头花龙胆组织培养繁殖技术
花卉组织培养技术资料
花卉组织培养技术录入时间:2009-5-13 16:39:54 来源：青岛海博生物1、应用价值花卉组织培养，就是分离花卉植物体的一部分，如茎类、茎段、叶、花、幼胚等，在无菌试管，并配合一定的营养、激素、温度、光照等条件，使其产生完整植株。
由于其条件可以严格控制，生长迅速，1-2个月即为一个周期，因此在花卉植物的生产上有重要应用价值。
快速大量繁殖方面：对一些难繁殖的名贵品种花卉及一些短期内大量急需生产的花卉，应用很广。
兰花、菊花、唐菖蒲等花卉利用腋芽增生，短期得到大量植株。
非洲紫罗兰可通过叶片，水仙可通地鳞片，诱导产生不定芽，来达到大量繁殖的目的。
花卉育种方面：百合、鸢尾等许多花卉可以进行远缘杂交，由于生理代谢等方面的原因，常使杂种胚早期败育，因而得不到杂种植物。
而在试管中进行胚培养，可使其顺利生长，得到远缘杂种。
此外还可采用愈伤组织诱变、花粉培养等多种方法，来进行花卉育种。
培育无病毒苗方面：菊花、唐菖蒲、水仙、郁金香、大丽花等一大批花卉靠无性繁殖法繁殖，病毒逐代传递积累，危害日趋严重。
而分离花卉植物0.1-0.5毫米大小的生长点，培养得到的基本上是无病毒苗。
2、花卉组织培养对实验室及设备的要求花卉组织培养是在人工控制的条件下培养花卉。
实验室方面①化学实验室：主要承担配制培养基的任务。
要求具有各种化学药品试剂、各种玻璃器皿、称量天平等。
②洗涤室：主要进行玻璃器皿的洗涤，要求有自来水装置，同时有烘箱，以便洗后烘干。
③灭菌室：主要进行培养基和用具的消毒。
要有高压灭菌锅，具有水源和电源。
④接种室：是花卉材料分离、消毒接种和转移的场所。
要求密闭、清洁、整齐、装有紫外灯，能随时灭菌。
有的也可用接种箱或超净工作台代替。
⑤培养室：是花卉材料培养生长的地方。
要求清洁，保温好，室温均匀一致，并有绝热、防火性能。
设备方面①天平：供配制培养基时称量药品和激素用。
大量元素用普通天平；微量元素和激素用分析天平。
②酸度计：测定培养基的pH用。
花卉组培苗生产技术
花卉组培苗生产技术规程2 术语和定义下列术语和定义适用于本标准。
2.1 花卉凡是具有一定观花、观叶、观芽、观茎、观果和观根等观赏价值，并经过技术和艺术进行栽培和养护的植物。
2.2 植物组织培养是指在无菌条件下，将离体的植物器官（如根、茎、叶、花、果实、种子等）、组织（如形成层、花药组织、胚乳、皮层等）、细胞（体细胞和生殖细胞）以及原生质体，培养在人工配制的培养基上，给予适当的培养条件，使它们得以继续生长、分化、形成完整植株的过程。
2.3 花卉组培苗以植物组织培养方法进行繁殖的花卉苗木称花卉组培苗。
2.4 植物生长物质指一些调节植物生长发育的物质。
包括植物激素和植物生长调节剂。
2.5 外植体用于组织培养的组织、器官、细胞及原生质体称为外植体。
2.6 培养材料生长在培养容器内培养基上的植物材料统称培养材料。
2.7 培养基在植物组织培养过程中，由人工配制的提供培养材料生长所必需的营养元素和某些生理活性物质的基质。
2.8 接种将外植体经消毒灭菌后，在无菌条件下放入培养容器内培养基上的过程。
2.9 增殖指外植体或继代组培苗产生出新的具有特定结构和功能的组织或器官的现象。
2.10 继代是指培养过程中将培养材料周期性地分株、分割、剪截等转接于新鲜培养基上进行增殖的过程。
3 生产设备（施）及化学试剂3.1生产设备（施）3.1.1 建筑设施设计组培实验室或小型组培工厂必须选择环境优静、无污染的地方并保证其生产过程中不对周围环境造成污染。
实验室或小型组培工厂各部分的配置要合理，做到工作方便、使用安全、节省能源。
房屋设计包括准备室、接种室、培养室、洗涤室、实验室、贮存室、温室，另外还可配置办公室、更衣室等。
3.1.2 生产设备3.1.2.1 洗涤设备工厂化生产可选用自动或半自动洗瓶机，实验室或小型车间选用普通洗涤用具，如洗涤室水槽、塑料盆、塑料桶、塑料箱等，人工洗涤。
另外配置干燥箱、晾瓶架等。
3.1.2.2 灭菌设备高压蒸汽灭菌锅（大型卧式、中型立式、小型手提式））、器械消毒器、紫外灯、烘干箱、微滤孔器等。
龙胆草栽培管理技术
龙胆草栽培管理技术（一）选地整地宜选择比较湿润的地域，地势平坦，阳光充足，土壤以含有丰富腐殖质的砂质土壤为宜。
贫瘠、粘重的土壤不宜栽培。
播种或移栽前进行整地，翻地深度20厘米左右，结合整地施足底肥，然后整平耙细，作成60-65厘米大垅或1-1.2米宽的畦床。
（二）种植方法1、繁殖方式龙胆有性繁殖与无性繁殖均可。
有性繁殖要求技术条件比较严格，种子播后土壤含水量不低于30%，地表空气湿度60-70%，温度25-28℃为适宜，约7天开始萌发，土壤PH6.3-7.8时种子萌发率较高。
无性繁殖可采用分根繁殖、地上茎扦插繁殖。
分根繁殖于秋季挖出地下部分，将根茎切成3块，连同须根备作种栽用；地上茎扦插可取多年生植株芽分化以前的枝条，每3节为扦插材料，下端节下斜切，并切除端节的两个叶片，立即浸入复合激素溶液GA、BAP、NAA各1ppm等量混合液2-3厘米，经48小时后，备作扦插材料用。
坚龙胆也可进行种子或分株繁殖。
种子繁殖发芽最适温度为20-25℃，低于10℃也可萌发，先高温后低温发芽率高，先低温后高温发芽率低，用赤霉素300ppm或24-D，5ppm浸种可提高发芽率。
分株繁殖多在秋季将地下部分挖出，将植株旁所生的子株作为种根。
龙胆和坚龙胆均为光萌发种子，光对种子萌发有促进作用。
关龙胆的种子光感度为1000-2000Lux48-72小时。
2、栽种方法（1）龙胆栽种方法：种子育苗：于春季播种，播前将种子经水洗后，混入适量细砂，于整平的畦床上撒播，播种量每平米1-1.2克，播后覆草保持温度、湿度，温度勿使超过30℃。
生长2年后于春季或秋季进行移栽，在备好的大垅上开沟，沟深视栽子大小而定，株距15厘米左右，覆土深度3-4厘米。
分根繁殖：将繁殖材料于秋季栽于已做好的大垅上，株距10厘米左右，覆土深度5厘米左右，栽后灌足水，以保墒情。
扦插繁殖：将备用的扦插材料扦入整好的畦床，株行距为10×10厘米，扦插深度为2-3厘米，随即灌水，土温18-20℃，约3周可生根。
龙胆的组织培养繁殖技术
培养 中起 着 决 定 性 作 用 。只 有 细 胞 分 裂 素 与 生 长 素 的合 理 配 制 才 可 能 有 较 高 的诱 导频 率 。 文章 系统 总 结 了龙 胆
龙 胆属 ， 系多 年 生 草木 。株 高 ３ ～ ７ ｃ 叶对 生 无 Ｏ ０ ｍ，
柄 ， 萼钟 状 ， 冠 紫色 ， 状 。种 子 条形 ， 花 花 钟 褐色 ， 边 缘 有翅 。根和 根茎 供药 用 ， 主要 含 龙胆苦 甙 ， 具有抗
３ ２ １ 消毒 ． ．
外 植体 用 ７ ～７ 酒精 浸泡 半 分钟 ， 即用 ０ ５ 立 无 菌 蒸 馏 水 冲洗 ２次 ， 用 ０ １ 升 汞 消 毒 １ ～ 后 ． ０
的组 织 培 养 及 繁 殖 技 术 ， 快速 大 量 生产 苗 木 ， 卉 具 有 普 遍 的 指 导 意 义 和 借 鉴作 用 。 对 花
关键词 ： 龙胆 ； ； 材料 组织培养 ； 培养茎 ； 导 诱 中图分 类号 ：７３ １ ２ ￥ ２ ． ３ 文献标 识 码 ： Ｂ
采 自于 龙胆野 生移 栽苗 的冬芽或 地上 部和 条叶
将 灭菌 处理过 的芽 接种到 设计好 的诱导 培养 基 上， ３ 每 ｄ观 察记 录一 次 ， 据 生长 情 况决 定 是 否转 根
到新 的培养 基上 ， 是在 原来 的培养基 上继 续培养 。 还 ３ ２ ４ 生根 培养 ．． 将 亟待培 养后 的丛 生芽分 成单株 接种 到设计好 的培养基 上 ， ３ 每 ｄ观察并 记 录生根情 况 。
文 章 编 号 ： ０ ６ ９ ３（ ０ ２ ０ － ０ ８ —０ １ ０ —６ ９ ２ １ ） ３ ０ ９ ２
头花龙胆组织培养繁殖技术
ｍｅ ｄ ｉ ｕ ｍ ｗ ａ ｓ ｓ ｕ ｉ ｔ ａ ｂ ｌ ｅ ｆ ｏ ｒ ｉ ｎ ｄ ｕ ｃ ｔ ｉ ｏ ｎ ， ｔ ｈ ｅ ｉ ｎ ｄ ｕ ｃ ｔ ｉ ｏ ｎ ｒ ａ ｔ ｅ ｗ ａ ｓ ９ ３ ． ３ ％； ＭＳ ＋ Ｎ Ａ Ａ Ｏ ． １ ｍｇ ／ Ｌ ＋ ６ Ｂ Ａ ０ ． ３ ｍｇ ／ Ｌ ｃ ｕ ｌ ｔ ｕ ｒ ｅ ｂ ａ ｓ ｅ ｗ ａ ｓ
头花龙胆 （ Ｇ ｅ ｎ ｔ ｉ ａ ｎ ａ ｃ ｅ ｐ ｈ ａ ｌ ａ ｎ ｔ ｈ ａ ） 分布于云南 、 四川 、 贵州 、 广 西等地 ， 生 于海 拔 １ ８ ０ ０— ４ ４ ５ ０ ｍ 的 山坡 草地 、 山坡
清洗 ３ — ４ 次， 每 次３ ｍ ｉ ｎ ， 再用 ０ ． １ ５ ％的升 汞 消毒 ８ —１ ０ ｍ ｉ ｎ ，
ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
摘
要： 为获得优 良健壮的组培苗， 建立头花龙胆的无性快繁体 系， 以六盘水采头花龙胆 茎段 为外植体 ， 进行
愈伤组织的诱导与分化 、 芽的增殖与继代、 根的分化培养。结果表明： Ｍ Ｓ ＋ Ｎ Ａ Ａ ０ ． ２ ｍ ｇ ／ Ｌ ＋ ６ Ｂ Ａ ０ ． ４ ｍ ｇ ／ Ｌ 培养基适
宜诱 导 ， 诱导率为９ ３ ． ３ ％； Ｍ Ｓ ＋ Ｎ Ａ Ａ ０ ． １ ｍ ｇ ， Ｌ ＋ ６ Ｂ Ａ ０ ． ３ ｍ ｇ ／ Ｌ培 养基 适 宜增 殖分 化 ， 增 殖 系数达 ｌ ０ ． ２ ； Ｍ Ｓ ＋ Ｎ Ａ Ａ ０ ． １ ｍ ｇ ／ Ｌ ＋ ６ Ｂ Ａ ０ ． １ ｍ ｇ ， Ｌ 培养基适宜生根 ， 接种 ３ ０ ｄ 即可生根 ， 生根率 １ ０ ０ ％， 同时也适 宜增殖。 关键词 ： 头花龙胆 ； 组织培养； 快速繁殖； 茎段
ｓ ｕ ｉ ｔ ａ ｂ ｌ ｅ ｏｒ ｆ ｐ ｒ ｏ ｌ ｉ ｆ ｅ ｒ ａ ｔ ｉ ｏ ｎ ａ ｎ ｄ ｄ ｉ ｆ ｆ ｅ ｒ ｅ ｎ ｔ ｉ ａ ｔ ｉ ｏ ｎ， ｐ ｒ ｏ ｌ ｉ ｆ ｅ ｒ ａ ｔ ｉ ｏ ｎ ｃ ｏ ｅ ｆ ｆ ｉ ｃ ｉ ｅ ｎ ｔ ｗａ ｓ １ ０ ． ２ ． ＭＳ ＋ＮＡＡ０ ． １ ｍｓ ／ Ｌ＋６ ＢＡ０ ． １ ｍｇ ／ Ｌ ｗａ ｓ ｔ ｈ ｅ ｓ ｕ ｉ ｔ ａ ｂ ｌ ｅ ｃ ｕ ｌ ｔ ｕ ｒ ｅ ｍｅ ｄ ｉ ｕ ｍ ｏｒ ｆ ｒ ｏ ｏ ｔ ｉ ｎ ｇ， ａ ｎ ｄ ｔ ｈ ｅ ｃ ｕ ｌ ｔ ｕ ｒ ｅ ｍｅ ｄ ｉ ｕ ｍ ｗａ ｓ ａ ｌ ｓ ｏ ｓ ｕ ｉ ｔ ａ ｂ ｌ ｅ ｏｒ ｆ ｐ ｒ ｏ ｌ ｉ ｆ ｅ ｒ ａ ｔ ｉ ｏ ｎ ． Ｋｅ ｙ ｗｏ ｒ ｄ ｓ ： Ｃ ． ｅ ｎ ｔ ｉ ａ ｎ ａ ｃ ｅ ｐｈ ａ ｎ ｔ ｈ ａ． ； Ｔｉ ｓ ｓ ｕ ｅ ｃ ｕ ｌ ｔ ｕ ｒ ｅ； Ｒａ ｐ ｉ ｄ ｐ ｒ ｏ ｐ ａ ｇ ａ ｔ ｉ ｏ ｎ； Ｓ ｔ ｅ ｍ ｓ ｅ ｇ ｍｅ ｎ ｔ
热带花卉组织培养
块
根
块根，是贮藏根的一种，但它与肉质直根的来源 不同，是由侧根或不定根的局部膨大而形成，因而 在一棵植株上，可以在多条侧根中或多条不定根上 形成多个块根，块根上无不定芽，芽着生在根与根 颈的交界处，分割时每一部分都必须带有根颈部分。 繁殖时应将整个块根挖回贮藏，第二年春季催芽再 分块根，也可采芽扦插繁殖。如甘薯、何首乌、大 丽花等。
北极圈
热带
南极圈
二、热带花卉原产地的七种类型
（一）热带雨林气候型 （终年高温多湿 ，常有阵
雨 ，昼夜温差小 ）
如马来半岛、非洲的刚果、马达加斯加东部、中美 洲亚马逊河盆地、夏威夷群岛等。
代表花卉
(二)热带草原气候型 （常年温暖、雨或旱季分明、降
雨集中，雨量较热带雨林少）
如亚洲中南半岛、印度西海岸、缅甸海岸、菲律宾、 非洲的苏丹、几内亚、刚果南部、北美洲的西印度群 岛、大洋洲的澳大利亚北部等地。 代表花卉
A
B
C
D
E
F F
病毒、真菌和细菌引起的热带花卉变色（A、B）、坏死（C）、腐烂 （D）、萎蔫（E）和畸形(F缀化)
勋章菊可采茎尖、嫩茎和花蕾为外植体
石斛兰可用茎尖、叶尖等为外植体
朱顶红可以茎盘、休眠鳞茎组织、花梗和子房为外植体
水仙花可以芽尖或用具有双鳞片的茎盘作外植体
长寿花以茎顶、叶、茎、花芽和花等作为外植体
块
根
块根，是贮藏根的一种，但它与肉质直根的来源 不同，是由侧根或不定根的局部膨大而形成，因而 在一棵植株上，可以在多条侧根中或多条不定根上 形成多个块根，块根上无不定芽，芽着生在根与根 颈的交界处，分割时每一部分都必须带有根颈部分。 繁殖时应将整个块根挖回贮藏，第二年春季催芽再 分块根，也可采芽扦插繁殖。如甘薯、何首乌、大 丽花等。
东北龙胆组织培养繁殖技术研究
东北龙胆组织培养繁殖技术研究李黎【摘要】以东北龙胆的茎尖、茎段作为外植体，对其组织培养繁殖技术进行研究，结果表明：诱导不定芽分化的最佳培养基是MS+6-BA2.0mg/L+ NAA0.1mg/L，分化率可达96.7%，最佳生根培养基为1/2MS+ IBA0.3 mg/L，生根率可达97.5%，组培苗最适合的移栽基质为珍珠岩，移栽成活率可达90.0%。
%The study of propagation techniques by tissue culture of stem tips and stem segements of Gentiana manshuica Kitagawa were used as explants. The results showed that the best medium of induction on adventitious bud was MS +6 -BA2.0mg/L +NAA0.1mg/L, and the ratio of differentiation was96.7%, the best medium of rooting was 1/2MS+ IBA0.3 mg/L, and the ratio of rooting was 97.5%. The best matrix of transplanting of the tissue culture seedling was the perlite, and the ratio of transplanted survival was 90.0%.【期刊名称】《国土与自然资源研究》【年(卷),期】2016(000)004【总页数】2页(P88-89)【关键词】东北龙胆;组织培养;激素;培养基【作者】李黎【作者单位】黑龙江省科学院自然与生态研究所湿地与生态保育国家地方联合工程实验室，哈尔滨150040【正文语种】中文【中图分类】S603.81.1 试验材料东北龙胆（Gentiana manshurica Kitag），为龙胆科多年生草本植物，以根及根茎入药［1，2］，植株高25-60cm，花蓝紫色，花期8-9月份［3］。
兰花组织培养技术
兰花组织培养技术摘要：在适宜的条件下，将兰花植株的外植体在无菌环境中应用人工培养基，通过外植体的采集与处理、培养基的制作、外植体的接种、继代增殖以及驯化移栽等操作技术，可在短期内获得大量幼小的无病毒植株，从而达到增殖扩繁的目的。
组织培养技术是经济有效快速繁殖优良品种的方法，也是产生脱毒苗的重要途径。
关键词：组织培养兰花外植体试管苗花属兰科多年生草本植物，中国兰花为兰科属中的地生兰。
其香味怡人，花色淡雅，品种丰富，素有“花中君子”之称。
具有很强的观赏价值和经济价值，深受人们的喜爱。
此外，其也是目前世界上栽培较广的切花材料之一，兰花的切花生产，需要大批量的种苗，要获得优质高产，兰花种苗必须具备种性一致，生长齐一，长势旺盛的特点。
在种苗生产上运用最广泛的是组培快繁和分株。
生产实践证明，运用组织培养快繁技术生产种苗，其长势旺盛，品种复壮，抗病性强，切花质量好，对加快优良品种的培育，挽救珍惜濒危种类等起到十分重要的作用。
兰花在植物分类学上属于单子叶植物中的一个科，为多年生草本植物，附生、地生或腐生。
兰花根呈圆柱状，属肉质组织，茎很短，高度约为2～3cm，兰叶大多叶边全缘，有的略有锯齿。
其花属于不整齐花范畴，总状花序。
兰属植物的果实为蒴果，呈三角或六角形，俗称“兰荪“。
一、无菌培养物的建立（一）培养容器的洗涤及培养基的制作1.培养容器的洗涤容器的洗涤是否干净直接影响组织培养的成败，为保证培养材料在瓶内生长健壮，在培养前期一定要对容器进行彻底的洗涤与灭菌。
以达到“瓶壁锃亮、水膜均匀，不挂水珠”为标准。
洗涤时用洗衣粉水洗刷，再用清水冲洗3～4次，干燥后备用。
2.培养基的制作培养基是植物组织培养的“血液”，血液的成分及其供应状况直接关系到外植体的生长于分化。
组培快繁中最常用的培养基主要是MS培养基。
母液要根据药剂的化学性质分别配置，一般配成大量元素、微量元素、铁盐、有机物、激素类母液。
其配置方法是先进行大量元素的配置，称量时应注意多余的药品不能回放在瓶中，应做其它处理。
金银花繁衍方式
4、生根培养：将2～3cm高的丛芽切成单株后转入生根培养基1/2MS++活性炭200上，20℃下培养25天后，生根率达%。
的种子裂口露白时，即可筛出种子进行条播。在畦面上按行距20厘米开横沟，深3～5厘米，播幅宽10厘米，将催芽籽均匀地撒入沟内，覆土压紧，盖草保温保湿，保持土壤湿润，每亩种子用量1～千克。10天左右出苗，齐苗后揭去盖草，加强苗床常规管理。当苗高15厘米时，摘去顶芽，促进加粗生长。当年秋季或翌年早春便可用于嫁接。也可将小苗直接植于园地，待来年径杆长成1cm以上，植株不用移栽，嫁接成活率90%。
开砧：在小斜口的木质部与皮部之间垂直向下切一刀，要求平直、光滑，长3—，稍带木质部。
削接穗：与上述的腹接接穗削法基本相同。不同之处是，穗段可选用1—2个芽，但不必削去下部的一个芽。
配合：与上述的腹接基本相同。
绑扎：先用剪好的塑料膜带将砧、穗固定，紧包2—3圈，再包砧木侧面伤口的下部和断面，要求封密包紧（见图二）
配合：将削好的接穗插入开好的砧木接口中，长削面向内，使砧穗形成层对准，如砧穗大小不一致，可对齐一边。
绑扎：先用宽1—的塑料带绑扎紧，再加上1—长方形的罩（单芽不加罩，用塑料带将接穗完全包裹），上下用塑料带扎紧（见图一）。
切接：砧木树液尚未流动或砧木较小时适用此法。多用于春天嫁接。
剪砧：在砧木离地面约5—6cm平直光滑处剪断，削平剪口，在断面平、扦插方法：扦插基质是泥炭土+珍珠岩（1：3），用75%甲基托布津1000倍溶液消毒，用扦插盘盛装扦插基质，将插条1/2～2/3斜插入孔内，压实按紧，随即浇1次水，置于全光照间歇喷雾下。半个月左右便可生根和萌发新芽。
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头花龙胆组织培养繁殖技术作者：郭美刘欣颖卢虹梁露孙爱群林文敏来源：《安徽农学通报》2017年第13期摘要：为获得优良健壮的组培苗，建立头花龙胆的无性快繁体系，以六盘水采头花龙胆茎段为外植体，进行愈伤组织的诱导与分化、芽的增殖与继代、根的分化培养。
结果表明：MS+NAA0.2mg/L+6BA0.4mg/L培养基适宜诱导，诱导率为93.3%；MS+NAA0.1mg/L+6BA0.3mg/L培养基适宜增殖分化，增殖系数达10.2；MS+NAA0.1mg/L+6BA0.1mg/L培养基适宜生根，接种30d即可生根，生根率100%，同时也适宜增殖。
关键词：头花龙胆；组织培养；快速繁殖；茎段中图分类号 Q946.5 文献标识码 A 文章编号 1007-7731（2017）13-0034-03Culture and Rapid Propagation of Tissue of Gentiana CephanthaGuo Mei et al.（Department of Biology Science，Liupanshui Normal University，Liupanshui 553004，China）Abstract：In order to obtain excellent robust plantlets of Gentiana cephantha，the asexual rapid propagation system of Gentiana cephantha was established. Stems as explants，induction and differentiation of callus，bud proliferation and subculture，differentiation of culture root were studied. The results showed that MS+NAA0.2mg/L+6BA0.4mg/L medium was suitable for induction，the induction rate was 93.3%；MS+NAA0.1mg/L+6BA0.3mg/L culture base was suitable for proliferation and differentiation，proliferation coefficient was 10.2.MS+NAA0.1mg/L+6BA0.1mg/L was the suitable culture medium for rooting，and the culture medium was also suitable for proliferation.Key words：Gentiana cephantha.；Tissue culture；Rapid propagation；Stem segment头花龙胆（Gentiana cephalantha）分布于云南、四川、贵州、广西等地，生于海拔1800～4450m的山坡草地、山坡路边、灌丛中、林缘、林下[1]。
为多年生草本，花簇生枝端呈头状（花果期9-12月）[2]，具有泻肝火、清下焦、除湿热之功效，主治目赤肿痛、湿热黄疸、头痛、胆囊炎、疮疡肿毒、外阴瘙痒等[3]。
头花龙胆是我省重要的中草药，民间用头花龙胆代替坚龙胆入药，野生资源已日趋匮乏。
目前有关头花龙胆的研究，主要在资源调查[2，4]、形态学[5]、种子萌发[6]、化学成分[7-8]及龙胆苦苷含量测定[9-10]方面，而头花龙胆组织培养及快速繁殖鲜为报道。
本实验对头花龙胆进行组织培养与快速繁殖试验研究，旨在建立头花龙胆的无性快繁体系，从而快速繁殖种苗，为人工种植奠定基础。
1 材料与方法1.1 材料头花龙胆采自六盘水市钟山区梅花山，选其幼茎作为外植体进行诱导培养。
1.2 方法1.2.1 外植体的处理将头花龙胆幼茎切成1～2cm长的茎段，洗衣粉水清洗30min，然后流水冲洗30～60min，置超净工作台，用75%的酒精消毒15～20s，弃酒精后无菌水清洗3～4次，每次3min，再用0.15%的升汞消毒8～10min，弃升汞后无菌水清洗6～8次，每次3min，最后把外植体放入无菌培养皿中，备用。
1.2.2 培养基与培养条件培养基：基本培养基为MS培养基，添加外源激素6BA和NAA 的不同浓度，蔗糖30g/L，琼脂12g/L，pH5.8培养条件：培养温度约25℃，光照时间12h/d，光照强度1500lx。
1.2.3 丛生芽的诱导在超净工作台上，将外植体接种到不同丛生芽的诱导培养基上。
每种丛生芽诱导培养基接种5瓶，每瓶接种3个外植体，接种完毕，贴上标签，注明日期及6BA 和NAA的浓度等。
诱导率（%）=诱导数/外植体接种数×1001.2.4 丛生芽芽苗的继代与增殖将丛生芽苗转接到继代增殖培养基中进行增殖培养。
统计增殖系数（增殖系数=外植体增殖芽苗数/接种芽苗数）。
1.2.5 生根培养将增殖的丛生芽分成单株接种于生根培养基上培养，记录生根情况。
2 结果与分析2.1 不同浓度NAA及6BA组合对丛生芽诱导的影响不同浓度的NAA及6BA对丛生芽诱导的影响见表1。
由表1可知，NAA为0.2mg/L时，丛生芽的长势较好，且丛生芽数也较多；当NAA为0.2mg/L，6BA为0.4mg/L时，丛生芽数是最多的，所以MS+NAA0.2mg/L+6BA0.4mg/L的培养基是诱导头花龙胆形成丛生芽的适宜培养基。
2.2 不同浓度NAA及6BA组合对丛生芽芽苗继代与增殖的影响由表2可知，在不同浓度的NAA和不同浓度的6BA组合的培养基上，丛生芽均有分化，当NAA为0.1mg/L时，丛生芽的增殖系数较大，最高达10.2，NAA 0.1mg/L、6BA0.3mg/L时，丛生芽增殖分化出的苗数最多且长势较好，所以MS+NAA0.1mg/L+6BA0.3mg/L的培养基是头花龙胆丛生芽增殖分化较适合的培养基。
2.3 不同浓度NAA及6BA组合对头花龙胆生根的影响不同浓度的NAA及6BA对头花龙胆生根影响见表3。
头花龙胆接种至生根培养基后，30d可以长出根。
当NAA为0.1mg/L、6BA为0.1mg/L时，头花龙胆组培苗的根粗壮且根较长，并且根数最多，达22.67±4.04根，生根率为100%，所以MS+NAA0.1mg/L+6BA0.1mg/L的培养基是头花龙胆生根的适宜培养基。
该培养基培养的头花龙胆组培苗的分枝数为12±2个、茎高为3.5±0.3cm，分枝数最多，茎增长最高，因此，该培养基既是头花龙组培苗生根的适宜培养基，又是分化增殖适宜培养基。
3 讨论龙胆组培苗的种植与传统的龙胆种子种植比较，传统的龙胆种子种植存在缺陷，首先，龙胆种子采集较困难且保存期限短，使用年限仅为一年[11]，还受季节限制；而龙胆组培苗培养时间短，不受季节限制，通过继代培养可以快速得到较多的组培苗，能够满足人们的需求。
其次，龙胆种子种植后发芽率较低，成苗率低；而龙胆组培苗移栽后注意保温保湿成活率可达90%以上。
第三，龙胆种子发芽后，幼苗还需移栽，且通常2～3a龙胆苗才能开花结果[12]，生长周期较长；而龙胆组培苗移栽后当年就能开花结果，生长周期较短。
所以通过组织培养可快速繁殖幼苗，加快龙胆的生产，满足人们的需求。
郭治友等[13]对都匀龙胆草进行了快繁，认为较适合丛生芽增殖的培养基为MS+6-BA1.1mg/L+IBA 1.0mg/L，增殖系数达8.6；文伟等[15]对龙胆草进行了快繁，认为MS+AgNO3 1.2mg/L+6-BA 0.6mg/L+NAA 0.1mg/L是愈伤组织及不定芽分化培养的适宜培养基，经过45d的培养，平均1个分化芽能培养形成4.8个长势旺盛的丛生状不定芽。
本实验不同浓度6BA与NAA的组合培养基，得到的丛生芽增殖系数不同，增殖系数在3.20～10.2，增殖系数最大的培养基为MS+NAA0.1mg/L+6BA0.3mg/L，增殖系数为10.2，说明6BA与NAA 不同浓度组合对组培苗丛生芽的增殖系数有较大影响，两者浓度比为3∶1时，增殖系数较大。
本实验的增殖系数较郭治友、文伟的高，且从成本考虑，本实验更为经济。
顾地周等[16]对高山龙胆用1/2MS+IAA 0.05的培养基培养21d，长出7～10条不定根；培养35d，根长达3.0cm以上。
赵志莲[17]通过对龙胆草的快繁，认为较适合的生根培养基为1/2MS+IBA0.05mg/L，经过30d左右培养可以得到根长为3cm的植株。
本实验较适合的生根培养基为：MS+NAA0.1mg/L+6BA0.1mg/L，经过30d左右培养，根数为22.67±4.04，根长为3cm左右，说明高山龙胆、深红龙胆、红花龙胆及头花龙胆的根生长速度较为一致，不同浓度生长素对生长速度影响不大。
本实验的生根培养基生根数更多，更适合植株生根，低浓度的6BA与NAA的组合，也可促进生根。
本实验还发现头花龙胆在培养基中可以开花，只要合理掌握花期就可以使头花龙胆在想要的时间内开花，使人能够更容易观赏，利用组织培养进行快速繁殖大大缩短了育苗时间，为人工栽培奠定了基础，具有重要的现实意义。
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