微生物培养TY

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答:空气中的微生物可ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ在皿盖与皿底之间的 培养基上滋生,因此最好不要用这个平板培养 微生物。
关于制备牛肉膏蛋白胨固体培养基的叙述中,错误的是 ()
A.操作顺序为计算、称量、溶化、倒平板、灭菌 B.牛肉膏溶化并与称量纸分离后,用玻棒取出称量纸 C.待培养基冷却至50℃左右时,进行倒平板 D.待平板冷却凝固约5min~10min后,将平板倒过来放置
练习
③将配制好的培养基转移到锥形瓶中,加 棉塞后包上牛皮纸并用皮筋勒紧放入 ___________中灭菌,压力为________, 温度为______,时间__________, 灭菌完毕拔掉电源, 待锅内压力____________,将试管取出。
练习
③将配制好的培养基转移到锥形瓶中,加 棉塞后包上牛皮纸并用皮筋勒紧放入 _高__压__灭__菌__锅__中灭菌,压力为________, 温度为______,时间__________, 灭菌完毕拔掉电源, 待锅内压力____________,将试管取出。
高压蒸汽灭菌

(3)为了尽快观察到细菌培养的实验结果,应将接种了湖
水样品的平板置于 恒温箱
中培养,培养的温度设定
在37℃。要使该实验所得结果可靠,还应该同时在另一平板上接

无菌水
作为对照进行实验。
(4)培养20小时后,观察到平板上有形态和颜色不同的菌
落,这说明湖水样品中有

种细菌。一般说来,
菌落总数越多,湖水遭受细菌污染的程度越
倒 平 板 操 作
问题讨论
1.培养基灭菌后,需要冷却到50 ℃左右时, 才能用来倒平板。你用什么办法来估计培养基 的温度?
答:可以用手触摸盛有培养基的锥形瓶,感觉 锥形瓶的温度下降到刚刚不烫手时,就可以进 行倒平板了。
2.为什么需要使锥形瓶的瓶口通过火焰?
答:通过灼烧灭菌,防止瓶口的微生物污染培 养基。

(3)为避免周围微生物污染,实验操作应在 酒精灯火焰附近 旁进行;
(4)避免已灭菌处理的材料用具与 周围物品 相接触。
2. 消毒方法:
(1)日常生活经常用到的是 煮沸 消毒法;
(2)对一些不耐高温的液体,则使用 巴氏 消毒法(作简要介绍);
(3)对接种室、接种箱或超净工作台首先喷洒 石炭酸或煤酚皂 等溶 液以增强消毒效果,然后使用 紫外线 进行物理消毒。
例1 某小组同学为了调查湖水中细菌的污染情况而进行了
实验。实验包括制备培养基、灭菌、接种及培养、菌落观察计数。
请回答与此实验相关的问题。
(1)培养基中含有蛋白胨、淀粉分别为细菌培养提供了
氮源 和 碳源 必须含有的基本成分是 水
。除此之外,培养基还
和 无机盐

(2)对培养基进行灭菌,应该采用的方法是
答:无菌技术还能有效避免操作者自 身被微生物感染。
2.请你判断以下材料或用具是否需要消毒或灭 菌。如果需要,请选择合适的方法。
(1) 培养细菌用的培养基与培养皿 (2) 玻棒、试管、烧瓶和吸管 (3) 实验操作者的双手
答:(1)、(2)需要灭菌;(3)需要消毒。
1. 无菌技术包括:

(1)对实验操作空间、操作者的衣着和手进行 清洁和消毒 ; (2)将培养器皿、接种用具和培养基等器具进行 灭菌 ;
(4)实验操作者的双手使用 酒精 进行消毒;
(5)饮水水源用 氯气 进行消毒。
3.灭菌方法:
(1)接种环、接种针、试管口等使用 灼烧 灭菌法;
(2)玻璃器皿、金属用具等使用 干热 灭菌法,所用器械是 干热灭 菌箱 ;
(3)培养基、无菌水等使用 高压蒸汽 灭菌法,所用器械是 高压蒸 汽灭菌锅 。
㈢.是否进行了及时细致的观察与记录 培养12h与24h后的大肠杆菌菌落的大小会有明显不同, 及时观察记录的同学会发现这一点,并能观察到其他一
些细微的变化。
3.微生物的恒温培养 4.菌种的保存
⑴.临时保藏:
固体斜面培养基上 4℃保存,菌种易被 污染或产生变异 ⑵.长期保存:
-20℃甘油管在 冷冻箱中保藏
2.在灼烧接种环之后,为什么要等其冷却后再 进行划线?
答:以免接种环温度太高,杀死菌种。
3.在作第二次以及其后的划线操作时,为什么 总是从上一次划线的末端开始划线?
答:划线后,线条末端细菌的数目比线条起始 处要少,每次从上一次划线的末端开始,能使 细菌的数目随着划线次数的增加而逐步减少, 最终能得到由单个细菌繁殖而来的菌落。


(5)如果提高培养基中NaCl的浓度,可以用于筛选耐

细菌,这种培养基被称为 选择培养基 。
练习
①对买回来的菌进行扩大培养,首先制备试 管培养基,写出制备固体牛肉膏蛋白胨培养 基所需的原料: _牛__肉__膏__、__蛋__白__胨__、__水__、__无__机__盐__、__琼__脂__ 其中提供氮源的主要是_蛋__白__胨__; 提供能源的主要物质是_牛__肉__膏__; 琼脂的作用是_凝__固__剂__,它不提供营养。
含量 10g
0.4g
4.0g 9.25g 0.5g 0.5g 100ml
有些细菌在一定的条件下,细胞里面形成一个椭圆形的休眠 体,叫做芽孢。
特点:1、对恶劣的环境,如干旱、高温等,有很强的抵抗力 2、小而轻,可随风飘散 3、当环境适宜(如温度、水分适宜)的条件下,芽孢又可以 萌发,形成一个细菌.
孢子
专题2 :微生物的培养与应用
一 基础知识:
(1)按培养基的 (2)按培养基的 化学成分分: 物理形态分:
·天然培养基
·合成培养基
液体培养基 半固体培养基 固体培养基
(3)按培养基的 功能分:
基础培养基 选择培养基 鉴别培养基
液体培养基:
表面生长 均匀混浊生长 沉淀生长
半固体培养基:
无动力
3.平板冷凝后,为什么要将平板倒置?
答:平板冷凝后,皿盖上会凝结水珠,凝固后 的培养基表面的湿度也比较高,将平板倒置, 既可以使培养基表面的水分更好地挥发,又可 以防止皿盖上的水珠落入培养基,造成污染。
4.在倒平板的过程中,如果不小心将培养基溅 在皿盖与皿底之间的部位,这个平板还能用来 培养微生物吗?为什么?
练习
③将配制好的培养基转移到锥形瓶中,加 棉塞后包上牛皮纸并用皮筋勒紧放入 _高__压__灭__菌__锅__中灭菌,压力为__1_0_0_K__P_a, 温度为______,时间__________, 灭菌完毕拔掉电源, 待锅内压力____________,将试管取出。
2.稀释涂布平板的操作方法
问题讨论
涂布平板的所有操作都应在火焰附近进行。 结合平板划线与系列稀释的无菌操作要求, 想一想,第2步应如何进行无菌操作?
答:应从操作的各个细节保证“无菌”。 例如,酒精灯与培养皿的距离要合适、吸 管头不要接触任何其他物体、吸管要在酒 精灯火焰周围等等。
三.结果分析与评价
(1)消毒的方法:
1、煮沸消毒法:100℃煮沸5-6min 2、巴氏消毒法:70-75 ℃下煮30min或
80 ℃ 下煮15min 3、化学药剂消毒法:用75%酒精、新洁
尔灭等进行皮肤消毒;氯气消毒水源 4、紫外线消毒:对实验室空气消毒 ……
⑵.灭菌的方法:
①灼烧灭菌
②干热灭菌: 160-170 ℃下加
4. 常用的消毒和灭菌方法有哪些?
2.消毒与灭菌的概念及两者的区别
(1)消毒:用温和的化学或物理方法,杀死 物体表面或内部的部份微生物的过程。
(2)灭菌:以强烈的理化因素杀死物体内外 所有微生物,达到完全无菌的过程。
灭菌与消毒技术是微生物有关工作中最 普通也是最重要的技术。
3.常用的消毒与灭菌的方法
鉴别培养基——在培养基中加入某种指示剂或化学 药品。用以菌种的鉴别。
2.培养基的成分
不管哪种培养基,一般都含有水、无机盐、 碳源和氮源等营养物质。
另外还需要满足微生物生长对pH、特殊营 养物质, 生长因子(如维生素、某些氨基酸、 嘌呤、嘧啶)以及氧气、二氧化碳、渗透压等 的要求。
练习
1.不能作为异养微生物碳源的是( ) A.牛肉膏 B.含碳有机物 C.石油 D.含碳无机物
㈠.培养基的制作是否合格 如果未接种的培养基在恒温箱中保温1~2d后无菌落生 长,说明培养基的制备是成功的,否则需要重新制备。
㈡.接种操作是否符合无菌要求 如果培养基上生长的菌落的颜色、形状、大小基本一致, 并符合大肠杆菌菌落的特点,则说明接种操作是符合要 求的;如果培养基上出现了其他菌落,则说明接种过程 中,无菌操作还未达到要求,需要分析原因,再次练习。
成分,请据此回答:
(1)右表培养基可培养的
微生物类型是 自养型微生。物
(2)若不慎将过量NaCl加
入培养基中。如不想浪费此培
养基,可再加 含碳有机物
入 金黄色葡萄球菌 ,用于培

(4)表中营养成分共有
类。
(5)不论何种培养基,在
各种成分都溶化后分装前,要
进行的是

编号 ①

③ ④ ⑤ ⑥ ⑦
成分 粉状硫 (NH4) 2SO4 K2HPO4 MgSO4 FeSO4 CaCl2 H2O
㈡.纯化大肠杆菌
微生物的接种的常用接种方法有: 平板划线法和稀释涂布平板法。 1.平板划线的操作方法
问题讨论
1.为什么在操作的第一步以及每次划线之前都 要灼烧接种环?在划线操作结束时,仍然需要 灼烧接种环吗?为什么?
答:操作的第一步灼烧接种环是为了避免接种 环上可能存在的微生物污染培养物;每次划线 前灼烧接种环是为了杀死上次划线结束后,接 种环上残留的菌种,使下一次划线时,接种环 上的菌种直接来源于上次划线的末端,从而通 过划线次数的增加,使每次划线时菌种的数目 逐渐减少,以便得到菌落。划线结束后灼烧接 种环,能及时杀死接种环上残留的菌种,避免 细菌污染环境和感染操作者。
固体培养基:菌落
有动力(弥散)
选择培养基——在培养基中加入(缺少)某种化学物质,以抑 制不需要的微生物的生长,促进所需要的微生物的生长。用以 菌种的分离 加入青霉素的培养基: 分离酵母菌、霉菌等真菌 加入高浓度食盐的培养基: 分离金黄色葡萄球菌 不加氮源的无氮培养基: 分离固氮菌 不加含碳有机物的无碳培养基: 分离自养型微生物
练习
②微生物在生长过程中对各种成分所需量 不同,故制备培养基时各成分要有合适的 _比__例__,在烧杯加入琼脂后要不停地__搅__拌_, 防止_____________________.
练习
②微生物在生长过程中对各种成分所需量 不同,故制备培养基时各成分要有合适的 _比__例__,在烧杯加入琼脂后要不停地__搅__拌_, 防止_琼__脂__糊__底__引__起__烧__杯__破__裂__.
练习
②微生物在生长过程中对各种成分所需量 不同,故制备培养基时各成分要有合适的 _____,在烧杯加入琼脂后要不停地_____, 防止_____________________.
练习
②微生物在生长过程中对各种成分所需量 不同,故制备培养基时各成分要有合适的 _比__例__,在烧杯加入琼脂后要不停地_____, 防止_____________________.
2.自养型微生物与异养型微生物的培养基的主要 差别是( ) A.碳源 B.氮源 C.无机盐 D.生长因子
【典例解析】
例:关于微生物营养物质的叙述中,正确的 是( )
A.是碳源的物质不可能同时是氮源 B.凡碳源都提供能量 C.除水以外的无机物只提供无机盐 D.无机氮源也能提供能量
例.右表是某微生物培养基
(4)表面灭菌和空气灭菌等使用 紫外线 灭菌法,所用器械是 紫外 灯。
二.实验操作(以培养大肠杆菌为例)
㈠.制备牛肉膏蛋白胨培养基
1.计算 2.称量 3.溶化 4.灭菌:
将锥形瓶放入高压蒸气灭菌锅,在压力为 100kPa、温度为121℃,灭菌15~30min。 5.倒平板:
待培养基冷却到50 ℃左右时,在酒精灯 附近倒平板。2d后观察平板,无杂菌污染才可 用来接种。
在生物体的一定部位产生一种特殊的生 殖细胞叫孢子。孢子的特点是能直接长成新
个体
思㈣考.:无菌技术
1. 获得纯净培养物的关键?
防止外来杂菌的入侵
2. 无菌技术除了用来防止实验室的培养物被其 他外来微生物污染外,还有什么目的?( P15旁栏思考)
无菌技术还能有效避免操作者自身被 3. 消毒和灭菌有何微不生同物?感染。
热1-2h。
③高压蒸气灭菌: 100kPa、121 ℃ 下维持15-30min.
列表比较消毒与灭菌
比较 理化因素 消灭微生物 芽孢和孢子能否
项目 作用强度 的数量
被消灭
消毒 较为温和
部分生活状 态的微生物
灭菌 强 烈 全部微生物
不能 能
1.无菌技术除了用来防止实验室的培养物 被其他外来微生物污染外,还有什么目的?
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