蓝胶说明书翻译

二乙基氨基乙基-亲和层析蓝胶使用说明书
目录号码
153-7307
介绍
二乙基氨基乙基亲和层析蓝胶是一种双功能基团离子交换/亲和层析介质，该介质是由同时偶联有Cibacron Blue F3GA和二乙基氨基乙基BIO-GEL A-5m的基团的琼脂糖。

Cibacron Blue F3GA是一种离子型的、憎水的基团，其空间活性结合位点对具有双核苷酸折叠的蛋白质具有吸附作用，如白蛋白。

二乙基氨基乙基通过阴离子交换，其结合等电点比流动相低的蛋白质。

通过这两种双功能基团制备成二乙基氨基乙基亲和层析蓝胶成为一种非常强有力纯化工具。

通过改变盐离子强度和流洗缓冲液的PH，可以从不同种类的血清中纯化出高纯度的IgG。

二乙基氨基乙基亲和层析蓝胶层析过程提供一种纯化血清蛋白的最简便方法。

免疫球蛋白被洗脱后，其它杂蛋白组分可以通过通过离子强度进行洗脱下来。

二乙基氨基乙基亲和层析蓝胶对血清白蛋白亲和层析能力比二乙基氨基乙基离子交换层析的能力更强，可以从混有白蛋白的血清中分离出其它组分的有效的方法。

产品描述
填料Bio Gel A-5m 琼脂胶
颗粒半径150-300纳米（50-100网孔）
洗脱方法0.01MTris,pH8,0.15MNaCl,0.04%NaN3
官能团Cibacron blue and diethylaminoethy1（亲和分离介质三嗪染料和DEAE）
推荐流速范围15-25cm/hr
压力限定15pis
容量
血清0.2-1ml血清/蓝胶
IgG的收率＞55%
白蛋白的收率＞90%
蛋白酶的去除率100%
稳定性
pH 2-11
有机溶剂酒精
温度不耐高温高压
存储
在0.02% NaN3或其他防腐剂中，4℃保存，一年
*使用1.5*20cm的柱子和流动相1：1的压力下，确定的流速。

**兔血清和人血清能力的结合能力有很大的批间差异性，应按照不同的批号，进行不同的选择。

没有提供的必须材料
预洗缓冲液0.1M醋酸，pH为3，1.4M的NaCl,40%异丙醇
流洗缓冲液参照表2
再生缓冲液2M盐酸胍于＋流洗缓冲液中
或1.5MNaSCN
布氏漏斗
层析柱
概述
1、利用表格1所给出的信息来准备适当的缓冲液，准备准确缓冲液对最适IgG的回收是必
须的。

参照优化后的分离条件。

表1 通过DEAE Affi-Gel蓝胶从血清中纯化IgG所用缓冲液
*KH2PO4被用作制备缓冲液，使用KOH对其PH值进行调整。

2、转换血清样品缓冲液。

使用Bio-Gel P-6DG脱盐柱进行交换，或先通过透析。

3、蓝胶预洗
利用布氏露斗，使用至少5倍床体积的预洗缓冲液对蓝胶进行漂洗，其中含有过量的染料基，在洗脱是它可能和血清蛋白同步洗脱。

继续使用至少10倍床体积进行漂洗，以确保其离子强度尽可能的低。

备注：如果使用酒精进行漂洗，应当注意到胶的收缩。

4、装柱和上样
按照二乙基氨基乙基亲和层析蓝胶瓶签所标注的血清和胶的比例，准备层析柱。

按照血清的体积计算所需要蓝胶的体积。

上样前应进行缓冲液转换和透析。

蓝胶的结合力存在很大的差异性，因此每毫升胶结合血清的体积应在0.2-1毫升范围内变化。

人和兔血清对给定批号的结合能力已在瓶签中做出标注，其它样本应按照最低标准进行试验。

5、使用三倍柱体积的缓冲液进行洗脱。

6、加入血清样品并用三倍体积的初始缓冲液洗脱，收集大约等于上样样品量的体积的样品。

7、从未结合蛋白峰的第一管进行收集，所有收集的体积应为上样体积的8倍。

8、对于其它结合蛋白，使用盐离子梯度进行洗脱。

当最终盐离子浓度达到0.5M时能使除了白蛋白以外所有的血清蛋白。

9、大多数白蛋白使用2-3倍床体积含有1.4M NaCl应用缓冲液（或用再生缓冲液）能够洗脱下来。

10、不论吸附的白蛋白洗脱与否，使用4-5倍床体积的再生缓冲液漂洗和三倍床体积的流洗缓冲液均可是填料再生。

11、填料使用5个循环后，由于少量蛋白质和填料能够结合，导致其结合能力有一些丧失。

为了弥补这种现象，应当将胶和样品的比例按照20%的比率增加。

就血清而言，胶的有效组分一般要使用8-10个周期。

注意：使用胶的最初1－2个循环中，在高盐浓度下，会洗脱出低浓度的染料。

这些染料不会干扰到胶的有效性而且不会在以后的使用中出现。

通过使用预洗缓冲液处理可以冲走填料中的蓝色染料基。

分离条件的优化
最终效果的取决于样品的pH和离子强度。

通过使用Bio-Gel P-6DG脱盐，或者通过透析，对血清的缓冲液的转换是非常重要的。

按照表1中列出的缓冲液可以完全消除样品中蛋白酶，但当遇到使用不同的血清样品（含非IgG蛋白吸附和修饰的IgG）需做出一些改变。

因此，未被吸附的蛋白组分理论上会被除去，而只剩IgG，应该照以上所述一直监测蛋白活性。

如果在未结合蛋白组分显示少量活性蛋白组分，需要对缓冲液做出修改。

这样有助于确定从未结合蛋白中提高IgG的回收率。

转移样品的缓冲液为20 mM Tris-HC1，Ph 8.0，并对柱子填料使用相同的缓冲液进行平衡。

使用氯化钠溶液梯度洗脱，并收集与上样样品相同体积的样品。

通过检测流出的蛋白酶来确定纤维蛋白中盐离子浓度。

有无蛋白酶的片段能被合并，或作为二次血清样品来纯化，其氯化钠浓度比非IgG蛋白被发觉所用浓度要低一点。

为了获得高纯度和高回收率的IgG，建议使用亲和蛋白A介质。

更多相关信息，请参照1092。

目录
页码产品描述
153-7307DEAE Affi-Gel 蓝胶
脱盐和样品的制备
150-0738 Bio-Gel P-6DG 脱盐Gel,100g
150-0739 Bio-Gel P-6DG脱盐Gel,1kg
732-2010 Econo-Pac 1oDG脱盐柱子,30*10ml
732-0011 Econo-Pac P-6装胶筒,5ml
其他IgG产品的纯化
732-0031 Econo-Pac DEAE 装胶筒,1*5ml
732-0035 Econo-Pac DEAE装胶筒,5*5ml
732-2026 Econo-Pac Serum IgG 纯化柱子
732-2027 Econo-Pac Serum IgG 纯化工具。