进口奶牛胚胎移植效果研究

奶牛胚胎移植技术

奶牛胚胎移植技术 上海交通大学农业与生物学院 朱淑文 一、概述 牛胚胎移植的商业化应用开始于七十年代初期。当时，必须通过手术方法才能采集胚胎，由于奶牛的乳房影响手术的顺利进行，手术后往往还会影响奶牛以后的繁殖性能，因此，胚胎移植主要在肉牛中应用。1976年，一些研究小组报道了应用导管高效采集胚胎的非手术方法。随后，胚胎移植在奶牛中的应用得到了飞速发展。1974年，第一头胚胎移植登记荷斯坦奶牛在美国出生。七十年代后期，胚胎移植（ET）登记荷斯坦奶牛的数量每年以100%以上的速度增长，1980年达到8298头年。进入80年代后，随着非手术采胚法和移植技术的改进以及胚胎冷冻保存技术的发展，每年（ET）登记奶牛的数量在稳步增长，至1990年达到18727头年。截止1991年，美国登记的胚胎移植荷斯坦奶牛总数量已达到142598头。目前，44%的荷斯坦优秀种公牛是由胚胎移植培育的。九十年代以来，胚胎移植在发达国家中的增长速度有所减缓，但是技术含量越来越高，例如体外受精胚胎生产技术、转基因技术以及克隆技术的应用和研究得到加强。近几年来，胚胎移植在亚洲和南美一些国家中增长速度很快。从整个世界范围来看，牛胚胎移植的增长速度仍然很快。 二、胚胎移植技术 （一）体内受精胚的移植 1 超数排卵 在常规胚胎移植技术中，获得大量可用胚胎的主要途径是超数排卵（简称超排），因此，高效率的超排技术是胚胎移植技术能否在生产中推广应用的关键。应用于奶牛的超排激素主要有PMSG（孕马血清促性腺激素）和FSH（促卵胞素）。PMSG尽管只需一次性注射，省时省力，但是半衰期过长，可以导致卵巢的过度刺激以及对排卵、受精和随后的胚胎发育产生不利的影响，因此现在一般已不采用PMSG对奶牛进行超排处理。目前广泛应用于母牛的超排激素是FSH。用于奶牛超排的商品FSH均是从屠宰家畜的脑垂体中提取的，脑垂体不但能够分泌

奶牛胚胎移植技术研究进展

REPRODUCTION & BREEDING 繁殖育种22 2018·9 奶牛胚胎移植技术研究进展 薛洁1,2，刘文浩1，吕湾2，杨海昱2，杨凌2，李荣岭1，李建斌1，仲跻峰1 （1.山东省农业科学院奶牛研究中心，济南 250131；2.河北工程大学，邯郸?056001） 中图分类号：S858.23 文献标识码：A 文章编号：1004-4264（2018）09-0022-05 DOI: 10.19305/https://www.360docs.net/doc/ec765608.html,ki.11-3009/s.2018.09.006 摘 要：胚胎移植技术是一项能够充分发挥优秀母畜繁殖潜力的技术。本文概述了奶牛胚胎移植技术的研究进展，包括超数排卵、胚胎收集、胚胎移植、胚胎冷冻保存、体外胚胎培养、胚胎分割、胚胎活检和性别鉴定以及胚胎克隆。 关键词：超数排卵；胚胎移植；胚胎分割；胚胎性别鉴定 胚胎移植（ET）是提高动物繁殖力的一种有效方法。虽然母牛的胚胎移植不能体现出公牛的遗传潜力，但可以让母牛生产更多的后代，比一年一次的自然分娩更能发挥优秀母牛的作用。1890年，Heape将2个四细胞时期的安哥拉兔胚胎移植到一只受精的比利时兔输卵管中，产下了4只比利时和2只安哥拉幼兔[1]，这是第一次成功移植哺乳动物胚胎。目前，结合活体采卵（OPU）、体外受精（IVF）和ET的体外胚胎生产已经发展成为一种替代传统超排和ET的方法。而胚胎冷冻、储存等技术使得在国际间运输胚胎、防止某些传染病传播、青年牛提前受孕产犊成为可能，还可以在移植前进行胚胎评估（如遗传价值或遗传疾病等）。 1 超数排卵 ET通常从超数排卵开始。Casida等首先开展了牛的超数排卵研究[2]，后来，英国剑桥农业研究委员会的Rowson等开发了使用孕马血清促性腺激素/马绒毛膜促性腺激素（PMSG）诱导超排的方法[3]。由于PMSG半 衰期长，只需要注射一次就可达到超排的目的，但发现经常回收到不成熟的卵泡和低质量的胚胎，超排效果相当不稳定。 Dziuk等研究了利用促卵泡素（FSH）进行超数排卵的方法[4]。给母牛每天注射2次FSH，连续注射4d，可获得更一致的超排结果[5]。多年来，商业化ET程序已形成，一般牛在发情的第8~13天注射FSH，而同期发情方案使超排更容易、方便。最近有报道指出，使用透明质酸作为稀释剂注射1或2次FSH的超排效果，与用盐水作为稀释剂多次注射FSH的超排效果一致[6,7]。 超数排卵的一个显著特征是动物对促性腺激素处理的反应不一致。在牛上使用类似的超排方案，可以回收0~100个卵母细胞，其中优质胚胎有0~60个。过去的25年里，牛超排获得胚胎的平均数量变化不大。美国胚胎移植协会（AETA）报告指出，1998~2010年，肉牛超排获得胚胎的平均数（7.1个/次）比奶牛（6.2个/次）略多一些。实际上与Looney报道的2.000多头肉牛超排获得的胚胎平均数（6.2个/次）和Hasler等报道的600多头荷斯坦牛超排获得的胚胎平均数（6.4个/次）没有差异。 2 胚胎收集 最初，收集牛胚胎需要进行手术。手术具有侵入性、费用高、耗时长的缺点，且需要专门技术人员及复杂的手术设施，并且不能在农场现场进行。此外，奶牛 收稿日期： 2018-01-30基金项目： 国家奶牛产业技术体系建设专项经费（CARS-36）；山东省农业科学院农业科技创新工程（CXGC2016A04）；山东省农业良种工程（2016LZGC027）；山东省自然基金面上项目（ZR2016CM37）。作者简介： 薛洁（1996-），女，硕士生，研究方向为奶牛育种；刘文浩（1972-），本科，副研究员。两人为共同第一作者。通讯作者： 李建斌，博士，研究员；杨凌，博士，教授。

胚胎移植操作规程

1 1 范围 本标准规定了绵羊的胚胎生产和移植的供体羊的选择和饲养管理、供体羊的超数排卵及人工授精、手术冲卵技术及胚胎质量鉴定、冻胚的解冻、受体羊的选择及饲养管理、胚胎手术移植技术和妊娠受体羊的饲养管理技术。 本标准适用于秦皇岛地区绵羊的胚胎生产和移植。 2 2 规范性引用文件 下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。 DB 1303/T 098-2000 羊的人工授精技术操作规程 3 3 供体羊的选择和饲养管理 3.1 3.1 供体羊的选择 a）a）体羊品种优良、生产性能好； b）b）传性稳定、谱系清楚； c）c）体质健壮。繁殖机能正常，无遗传和传染性疾病。年龄在2岁至7岁为宜； d）d）具有畜牧部门颁发的种畜禽鉴定合格证书。 3.2 3.2 供体羊的饲养管理 3.2.1 3.2.1 保持饲养环境稳定，饲养环境卫生、干燥、棚舍温度适宜。避免应激反应。 3.2.2 3.2.2 制定合理的供体羊日粮配方，保证正常的营养平衡。 3.2.3 3.2.3 满足供体羊清洁饮水的需要。 4 4 供体羊的超数排卵及人工授精 4.1 4.1 超数排卵 4.1.1 4.1.1 超数排卵的季节和发情周期：绵羊最适超数排卵季节为9月下旬至11月上旬。绵羊的发情周期在15d—17.5d。供体母羊在超数排卵前需观察1—2个完整的发情周期。 4.1.2 4.1.2 用于超数排卵的激素选择 FSH—P（垂体促滤泡素） LH—P（垂体促黄体生成素） ICI80996（氯前列烯醇） 4.1.3 4.1.3 激素剂量（注射总量/只） FSH—P剂量（肌注）：120IU—160IU LH—P剂量：根据FSH的注射剂量，肌注100—120IU。 ICI80996：肌注0.08mg/次，注射两次/d。 4.1.4 4.1.4 超数排卵方法 FSH—P 3天注射法 以母羊发情之日作为发情周期的0d，在母羊发情周期的第13d或13.5d（周期大于17.5d的羊在第13.5d）开始，每天早：（6：00—7：00）和晚（18：00—19：00）各注射1次FSH，连续3天，递减注射。 FSH、LH用生理盐水稀释。 在第5、6次注射FSH—P时，同时肌肉注射ICI80996。 确定供体羊发情后立即注射LH。如果FSH—P未注射完供体羊已发情，停止注射FSH—P，立即注射LH。

奶牛胚胎技术标准

奶牛胚胎技术标准 1范围 本标准规定了奶牛胚胎质量标准 本标准适用于奶牛场胚胎生产移植。 2规范性使用文件 下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本标准。然而，鼓励根据本标准达成的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。 Q/shz T 06 02-2014 奶牛胚胎移植技术标准 3要求 3.1供体牛选择和胚胎生产应符合Q/shz T 06 02-2014 关于奶牛胚胎移植技术标准供体牛选择和胚胎生产技术规程。3.2胚胎级别应以在显微镜下观察的形态学变化确定。 3.3鲜胚移植前胚胎在体式显微镜下观察应在到以下胚胎形态学鉴定及A组、B组、C级（可用胚胎）标准，冷冻胚胎应达到A级、B级标准，见表1 3.4冷冻胚胎解冻条件和方法 3.4.1分步脱甘油法（甘油冷冻胚胎） 解冻细管，并按步骤倒入以下溶液：3.3ml 1M蔗糖液+6.7ml，10%甘油5min,转移至3.3ml 1M蔗糖液+3.3ml 含0.4% BSA 的PBS液5min,然后移到0.4% BSA的PBS液中，装管，移植。 3.4.2乙二醇冷冻胚胎解冻后直接移植 解冻细管时，从液氮中取出细管，空气中室温20o C-25o C停留8S-10S,然后放入32o C-35o C水浴中，停留10S-20S，冰晶消失后取出细管，用面巾纸揩干细管外部水珠，再用70%酒精棉球消毒。最后剪掉封口端0.5cm-1cm,直接给受体牛移植。 冷冻胚胎解冻后，在体式显微镜下观察，胚胎完整性未受到破坏，透明带和细胞团结构完整，细胞质均匀，或经过体外培养发育正常，为合胚胎。 4检验规则 4.1组批 按胚胎数量的5%-10%随机抽样检验。5枚-10枚胚胎为一组批或根据用户所需的胚胎数量，确定检验胚胎数量。 4.2检验项目 主要检验冷冻前后胚胎形态学变化。 4.3注意事项 检验前，应事先准备好受体牛，以便检验合格的冷冻胚胎及时移植到受体牛生殖道内。 5标志、包装、储存、运输 5.1标志 装胚胎应答应标记胚胎序号、供体母牛品种及编号、与配公牛品种及其编号、胚胎发育阶段及其级别、胚胎采集日期等，使用甘油冷冻胚胎应注明GL标记，用乙二醇冷冻解冻后直接移植的冷冻胚胎应标记字母DT.储存胚胎液氮容器外边应有标签注明胚胎品种、数量、生产日期以及生产单位名称和地址。 5.2包装 0.2ml塑料细管 5.3储存 冷冻胚胎应储存在铝合金液氮容器内，内部要定期补充液氮保持-196 o C温度。储存条件应为阴凉干燥处，不应堆放，

胚胎移植技术应用

《动物遗传育种与繁殖专论》 课程作业 胚胎移植技术在畜牧业中的应用 姓名： 学号：

胚胎移植技术在畜牧业中的应用 畜牧业发展水平占农业的比重是衡量一个国家和地区现代化水平的重要标志，近年来，畜牧业已成为我国农业发展的重心．胚胎移植技术也称受精卵移植技术，就是将良种母畜配种后的早期胚胎取出，移植到同种的生理状态相同的母畜体内，使之继续发育成为新个体，所以该项技术又被称为“借腹怀胎”。胚胎工程技术是胚胎移植技术发展到一定程度而出现的名词, 是由发育工程演变而来的。由于胚胎移植技术可最大限度的发挥优秀母畜在品种改良和育种中的作用，同时它又是体外受精、转基因、体细胞核移植等胚胎工程的基础性环节，因此，胚胎移植技术被誉为家畜繁殖技术的第二次革命。 胚胎工程技术根据其发展现状包括以下9类:胚胎移植技术;胚胎冷冻保存技术;胚胎分割技术;试管动物技术(体外受精技术);性别控制技术,即XY精子分离和胚胎性别鉴定技术;转基因动物技术;动物克隆技术(细胞核移植技术);胚胎干细胞技术;胚胎嵌合技术。目前, 前5种技术已在生产实践中得到不同程度的应用,但应用较多的是前2种技术, 其他几种技术由于设备投入成本较大、成功率较低, 尚处于实验室向生产转化阶段。 胚胎移植技术可使引进的种畜在较短时间内快速纯种繁殖，成为大群体，满足牛羊业迅猛发展的需要。同时，牛、羊业的快速发展和这种市场化发展的需求，使胚胎移植技术受到更多研究者和生产者的

高度重视，进而促进了胚胎移植技术快速发展和商业化。20世纪90年代后期，胚胎移植技术在畜牧生产中得到应用推广，同时胚胎移植技术又解决了畜牧业发展中的一些难点问题。 胚胎移植技术是继人工授精之后发展起来的繁殖高新技术, 目前已成为扩大优秀家畜遗传资源的主要手段, 有的称作MOET技术( 超数排卵与胚胎移植技术)。作为家畜育种的重要手段之一, 自20 世纪50年代初第一头胚胎移植牛在美国诞生以来, 胚胎移植技术飞速发展。据不完全统计, 全世界目前年产胚胎移植牛超过35万头, 美国、法国等发达国家每年参加后裔测定的青年公牛的80%来自胚胎移植所产的后代。20世纪80年代后期, 我国在生产中开始应用牛、羊胚胎移植技术, 近几年该技术在全国得到迅速发展。本实验室1990年奶牛新鲜胚移植妊娠率达62.2%, 达76%。在6省区规模化生产中, 绵羊和山羊的移植妊娠率在60%左右, 达76.8%。根据国际胚胎协会的统计, 20多年来,进行胚胎移植的动物数量和种类每年都在增加, 胚胎移植已经成为畜牧业中最活跃的产业。 胚胎移植技术在畜牧业发展中的作用主要体现在促进家畜的遗传改良，充分发挥优良母畜的繁殖潜力，提高繁殖效率．优良后代的增加，既取决于种公畜，也有赖于优良母畜。尤其是生产性能取决于父母双方，如果说人工授精技术的出现使公畜的繁殖潜力得到最大限度地发挥的话，那么胚移技术的出现可以使母畜的繁殖潜力得以充分发挥，从而有效促进家畜的遗传改良。更为重要的是，如果超数排卵时利用优良公畜冻精配种优良母畜(供体)，然后利用采出的胚胎进行

肉牛胚胎移植技术

肉牛胚胎移植技术 胚胎移植又称受精卵移植，是将l头良种母畜(供体)配种后的早期胚胎取出，移植到另一头同种的生理状态相同的母畜(受体)的子宫内，使之继续发育成为个体，所以也叫人工授胎或“借腹怀胎”。 (一)胚胎移植的意义 1．充分发挥优良母畜的繁殖潜力，提高繁殖效率由于牛的胚胎移植可以利用非手术法反复从一头供体中收集胚胎，所以繁殖率得以更加提高。据报道国外已能做到从一头供体牛一年获得40～50头犊牛。 2．加速品种改良，扩大良种畜群利用超数排卵、胚胎移植技术能使母畜排出较多卵子，山东永丰牧业同时解除其妊娠胚胎的职能，这样一头良种母牛就可产生多量的后代。使一头优良母畜在育种工作中的意义大为提高。 3．诱发肉牛怀双胎，提高生产效率在肉牛业中，有一种由胚胎移植技术演化出来的所谓“诱发双胎”的方法，即向已配种的母畜(排卵的对侧子宫角)移植一个胚胎，这样配种后未受胎的母畜可能因接受移植的胚胎而妊娠，而已受精的母畜由于增加了一个外来胚胎而可能怀双胎o 4．代替种畜的引进，保存品种资源通过胚胎的运输代替以往的种牛进出Vl山东永丰牧业，大大节约了购买和运输种牛的费用。同时可用保存胚胎的方式解决牛品种资源保存的问题。 (二)胚胎移植的操作原则 1．胚胎移植前后所处环境的一致性即胚胎移植后的生活环境和胚胎的发育阶段相适应山东永丰牧业。包括生理上的一致性(即供体和受体在发情时问上的一致性)和解剖位上的一致性(即移植后的胚胎与移植前所处的空问环境的相似性)以及种属一致性(即供体与受体应属同一物种，https://www.360docs.net/doc/ec765608.html,但并不排除种间移植成功的可能性)。 2．胚胎收集期限胚胎收集和移植的期限(胚胎的日龄)不能超过周期黄体的寿命，最迟要在周期黄体退化之前数日进行移植。通常是在供体发情配种后3～8日内收集和移植胚胎。 3．在全部操作过程中，胚胎不应受到任何不良因素(物理的、化学的、微生物的)的影响而危及生命力。移植的胚胎必须经鉴定并认为是发育正常者。 (三)胚胎移植技术的基本程序胚胎移植的基本程序包括：供授体母牛的同期发情、供体母牛的超数排卵、供体母牛的配种、胚胎的收集、山东永丰牧业胚胎的检查、胚胎的保存和移植等程序。如图3—4所示。关于超排和同期发情处理在前面已有叙述，下面仅介绍其余部分。 1．供体母牛的配种经超数排卵的供体母牛，为了使排出的卵子有较多的受精机会，一般在发情后输精2～3次，每次间隔8～12 h。 2．胚胎的收集 从供体母牛收集胚胎的方法，可采用手术法和非手术法两种。手术法是按外科剖腹术的要求进行山东永丰牧业，手术部位在右肋部或腹下乳房至脐部之问的白线切开。 https://www.360docs.net/doc/ec765608.html,伸进手指找到输卵管和子宫角，引出供。母体十畜同期发情处理受体母畜 辛辛辛辛

羊的胚胎移植.doc

羊的胚胎移植 一、胚胎移植概述 二、胚胎移植原理 三、胚胎移植技术程序 一、胚胎移植概述 1.胚胎移植的发展历史 2.胚胎生物技术的研究意义及其在畜牧生产中的应用 3.胚胎移植目前存在的问题 4.影响胚胎移植的主要因素 5.胚胎移植的经济效益 6.胚胎移植的发展前景 1.1国外胚胎移植发展史 George是世界上第一个提出动物胚胎移植的人。1890年4月，Walter Heape用兔作为实验动物，成功地获得了世界上第一个动物胚胎移植后代。Heape兔胚胎移植的成功，极大的影响着繁殖生物学和畜牧业的发展。1900年，Heape的杰出接班人FHA Marshall和John Hammond总结了他的主要工作内容，提出了哺乳动物性季节的概念，也就是现在所说的发情周期。1911-1913年，奥地利维也纳的Biedl 等进行了兔的胚胎移植实验，但由于战争，直到1922年才报道了其研究结果。虽然他们做了70多个实验，但由于把输卵管的胚胎移植到子宫，结果只有一只受体兔妊娠，这充分证明了胚胎和受体的同步性是非常重要的。1932年和1933年，Warwick,Berry和Horlache第

一次把胚胎移植技术用在绵羊和山羊上，Dr. Berry也因此成为了第一个国际胚胎移植协会先驱奖的获得者。1948年，张明觉用超数排卵技术从2只母兔获得88枚受精卵，给7只受体母兔移植，成功地产出76只小兔，这次试验的成功具有划时代的意义。1950年12月19日，33岁的美国人Elwyn Willed成功地获得了世界上第一头胚胎移植牛犊。60年代初，全部采用的是手术回收胚胎和移植，1964年Mutter 等和1965年Sugie相继报道了非手术移植胚胎获得成功。70年代中期，牛的非手术移植完全取代了手术移植. 1974年，成立了国际胚胎移植协会(IETS )，随后相继成立了美国胚胎移植协会、加拿大胚胎移植协会、欧洲胚胎移植协会 1.2 国内胚胎移植发展史 我国的胚胎移植研究起步较晚，于20世纪70年代初才开始。1973年首先在家兔上获得成功。1974年，中科院遗传所在绵羊胚胎移植上取得成功。1976年郭志勤、谭丽玲等在家兔胚胎和绵羊胚胎低温(100C)保持1天和10天后移植成功。手术法和非手术法牛胚胎移植在1978年和1980年也相继成功。1980年中国农业科学院畜牧所在绵羊胚胎超低温保存后移植产羔。20世纪80年代，胚胎移植进入了实验阶段，掀起了全国的研究高潮，20几个省近30个单位相继开展了胚胎移植研究工作。20世纪90年代初期，我国的胚胎移植工作逐渐进入了生产应用初始阶段。生产应用比较好的地区主要是内蒙古、新疆和黑龙江、北京 1.3 羊的胚胎移植发展历史

一次性使用胚胎移植导管产品技术要求weichuang

一次性使用胚胎移植导管 适用范围：与注射器配合，经阴道向子宫内转移经过体外受精(IVF)的胚胎或受精卵用。 1.1 产品型号 表1一次性使用胚胎移植导管尺寸及公差

1.2 划分说明 XXXXX –d –L XXXXX：表示胚胎移植导管（PTYZ/PTYZ1） d：一次性使用胚胎移植导管外径（F）（1F=0.333mm） L：一次性使用胚胎移植导管长度（cm） 1.3 结构组成 一次性使用胚胎移植导管结构如图1所示。PTYZ型由引导导管、移植管和可塑型的不锈钢内芯组成；PTYZ1型由引导导管、移植管和标记环组成。 引导导管管材：PTYZ-d-L为：医用聚氨酯，针座为ABS；PTYZ1-d-L为：聚醚-聚酰胺共聚物，针座为ABS，标记环：为医用硅胶。 移植管：由304不锈钢管、聚氨酯管和ABS针座组成。 可塑型的不锈钢内芯：由304不锈钢丝和ABS手柄组成。 针座和导管的连接为机械螺旋拧压方法。 PTYZ-3-23/ PTYZ-5-23

PTYZ1-3-23/ PTYZ1-5-23 图1一次性使用胚胎移植导管示意图 2.1 尺寸 一次性使用胚胎移植导管尺寸及公差应符合表1的规定。 2.2 外观 外表面应清洁无杂质，不应有加工缺陷和表面缺陷，末端圆滑、无毛刺。 2.3 物理性能 2.3.1 断裂力 管材的断裂力：直径＜1.15mm的管材最小断裂力为5N，≥1.15mm ~ ＜1.85mm 的管材最小断裂力为10N，≥1.85mm管材最小断裂力为15N。 2.3.2 标记线应清晰可见。 2.3.3 接头 2.3.3.1 移植管的管座头端与引导导管的接头应相匹配，连接后无明显摆动。 2.3.3.2 移植管的接头应符合GB/T 1962.2-2001的要求。 2.3.4 无泄漏 移植管的针座和导管连接部分应无泄漏现象。 2.3.5 耐腐蚀性：一次性使用胚胎移植导管中的不锈钢管和不锈钢内芯不应有腐蚀痕迹。 2.4 化学性能：（除金属部件外）

实习报告：动物胚胎移植技术

动物胚胎移植技术

摘要 胚胎移植又称受精卵移植，是把一头雌性动物的早期胚胎从输卵管或子宫内冲洗出来，移植到另一头雌性动物的输卵管或是子宫内，使之继续发育成新个体的技术。 动物胚胎移植主要是通过对优良供体母畜作同期排卵处理和体内胚胎生产或体外人工授精（IVF）的方法，以大量获得优良的动物胚胎后再将其移植给普通代孕受体母牛进行快速繁殖优良动物的生物技术。胚胎移植技术主要用于快速扩大优秀种公牛和核心母牛的数量。尽管单个胚胎的生产成本较高，但由于种公牛和种母牛较高的经济价值和社会价值，以及利用胚胎移植在育种方面可以获得同胞或同卵双生牛进行后裔测定等优势，因此，该技术在种公牛的选育和优质核心母牛群的培育以及加快育种步伐方面均具有极大的优越性。 本论文将对动物胚胎技术作比较全面的阐述，使大家对动物胚胎技术有一个比较全面的认识。 关键词：供受体超数排卵同期发情胚胎回收胚胎检查胚胎移植

1.1 发情后生殖器官的孕向发育 家畜在发情后生殖器官会发生一系列变化，如：卵巢中功能性黄体的形成，孕酮的分泌和维持，子宫内膜组织的增生和分泌机能的增强，以及其他生理生化的特异现象。这些变化都为胚胎的生存和发育创造了适宜的条件，为妊娠作准备。 配种受孕后的动物其生殖系统朝着妊娠的方向继续发生变化以适应胚胎发育的需要，如黄体的持续存在以及孕酮的分泌和维持，子宫内膜的继续发育。而未受孕的动物其生殖系统会退回到发情前状态。 发情供体和受体发情周期的同期化程度前后不超过一天，否则移植成功率就会降低，甚至移植失败 因此发情后或交配刺激后雌性动物生殖器官的孕向变化是进行胚胎移植的主要生理学基础。 1.2 早期胚胎的游离状态 胚胎在发育的早期有相当一段时间是游离存在于子宫内的，和子宫黏膜没有建立紧密联系，其发育主要靠自身贮存的养分。这样，早期的胚胎容易从生殖道中取出，而且在离体情况下，可短期培养，易存活。 早期胚胎处于游离状态是能够进行胚胎移植技术的基础 1.3 子宫对早期胚胎的免疫耐受性 1.4 胚胎遗传物质的稳定性 在同一物种之内进行胚胎移植不会产生排斥现象;同时，受体对胚胎不产生遗传上的影响，不会改变新个体的遗传特性，也不会减弱起优良性状在出生后的表现程度。

胚胎移植技术的现状与展望

胚胎移植技术的现状与展望摘要：统计与分析了1991-2000年国际胚胎移植状况，结果表明胚胎移植已成为畜牧产业中最活跃的领域之一。胚移比例最大的依然是牛，其他种类的动物胚胎移植，如：绵羊、山羊、猪、马、鹿、美洲驼、羚羊等，也十分活跃。牛的胚胎移植，有几个重要指标分析结果如下：(1)供体牛的品种分布基本相同，肉牛与奶牛所占比例接近，但不同国家之间差别很大；(2)每头供体牛所得可用胚胎数在5-6枚之间；(3)鲜胚移植与冻胚移植的比例基本持平，但近年来冻胚移植的比例稍大于鲜胚移植；(4)通过IVF体外方式生产胚胎数目有所增长，目前每年大约在3-4万枚；(5)妊娠率：鲜胚移植妊娠率在60%以上，冻胚移植妊娠率在50%以上，IVF体外方式生产胚胎妊娠率在40%左右；(6)胚胎移植技术的发展状况在全世界分布不均衡，北美和欧洲胚移技术最成熟；(7)胚胎贸易有所增长。最后，对该技术存在的问题与发展前景提出了探讨和展望。 关键词：胚胎移植；牛；现状；展望 胚胎移植技术是继20世纪六七十年代人工授精之后发展起来的生物技术，是胚胎工程的重要组成技术。胚胎移植最早是1980年在兔子上实验成功的,但直到1977年才开始应用于生产,至今发达国家已经进入商业化应用阶段。在商业化应用上，牛的胚胎移植技术最成熟、占得比例最大。它是将一头良种母畜配种后形成的早期胚胎取出，移植到另一头或几头同种的、生理状态相同的母畜生殖器官的相应部位，使之继续发育成新的个体，也有入人通俗地称之为“借腹怀胎”。在一个繁殖季节里产生比自然状态下多几倍甚至十几倍的优秀后代，极大的提高了优良母畜的利用率和繁殖率。因此，胚胎移植技术在畜牧业生产中发挥着巨大的作用。 1.胚胎移植的历史回顾 1890年Heape在英国剑桥大学首次报道获得兔子胚胎移植成功[1]。20世纪30年代后开始大量研究，1951年willett首次成功地进行了牛的胚胎移植。1974年第一头胚胎移植的何斯坦奶牛在美国出生。1976年，一些研究小组报道了采用导管高效采集胚胎的非手术方法，随后胚胎移植在奶牛中的应用得到飞速发展。由于牛经济价值高，产仔数量少，用胚胎移植技术进行纯种扩群繁殖的效果好，且供受体牛均可反复使用，因此牛的胚胎移植技术已较多应用于实际生产中[2]。我国对牛胚胎移植研究起步较晚，1978牛手术法胚胎移植犊牛降生，1980年非手术法移植成功，1982年冷冻胚胎移植成功[3]。本世纪韧，我国先后开展了“万枚高产奶牛胚胎移植富民工程”项目，“奶业重大关键技术研究与产业化技术集成示范”项目，使我国的胚胎移植技术得以较快发展与推广，并逐步向产业化阶段迈进[4]。根据IETS(国际胚胎移植协会)的统计，1991年全世界移植牛胚胎总数为240 730枚，到2000年全世界移植牛胚胎总数达528 540枚。从1991-2000年，国际胚胎移植总数增长120％。胚胎移植已经发展成为畜牧业中最活跃的领域之一[5]。 2.1991—2000年世界胚胎移植，移植的牛的胚胎总数的统计与分析 1991年全世界移植牛胚胎总数为240730枚，1995年牛胚移总数首次超过40万枚，2000年创造50多万枚的新记录。以ITES提供的胚移妊娠率为参考(按平均60％计)。 全世界在该年有30多万头胚移牛产生。而且IETS的统计数据还不能包括世界上所有的

小鼠胚胎移植技术方法比较_管彤

第18卷　第1期2001年3月实验动物科学与管理 LABORATORY ANIMAL SCIENCE AND ADMINSTRATION Vol .18　No .1Mar .2001 小鼠胚胎移植技术方法比较 管　彤,王凤山,王　静,王晓军,于国德,杨梦礼 (天津市劳动卫生职业病研究所,天津　300204) 摘要:以近交系小鼠C 57BL 6J 、BDF 1小鼠作为供体胚小鼠,封闭群昆明种小鼠作为代母,对实验小鼠胚胎移植的三种方法,即:对小鼠受精卵(或2个细胞期胚)经由代母输卵管口移植、经由代母输卵管壁移植及对小鼠进行子宫移植(8细胞期胚)的方法了进行实验研究,并对各方法适于使用的动物对象、实验要求、产仔率、优势与不足等做了进一步的探讨,为今后的实验动物与动物实验提供参考依据。关键词:近交系小鼠;输卵管口(壁);移植;子宫移植 中图分类号:S865.13　文献标识码:A 文章编号:1006-6179(2001)01-0029-03 收稿日期:2000-07-07 第一作者简介:管彤(1968-),女,助理研究员,主要从事野生小鼠资源开发及实验小鼠胚胎毒理学研究。 自五十年代以来人类建立了受精卵和早期胚胎的采集技术之后,很快就完成了早期胚向代母体内 输卵管及子宫移植的胚胎移植技术的开发和研究[1] 。小鼠的胚胎移植技术对于实验动物学研究及生命科学研究具有重要价值。人类由小鼠进行发育生物学研究,包括胚胎的发生、发育、突变基因的研究、转基因动物的研究、基因打靶技术及小鼠胚胎冷冻种子库技术等涉及胚胎体外操作的各种研究,均需要进行胚胎移植入代母体内来完成。按照胚胎发 生的阶段不同,移植部位也不同[2] 。1～2个细胞期胚胎进行输卵管口移植,8细胞期至桑椹期胚进行 子宫移植。1992年,日本学者Nakagata [3] 又报道了经由输卵管壁进行输卵管移植的技术,以解决移植中一些代母品系输卵管口较小、较短的问题。 本文主要是将此三种移植方法引入,使之在本实验室成为常规后,将其应用于实验小鼠并进行了方法上的比较,重点比较了方法上的难易程度、产仔率、方法选择的前提因素。 1　材料与方法 1.1　实验动物 实验动物作为参比对照的成年近交系C 57BL 6J 小鼠、B DF 1小鼠(♀C 57BL 6J ×♂DBA 2)和作为代母的昆明种封闭群小鼠。 1.2　试剂 PMSG (pregnant mare serum gonadotropin )、HC G (human chorionic gonadotropin )、胚胎移植用Injection Medium 培养液、M 2培养基等。1.3　假孕代母的准备 1.3.1　昆明种雄性小鼠的结扎 为输卵管移植及子宫移植用代母(昆明种封闭群小鼠)交配用的雄性昆明种小鼠进行输精管结扎手术,以便制备假孕代母。进行输精管结扎手术的雄性昆明种小鼠应提前三周施行手术,术后备用。1.3.2　制备假孕代母 胚胎移植前一日(子宫移植,前三日)将已施行输精管结扎手术术后三周的昆明种雄性小鼠以1∶2与其雌性小鼠进行同笼交配,次日检查阴道栓有无,以阴道栓形成者作为移植用代母。1.4　卵的采集 1.4.1　超排卵 [4] 取出生后8～10周的C 57BL 6J 及B DF 1雌性小鼠进行PMSG 处理(腹腔注射,5IU 只),48h 后进行HC G 超排卵处理,方法、剂量相同,HC G 处理14～17h 后可进行受精卵的采集(子宫移植,为HC G 处理后第三日)。 1.4.2　交配 取已注射PMS 、HCG 后的C 57BL 6J 、B DF 1雌性小鼠与其相应的C 57B L 6J 、BDF 1雌性小鼠进行同笼

IVF-in vitro fertilization-体外受精联合胚胎移植技术,又称试管婴儿

IVF-in vitro fertilization-体外受精联合胚胎移植技术，又称试管婴儿 IVF-in vitro fertilization-体外受精联合胚胎移植技术，又称试管婴儿，是指分别将卵子与精子取出后，置于试管内使其受精，再将胚胎移植回母体子宫内发育成胎儿。 学术术语来源--- 新鲜胚胎与冷冻胚胎移植在体外受精周期中疗效比较的Meta分析 文章亮点： 1 对于胚胎移植的方法，临床上一直存在争议，诸多研究以新鲜胚胎移植和冷冻胚胎移植的回顾性分析为主，缺乏两种方法对比的循证医学证据。 2 现有关于新鲜胚胎移植与冷冻胚胎移植在IVF周期中疗效的Meta分析，纳入研究文献方法学质量不高，或此类分析较少。此次Meta分析研究，全部纳入国外随机对照实验，方法学质量采用改良Jadad评分标准，全为高质量研究文献。 3 文章特点在于采用Meta分析比较新鲜胚胎移植与冷冻胚胎移植在IVF周期的临床疗效差异，发现新鲜胚胎移植与冷冻胚胎移植在流产率方面无明显差异，但冷冻胚胎移植在持续妊娠率及临床妊娠率方面较优。 关键词： 器官移植|器官移植循证医学|新鲜胚胎移植|冷冻胚胎移植|体外受精-胚胎移植|临床妊娠率|持续妊娠率|流产率|Meta分析 主题词： 胚胎移植；受精，体外；妊娠率；循证医学 摘要 背景：胚胎移植的方式主要包括新鲜胚胎移植和冷冻胚胎移植，但两种方法各有优缺点，哪种方法更有利于患者的受孕目前仍存在较大争议。 目的：系统评价新鲜胚胎移植与冷冻胚胎移植在体外受精-胚胎移植(IVF)周期中的临床疗效。 方法：计算机检索Medline、Cochrane Library、Ovid、EMBASE、中国生物医学、中国期刊全文和万方数据库，以及手工检索国内相关妇产科杂志。检索新鲜胚胎移植与冷冻胚胎移植在IVF周期中的疗效对比的随机对照研究文献，评价指标包括临床妊娠率、持续妊娠率、流产率等。由2名评价者按照纳入与排除标准选择试验，提取资料和评价质量，并采用RevMan 5.2软件进行Meta分析。 结果与结论：共纳入随机对照研究3篇，包括633例患者。Meta分析结果显示：冷冻胚胎组在持续妊娠率方面，优于于新鲜胚胎组[OR=0.60，95%CI(0.44，0.84)，P=0.003]；在临床妊娠率方面，冷冻胚胎组优于新鲜胚胎组[OR=0.60，95%CI(0.44，0.83)，P=0.002]；在流产率方面，2组比较差异无显著性意义[OR=1.23，95%CI(0.60，2.49)，P=0.57]。提示在IVF周期中，冷冻胚胎移植在持续妊娠率及临床妊娠率方面优于新鲜胚胎移植。但受纳入研究样本量及方法学质量限制，尚需开展更多大样本、高质量随机对照试验来增加证据的论证强度。 中国组织工程研究杂志出版内容重点：肾移植；肝移植；移植；心脏移植；组织移植；皮肤移植；皮瓣移植；血管移植；器官移植；组织工程