血液分析仪原理

血液分析仪的工作原理
•血液分析仪的功能：细胞计数及细胞分类•血液分析仪的检测原理：①电阻抗法②光散射法
•电阻抗原理：根据血细胞相对不导电的性质，使悬浮在电解质溶液中的血细胞颗粒，在通过计数小孔时可引起电阻变化。

信号发生变化的大小与细胞体积成正比，信号发生的频率用于测量细胞数量。

（库尔特原理）
库尔特细胞分类
•经溶血素作用后细胞体积大小取决于细胞内有形物质的多少。

淋巴细胞：颗粒少，体积小35~98fl
单核细胞、嗜酸性粒细胞、嗜碱性粒细胞及原始、幼稚、异型淋巴细胞等：中间细胞群体积98~135fl
中性粒细胞：核分叶多，颗粒多，胞体大135~350fl
光散射法
•体积、电导和激光散射原理(VCS):先加入红细胞溶血剂溶解掉红细胞，然后加入稳定剂来中和红细胞溶解剂的作用，使白细胞表面、胞浆和细胞体积保持稳定不变。

应用鞘流技术将细胞推进到流动细胞计数池(Flowcell)中。

•V 代表体积，采用经典的库尔特专利技术，用低频电流准确分析细胞体积
•C 代表高频电导性，采用高频电磁探针原理测量细胞内部结构间的差异
•S 代表激光散射，采用氦氖激光源发出的单色激光照射于每个细胞上，收集细胞在
10ⅹ~70ⅹ角度内出现的散射光(MALS) 信号。

可以区分出颗粒特性不同的细胞群体。

XE-2100
•采用半导体激光流式细胞技术结合核酸荧光染色技术进行白细胞计数和分类。

半导体激光照射在通过鞘流技术处理的细胞上，可根据每个细胞所产生的三种信号来鉴别细胞类别。

前向散射光(FSC) 信号可反应细胞体积大小；侧向散射光(SSC) 信号可反应细胞的颗粒和细胞核等内含物的信息；侧向荧光(SFL) 强度信号则用于分析细胞内脱氧核糖核酸(DNA) 和核糖核酸(RNA) 的含量
散点图
•VCS 技术可通过DF1、DF2、DF3 三个散点图将五种类型白细胞明显区分开。

三个散点图的纵坐均定义为细胞体积。

DF1 为细胞体积和激光散射的方图，DF2 和DF3 为细胞体积和高频电导性的直图，DF3 为除去粒细胞群体后显示出淋巴细胞后面的碱性粒细胞图像
•在白细胞分析上主要采用两个通道进行细胞计数和分类，两通道均采用鞘流进样方式和激光测定。

①DIFF 通道：STROMATOLYSER-4DL 试剂中的表面活性剂可以溶解掉标本中的红细胞和血小板，并在白细胞膜上打出小孔；然后STROMATOLYSER-4DS 试剂中的聚次甲基染料通过这个小孔进入白细胞中，与细胞核的核酸和细胞器结合，经过波长633nm 的激光照射后产生的荧光强度与细胞的核酸含量成正比。

STROMATOLYSER -4DL 试剂还具有与嗜酸性颗粒特异性结合的能力，可根据侧向散射光信号强度，将嗜酸性粒细胞从中性粒细胞中分离出来。

这样可以将中性粒细胞、嗜酸性粒细胞、单核细胞、淋巴细胞清楚的分离开。

在DIFF 散射图中可以得到白细胞的四个分群
②WBC/BASO 通道：专用嗜碱性粒细胞测定的通道，因为嗜碱性粒细胞数量非常少，因此必须采用特殊技术处理。

STROMATOLYSER –FB 是一种酸性试剂，可将红细胞和血小板处理后呈淡影化，将
除嗜碱性粒细胞以外的白细胞处理成裸核
形态，然后采用前向散射光(FSC) 信号和侧向散射光(SSC) 信号使嗜碱性粒细胞从其
它细胞中分离出来。

前向散射光与细胞体
积测定相关，侧向散射光与裸核后的细胞
结构复杂性有关。

在这个通道中可以获得
白细胞总数和嗜碱性粒细胞的数量。

•幼稚细胞分析上有特殊的IMI 通道，在IMI 检测通道中主要应用射频(RF) 技术和电阻抗法(DC)。

这个测定通道根据幼稚细胞膜表面比成熟细胞膜表面含有脂质少的现象，在稀释液中加入硫化氨基酸(IM 试剂)，由于占位不同，结合在幼稚细胞表面的氨基酸较多，对溶血剂有抵抗作用，对幼稚细胞具有保护作用。

当加入溶血剂后成熟细胞易被溶解掉，而幼稚细胞不易被溶解破坏，可通过电阻法检测出来。

射频技术用于测量细胞核的大小和颗粒的多少，而电阻抗信号可反应出细胞体积的大小。

•有核红细胞检测通道–NRBC 通道：在处理标本
时加入STROMATOLYSER–NR 专用试剂，它即可使成熟红细胞溶解又可保持有核红细胞的核结构，同时也将白细胞保持完好。

NR 试剂中的聚
次甲基荧光染料可渗透进入细胞膜内，将白细胞和有核红细胞的核染色。

通过检测荧光强度可区分明显的两个细胞群体。

白细胞核大荧光强度高，偏于散点图右侧；而有核红细胞核小，荧光强度低，位于白细胞群左侧；正常红细胞无细胞核和破碎，荧光强度极低。

根据荧光强度差和前向散射光信号测定的细胞体积差，可将有核红细胞从其他细胞群中区分出来
•1、凡影响细胞脉冲大小的因素（电压、手机信号）
•2、操作人员素质，报警信息、散点图、直方图形态
•3、仪器的正确使用及保养。