HA与HI试验

实验HA与HI
一、实验原理
某些病毒（如新城疫病毒，减蛋综合症）能凝集某些动物的红细胞，这种现象虽非抗原抗体，但利用这一现象可检查样品中是否有病毒存在，测病毒滴度，病毒红细胞血凝由于能被相应抗体所抑制，因此可以通过病毒的血凝抑制试验测定抗体的效价。

二、实验试剂与器材
1、实验器材
小烧杯、电子天平、离心机、离心管、采血针、玻璃棒、微量移液器（50μl）、枪头（50μl）、培养皿、96孔板恒温箱
2、实验材料
免疫过的鸡
3、实验试剂
3*1 0.9%生理盐水（200ml）称取1.8gNaCl,溶解于200ml蒸馏水中，即可制成
3*2 1%红细胞配制
（1）、取抗体凝血，离心（1000~1500rpm,5min）
（2）、弃上清，取5ml生理盐水，离心（1000~1500rmp,3~5min）
（3）、弃上清，取5ml生理盐水，离心（3000rmp , 3~5mim）（4）、以红细胞体积，加入生理盐水，制成1%浓度
抗体制备 3*3
（1）、从鸡翅取血，放入离心管中（2000rmp , 3~5min）
（2）、吸取上清，即为抗体（黄色清亮）
3*4 抗原制备
（1）、取新城疫病毒干粉，加生理盐水（灭菌过））、
（2）、溶解，即为抗原
三、实验步骤
1、HA实验步骤
（1）、前10孔与第12孔，每孔加50μl生理盐水
（2）、第11孔加50μl病毒液，第12孔不加，前10空依次倍比
孔口 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12
项目50 50
50
50
50
50 50
50
50 50
50
不稀释液
加→→→→→→→→不病毒液弃50 →50，50
50 加50
50 50 5050
50 50 50
11：1024
：2 1阳毒病液：：阴14 1：1：1：1：8 11：：16
256
倍稀释性64
性32
128
512
对对数
照照50 50 50
50 红细胞50 50 50 50 50 50 50
50
放用作时37 ℃恒温箱20min
温间与度凝凝结果凝凝凝凝凝不不不凝不凝集凝凝凝集集集集集集集．
12 10 11 5 6 7 8 9 2 孔口 1 3 4
项目50 50 50 50 不加50 50 稀释液50 50 50 50 50
50
50→，→→→→→→→不→被检抗50
病毒倍比稀50毒l
5050l50l50l
(1211110)
生ll50μ病毒50μ生理盐水每孔50μl 液理盐水
l红细胞3）、每孔加入50μ（
，观察结果20min、放37 ℃恒温箱（4）实验步骤 2、HI 1ml 抗原液，加2^2 ,则取/、四单元抗原：取病毒滴度（1）2^n 生理盐水。

—1ml(n-2) 入2^50μl孔第50μl1210、 (2)前孔与第孔每孔加入生理盐水，11 生理盐水．
50弃……12 11
10
1
生50μll
50μ理盐水抗体l生理盐水50μ每孔孔倍比稀释1050μl抗体，前）（3、第11孔加入
50μl四单位抗原（4）、每孔加入
15min ℃恒温箱、放37 ）（5 50μl 1%细胞）（6、每孔加入15min
℃恒温箱37 、放）7（
（8）、取出观察，记录抗体效价
四、实验结果与分析
1、HA实验结果与分析
（1）实验结果
第7孔
（2）分析
①第3排，第7列红细胞下滑可能是由于洗板的问题
2、HI实验结果与分析
(1) 实验结果
第9孔
（2）实验分析
①取血清时，鸡的血脂太高，或者是由于该鸡血液中蛋白质含量偏高、血清黏稠，离心后不易分离。

②第7排，第9列红细胞有点凝集可能是红细胞没有混匀
注意事项
（1）1%红细胞配制时洗涤干净并且转速要合适，过高过低都会对结果造成影响
（2）红细胞与4单位抗原从右往左加入
（3）吸取红细胞与病毒液，充分混匀边搅边加
（4）4单位抗原现用现配，此时病毒凝集力强，且较易混匀
（5）在静置过程中，不能振动反应板，在静置过程中轻拿轻放，注意在温箱中放置的温度和时间。

．
（6）拿出反应板时，立即看结果
(7) 稀释血清时，移液器不能离开液面，防止产生气泡，导致
移液体积不准确。