
目的要求
1.掌握下呼吸道标本的分离培养及检测方法 2.掌握的铜绿假单胞菌形态染色、培养特性、菌落特
征和鉴定方法 3.掌握流感、副流感嗜血杆菌形态染色、培养特性、
菌落特征和鉴定方法
菌种试剂
菌种：流感嗜血杆菌、副流感嗜血杆菌、金黄色葡菌 球菌
标本：模拟痰标本
同 学 分 离 的 流 感 嗜 血 杆 菌 菌 落
流感嗜血杆菌卫星试验阳性结果
流感嗜血杆菌和副流感嗜血杆菌卫星 现象结果（二者卫星现象均阳性，上 面“+”，下面“-”）
溶血嗜血杆菌的卫星试验阳性
流感嗜血杆菌卫星试验阳性
某 同 学 做 的 “ 卫 星 试 验 ”
副 流 感 嗜 血 杆 菌 因 子 试 验 结 果
2. 痰标本：血平板菌落观察和革兰染色、氧化酶试验。 麦康凯和巧克力平板上菌落观察。
3. 取Mac上浅粉红色的菌落接种相应的微量生化编码 系统（非发酵菌微量生化编码系统）。
（上述实验每人均做）
流感嗜血杆菌培养24h菌落
48h
流 感 嗜 血 杆 菌 培 养 菌 落
菌落: 直径0.5-1.5mm、圆形、光滑、湿润、 无色或灰白色半透明小菌落
副嗜沫嗜血杆菌 -
副溶血嗜血杆菌 -
杜克雷嗜血杆菌 +
嗜沫嗜血杆菌
-
+-
++
+
-
+
-
+
+
-
-
--
痰培养平板上致病菌的 初步判断
原则：需要结合“痰标本涂片、培养及临床表
现”才能判断培养出来的细菌是定植还是致病菌
①患者的血象、体温、胸痛和肺部啰音等 体现感染的临床表现。
②痰涂片镜检见大量白细胞吞噬细菌
X+V因子周围 生长
流感嗜血杆菌因子试验结果
X+V因子 周围生长
流感嗜血杆菌因子试验结果
溶 血 嗜 血 杆 菌 因 子 试 验 结 果
X因子 V因子 β溶血
流感嗜血杆菌 + 副流感嗜血杆菌 -
++-
几种嗜血杆菌对生长因子需求
X因子 V因子 β溶血
流感嗜血杆菌
+
溶血嗜血杆菌
+
副流感嗜血杆菌 -
嗜血杆菌属
形态：G-b 细小 呈球杆状 短丝状或多形态
培养：5-10%CO2 营养要求高 生长需X或V因子 巧克力平板
菌落: 直径0.5-1.5mm、圆形、光滑、湿润、 无色或灰白色半透明小菌落
革兰阴性短小球杆菌（有多形性）
副流感嗜血杆菌革兰染色结果
培养基：巧克力平板
血液中含有X、V因子，V因子处于抑制状态，加 热80-90℃ 10-15min可破坏V因子的抑制物使V因 子发挥作用。 巧克力琼脂中加入抗生素可提高检出率
因子试验（MH平板 1个/人） ③转种巧克力平板（2个/组）
肉眼观察
痰液及上呼吸道标本 培养前处理①
直接涂片检查②
血平板、Mac 巧克力平板
特殊细菌培养 选择适当培养基和条件
初报
菌落观察
涂片
纯培养
生化鉴定 药敏
最终报告
分离鉴定
①洗痰、胰酶均质化
②合格痰标本：白细胞 ＞25/低倍视野，鳞状上 皮细胞＜10/低倍视野
金黄色葡萄球菌 （划线或点种）
卫星试验阳性结果
因子试验（MH平板）
X＋V
X
V
嗜血杆菌（密 集涂布于平板上）
操作方法、注意事项
因子试验结果
X＋V生长，V生长
第一天实验内容
1. 模拟痰标本
①分离培养：接种（ 1个大血平/人+1个Mac/人+1 个巧克力/人）
②涂片干燥固定革兰染色 2. 流感嗜血杆菌或副流感嗜血杆菌：
卫星试验（1个小血平板/人）
②
因子试验（1个MH平板/人） ③转种巧克力平板（2个/组）
部分接种流感，部 分接种副流感
一个接种流感嗜血杆菌， 一个接种副流感
第二天实验内容
1. 嗜血杆菌：①观察分区划线结果，观察菌落特点 ②卫星现象结果观察 ③因子试验结果观察
③痰涂片见到的细菌培养大量生长（占所 分出细菌的50%以上）
绿
色
色
素
血
、
平
金 属
板
光 泽
、
特
殊
气
味
、
β-
溶 血 环
麦 康 凯 平 板
巧 克 力 平 板
铜绿假单胞菌菌落形态
巧克力平板： 菌落圆形、大小不一、边缘不整、 扁平、湿润、常呈融合态，特殊气味、色 素不易观察到。
血平： 类似巧克力琼脂上菌落，绿色色素、特殊 气味，有金属光泽、有β溶血。
非发酵菌微量编码系统结果判断
DNA
() ()
I
II
III
IV
葡
葡 氧 枸麦
精 甘 木硝
乙
萄
萄
糖
糖 化 橼芽
氨露
酸
酰
厌
需
酸
氧
氧 酶 盐糖
酸 醇 糖盐
胺
2
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21
4
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2 wk.baidu.com4 0
1
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菌落特征: 巧克力平板上无色或灰白色半透明小菌落 卫星试验：金葡菌能合成释放V因子，在金葡菌菌落
周围，流感嗜血杆菌菌落较大，远离则小 因子试验：MH平板上贴上X、V、X＋V因子纸片，
不同嗜血杆菌会在所需因子纸片周围生长
副流感嗜血杆菌
流感 嗜血 杆菌
卫星试验（血平板）
流感嗜血杆菌（密 集涂布于平板上）
原理：精氨酸经两次水解后,生成鸟氨酸、氨及二氧化碳。 鸟氨酸又在脱羧酶的作用下生成腐胺。氨及腐胺均为碱性物 质，故可使培养基变碱，用指示剂指示出来。
• 乙酰胺利用试验
原理：许多非发酵菌产生一种脱酰胺酶，可使乙酰胺经脱 酰胺作用释放氨，使培养基变碱。
• DNA酶试验
原理：甲基绿与长链DNA结合呈绿色，而短链的寡核苷酸 不与甲基绿结合，呈灰白色。
铜绿假单胞菌
G-b、菌体 长短不一 、
球杆状或长 丝状
革兰染色
可疑菌落（痰培养中优势菌）
涂片革兰染色 革兰阴性杆菌
氧化酶(+) 非发酵菌鉴定系统鉴定到种
非发酵菌微量生化鉴定系统
第三天实验内容
1. 不发酵菌微量编码系统结果判断 2. 痰标本鉴定结果报告
非发酵菌微量生化鉴定系统
• 精氨酸双水解酶试验 （在非发酵菌鉴定中不加石蜡油）
主要试剂：X、V、X＋V因子纸片，氧化酶试剂， 革兰染色液 不发酵细菌微量生化编码管
第一天实验内容
1. 模拟痰标本 ①分离培养：接种（1个大血平/人+1个Mac/人+1 个巧克力/人） ②涂片干燥固定后革兰染色
2. 流感嗜血杆菌或副流感嗜血杆菌： ①菌落观察、涂片干燥固定后革兰染色 ②卫星试验（1个小血平板/人）
临床微生物学检验 第五个实验周
2013检本
目的要求
1.掌握下呼吸道标本的分离培养及检测方法 2.掌握的铜绿假单胞菌形态染色、培养特性、菌落特
征和鉴定方法 3.掌握流感、副流感嗜血杆菌形态染色、培养特性、
菌落特征和鉴定方法
菌种试剂
菌种：流感嗜血杆菌、副流感嗜血杆菌、金黄色葡菌 球菌
标本：模拟痰标本
同 学 分 离 的 流 感 嗜 血 杆 菌 菌 落
流感嗜血杆菌卫星试验阳性结果
流感嗜血杆菌和副流感嗜血杆菌卫星 现象结果（二者卫星现象均阳性，上 面“+”，下面“-”）
溶血嗜血杆菌的卫星试验阳性
流感嗜血杆菌卫星试验阳性
某 同 学 做 的 “ 卫 星 试 验 ”
副 流 感 嗜 血 杆 菌 因 子 试 验 结 果
2. 痰标本：血平板菌落观察和革兰染色、氧化酶试验。 麦康凯和巧克力平板上菌落观察。
3. 取Mac上浅粉红色的菌落接种相应的微量生化编码 系统（非发酵菌微量生化编码系统）。
（上述实验每人均做）
流感嗜血杆菌培养24h菌落
48h
流 感 嗜 血 杆 菌 培 养 菌 落
菌落: 直径0.5-1.5mm、圆形、光滑、湿润、 无色或灰白色半透明小菌落
副嗜沫嗜血杆菌 -
副溶血嗜血杆菌 -
杜克雷嗜血杆菌 +
嗜沫嗜血杆菌
-
+-
++
+
-
+
-
+
+
-
-
--
痰培养平板上致病菌的 初步判断
原则：需要结合“痰标本涂片、培养及临床表
现”才能判断培养出来的细菌是定植还是致病菌
①患者的血象、体温、胸痛和肺部啰音等 体现感染的临床表现。
②痰涂片镜检见大量白细胞吞噬细菌
X+V因子周围 生长
流感嗜血杆菌因子试验结果
X+V因子 周围生长
流感嗜血杆菌因子试验结果
溶 血 嗜 血 杆 菌 因 子 试 验 结 果
X因子 V因子 β溶血
流感嗜血杆菌 + 副流感嗜血杆菌 -
++-
几种嗜血杆菌对生长因子需求
X因子 V因子 β溶血
流感嗜血杆菌
+
溶血嗜血杆菌
+
副流感嗜血杆菌 -
嗜血杆菌属
形态：G-b 细小 呈球杆状 短丝状或多形态
培养：5-10%CO2 营养要求高 生长需X或V因子 巧克力平板
菌落: 直径0.5-1.5mm、圆形、光滑、湿润、 无色或灰白色半透明小菌落
革兰阴性短小球杆菌（有多形性）
副流感嗜血杆菌革兰染色结果
培养基：巧克力平板
血液中含有X、V因子，V因子处于抑制状态，加 热80-90℃ 10-15min可破坏V因子的抑制物使V因 子发挥作用。 巧克力琼脂中加入抗生素可提高检出率
因子试验（MH平板 1个/人） ③转种巧克力平板（2个/组）
肉眼观察
痰液及上呼吸道标本 培养前处理①
直接涂片检查②
血平板、Mac 巧克力平板
特殊细菌培养 选择适当培养基和条件
初报
菌落观察
涂片
纯培养
生化鉴定 药敏
最终报告
分离鉴定
①洗痰、胰酶均质化
②合格痰标本：白细胞 ＞25/低倍视野，鳞状上 皮细胞＜10/低倍视野
金黄色葡萄球菌 （划线或点种）
卫星试验阳性结果
因子试验（MH平板）
X＋V
X
V
嗜血杆菌（密 集涂布于平板上）
操作方法、注意事项
因子试验结果
X＋V生长，V生长
第一天实验内容
1. 模拟痰标本
①分离培养：接种（ 1个大血平/人+1个Mac/人+1 个巧克力/人）
②涂片干燥固定革兰染色 2. 流感嗜血杆菌或副流感嗜血杆菌：