组织学技术(特殊染色)

从而可证明多糖或粘多糖的存在。
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1、试剂配制 （1）1%过碘酸水溶液：
过碘酸 1g 双蒸水 100ml 将过碘酸溶于双蒸水中
（2）Schiff试剂：
双蒸水
200ml
碱性品红
1g
1mol/L 盐酸
20ml
偏重亚硫酸钠
2g
（或亚硫酸氢钠）
活性炭
300mg
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※ 双蒸水煮沸后离火，慢慢加入品红， 搅拌至完全溶解，冷却至50℃时过滤， 加入盐酸，冷却至25℃时加入偏重亚硫酸钠 摇荡，密封置于暗处或4℃冰箱内24h 。 溶液呈草黄色时，加入活性炭摇荡1min 快速过滤。避光4℃保存备用。
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3、染色程序 （1）新鲜组织10%甲醛固定，石蜡切片，
常规脱蜡入水； （2）入高锰酸钾溶液中5min，水洗1min； （3）入草酸溶液中漂白2min，水洗2min； （4）硫酸铁中媒染2min，水洗1min；
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（5）银氨溶液中处理1-5min（25 ℃）， 蒸馏水洗2次，各2min；
去除胶原纤维颜色。 （4）常规乙醇脱水，二甲苯透明，树胶封片。
4、结果 弹性纤维为棕红色，背景淡棕色。
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三、胶原纤维
胶原纤维，粗细不等，直径0.5-10µm，波浪 状，有分支交织成网。胶原纤维由Ⅰ型胶原蛋 白组成。胶原纤维对酸性染料的亲和力强，
如常用的酸性复红及苯胺蓝等，对胶原纤维有 选染性，而其它组织不易着色，从而有利于其 他组织的复染。
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地衣红染色显示弹性纤维
1、取材 皮下组织
2、染液配制 地衣红染液：
地衣红0.1g ，70%乙醇100ml，硝酸2ml。 3、染色程序 （1）石蜡切片脱蜡下行至70%乙醇。 （2）地衣红染液，室温，12h或过夜，或37℃,15-30min. （3）70%乙醇分色，必要时可用0.5%-1%盐酸乙醇分色，
例如： 先天性糖代谢紊乱-葡萄糖-6-磷酸酶缺乏、 淋巴肉瘤、间皮瘤、肾上腺瘤，肝细胞内 都可聚集过多的糖原。
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★ 过碘酸-雪夫反应
（periodic acid Schiff reaction， PAS)
原理： 用过碘酸氧化多糖结构的碳键，
使其形成2-醛基，与无色的品红结合生成
紫红色品红复合物，沉淀于细胞内糖原分布部位，
补加4滴氨水，加蒸馏水稀释至100ml， 保存于棕色瓶中备用。
ห้องสมุดไป่ตู้
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（4）高锰酸钾溶液：高锰酸钾0.5g， 蒸馏水95ml，3%硫酸5ml
（5）氯化金溶液：氯化金 0.2g， 蒸馏水100ml
（6）草酸溶液：草酸2ml，蒸馏水98ml
（7）硫酸铁溶液：硫酸铁2g， 蒸馏水100ml
（8）甲醛溶液：甲醛20ml， 蒸馏水80ml
（6）甲醛溶液中还原5min， 蒸馏水洗2次，各2min；
（7）氯化金溶中调色1-3min，蒸馏水洗2次；
（8）95%及无水乙醇脱水， 二甲苯透明，中性树胶封片。
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4、结果 淋巴结内可见黑色网状纤维， 粗细不等，交织成网。
5、注意事项 配制氨银时氨液不可过多。
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疏松结缔组织各种成分显示方法：
疏松结缔组织中含有： 胶原纤维、弹性纤维、网状纤维； 巨噬细胞、肥大细胞。
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一、 网状纤维
分布：肝、肾、脾、淋巴结等器官内。
纤维直径0.2-2.0µm，分支多，交织 成网。
网状纤维主要由Ⅲ型胶原蛋白组成，表 面被覆糖蛋白，在镀银切片呈黑色称为 嗜银纤维。
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二、弹性纤维
分布广泛，弹性纤维较细，直径0.2-1.0µm， 交织成网。富有弹性，与胶原纤维交织在一起。 弹性纤维核心部分由均质的弹性蛋白组成； 外周覆盖微原纤维。
在皮肤学和检测幼年机体组织中的弹性结构。
常用的显示弹性纤维的染色有： 地衣红染色、 Gomoris醛品红染色、 Weigert染色等。
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(3)亚硫酸氢纳溶液 10%偏重亚硫酸氢纳 5ml
1mol/L盐酸
5ml
蒸馏水 用前配制
90ml
(4)1mol/L盐酸 36%盐酸 85.6ml
蒸馏水 914.4ml
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2、染色步骤
（1) 切片入1%过碘酸液 氧化2-5 min。 充分水洗后，过蒸馏水。
（2）入Schiff 液10-20 min（室温 暗处） （3）入亚硫酸氢纳液洗3次每次2min
（去非特异性染色）流水冲洗10min， 过蒸馏水。 （4)Mayer苏木精复染2-3min。流水冲洗， 过蒸馏水，吸干。 从95%乙醇开始脱水、透明、封片。
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3、对照
用1%淀粉糖化酶处理对照片20 min.或用唾液 （无气泡）消化对照片30 min 2次。
4、结果
细胞内糖原呈紫红色；对照片为阴性
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5、注意事项： （1）糖原易溶于水，要用冷Carnoy液固定
（2）配制Schiff试剂碱性品红杂质太多， 或亚硫酸氢纳潮解，都不能使碱性品红脱色； 盛Schiff试剂的瓶子不宜过大，以免SO2逸出； 若Schiff试剂变成粉红色即失效。
Carnoy固定液: 取纯乙醇、氯仿、冰醋酸，按6:3:1的比例配制， 现配现用。一般固定1-2 h。固定后的组织块 可直接入95%的乙醇脱水。
显示胶原纤维的主要方法： 如van Gieson法、 Mallory法、 Masson 法等。
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Gomoris镀银法显示网状纤维
1、取材：淋巴结
2、试剂配制
（1）硝酸银溶液： 硝酸银 10.2g，溶于100ml蒸馏水。
（2）氢氧化钠溶液： 氢氧化钠 3.1g，溶于100ml蒸馏水。
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（3）银氨溶液的配置：
取5ml 硝酸银溶液， 缓慢滴加氨水至溶液变得清亮；
再加入5ml氢氧化钠溶液， 此时溶液变黑色再滴加氨水至溶液清亮后，
组织学技术
（特殊染色）
授课人：韩伊林
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特殊染色用于显示标本中的一些结构，
使其在显微镜下与其它组织或细胞区别.
单一特殊染色 一种染料对一种组织
特殊染色
结构或细胞进行染色
复合特殊染色 多种染料对多种组 织结构或细胞进行 染色
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糖原染色方法：
糖原为细胞内的多糖或粘多糖， 肝细胞和肌细胞内的糖原最多。 糖原的多少，可以反映机体糖代谢的情况。