临床病理考试

. 1、简单设计一个免疫组织化学标记的方案来研究一个课题（一抗和二抗的名称和来源，一抗的定位预测；实验方案，生物学意义和临床意义，实验设计（每个对照组的意义）。

结果判断一抗：鼠抗人VEGF单克隆抗体；二抗：羊抗小鼠生物素标记抗体；一抗的定位预测：表达在肺组织的细胞浆中；实验方案：选择非小细胞肺癌组织、癌旁组织、正常肺组织三组石蜡标本切片。

通过抗体标记VEGF，经过免疫组化染色后判定相关蛋白表达与肺细胞癌的临床病理特征的关系。

生物学意义：VEGF是肿瘤血管生成和侵袭转移过程中的关键因素，可以通过其相关的特异性受体选择性作用于内皮细胞发挥作用。

临床意义：通过了解非小细胞肺癌VEGF的表达，可能预测非小细胞肺癌的转移、预后，从而指导抗肿瘤治疗。

实验设计：通过设立癌旁组织和正常肺组织的对照组，对比所研究蛋白在不同组织中表达的差异，进而得出实验结论。

结果判断：免疫组化染色后，利用电脑的病理图文报告分析系统进行结果判读，对染色结果定量分析。

掌握以下原则：阳性细胞定位是否明确，是胞膜、胞浆还是胞核阳性间质清晰，无背景着色；阳性细胞要在5％以上，才能定为阳性；参考评价：＜5% -, 5％－25％＋，25％－50％＋＋，＞50％＋＋＋。

2、免疫组化的应用范围及盲点范围：提高病理诊断准确性；对疾病的预后和治疗的意义；癌基因蛋白的应用；对肿瘤增生程度的评价；微小病灶的发现；在肿瘤分期上的意义；指导肿瘤的治疗；免疫性疾病的辅助诊断；病原微生物的检测；盲点：由于抗体稀释度、多克隆抗体特异性问题、试剂盒选择、操作中时间、温度、染色过程等因素使其在结果判断上存在“假阳性”和“假阴性”；影响因素很多，使结果判断的标准化问题尚难统一；存在抗原抗体交叉反应、抗原联合表达等问题3、何谓“套餐式”免疫标记？举两例说明每一种组织的标记物必须用2种以上的抗体，除了能够阳性正面证实的抗体，还要有能阴性反面证实的抗体。

例如：a.Keratin,Vimentin,LCA,S100四种抗体组合。

Keratin角蛋白，存在于上皮细胞，Keratin 阳性且其它阴性的结果可以筛选出可疑癌或生殖细胞瘤；Vimentin波纹蛋白，存在于间质细，LCA存在于血细胞，Vimentin和LCA阳性的结果可以筛选出可疑淋巴瘤；S-100 存在于神经内分泌细胞，Vimentin和S100阳性的结果可以筛选出可疑神经内分泌肿瘤；Vimentin阳性的结果可以筛选出可疑肉瘤。

b.胃肠道间质瘤GIST检测CD117,DOG-1,CD34；鉴别平滑肌瘤及神经鞘瘤。

4、何谓靶向治疗？举两例说明在细胞分子水平，针对已经明确的致癌位点（该位点可以是肿瘤细胞内的一个蛋白质分子，也可以是一个基因片段），来设计相应的治疗药物，药物进入体内后会特异地作用于致癌位点，达到治疗肿瘤的目的。

举例：曲妥珠单抗用于治疗Her-2 阳性乳腺癌吉非替尼治疗EGFR阳性肺非小细胞肺癌. 5、靶向治疗应用现状靶向治疗是近年来肿瘤治疗领域中的热点，已经在肺癌、胃肠间质瘤、淋巴瘤、乳腺癌和结直肠癌等治疗中显示了一定的疗效。

肺癌：部分非小细胞肺癌EGFR过表达/突变，采用EGFR抑制剂进行靶向治疗，药物有吉非替尼、西妥昔单抗等；胃肠间质瘤：发病机制关键在于C-kit基因功能获得性突变以及由此导致的Kit蛋白异常活化，治疗药物有伊马替尼、苏尼替尼。

乳腺癌：Her-2过表达，治疗药物赫赛汀，是靶向Her-2胞外区的人单克隆抗体。

存在的问题：一些癌症的分子发病机制尚不完全清楚，使得靶向药物的应用范围受到限制。

存在不良反应。

临床疗效存在个体差异性。

靶向治疗药物耐药。

6、分子病理学临床应用的进展，举例说明肺癌的分子病理学胃肠道间质瘤(GIST) 的分子病理学乳腺癌的分子病理学：在我国，乳腺癌已经成为女性最常见的恶性肿瘤之一，居女性恶性肿瘤死亡率的首位。

研究发现，有20-30%的乳腺癌患者，临床表现为乳腺癌显著扩散，化疗效果差且易早期复发，预后较差，原因是这些患者均为Her-2阳性，且Her-2过度表达。

Her-2/neu基因是一种原癌基因，参与调控细胞生长、增殖及分化，是公认的重要肿瘤标记之一。

30%的浸润性乳腺癌和70%的导管原位癌存在Her-2基因过表达。

Her-2阳性同时预示着肿瘤对内分泌治疗和常规CMF方案相对耐药。

经FDA批准的乳腺癌细胞Her-2的检测仅有两种，a.免疫组织化学方法测定C-erbB-2蛋白表达；b.荧光原位杂交法（FISH法）：定量检测Her-2基因扩增，是Her-2诊断金标准，注射用曲妥珠单抗（赫赛汀）是用于治疗Her-2 FISH阳性乳腺癌患者的分子靶向药物结直肠癌的分子病理学恶性淋巴瘤的分子病理学7、免疫病理、超敏反应、肿瘤免疫逃逸的概念免疫病理学：研究免疫系统功能异常和免疫应答所引起的病理现象的科学，设计范围较广，包括自身免疫病、超敏反应、免疫缺陷、免疫增生等。

超敏反应：又称变态反应，是指机体受同一抗原物质再次刺激后产生的一种异常的或病理性的免疫应答。

肿瘤免疫逃逸：机体免疫系统具有免疫监视功能，当体内出现恶变细胞时，免疫系统能够识别并通过免疫机制特异地清除这些“非己”细胞，抵御肿瘤的发生发展。

然而，恶变细胞在某些情况下能通过多种机制逃避机体的免疫监视，在体内迅速增殖，形成肿瘤。

8、自身免疫病有哪些共同特征，为什么体内会产生自身抗原，发生组织损害的可能机制共同特征：病程反复发作、慢性迁延；血清Ig升高，自身抗体升高、与自身成分起反应的致敏淋巴细胞；重叠：一个患者同时患两种或更多的属同一类的自身免疫病；治疗：皮质激素或其他免疫抑制剂能缓解；与遗传、性别和年龄有关。

自身抗体产生：自身抗原物理、化学、生物等性质的改变；外来交叉抗原激活；隐蔽抗原的释放；表位扩展：自身反应性T细胞不断识别自身抗原的隐蔽决定簇。

发病机制：抗原因素：自身Ag性质的改变；交叉抗原的作用；隐蔽Ag的释放；表位扩展。

. 机体免疫功能的异常：1. MHC-Ⅱ类Ag表达↑；2.免疫调节异常：包括调节性T细胞亚群异常、协同刺激分子异常表达、多克隆激活作用、凋亡途径异常等；遗传因素；其他因素年龄性别神经内分泌等其他因素。

9、免疫调节异常的机制有哪些，调节性T细胞的特点、功能及其与疾病的关系机制：自身抗体对细胞的溶解作用：Ⅱ型过敏反应，补体依赖的细胞毒作用、ADCC（抗体依赖的细胞介导的细胞毒性作用）；免疫复合物对组织的损伤作用：Ⅲ型过敏反应；致敏T细胞对组织的损伤作用：Ⅳ型过敏反应。

调节T细胞：调节性T细胞是一具有免疫调节（或免疫抑制）作用的细胞群，能够主动抑制自身反应性T细胞的活化，维持自身免疫耐受，防止自身免疫病的发生。

调节性T淋巴细胞/致病性T淋巴细胞平衡是机体调节免疫反应的重要模式之一，其紊乱可能是很多自身免疫性疾病的发病机制，并与肿瘤等多种疾病的发生发展密切相关。

心肌病：由不同原因（遗传性病因多见）引起的心肌病变导致心肌机械或心电功能障碍，常表现为心室肥厚或扩张，可局限于心脏本身，亦可为系统性疾病的部分表现，最终可导致心源性死亡或进行性心力衰竭。

AKAP：A激酶锚定蛋白是一组结构各异但功能相关的蛋白质，因其具有与PKA结合的特性。

目前研究发现AKAP除了作为A激酶锚定分子外，还是会聚和传播高度有序的细胞信号的一个平台，在心肌细胞的收缩、能量代谢、离子通道的启闭、基因表达等方面均扮演重要角色。

Z线：每条肌原纤维表面有明暗相间的带交替排列，分别称为明带和暗带，明带中央有一根深色的线称为Z线，两条相邻Z线之间的一段肌原纤维称为肌节。

横纹肌：肌肉中的一种，包括骨骼肌和心肌。

1骨骼肌：每个肌原纤维的明带暗带都与邻近肌原纤维的明带暗带准确地排在同一水平面上，因此整个肌细胞显示出横纹，也称随意肌。

2．心肌为心脏所特有的肌肉组织，由心肌细胞组成。

肌原纤维的结构与骨骼肌的相似，但横纹不明显。

其显著不同点在于心肌细胞有闰盘，闰盘对兴奋传导有重要作用。

心肌除有收缩性、兴奋性和传导性外，还有自动的节律性。

肌小节的结构：在光学显微镜下，我们可以看到肌原纤维沿长轴呈现有规则的明暗交替的带状区域，分别称之为明带和暗带。

暗带的中央有相对较亮的区域称之H带。

H带的中央可见一条横向暗线，叫做“M线”。

明带的中央也有一条横向的暗线，称为“Z线（Z line）”，Z线为中间纤维。

两条相邻的Z线之间包含着中间的暗带和两侧各1/2的明带，其长度在静息时为2.0~2.5μm，这样的一段结构叫做“肌小节”，它是肌纤维收缩的基本功能单位。

心肌细胞的钙信号：肌膜上动作电位沿T管膜传至肌细胞内部，激活T管膜和肌膜上的L钙通道，少量钙离子内流，与JSR膜中钙结合位点结合，再引起JSR膜中钙释放通道开放，结果使钙离子水平上升百倍。

钙触发心肌收缩，然后激活JSR膜上钙泵，回收钙离子，心肌舒张。

心肌病的主要分类和各自的主要特征：. 扩张性心肌病：左心室(多数)或右心室有明显扩大，且均伴有不同程度的心肌肥厚，心室收缩功能减退，以心脏扩大、心力衰竭、心律失常、栓塞为基本特征。

常伴有心律失常，病死率较高。

肥厚性心肌病：是一种遗传性心肌病，以心室非对称性肥厚为解剖特点，是青少年运动猝死最主要原因之一。

根据左心室流出道有无梗阻可分为梗阻性和非梗阻性肥厚型心肌病。

限制性心肌病：以心室壁僵硬增加、舒张功能降低、充盈受限而产生临床右心衰症状的一类心肌病。

患者心房明显扩张，但早期左心室不扩张，收缩功能多正常，室壁不增厚或轻度增厚。

目前心脏病治疗的基础和临床研究的方向心脏病基因检测共识：13 种遗传性心脏病（包括长QT 综合征、Brugada 综合征、短QT 综合征、心房颤动、肥厚性心肌病、致心律失常性心肌病、扩张性心肌病等）。

心肌再生与缺血性心肌病的治疗干细胞治疗心脏病MIRNA、LNCRNA在心脏病的作用。

研究方向：基因监测，治疗，细胞信号通路研究10、基因病理检测特定疾病所包含的某种基因，简单的如单基因突变，也包括多基因、环境、不稳定DNA和表观遗传所引起的复杂的基因遗传模式的改变。

11、疾病环境和基因的分子基础酶的改变：苯丙氨酸羟化酶，剪切点突变引起苯丙酮尿症酶抑制剂的改变：α1抗胰蛋白酶，错义突变引起肺气肿和肝脏疾病受体的改变：低密度脂蛋白受体，缺失或点突变引起家族性高胆固醇转运或载体蛋白的改变：剪切点突变引起β珠蛋白生成障碍性贫血，缺失或点突变引起囊性纤维化凝血因子的改变：缺失、插入和无义突变引起血友病A 结构蛋白的改变：原纤维带白基因突变引起马方综合征生长调节：Rb基因引起视网膜母细胞瘤12、分子病理的应用，举例说明诊断：从小分子水平筛查疾病；阐明病因；更全面的理解疾病治疗：靶向治疗预后：特定分子类型所代表的疾病结果13、GWAS全基因组关联分析，是指在人类全基因组范围内找出存在的序列变异，即单核苷酸多态性（SNP），从中筛选出与疾病相关的SNPs。