组培常见问题及解决方法2

继代培养常见问题解决办法
余宏傲
温州科技职业学院园林系2013.12
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Contents
玻璃化及其解决办法
老化、褐变及解决办法
总结
3污染及其解决办法
124总结
5
案例
2010年秋，浙江宁波市X组培企业的技术人
员张某犯了难，原因是他们公司的老板被公安部门带走协助调查了，这已经是老板第二次被公安带走。

公司上下人心惶惶，外面风言风语，张某感觉此次老板凶多吉少，恐怕老板出不来，公司要倒闭了。

对于刚刚从某职业院校毕业两年的农类专业
毕业生来说，张某很感谢该老板在自己毕业
时对他的知遇之恩。

所以在老板第一次被带走
的时候他选择继续留下来静观其变。

但是当
老板被第二次带走的时候，他开始动摇了。

案例
此时，刚好有个与他们有生意往来的大客户看到了该公司经营的蓝莓组培苗巨大的市场前景，决定投资该种苗产业，同时也觉察到他们的窘境，决定从他们公司挖人。

于是，张某与技术总监吴某就跳槽去了这家隔壁市的这家大公司。

张某跳槽后，面对新公司，既兴奋有有点不安，兴奋的是老板对他很器重，由于技术总监负责大田基地无暇顾及组培室，老板将组培苗的生产全权交给他，薪水是原来的2倍，做好了还加提成。

不安的是老板要求他立刻把原来做的蓝莓组培苗启动起来，争取在第二年底上市销售20万苗。

张某当时面临如下几个问题：
1、从原公司带来的组培瓶苗数量少，由于长期没有继代，老化严重。

2、由于新公司员工对于操作技术不熟练，好不容易从原公司带来的苗刚继代了一批不久就发现几乎都有点污染，因此到目前为止，他们只剩下他从原公司带来的不足50瓶的组培母瓶苗和300多瓶的继代半污染、全污染的苗。

3、母瓶数量不足，同时又有污染，明年何时才能出苗？！
刚出现污染的苗
老化苗
部分褐变苗
部分全污染苗
剩余母瓶苗
如果你是张某，你该如何抉择：
1、继续跳槽，找一家大型组
培企业，做一个普通的技术
人员，混混日子算了。

2、珍惜当前的机遇，
勇敢的挑起重担，继
续走下去。

3、出去打工去，
换一个行业。

张某分析了当前形势，决定留下来。

理由是： 1、对自己有点信心，经过两年的锻炼，对该品种苗组培技术基本掌握，对该品种组培有信心。

2、喜欢当领导的感觉，作为一个小头目，他喜欢被他们（包括老总）尊称为张经理，而原来他们都叫他小张。

3、丰厚的工资和奖金吸引了他。

但是面对现状，他首先要做的是要将从原公司带来的瓶苗保住，张某面对已经有点污染的组培继代瓶苗和剩下的母瓶，他该如何处理：
张某找到技术总监吴某连夜商议，查找原因：
同时，他还将污染情况拍成照片，发到技术群里和论坛里，请求资深人士和网友的帮助。

利用搜索和专业网站查找相关文献资料：
谷歌学术搜索
百度文库
小木虫、生物谷等专业
网站
经张某回忆大学上课所学，查找资料并结合网友讨论，查出造成污染的原因有：
1、真菌污染：菌斑呈绒毛状、絮状，界限不明显，伴
有不同颜色的孢子接种后3—10天才能发现。

主要是霉菌污染。

2、细菌污染：菌斑呈黏粘液状，界限比较明显，一般
接种后1—2天即能发现。

主要是大肠杆菌和链球菌。

3、藻类、昆虫污染
4、培养基污染、接种苗污染
5天
9天
真菌污染
培养基污染21天
细菌污染接种苗污染3天
8天
15天
藻类污染
昆虫污染
经查，他们觉得可能是以下几个原因造成： 1、主要原因是工人接种苗操作不规范，接种时
闲聊，无菌操作不规范；
2、其次是长期没有继代，瓶口聚集大量细菌真菌；工人接种是未按严格消毒，一次接种数量过多；
3、瓶苗老化，自身生长势慢，抵抗内部细菌能力减弱。

4、再次是培养基灭菌、贮藏和培养室的消毒和管理方面存在问题。

原因似乎是找到了，如果你是张某，你们打算从那几个方面入手，解决污染的问题：
1、分类对待将已经继代接种的苗和还未继代
接种的分成两批。

对于已经接种的苗，根据污染情况
（1）已经接种污染的苗：完全、部分
（2）原公司带来的母瓶苗
2、接种污染的部分组培苗进行抢救性接种，对
于母瓶，降低每瓶接种数量。

张某决定采取以下技术措施：
1、安排人员对培养基严格消毒，并加大激素用量到原来用量的5倍，并放置干净的房间，随配随用；
2、安排人员接种室打扫干净，严格消毒；
3、自己亲自示范，对接种人员重新培训，除常规无菌操作技术外，接种时重点是瓶口长时间灼烧；
4、接种时亲自上岗，带头操作并监督生产；
5、每瓶接种由原来的6丛，变为1-2丛；
7、培养室严禁闲杂人员出入;
接种、接种室管理
严格打扫卫生
接种规范
严格管理培养基储存
抢救性接种
正常接种：8-10丛
抢救性接种：1丛抢救性接种：1-2丛
经过这样的严格处理后，张某发现，虽然仍然污染了300多瓶，但还有700瓶左右，大约2000多丛的苗存留下来。

但是由于长期未继代和激素处理过高，普遍出现了老化、玻璃化的现象。

老化苗正常苗玻璃化苗
此时控制住了污染，张某对接下来的工作更有信心了，接下来他是如何让组培苗嫩化、并降低玻璃化呢？
玻璃化苗
正常苗
嫩化苗
张某采取了如下措施：
Sub title
1、对于老化苗，采用适度降低琼脂的用量、遮光处
理，适当增加激素浓度，采用一系列单因子实验来
确定最适合的浓度。

并及时快速的转接。

2、对于玻璃化的组培苗，采用降低培养温度、
降低激素浓度，增加光照强度、加入活性炭0.5-1g/L。

3、对于褐变苗，接种时去除褐变部分，培养基内适当
增加细胞分裂素浓度，提升培养温度，及时快速的转接。

单因子实验
激素浓度1激素浓度2激素浓度3激素浓度4 A
B
C
D
E
在张某近五个月的不懈努力下，终于得到了一批正常生长的蓝莓组培苗，总共数量达到了400瓶，共5000株左右。

生长健壮蓝莓组培苗
公司获悉张某控制住了污染，取得了初步成功，获得嘉奖，他被正式任命为组培中心主任，全面负责组培工作。

组培中心主任
张××
仅有的5000苗，区区6个月时间，张某能完成第二年底出圃20万成苗的生产任务吗？如果能，他是如何安排组培苗工厂化生产的呢？ 请听下次课程：《组培苗工厂化生产与管理》分解。

4、总结
1、引起污染的致病原有那些？如何区分？
2、生产上导致污染的原因有？如何控制与预防？
3、玻璃化、褐变、老化的原因是？如何防止？
4、张某取得初步成功的关键是？
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