不同培养基成分对金铁锁愈伤组织生长及皂苷含量积累的影响

合集下载

不同培养基成分对金铁锁愈伤组织生长及皂苷含量积累的影响_韦伟

1208
L IS HI ZHEN M ED I CI NE AND M ATER I A M ED ICA RE SEA RCH 2010 VO L. 21 NO. 5
时珍国医国药 2010 年第 21 卷第 5 期
在蔗糖 40~ 50g L- 1 的时候达到最高 , 随后随浓度增大而迅速降低。综合分析 , 以蔗糖 40g L- 1 为最优碳源浓度。
图 1 不同蔗糖浓度对金铁锁愈伤组织生长和皂苷积累的影响
3. 3 氮源对金铁锁愈伤组织生长和皂苷含量积累的影响由表 2 可知 , KNO3 与 NH 4 NO3 混合添加的时候 , 干重增量达到最高 , 皂苷含量积累也呈现较优状态。单独加 KNO3 作用效果不明显 , 单独加 NH 4 NO 3 作用效果较好并随浓度增加而增大。综合分析 , 混合氮源利于金铁锁愈伤组织生长和皂苷的积累 , KNO 3 NH 4 NO3 为 ( 1. 9 1. 65) g L- 1时效果最佳。
3. 4 不同浓度磷酸盐对金铁锁愈伤组织生长及皂苷积累的影响由图 2 可知 , 在 KH 2 PO4 小于 1 . 00 mm o l L- 1 时 , 金铁锁愈伤组图 3 CaC l2 浓度对金铁锁愈伤组织生长和皂苷积累的影响织干重增量和金铁锁皂苷产量增加迅速 , 在 1. 00 mm ol L - 1 时本文通过研究不同碳源、氮源、磷酸盐和钙盐对金铁锁愈伤两者达到最高 , 并随着浓度增加而减小。因此 , KH 2 PO4 浓度为 1 组织生长及皂苷含量积累的影响 , 明确了金铁锁细胞培养的适宜 mm o l L- 1时为愈伤组织生长和金铁锁皂苷合成的最佳浓度。条件 , 为下一步大量培养金铁锁愈伤组织及规模化生产金铁锁皂苷物质奠定了基础。

影响愈伤组织中次生代谢产物含量的因素研究进展

影响愈伤组织中次生代谢产物含量的因素研究进展作者：房慧勇朱虹丁海麦韩华锐刘晓兰郝丽静李旻辉来源：《中国中药杂志》2014年第15期[摘要] 次生代谢产物是植物在长期进化过程中与生物和非生物因素相互作用的结果，在植物生长、发育和生理功能方面发挥着重要作用。

药用植物的有效成分通常都是细胞次生代谢产物，其合成受环境等多种因素影响。

利用愈伤组织培养获得目标产物，具有成本低、不受自然条件影响的优势。

药用植物愈伤组织中次生代谢产物的积累量不仅受光照、温度、pH等环境因素的影响，而且，种质本身、植物生长调节剂和诱导子的使用亦会对其积累产生较大影响。

该文就如何提高药用植物愈伤组织中次生代谢产物含量的影响因子进行综述，以期为进一步研究提供参考。

[关键词] 药用植物；次生代谢产物；愈伤组织；影响因子[收稿日期] 2014-01-01[基金项目] 国家“十二五”科技支撑计划项目（2012BAI28B02）；河北省教育厅科学技术研究计划项目（2010114）；河北大学医学学科专项（2012A3004）；内蒙古自治区高等学校青年科技英才支持计划项目（ NJYT-13-B18）[通信作者] 李旻辉，E-mail： li_minhui@植物次生代谢过程是植物在长期进化中对生态环境适应的结果，次生代谢产物虽然是植物生长非必须物质，但是，当植物在非生物胁迫条件下以及受到食草动物和病原体的攻击时，它们起着非常重要的保护作用，间接地影响着植物的生长[1]。

近年来，大量植物次生代谢产物被发现，部分已经广泛的应用于医药产业，其生物学作用与功能也越来越受到科学家们的重视[2-3]。

药用植物的有效成分通常都是植物次生代谢产物，其含量高低与药材品质息息相关[4]。

在植物不同的器官和组织或是不同的发育时期，次生代谢产物的产生和积累量都不同，通常在胁迫条件下才能大量积累[5]。

为了有效地保护药用植物种质资源同时确保高效生产次生代谢产物，通过愈伤组织培养获得次生代谢产物已被认为是一个行之有效的方法，愈伤组织培养技术具有操作简单、生长快、培养效率高、培养成本低等特点，不仅是一种植物快繁的新手段，同时也是植物改良，种质保存和有用化合物生产的理想途径，应用前景广阔。

不同培养基组分对金线莲组培苗生长及生根的影响

［９】周畅，洪家胜．不同配比的基质对生产产量和品质的影响［Ｊ】农业科技通讯，２０１０（７）：１０３—１０７．［１ｏ］张纲．不同基质配方对蔬菜穴盘育苗效果的比较试验【Ｊ］．农业科技
通讯，２０１４（５）：１２４—１２５．
［３］任家永，王克春．南京市六合区阳台农业产业发展分析［Ｊ】．中国园艺文摘，２０１３，２９（７）：５７—５８．【４】吴树静．城市家庭绿色小菜园【Ｊ】现代园艺，２０１５（１６）：５４．【５］李德翠，高文端，徐刚．以木薯渣为主的番茄育苗基质配方研究［Ｊ】．西
响研究。结果表明：增殖阶段，采用大量元素加倍，最有利于金线莲增殖苗的生长，增殖苗生长快，芽粗，而且比较整齐，叶片舒展、叶色深绿；在生根时，最佳的香蕉粉用量为１００９，Ｌ，高生长快，根较粗，叶色深。关键词金线莲；组织培养；生长；生根中图分类号￥５６７．２３＇９文献标识码Ａ文章编号１００７—５７３９（２０１５）２４—００８９—０２
２００９（２）：１７—１９．
得出安定区辣椒最佳施氮量为（Ｎ）３８９．１３ｋｇ／ｌｌｍｚ，施磷量（Ｐ２０５）７０２．３３ｋｇ／ｈｍ２，施钾量（Ｋ２０）１４７．２５ｋｇ／ｈｍ２，此时辣椒产量预报值为５５比例为１：１．８：０．３８。４参考文献
４７９．５７
【５］朱占录，李继明．安定区玉米配方施肥试验研究叫．甘肃农业科技，
现代农业科技２０１５年第２４期壮苗时，可以通过培养基成分调整与外源添加物使用，较好地实现组培苗的增壮。４参考文献
［１］郎楷永，陈心启，罗毅波，等．中国植物志：第１７卷【Ｍ］．北京：科学出版社。１９９９：２２０．［２】郑纯，黄以钟，季莲芳．金钱莲文献考证、原埴物及商品调查【Ｊ］．中草药，１９９６，２７（３）：２６９．【３】林宗铿．名贵药材“金线莲”【Ｊ］．福建热作科技，２００３，２８（２）：４５－４６．【４］王雅英，林小华，洪璇．金线莲外植体筛选及愈伤组织诱导研究［Ｊ】．亚热带植物科学，２０１１，４０（３）：４１—４３．【５］冯亦平，张利平，王岩花，等．金线莲外植体的筛选及不定芽诱导的研究叨．种子，２００９，２８（１０）：１９—２２．［６］刘丹．福建戴云山金线莲工厂化育苗关键技术研究［Ｄ】．福州：福建农

培养基成分对彭泽贝母愈伤组织增殖及生物碱含量的影响

培养基成分对彭泽贝母愈伤组织增殖及生物碱含量的影响（作者:___________单位: ___________邮编: ___________）【摘要】目的研究MS培养基中大量元素、微量元素对彭泽贝母愈伤组织生长及生物碱含量的影响，筛选有利于彭泽贝母愈伤组织生长和生物碱积累的培养基配方。

方法采用正交和单因素实验设计，以生长40 d的彭泽贝母愈伤组织的生长率和生物碱含量为指标，评价各因素对其影响的大小。

结果各因素对彭泽贝母愈伤组织生长影响大小依次为PCaKN,对生物碱积累影响大小依次为KNCaP；培养基中NO3-N含量较高时，有利于生物碱的积累；微量元素缺乏时均有利于彭泽贝母愈伤组织的生长，缺Cu、缺I时不利于生物碱的积累。

结论有利于彭泽贝母愈伤组织生长和生物碱积累的最佳组合分别为：N3P1K3Ca2、N1P2K3Ca1；培养基中大量元素、微量元素对彭泽贝母愈伤组织生长及生物碱含量存在一定影响。

【关键词】彭泽贝母愈伤组织生长量生物碱Abstract：ObjectiveTo study the effect of large elements, trace elements of MS culture medium on the growth and alkaloidcontent of Fritillaria monantha Migo callus ,and to select the culture medium which is advantageous in its growth and alkaloid accumulation.MethodsWith the growth rate and alkaloid content of the 40 days’callus as indexes, single-factor and orthogonal experimental design was conducted to evaluate the impact of various factors.ResultsThe effect of various factors on the growth of the callus is PCaKN ,and on the alkaloids was KNCaP; the alkaloid content was higher when the proportion of NO3-N was higher than NH+4-N；Lacing trace elements were all advantageous in growth of the callus，but lacing I and Cu were not helpful to the accumulation of alkaloids. ConclusionThe best combination of the various factors for the growth and the accumulation of alkaloids of the callus respectively is: N3P1K3Ca2、N1 P2 K3Ca1；large elements, trace elements of MS culture medium have effects on the growth and alkaloid content of Fritillaria monantha Migo callus.Key words：Fritillaria monantha Migo; Callus; Alkaloids ; Growth江西彭泽贝母Fritillaria monantha Migo主产于江西北部的彭泽、湖口、都昌、九江、瑞昌、修水等县，已被确定为国产贝母属植物在江西的新分布,彭泽贝母作川贝母使用已有多年的历史，现代药理学研究表明，彭泽贝母的药理、药效接近甚至优于几种常用贝母。

不同培养条件对金铁锁毛状根生长的影响

过度采挖，育更新不及时，抚造成金铁锁质量与产量下降，９１年作为稀有濒危物种列于《１９中国植物红皮书》
中，９１９年作为国家 Ⅱ ９级重点保护野生植物被列入《国家重点保护野生植物名录（第一批）中。》随着天然植物资源的匮乏，采用生物技术定向培养植物细胞和器官来获取次生代谢产物显得越来越重要，毛状根培育技术是规模化培育植物根部次生代谢产物的一种有效途径。步怀宇等研究发现，黄芩滇毛状根中黄芩苷是原药材的７１倍；．８刘峻等研究人参毛状根时发现，人参总皂苷含量是原药材的１７．倍。毛状根（ａｙｒｏ）由发根农杆菌感染植物细胞后，Ｒ质粒（ｏｔｎｕｉｇｐａｍｄＲｌｍｉ）ＴＤＡｈｉｔ是ｒｏ其ｊｒｏｉｄｃｎｌｓｉ，ｉａｄ的．Ｎｐｓ片段在植物细胞核基因组中插入整合与稳定表达的结果，因其外形像毛发一样，故称其为毛状根。毛状根培养系统具有生长快速、不需添加外源植物激素、遗传性稳定、生化特性不易改变以及有效药物成分含量高等特点。本文研究了不同的培养条件对金铁锁毛状根生长的影响，以期建立高效培养体系，进一步为大规模的培养及产业化奠定基础。
Ａｂｓｒｃｔａｔ
ＨａｒｒｏｃｎｅｎｕｅｆｎＰａｉｙｏｔａｂｉｄｃｄｒｏｓｍｍｏｉｎｔｎｃｉｅ｝Ａｒｂｃｅｉｍｒｉｇｎｓｓｅｅｕｉｄｓ）ｇｏａｔｒｌｏｖｕｈｚｅｅｏ

培养基及培养条件对杜仲愈伤组织生长及次生代谢产物含量的影响X

西北植物学报2004,24(10):1912—1916A ctaB ot.B orea l.-O cciden t.S in.文章编号:100024025(2004)1021912205培养基及培养条件对杜仲愈伤组织生长及次生代谢产物含量的影响Ξ李　琰3,王冬梅,姜在民,唐　锐(西北农林科技大学,陕西杨陵　712100)摘　要:以M S、L S、B5、N6、H、N itsch、W h ite、1 2M S为基本培养基,分别添加0.5m g L NAA和0.5m g L BA,分析不同类型培养基对杜仲愈伤组织生长及次生代谢产物含量的影响,并以B5培养基进行光照条件、碳源、蔗糖浓度试验。

结果表明:B5培养基不仅有利于愈伤组织生长,也有利于总黄酮的形成,而1 2M S培养基有利于绿原酸的积累;12h d光照对愈伤组织的生长及绿原酸和总黄酮的合成有明显的促进作用,黑暗不影响愈伤组织的生长,但却抑制绿原酸和总黄酮的形成;3种碳源中,愈伤组织的增长量、绿原酸和总黄酮的含量均以蔗糖为碳源时最高,葡萄糖最低;蔗糖浓度在10～50g L范围内绿原酸的含量随着糖浓度的升高而升高,40g L时愈伤组织的增长量和总黄酮的含量最高。

关键词:杜仲;组织培养;次生代谢产物中图分类号:Q946.8;S722.37 文献标识码:AEffects of ba sic m ed i a and culture cond ition s on growth of ca lluses and production of secondary m etabol ites of E uco mm ia u l m oidesL I Yan,W AN G Dong2m ei,J I AN G Zai2m in,TAN G R u i(N o rthw est Sci2T ech U niversity of A griculture and Fo restry.Yangling,Shaanxi712100,Ch ina)Abstract:T he M S,L S,B5,N6,H,N itsch,W h ite,1 2M S as basic m edia,supp lem en ted w ith0.5m g L NAA and0.5m g L BA w ere u sed to study their effects on callu s grow th and secondary m etabo lites p ro2 ducti on of E uco m m ia u l m oid es.L igh t,carbon sou rces and sucro se concen trati on w ere studied w ith B5as basic m edia.T he resu lts show ed that B5m edium w as best no t on ly fo r callu s grow th,bu t also fo r the accu2 m u lati on of flavono ids.1 2M S w as su itab le fo r the accum u lati on of ch lo rogen ic acid.12h d illum inati on increased the callu s grow th,ch lo rogen ic acid and flavono ids accum u lati on.D ark did no t influence callu s grow th,bu t no t beneficial fo r the ch lo rogen ic acid and flavono ids accum u lati on.Sucro se as carbon sou rce w as best fo r callu s grow th,ch lo rogen ic acid and flavono ids accum u lati on and gluco se w as least in the th ree carbon sou rces.In the range of10～50g L sucro se concen trati on,the ch lo rogen ic acid con ten ts increased along w ith concen trati on of sucro se.T he callu s increm en t and flavono ids con ten ts w as h ighest w hen the sucro se concen trati on w as40g L.Key words:E uco m m ia u l m oid es O liv.;tissue cu ltu re;secondary m etabo lites收稿日期:2003211221;修改稿收到日期:2004203217基金项目:国家“十五”攻关项目(2001BA502B0403);西北农林科技大学青年科研专项部分内容作者简介:李　琰(1971-),女(汉族),河南洛阳人,讲师,硕士,从事植物学及药用植物学的教学和研究。

不同培养基成分对铁皮石斛组织培养的影响_宋顺

表 1 原球茎诱导培养基中不同的激素浓度组合 mg/L
序号 1 2 ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ 4 5 6
NAA 0.5 1 1.5 2 0.5 1
6-BA 0.01 0.01 0.01 0.01 0.1 0.1
序号 7 8 9 10 11 12
NAA 1.5 2 0.5 1 1.5 2
6-BA 0.1 0.1 0.5 0.5 0.5 0.5
培养室温度(25±1)℃，光照时间 12 h/d，光照强度为 1000~1500 lx。 2 结果与分析 2.1 NAA、6-BA 对原球茎诱导的影响
接种培养 30 天后观察由铁皮石斛兰茎段诱导形成原球茎的生长情况，结果如表 4 所示。从表 4 中可以看出，生长素 NAA 和细胞分裂素 6-BA 对其原球茎的诱导有较大的影响，不同激素浓度的组合对铁皮石斛原球茎的诱导率也有所不同。随着 NAA 浓度的升高，原球茎的诱导率也随之升高，当 NAA 浓度为 1.5 mg/L 时，其诱导率最高，当其浓度增加到 2 mg/L 时，其诱导率反而下降，而 6-BA 的浓度过高或者过低，均不利于原球茎的形成，当其浓度为 0.5 mg/L，其诱导效果最佳。由此可见，在原球茎的诱导阶段，高浓度的生长素对其形成有促进作用[20]，而细胞分裂素的浓度对其诱导也有一定的影响，应该选择 NAA 和 6-BA 浓度较合适的组合。如 [21] 图 1-11 所示，该配方培养基对原球茎
· 134 ·
中国农学通报
低。 [18] 因此，利用组织培养技术可以扩大铁皮石斛兰的生长规模[19]，目前关于铁皮石斛的组织培养研究已经有相关报道，但是组织培养所需的成本过高和试管成苗周期长的问题是制约铁皮石斛产业化大生产的瓶颈。笔者采取不同的培养基配方，对铁皮石斛进行原球茎扩繁、分化以及生根的方法进行了研究，探讨在组培快繁过程中不同因素对其生长发育中的影响，以期获得最适宜的组培快繁条件，为减少组培苗的生长周期、获得大量优质的组培苗提供一定的理论依据。 1 材料与方法 1.1 试验时间、地点

金铁锁化学成分及抑菌活性研究

金铁锁化学成分及抑菌活性研究目的：研究金铁锁的化学成分及抑菌活性。

方法：采用硅胶柱色谱、凝胶柱色谱等手段进行分离、纯化，根据波谱数据和理化性质进行结构鉴定。

结果：从金铁锁的乙醇提取物中分离得到10个单体化合物，分别为对羟基苯甲酸甲酯（1），N-甲基糖精（2），3-羟基-4-甲氧基苯甲酸（3），日尔曼醇（4），二十三烷酸（5），二十八烷（6），杜鹃花酸（7），琥珀酸（8），stellarine A（9），齐墩果烷-12-烯-3α，16α-二羟基-23，28-二酸（10）。

结论：除化合物10之外，其他化合物均为首次从金铁锁属植物中分离得到。

研究表明化合物8，9有一定的抑菌活性。

标签：金铁锁；化学成分；抑菌活性金铁锁Psammosilene tunicoides W. C. Wu et C. Y. Wu为石竹科Caryophyllaceae金铁锁属植物的干燥根，金铁锁又名昆明沙参、独定子、蜈蚣七等。

主要分布在贵州、云南、四川、西藏等中国西南地区，是我国西南地区特有的单属种植物，也是贵州民间常用药物，现已作为稀有濒危物种列于《中国植物红皮书》中，属国家二级保护植物。

金铁锁以根入药，具有散瘀定痛、止血、消痈排脓之功，用于跌打损伤、风湿痛、胃气痛、创伤出血等的治疗[1-3]。

金铁锁主要化学成分为三萜皂苷类化合物[4]和环肽类化合物[5]，近年来，随着金铁锁研究的进一步深入，还报道了从金铁锁中分离得到α-菠甾醇、尿囊素、D-3-O-甲基肌醇等少量酰胺及有机酸类化合物[6]。

现代药理研究表明，金铁锁具有较好的镇痛和抗炎[7]、抗类风湿性关节炎[8]等作用，为寻找金铁锁镇痛、抗炎及止血的活性成分，本文对金铁锁根的化学成分进行了研究，从金铁锁的乙醇提取物中分离得到10个单体化合物，其中9个化合物为首次从金铁锁属植物中分离得到，化合物琥珀酸，stellarine A有一定的抑菌活性。

1 材料INOVO 400 MHz核磁共振波谱仪（美国Varian公司），以TMS为内标；HP MS5973质谱仪（美国惠普公司）；Brucker Vector 22傅里叶变换红外光谱仪（德国Brucke公司）；ZF7三用紫外分析仪（巩义市予华仪器有限责任公司）；XT-4型显微熔点测定仪（温度计未校正，北京泰克仪器有限公司）。

几种因素对悬浮培养人参细胞生长和皂苷积累的影响

几种因素对悬浮培养人参细胞生长和皂苷积累的影响为了完善人参细胞悬浮培养体系，论文研究了人参细胞悬浮培养的动态，探明了培养瓶瓶盖透气滤膜的有无，摇床转速和接种量对人参细胞生长和皂苷积累的影响。

结果表明人参细胞悬浮培养过程中，细胞生物量和皂苷产量在培养20 d时达到最大值，因此，可将培养期定为20 d。

培养瓶盖上有透气滤膜时有利于人参细胞生长和皂苷合成；悬浮培养时摇床转速影响细胞生长但对皂苷合成无影响，转数为120 r·min-1时，皂苷生产量最高。

每个培养瓶接种6 g鲜重的细胞时，细胞生长和皂苷积累明显好于其他接种量，总皂苷质量分数达12.8 mg·g-1DW，生产量达146.6 mg·L-1。

标签：人参细胞；透气膜；摇床转数；接种量人参Panax ginseng C. A. Meyer是五加科人参属的多年生药用植物，主要活性成分人参是皂苷，具有抗炎、抗氧化、抗肿瘤、提高人体免疫力及延缓衰老等功效[1]。

目前，人参栽培以播种作为主要繁殖方式，从播种到收获需要4～6年的时间，管理成本较高，病害严重，且因为防治这些病虫害频繁使用的农药带来的残留问题降低了人参产品质量[2]，同时阻碍其向国外市场出口。

因此，利用植物细胞培养工程手段，通过细胞、组织或器官培养获得人参皂苷便成了解决这些问题的有效方法。

人参细胞和组织培养兴起于20世纪60年代，其工厂化生产始于20世纪80年代[3]。

在进行人参细胞培养过程中，利用液态培养基进行的悬浮培养被认为是一种取代传统固态培养基进行培养的方式，其优势在于细胞增殖速度快，可提供大量均匀一致的培养物[4]。

因此，悬浮培养成为植物组织培养走向工业化的必经步骤[5]。

由于人参市场的需求量逐年增加，工厂化生产过程中提高人参有效物质的积累越来越受到人们的关注[6]。

本试验调查了人参细胞悬浮培养过程中细胞生长和底物消耗的动态，研究了培养瓶的换气条件、摇床转数及接种量对细胞生长和皂苷积累的影响，旨在完善人参细胞悬浮培养技术，为人参皂苷的工厂化生产提供理论依据。

利用基因工程技术提高金铁锁中皂苷含量的实验方案研究

利用基因工程技术提高金铁锁中皂苷含量的实验方案研究利用基因工程技术提高金铁锁中皂苷含量的实验方案研究本课题从分子水平上研究提高金铁锁中皂苷合成途径中β-AS和细胞色素P450对皂苷含量提高的影响。

利用基因工程技术对β-AS和细胞色素P450基因进行克隆，并且通过原核表达验证其功能。

为后续β-AS和细胞色素P450基因在表达载体上大量生产奠定了一定的基础。

该实验的成功研究可以在一定程度上提高金铁锁中皂苷含量，为以后对金铁锁皂苷含量的研究提供一点点帮助和生产实践中提供一定的理论基础。

关键词：基因工程；β-香树素合酶；细胞色素P450；三萜皂苷Amoxicillin Solid Preparation Workshop GMP DesignAbstractIn this study, we studied the effects of β-AS and cytochrome P450 on the increase of saponin content in the synthesis pathway of saponin in Jintiesu. The β-AS and cytochrome P450 genes were cloned using genetic engineering techniques and their function was verified by prokaryotic expression. It lays a foundation for the subsequent mas s production of β-AS and cytochrome P450 genes on expression vectors. The successful study of this experiment can improve the content of saponin in Jintiesuo to a certain extent, and provide a little theoretical help for the research on the content of saponin in the future and provide a certain theoretical basis in production practice.Key Words：Genetic engineering；β-AS；cytochrome P450; triterpenoid saponin缩略词表List of abbreviation缩写英文全称中文全称Amp Ampicilin 氨苄青霉素cDNA Complementary deoxyribonucleic acid 互补（链）脱氧核糖核酸DNA Deoxyribonucleic Acid 脱氧核糖核酸HMGR 3-hydroxy-3methylglutary-CoA reductase 3-羟基-3-甲基戊二酰辅酶A还原酶rpm Revolution per minute 每分钟转速HPLC High-performance liquid chromatography 高效液相色谱IDI Isopentenyl diphosphate isomerase 异戊烯基焦磷酸异构酶GPP Isopentyl diphosphate 牻牛儿基焦磷酸RNA Ribonucleic Acid 核糖核酸LB Luria-Bartani medium LB培养基min Minute 分钟dH2O Double distilled water 双蒸水PCR Polymerase chain reaction 聚合酶链式反应RACE Rapid amplification of cDNA ends cDNA末端快速扩增SDS Sodium dodecyl sulfate 十二烷基磺酸钠PAGE Polyacrylamide gel electrophoresis 聚丙烯酰胺凝胶电泳h Hour 小时bp Base Pair 碱基对金铁锁Psammosilene tunicoides W.C. Wu et C.Y Wu是石竹科金铁锁属植物的干燥根[1]，是“云南白药”的重要构成药物之一。

不同覆盖栽培方式对金铁锁生长习性及总皂苷含量的影响

现代农业科技2024年第5期农艺·园艺金铁锁（Psammosilene tunicoides W.C.Wu et C.Y. Wu），又称昆明沙参、独钉子、土人参、金丝矮陀陀等，为石竹科金铁锁属多年生草本植物，主产于云南、四川、贵州等地，是我国西南地区特有的单属植物[1]，以根茎入药，具有消炎、止痛、止血、攻痈排脓等功效，可治疗跌打损伤、创伤出血、风湿、胃寒痛等，曾载入1974年《云南省药品标程》、1977年《中国药典》以及1988年《贵州省中药材质量标准》。

长期以来，金铁锁主要依赖采挖野生资源。

因过度采挖、生境破坏以及自然繁殖力差等因素，金铁锁野生资源数量急剧下降，已被列入《中国植物红皮书》，为国家二级重点保护植物[2-3]。

因此，开展金铁锁引种驯化栽培，建立规范化种植基地，是保护金铁锁野生资源、保证药材有效供给的必然选择。

近年来，采用种子直播、露地育苗移栽等栽培方式，金铁锁人工种植发展较快，但生产中普遍存在杂草难以防治、干旱影响出苗率、主要有效成分含量降低等问题[4]。

地膜等覆盖栽培技术，可增加土壤温度及土壤含水量，促进作物干物质积累，对提高山区、干旱地区的作物产量具有重要意义[5]。

其中，与白色地膜覆盖相比，黑色地膜透光率低，可显著降低覆膜后高温对作物生长的不利影响，更有效地抑制杂草生长[6]。

目前，黑色地膜覆盖栽培技术已应用到桔梗、轮叶党参、山药等中药材生产中，其增产、除草效果明显[7]。

为探索不同覆盖材料覆盖栽培金铁锁的可行性，特进行了不同覆不同覆盖栽培方式对金铁锁生长习性及总皂苷含量的影响方其仙1李茜1郑竹1杨净云1吴潇潇1张俊禹1蒋朝金2（1云南农业职业技术学院，云南昆明650031；2云南麇岵生物科技有限公司，云南宣威655400）摘要本研究设置绿色无纺布覆盖（处理1）、白色农膜覆盖（处理2）、银黑双色农膜覆盖（处理3）和不覆盖任何农膜对照（CK）4种栽培方式，探明金铁锁覆盖栽培的效果。

培养基成分和培养条件对黄芪愈伤组织中黄芪皂苷积累的影响

培养基成分和培养条件对黄芪愈伤组织中黄芪皂苷积累的影响张宗申;王子茜【摘要】对提高黄芪愈伤组织中黄芪皂苷含量的人工调节技术进行了研究.生长在6,7-V基本培养基上的黄芪愈伤组织中黄芪皂苷含量比MS培养基上的高,而且光照比黑暗更有利于黄芪皂苷合成.调整6,7-V培养基中氨态氮和硝态碳的比例为1∶1(氮源总浓度为60mmol·L-1)、KH2PO4浓度为1.5mmol·L-1、CaCl2浓度为8.97mmol·L-1时比较适合黄芪皂苷的积累.以蔗糖为碳源比葡萄糖和麦芽糖更有利于皂苷的积累.通过调节培养基成分和培养条件是改变黄芪细胞中黄芪皂苷积累趋势的一个重要手段.【期刊名称】《大连工业大学学报》【年(卷),期】2009(028)003【总页数】4页(P174-177)【关键词】膜荚黄芪;愈伤组织;黄芪皂苷【作者】张宗申;王子茜【作者单位】大连工业大学,生物与食品工程学院,辽宁,大连,116034;大连工业大学,生物与食品工程学院,辽宁,大连,116034【正文语种】中文【中图分类】TS972.161;R282.710 引言黄芪是豆科黄芪属植物，全世界约2 000多种，而我国有278种、2 亚种35 变种2变型,分布于南北各省区[1]。

现代医学研究表明，黄芪中的有效成分是皂苷、黄酮和多糖类物质，具有抗炎、镇痛、抗血栓形成、抗衰老、抗病毒、抗风湿、抗肝纤维化等多种药理作用[2-3]。

历史上黄芪以野生为主,但由于长期过度采挖,致使野生黄芪资源几近枯竭,不能满足医药市场日益增长的需求[4]。

利用植物组织培养技术生产黄芪次级代谢产物是解决目前供需矛盾的有效途径之一。

目前，对黄芪组织培养的研究主要集中在愈伤组织诱导、器官发生和利用毛状根培养系统提高其次生代谢产物的产量等方面。

陈刚等[5]通过组织培养的手段从草木樨状黄芪无菌苗茎段诱导出愈伤组织进而诱导出丛生芽，并发育成苗。

胡之璧等[6]建立了由发根农杆菌感染膜荚黄芪叶片外植体形成的毛状根培养系统并得到了较多的活性成分。

金铁锁愈伤组织花色苷的稳定性研究

金铁锁愈伤组织花色苷的稳定性研究韦红边;李小兰;张明生;刘贵贤;高晓峰;徐佳瑜【摘要】以金铁锁红色愈伤组织为材料,用1%盐酸-甲醇提取花色苷,研究其在不同温度、光照、pH、可溶性糖、还原剂、氧化剂、防腐剂和金属离子等条件下的稳定性.实验结果表明,金铁锁花色苷在温度为4~60℃及偏酸性条件下较稳定;光照对花色苷具有较强的破坏作用,应避光存放;氧化剂和抗坏血酸对其影响较大,但在还原剂作用下较稳定.此外可溶性糖及防腐剂对愈伤组织有一定的增色作用;K+、Zn2+、Mn2+、Mg2+、Ca2+的存在对其稳定性没有较大影响,但Cu2+、Fe3+对其有明显的破坏作用,因此在储存愈伤组织或花色苷时应避免使用铜器和铁器.%The anthocyanin was extracted by 1%HCl-ethanol from the red callus of Psammosilene tunicoides. Effects of temperature, light, pH value, soluble sugar, reductant, oxidant, antiseptic, metalions and other conditions anthocyanin stability was studied. The results showed that anthocyaninwas stable at temperature 4~60℃ and acidic condition. Light had strong damage effect for anthocyanin stability, so anthocyanin should be kept away from light. Anthocyanin was greatly affected by the oxidant and Vc, but was well tolerated to reductant. Moreover, the soluble sugar and antiseptic had certain hyperchromic effect for the callus. K+、Zn2+、Mn2+、Mg2+、Ca2+had no great influence, but Cu2+and Fe3+had obvious dam-age to anthocyanin stability, so the callus or anthocyanin of P. tunicoides should not be stored in copperware and ironware.【期刊名称】《山地农业生物学报》【年(卷),期】2016(035)002【总页数】8页(P7-14)【关键词】金铁锁;愈伤组织;花色苷;稳定性【作者】韦红边;李小兰;张明生;刘贵贤;高晓峰;徐佳瑜【作者单位】贵州大学生命科学学院,贵州贵阳550025;山地植物资源保护与种质创新省部共建教育部重点实验室,贵州贵阳550025【正文语种】中文【中图分类】TS264.4金铁锁(Psammosilene tunicoides W. C. Wu et C. Y. Wu)为石竹科金铁锁属，中国特有单属种多年生草本植物。

不同诱导子对黄芪有效成分积累的影响

不同诱导子对黄芪有效成分积累的影响刘惠娟;梁建萍【摘要】For collecting the elicitors that can promote accumulation of A stragalus effective components,the paper chooses seeds from Datong as experimental materials,soaks seeds with different concentrations ofSA,SNP,NAA,plants in flowerpots,then determines the contents of polysaccharide,flavonoids,astragalosides and activity ofPAL,comprehensively evaluates every index under different elicitors by ANOVA and the methods of correlation analysis.The results show that 15 μ mol/L SA,15 mnol/L SNP,1.0 mg/L NAA can significantly promote the accumulation of effective components,SA has more obvious effect on flavonoids,SNP on astragalosides and NAA on polysaccharide,and there is a positive correlation between PAL activity and flavonoids content.%为了筛选可以促进黄芪有效成分积累的诱导子种类及浓度,以大同浑源蒙古黄芪的种子为原料,用不同浓度SA,SNP,NAA浸种,进行盆栽试验,并对黄芪根部多糖、黄酮、皂苷含量及苯丙氨酸解氨酶(PAL)活性进行测定,应用单因素方差分析和相关性分析法,对不同诱导子处理下黄芪的各项指标进行了综合评价分析.结果表明,15 μmol/L SA,15 mmol/L SNP,1.0 mg/L NAA可以显著促进黄芪有效成分的积累,其中,SA 对黄酮效果明显;SNP对皂苷效果明显;NAA对多糖效果明显,并且PAL活性和黄酮含量之间存在正相关性.【期刊名称】《山西农业科学》【年(卷),期】2017(045)003【总页数】4页(P394-397)【关键词】诱导子;有效成分;单因素方差分析【作者】刘惠娟;梁建萍【作者单位】山西农业大学生命科学学院,山西太谷030801;山西农业大学生命科学学院,山西太谷030801【正文语种】中文【中图分类】S567.23+9黄芪为豆科植物膜荚黄芪的根[1]，主要药效成分为黄酮、皂苷和多糖等，有补气固表、脱毒排脓、生肌等功效[2]。

不同培养条件对半枝莲愈伤组织诱导及其总黄酮积累的影响

不同培养条件对半枝莲愈伤组织诱导及其总黄酮积累的影响半枝莲(Scutellaria barbata D.Don.)属于唇形科黄芩属多年生草本药用植物,全草可入药,是著名的抗恶性肿瘤的中药材,具有重要的药用价值,其含有的主要活性物质为黄酮类化合物。

为了提高半枝莲中的总黄酮含量,本文采用组织培养技术,开展了半枝莲愈伤组织的诱导研究。

通过单因素试验对愈伤组织的诱导条件进行了考察,提高了愈伤组织中总黄酮的含量,揭示了不同因素与愈伤组织诱导之间的关系,同时也为探究能够提高总黄酮含量的生产体系奠定了实践基础。

本研究以半枝莲茎段为植物材料进行离体培养,通过设置不同光照条件,确定了最佳愈伤组织诱导的光条件,然后通过单因素试验,考察了生长素、细胞分裂素、赤霉素、精胺和蔗糖因素,对愈伤组织诱导及其总黄酮积累的影响。

(1)在不同的光照条件(16h/8h光周期培养4周、黑暗2周光照2周交替培养及全黑暗培养4周)下,用0.0025、0.0045.0.0090 mmol/L的6-BA和0.0025、0.0055、0.0080mmol/L的NAA进行组合处理。

结果表明,在光照条件下,当6-BA. NAA的浓度分别为0.0090和0.0055 mmol/L时,测得的愈伤组织诱导率(97.917%)、干重(0.467 g)和总黄酮含量(4.791%)均为最高值。

其总黄酮含量的最高值与交替培养(3.401%)和黑暗培养(2.985%)相比,分别高出了40.870%和60.503%。

故全光周期条件为最优的培养条件。

(2)在不同生长素和细胞分裂素组合处理时,结果如下：①2,4-D和6-BA组合处理时,愈伤组织诱导率最高为79.169%(0.0025 mmol/L 2,4-D+0 mmol/L6-BA),此时干重也为最高值(0.438 g),而总黄酮含量最高为3.483%,此时2,4-D 和6-BA的浓度均为0.0045 mmol/L。

人参细胞悬浮培养中蔗糖和无机盐对皂苷生产的影响

人参细胞悬浮培养中蔗糖和无机盐对皂苷生产的影响高日;朴炫春;于晓坤;金星爱;廉美兰【摘要】通过研究人参细胞悬浮培养过程中培养基蔗糖浓度、MS浓度、氮浓度及硝态氮与铵态氮比例对细胞生长及皂苷合成的影响，发现在培养基中添加30 g/L蔗糖时，人参细胞合成皂苷能力最强,蔗糖浓度过低(10 g/L)或过高(70 g/L)均不利于细胞干重增加及皂苷积累.MS培养基浓度减半(0.5 MS)或维持原浓度(1.0 MS)，总氮浓度为30 mM时,有利于人参细胞皂苷的合成.MS培养基中硝态氮促进皂苷合成，单独使用硝态氮比与铵态氮混用或铵态氮单独使用更有利于皂苷的合成，皂苷生产量达到最高(158.9 mg/L).【期刊名称】《延边大学农学学报》【年(卷),期】2011(033)002【总页数】5页(P89-93)【关键词】人参细胞；蔗糖；MS浓度；氮【作者】高日;朴炫春;于晓坤;金星爱;廉美兰【作者单位】延边大学长白山生物功能因子省部共建教育部重点实验室;延边大学长白山生物功能因子省部共建教育部重点实验室;延边大学长白山生物功能因子省部共建教育部重点实验室;延边特产研究所,吉林延吉133000;延边大学长白山生物功能因子省部共建教育部重点实验室【正文语种】中文【中图分类】S567.5+1人参(Panax ginseng)中含有皂苷、抗氧化物、多肽、多糖、脂肪酸、乙醇及维生素等成分[1],其中皂苷是最主要的活性物质[2].栽培人参生长周期长,从播种到收获需要5～7年的时间,且要求精细的管理,生长及产量受气候、土壤及病虫害等因素的影响[3,4];而细胞培养可以更有效地生产皂苷,具有皂苷质量及生产量易调控,不受气候、地理条件的限制,培养条件和过程易优化等特点[2].选择适宜培养基是植物细胞培养的首要条件,通过培养基中养分的调节可改变植物细胞生长及物质合成能力[5].所以,建立高产、稳产的细胞培养体系是利用细胞工程生产次生代谢产物的关键.在细胞培养过程中,除了物种本身特性外,碳源、氮源等外部因子对细胞生长和次生代谢产物积累的影响也很大.对大多数植物的细胞培养,培养基中的蔗糖是主要的碳源及能源,其浓度影响细胞生长及次生代谢物的产量.如紫苏细胞悬浮培养中,相对高的蔗糖浓度促进花青素的合成[6];培养基中氮是细胞培养的主要营养物质,这已在许多植物的细胞培养中得以证实,如美洲商陆的花青苷[7],止泻木的生物碱[8],紫草的紫草素[9]等的生产.人参属植物也有许多关于通过改善培养基成分提高有效成分含量的研究报道[2,10],但为了进一步优化人参细胞培养体系,本文只研究对细胞及皂苷合成有影响的蔗糖、MS浓度及氮等因素.1 材料与方法1.1 材料将在长白山区采集的约5年生新鲜人参根部泥土洗净,在洗衣粉稀释液中清洗5 min后,流水冲洗10 min.在超净工作台内将洗净的人参根用70%酒精浸泡1 min,然后用2%次氯酸钠消毒30 min,最后用无菌水冲洗5次.将已消毒的人参根切成1 cm2的小块,接种在MS+2,4-二氯苯氧乙酸(2,4-D)1.0 mg/L+激动素(KT)0.1mg/L+蔗糖30 g/L+琼脂6.5 g/L的培养基中诱导愈伤组织.将诱导的愈伤组织接入含50 mL培养基(MS+2,4-D 1.0 mg/L+KT 0.1 mg/L-1+蔗糖30 g/L)的250mL三角瓶中,在转速为100 r/min的摇床中悬浮培养,继代周期为20 d.培养条件为(25±2)℃,暗培养.1.2 蔗糖浓度对皂苷生产的影响在MS+IBA 7 mg/L+KT 0.5 mg/L的培养基中加入不同浓度的蔗糖(10,30,50和70 g/L),pH值调为5.8.称取继代培养20 d的细胞(鲜重4 g)接入250 mL三角瓶中(含50 mL培养基),在转速为100 r/min的摇床中培养,培养温度为(25±2)℃,暗培养.20 d后调查细胞生长及皂苷含量.1.3 MS培养基浓度对皂苷生产的影响为了调查MS培养基浓度的影响,将MS基本培养基浓度设置为：1)0.5 MS;2)1.0 MS;3)1.5 MS;4)2.0 MS.培养基的其他成分为IBA 7.0 mg/L+KT 0.5 mg/L+蔗糖30 g/L,p H值调为5.8.其它条件同上.1.4 氮浓度及NO3-/NH 4+对皂苷生产的影响将MS培养基中的氮浓度设置为30,60,90和120 mM,培养基其它成分同上.为探明NO3-/NH 4+的影响,将MS培养基中氮浓度固定为 30 mM 后,用NH4Cl和KNO3分别调节NH 4+和 NO3-浓度,使NO3-/NH 4+为0/30,5/25,10/20,15/15,20/10,25/5和30/0 mM.其它条件同上.1.5 人参皂苷含量测定人参皂苷的提取采用改良的William等的方法[10],利用HPLC测定皂苷含量.开始测定的10 min,水和氰化甲烷比率为75∶25,最后25 min为63∶37.流动相流速1.2 mL/min,203 nm下测定人参皂苷含量.1.6 生物量调查及数据分析培养20 d后,用滤纸滤去培养液,水洗3～4次后收集细胞,将细胞放入55℃的干燥箱中,2 d后待细胞完全干燥称重并记录;人参皂苷生产量=皂苷含量(mg/g DW)×细胞干重(g/L).所有试验处理均设5瓶作为重复.2 结果与分析2.1 蔗糖浓度对皂苷生产的影响植物细胞培养过程中糖水平的高低直接影响次生代谢产物的积累,一般认为较高浓度的蔗糖促进次生代谢物合成[11-12].该试验通过研究蔗糖浓度对人参皂苷生产的影响,发现培养基蔗糖浓度不同,细胞干重和皂苷含量也不同;在30 g/L蔗糖浓度处理中细胞干重和皂苷含量最高,获得最多的皂苷生产量(图1).蔗糖浓度低于或高于30 g/L时,细胞生长及皂苷积累受到抑制.研究结果表明,培养基中蔗糖浓度低时(10 g/L),人参细胞因碳源不足生长不良,但在蔗糖浓度较高的培养基中,细胞代谢产物的生产受到抑制,这可能是因为培养基中糖过多,渗透压增加所至[2].利用植物细胞培养生产次生代谢产物的研究很多,但不同植物种类对蔗糖浓度的要求不同.油菜细胞培养时,培养基中蔗糖浓度从20 g/L增加到220 g/L时酰基甘油生产量可提高8倍[13];三七细胞培养在蔗糖40 g/L时皂苷和多糖生产量最多[14];人参细胞培养中蔗糖浓度为30～50 g/L时细胞生长最佳,随蔗糖浓度增加(至60 g/L)皂苷含量增加,但浓度提高到70 g/L时则有抑制作用[15].这些研究结果表明植物细胞培养时,依据植物种类及目的产物,对蔗糖的要求有所不同,因此探明蔗糖浓度对细胞生长和物质合成的影响显得非常重要.图1 蔗糖浓度对悬浮培养人参细胞中皂苷生产的影响Fig.1 Effect of sucrose concentration on production of ginsenosideduring cell suspension culture 2.2 MS培养基浓度对皂苷生产的影响MS培养基浓度对人参细胞生长及皂苷合成的影响明显,由图2可知,在MS培养基维持原有浓度(1.0 MS)时细胞干重增加,减少或增加MS培养基浓度,不利于细胞干重的增加,尤其是MS浓度加倍(2.0 MS)时,干重显著减少.皂苷含量在0.5和1.0 MS中较高,1.5 MS中有所减少,2.0 MS时减少幅度较大.在0.5和1.0 MS中皂苷生产量最多,大于60 mg/L,当培养基浓度增加到1.5倍(1.5 MS)时皂苷生产量下降(43.5 mg/L),2.0 MS中皂苷生产量最少(26.1 mg/L).此结果表明,通过人参细胞培养生产皂苷时,维持MS基本浓度即可.目前,关于人参次生代谢物生产的报道较多,这些研究结果认为MS培养基中盐浓度对人参细胞或器官生物量及物质合成有显著的作用,Yu等认为1.0 MS对人参不定根生长及皂苷合成有利[16];Sivakumar等认为0.5 MS适宜于人参不定根培养,2.0 MS有抑制作用[17].这些结果与该试验结果相似,说明人参细胞与不定根培养一样,维持MS原浓度或适当降低其浓度对次生代谢物生产有利.图2 MS培养基浓度对悬浮培养人参细胞皂苷生产的影响Fig.2 Effect of MS strength on production of ginsenoside during cell suspension culture2.3 氮浓度和氮形态对皂苷生产的影响MS培养基中总氮浓度对细胞干重及皂苷合成有影响,随氮浓度的增加细胞干重、皂苷含量及生产量呈减少趋势(图3).细胞干重值在30 mg/L最高(11.6 mg/L),但氮浓度从30到60 mM,细胞干重减少幅度较小,而从60到90 mM 和90到120 mM,干重减少明显,减少量均超过2 mg/L,氮浓度120 mM干重值最低(6.1 mg/L).与细胞干重一样,皂苷含量在氮浓度30 mM 最高(10.8 mg/g DW),并随氮浓度的增加而下降.皂苷生产量表现干重和皂苷含量的综合趋势,在氮浓度30 mM皂苷生产量(124.5 mg/L)明显高于其它浓度处理.在植物细胞培养中,氮影响细胞生长及次生代谢物生产的效果显著[18],人参细胞培养时培养基中的氮浓度可适当降低.图3 氮浓度对悬浮培养人参细胞中皂苷生产的影响Fig.3 Effect of nitrogen concentration on production of ginsenosideduring cell suspension culture 将培养基中氮含量固定为30 mM后调节培养基中铵态氮和硝态氮的浓度,结果发现硝态氮对细胞干重的增加有利,不论铵态氮浓度多少,硝态氮含量大于10 mM时,细胞干重增加,硝态氮低于10 mM时干重减少,尤其是未加硝态氮时,细胞干重几乎不增加(图4).皂苷含量和生产量随硝态氮的增加而增加,在只加入硝态氮的培养基中(NO3+/NH 4-为30：0)最高.该试验结果与Zhang等[17]及Liu和Zhong[18]所进行的三七和人参细胞培养的结果相似.因此,在人参细胞培养生产皂苷时,MS培养基中只加入硝态氮即可.图4 培养基中NO3+/NH4-对悬浮培养人参细胞中皂苷生产的影响Fig.4 Effectof NO3+/NH 4-on production of ginsenosideduring cell suspension culture3 结论人参细胞悬浮培养生产皂苷时,最佳的蔗糖浓度为30 g/L,过低(10 g/L)或过高(50g/L)对细胞干重及皂苷生产不利.将MS培养基浓度减半(0.5 MS)或维持原MS浓度(1.0 MS),促进细胞生长和皂苷合成,而培养基浓度超过MS基本浓度时则有抑制效果.培养基中总氮浓度和硝态氮与铵态氮浓度对细胞生长和皂苷合成也有影响,当总氮浓度为30 mM,硝态氮含量高时,有利于皂苷的合成,培养基中单独使用硝态氮(NO3+/NH 4-为30：0)时,皂苷生产量最高,但单独使用铵态氮(NO3+/NH4-为0：30)时,细胞几乎不生长.参考文献：[1] 张小勇,许学哲,金星华.人参皂苷的高效液相色谱分析[J].延边大学农学学报,1999,25(2)：97-99.[2] Akalezi C O,Liu S,Li Q S,et bined effects of initial sucrose concentration and inoculums size on cell growth and ginseng saponin production by suspension cultures of Panax ginseng[J].ProcBiochem,1999,34：639-642.[3] Proctor J T A.Ginseng：old crop,new directions[M].In：JanickJ,ed.Progress in new crops,ASHS Press,Arlington,VA,1996,565-577.[4] Sticher O.Getting to the root of ginseng[J].Chemtech,1998,28：26-32.[5] Zhang Y H,Zhong J J,Yu J T.Enhancement of ginseng saponin production in suspension cultures of Panax notoginseng ：manipulation of medium sucrose[J].J Biotechnol,1996,51：49-56.[6] Zhong JJ,Yoshida T.High-density cultivation of Perilla f rutescens cell suspensions for anthocyanin production：effects of sucrose concentration and inoculum size[J].Enzym Microb Technol,1995,17：1073-1079.[7] Sakuta M,Takagi T,Komamine A.Effects of nitrogen source on betacyanin accumulation and growth in suspension cultures of Phytolaccaamericana[J].Physiol Plant,1987,71：459-463.[8] Panda A K,Mishra S,Bisaria V S.Alkaloid production by plant cell suspension cultures of Holarrhenaantidysenterica：I.Effect of major nutrients[J].Biotechnol Bioeng,1991,39：1 043-1 051.[9] Srinivasan V,Ryu D D Y.Improvement of shikonin productivity in Lithospermumerythrorhizon cell culture by altering carbon and nitrogen feeding strategy[J].Biotechnol Bioeng,1993,12：793-799.[10] William,John G,Hendel J.Reversed-phase high-performance liquid chromatographic determination of ginsenosides of Panax quinquefolium[J].JChromatogr,1996,775：11-17.[11] 高文远,贾伟.药用植物大规模组织培养[M].北京：化学工业出版社,2005,9.[12] Weselake R J,Byers SD,Davoren JM,et al.Triacylglycerol biosynthesis and gene expression in microspore-derived cell suspension cultures of oilseed rape[J].JExp Bot,1998,49：33-39.[13] Zhang Y H,Zhong J J,Yu J T.Enhancement of ginseng saponin production in suspension cultures of Panax notoginseng ：manipulation ofmedium sucrose[J].J Biotechnol,1996,51：49-56.[14] Choi K T,Ahn IO,Park JC.Production of ginseng saponin in tissue cultureof ginseng(Panax ginseng C.A.Mayer)[J].Russ J Plant Physiol,1994,40：784-788.[15] Yu K W,Hahn E J,Paek K Y.Production of adventitious ginseng roots using bioreactors[J].Kor J Plant Tiss Cult,2000,27：309-315.[16] Sivakumar G,Yu K W,Paek K Y.Production of biomass and ginsenosidef rom adventitious roots of Panax ginseng in bioreactor cultures[J].Eng Life Sci,2005,(5)：333-342.[17] Zhang Y H,Zhong J J,Yu J T.Effect of nitrogen sources on cell growth and production of ginseng saponin and polysaccharidein suspension cultures of Panax notoginseng[J].Biotechnolo Progress,1996,12：567-571. [18] Liu S,Zhong JJ.Simultaneous production of ginseng saponin and polysaccharideby suspension cultures of Panax ginseng ：Nitrogeneffects[J].Enzym Microb Technol,1997,21：518-524.。

培养基成分及其作用

培养基成分及其作用植物生长发育需要多种营养和生长调节物质，当其缺乏时，生长发育受阻，形态不正常。

在植物组织快繁过程中，培养物生长发育所需的营养和生长因子，主要靠培养基供给。

因此，完全培养基的成分除了水分外，还要包括无机营养、有机物营养、生长调节物质及其他附加物等。

一、无机营养物无机营养物即无机盐是植物生长发育所必需的，根据植物对无机盐需要的多少，将其分为大量元素和微量元素。

1. 大量元素大量元素在植物体内含量占干物重的0.1-10%，其浓度一般大于0.5mmol/L，包括氮(N)、磷(P)、钾(K)、钙(Ca)、镁(Mg)、硫(S)，若加上碳(C)、氢(H)、氧(O)，则有9种元素。

在离体培养中，其C、H、O三元素是从人工加入的糖类获得的，H、O元素也可以从培养基所含的水分中获得，而其余6种矿质元素要从加入的适量的无机盐类来获取。

无机氮常以硝态氮(如KNO3)和铵态氮(如NH4NO3)两种形式供应，多数培养基都是二者兼而有之。

2. 微量元素植物所需的微量元素包括铁(Fe)、硼(B)、锰(Mn)、铜(Cu)、锌(Zn)、钼(Mo)、氯(Cl)等，植物对其需要量极微，在植物体内含量占干物重的0.01%以下，起生长发育所需的浓度一般小于0.5mmol/L，稍多则产生毒害。

碘(I)虽不是植物生长的必需元素，但几乎在所有的培养基中都含有碘元素，有些培养基还加入了钴(Co)、镍(Ni)、钛(Ti)、铍(Be)，甚至铝(Al)等元素。

3. 铁盐铁是用量较多的一种微量元素，是许多重要氧化还原酶的组成成分，在植物叶绿素的合成过程中起到重要的作用。

若以硫酸铁和氯化铁为供铁源，培养基的pH值会达到5.2以上，形成氢氧化铁沉淀，使培养物无法吸收而出现缺铁症，故在培养基配制时，常用硫酸亚铁和EDTA二钠配成螯合态铁，成为有机态铁方被培养物吸收和利用;也可用EDTA铁盐，作为铁的供应源。

这些元素参与培养物机体的建造，构成植物细胞中的核酸、蛋白质、叶绿体、酶系统和生物膜所必需的元素。