第十一章 水质细菌学检验

11.3.1 水中细菌总数的检测
方法和步骤
（1）采集水样。 （2）吸取10 ml水样（河水、污水、游泳池水或港 湾水等），注入盛有90ml无菌水或无菌海水的三 角瓶中，混匀成10-1稀释液，在吸水样前，水样应 彻底搅动均匀。 （3）按10倍稀释法将水样稀释成10-2、10-3、10-4
11.3.1 水中细菌总数的检测
• 其中只有更少的病原菌能经食道进入肠 道引起疾病，为什么？
• 口中溶菌酶；正常胃酸pH3.2。
• 此类水中病原菌若经水传播， 在消化道 滋生导致疾病—肠道传染病
一 伤寒沙门氏菌
• 病症：伤寒或副伤寒。 • 乙级传染病（不用隔离） • 表现：持续发烧，牵涉到
淋巴组织，脾脏肿大，躯 干上出现红斑，胃肠壁溃 疡产生腹泻。
consumers can become seriously ill. Fortunately, public water systems take many steps to ensure that the public has safe, reliable drinking water. One of the most important steps is to regularly test the water for coliform bacteria.
• （1）生理生态
• 种类：痢疾杆菌(痢疾志贺氏菌) 、副痢疾杆菌
大小 痢疾杆菌 副痢疾杆菌 0．4~0．6× 1．0~3．0um 0．5× 1．0~1．5um 革兰氏 染色 阴性 阴性 芽孢、荚 膜、鞭毛 无 无 症状 重症 较轻，通常又称肠炎
（二）致病机理
• 内毒素 • 损害了人体肠道细胞，引 起肠道痉挛、腹泻等症状。
水体中能以单独个体、成对、链状，成簇或成团的形式存
在，此外没有单独的一种培养基或某一环境条件能满足一
个水样中所有细菌的生理要求，所以由此法所得的菌落数
实际上要低于被测水样中真正存在的活细菌的数目。
一 水中细菌总数的检测
细菌总数是指1毫升水样在营养琼脂培养基中， 37℃、24小时培养后所生长的菌落数。 一般规定，1毫升自来水中总菌数不得超过 100 个。
• 间接病原菌测定： 测定水中是否有肠
道正常细菌的存在——若检出，则表明水被
粪便所污染，则有肠道病原菌的可能。
第三节 细菌总数和大肠菌群与生活 饮用水标准
微生物指标 限 值
总大肠菌群（MPN/100mL或CFU/100mL） 不得检出
耐热（粪）大肠菌群（MPN/100mL或CFU/100mL） 不得 检出 大肠埃希氏菌（MPN/100mL或CFU/100mL） 不得检出
方法和步骤
（5）注入彻底融化，然后冷却到45℃的营养琼脂培养基 （用于河水样）或2216E培养基（用于海水、港湾水样） 约15ml，立即旋摇培养血，充分混匀，水平放置至固化 。 （6）接种河水的培养皿，倒置于37℃培养24小时。接种 海水样，港湾水样的培养皿，应倒置后于18—20℃下培养 到长出明显菌落（5天左右）止。
• “极易耐药，预防为主”
三 霍乱弧菌
• 病症：霍乱（ “最可怕的 瘟疫”） • 甲级传染病（法定隔离）
• 重—呕吐、“米汤样”大
便、腹疼和昏迷等，严重 的常常在症状出现后12h内 死亡，死亡率极高。 • 轻—只造成腹泻。 Vibrio cholerae bacteria infect between 100,000 and 300,000 people each year.
二 大肠菌群（Coliform Bacteria Group）和 饮用水
The preferred fecal indicator: • Can be tested for easily • Is of human or other animal origin • Survives as long as, or longer than, pathogens • Is present at densities correlated with fecal contamination • Can be used as a surrogate for many different pathogens • Is appropriate for fresh and saline aqueous environments Fecal indicator bacteria: bacteria used to measure the sanitary quality of water
（二） 蠕虫
• 引起人体疾病的后生动物又叫蠕虫，通过饮水引起疾
病的蠕虫见下表
名称 寄生部位 肠道 吸虫类 血管 虫名 姜片虫 血吸虫 病症 消化不良 腹泻、高烧 水中传染方式
绦虫类
线虫类
肝脏的胆 肝吸虫 肝硬化 道 病人粪便中虫 猪 肉 绦 消化不良 卵 肠道 虫 牛 肉 绦 癫痫 脑 虫 营养不良、急性阑 肠道 蛔虫 尾炎、肠梗阻
731部队—鼠疫杆菌、霍乱弧菌、伤寒 （一）、生理生态 杆菌、炭疽杆菌等等
• 形态：微弯曲杆状
• 大小：0.3~0.6×1.0~5.0um
• 特征：一根较粗的鞭毛 • 传播方式：水及食物，与 病人或带菌动物接触
• 革兰氏染色则为阴性红色
（二）致病机理
• 外毒素
肠道细菌传染病主要由病人带菌的 由口进入人体 释放出外毒素 粪便污染水体而传播。 破坏肠细胞膜 霍乱弧菌 小肠中大量繁殖
一 水中细菌总数的检测
材料和器皿 （1）培养基
①营养琼脂培养基
②2216E培养基：蛋白胨 5.0克; 酵母膏 1.0克; FePO4 0.01
克; 琼脂 18.0克; 陈海水 1000毫升; pH 7.6～7.8。
（2）无菌采样瓶、灭菌移液管、灭菌培养皿，盛有90ml
及 9mL灭菌蒸馏水的锥形瓶和试管。
11.3.1 水中细菌总数的检测
结果与分析 取同一稀释度的平板培养物，依菌落计算原则进行计 算。 （1）菌落计算原则
平皿菌落的计算，可用肉眼观察，必要时用放大镜检查，防止遗
漏，也可借助于菌落计数器计数。对长得相当接近，但不相触的菌 落，应予以—一计数。对链状菌落，应当作为一个菌落来计算。平
皿中若有较大片状菌落时则不宜采用，若片状菌落少于平皿的一半
受纳污水的种类及数量
环境影响因子
例如，受到医院污水、垃圾污染 的，病原菌数量将会很大，受到 农业土壤污染的藻类数量将会猛 增。由于细菌不喜欢阳光、好附 着在固体上，因而水底和岸边的 细菌数量高于水面和河、湖中央 的细菌。
• 提问：地下水饮用时的卫生 程度与什么有关？ • 深度及地表水污染程度
• 由于土壤层层过滤，一般细菌 很少
• 寄生虫种类繁多
传播方式：虫卵通过病人粪便污染水体
（一） 原虫
• 引起人体疾病的原生动物又叫 原虫 ，通过饮水引起疾 病的原虫见下表。
类别 肉足纲 鞭毛纲 纤毛纲 孢子纲 名称 变形虫赤痢 阿米巴 贾第鞭毛虫 袋形虫 孢子虫 病症 阿米巴痢疾 腹泻、营养不良 小袋虫痢疾 腹泻、营养不良 机理 寄生于肠道中，破坏肠细胞粘膜 吸附与肠道外壁，妨碍肠道中的营 养物吸收 寄生于肠道中，破坏肠细胞粘膜 吸附与肠道外壁，妨碍肠道中的营 养物吸收
• 防治饮用水传染病的关键是严防水 源被粪便污染。
• 如何知道饮用水是否受到粪便污
染呢？
• 检测肠道病原菌数量
第三节 细菌总数和大肠菌群与生活 饮用水标准
• 通常不直接检测—— •通常检测大肠菌群（作为肠道正常菌的代表）的存
• 水中存在病原菌的可能性很小，其他各种细菌的种类却很多， 在及数量。 要排除一切细菌而单独直接检出某种病原菌来，在培养分离 技术上较为复杂，需较多的人力和较长的时间。
持续发热、脏器炎症、腹泻
昔日治疗伤寒特效药氯霉素，如今几乎对伤寒无效 ，预防为主
• 37 ℃能耐20天，加热到60℃能耐10min，对 二、痢疾杆菌 1％的石炭酸，可抵抗半小时。
• 传播方式：食物和饮用水 • ——细菌性痢疾(与阿米巴痢疾不同)（乙类传染病），症 状为急性腹泻，通常大便中有血及粘液，某些病例中有发 烧。
③菌落计数的报告，菌落在100以内时，按实有数报告；大于100时
，采用二位有效数字，在二位有效数字后面的数值，以四舍五入方 法计算，为了缩短数字后面的零数也可用10的指数来表示。
二 大肠菌群（Coliform Bacteria Group）和 饮用水
Coliform Bacteria and Drinking Water
• 14世纪、15世纪、16世纪，每
一次伤寒都随战争而爆发，病 死率达40％到50％， 20世纪初， 英国医生赖特研制出伤寒疫苗， 伤寒从此销声匿迹。
伤寒沙门氏菌
（一）生理生态
• 种类：伤寒沙门氏菌、副 伤寒沙门氏菌和乙型副伤 寒沙门氏菌。 • 大小： • 0．5~0．8×1~3．5um • 特征：周生鞭毛，革兰氏 阴性反应，无芽孢和荚膜 在地面普通水中可生存1～3周，井水中可生存约１周，在粪
• 目前大多数城市集中供水水源为江河湖泊，难免 受到各种污染包括病原污染，病原菌的监测与控 制责任重大。
• 提问：海水中 有能引起人体 疾病的细菌 （病原菌）吗？ 为什么？
• 没有；海水中含
盐量很高（一般 3.2~4%）
第二节 水中的病原细菌
• 水中的细菌只有很少的一部分是病原菌 （或称致病菌）
肠细胞大量脱水、电解质失衡 腹泻或休克、死亡
• 霍乱18世纪传入，流行百次，1952年绝迹。
•
这三种致病菌是水中最为常见的致病菌，都属于肠道传染 病菌，其它病原菌如变形杆菌、肠炎耶尔氏菌、沙雷氏菌引 起的症状较轻通常为肠炎
四 寄生虫（了解）
真菌一般通过接触或食物传播，不通过水传播
• 寄生虫——引起疾病的原生动物(原虫）和后生动物 （蠕虫）
时，而另一半中菌落分布又均匀，则可将其菌落数的2倍作为全皿 的数目。算出同一稀释度的平均菌数，供下一步计算时用。
11.3.1 水中细菌总数的检测
（2）计算方法
①首先选择平均菌落数在30～300者进行计算。当只有一个稀释度 的平均菌落数符合此范围时，即可用它作为平均值乘其稀释倍数。 ②若有两个稀释度的平均菌落数都在30—300之间，则应按两者的 比值来决定。若其比例小于2，应报告两者的平均数；若大于2，则
Public water systems are required to deliver safe and
reliable drinking water to their customers 24 hours a day, 365
days a year. If the water supply becomes contaminated,
方法和步骤 （4）根据水样的洁净程度，污染严重者选取10-2、10-3、 10-4稀释度；中等的选取10-1、10-2、10-3稀释度，每个稀 释液分别注入两个培养皿，每皿 1ml。稀释度的选择是本 试验精确度的关键，选择适宜者，平皿上菌落总数介于 30—300个之间。
11.3.1 水中细菌总数的检测
报告其中较小的数字（见表7-例2和例3）。
③如果所有稀释度的平均菌落数均大于300，则应按稀释度最高的 平均菌落数乘以稀释倍数报告之。
11.3.1 水中细菌总数的检测
（2）计算方法 ④若所有稀释度的平均菌落数均小于30，则应按稀释度最低的平均
菌落数乘以稀释倍数报告之。
⑤如果全部稀释度的平均菌落数均不在30—300之间，则以最接近 300或30的平均菌落数乘以稀释倍数报告之。
第十一章 水的卫生细菌学
——与饮用水的健康卫生有关 的细菌学知识
• 内容：饮用水中致病微生物的检验和控制。
第一节 天然饮水中的细菌及其分布
包括雨雪水、河流湖泊水、地下水、海水
• 提问：雨雪中 的细菌数量种 类与什么有关？
直接与空气的洁 净程度 间接由地面的洁 净程度
• 提问：河流、 湖泊中的细菌 数量种类与什 么有关？
菌落总数（CFU/mL） 100
一 水中细菌总数的检测
目的和原理
水中细菌总数往往同水体受有机物污染的程度呈正相
关，它是评价水质污染程度的一个重要指标之一。由于
重金属及某些其它有毒物质对细菌有杀灭或抑制作用， 因此总细菌数少的水样，并不能排除已被这些物质所污 染。
一 水中细菌总数的检测
采用标准平皿法对水样中细菌作计数，这是一种测定水 中好氧的和兼性厌氧的异养细菌密度的方法，由于细菌在
坑及污水中可生存1～2个月。
（二ຫໍສະໝຸດ Baidu致病机理
• 通过内毒素致病 • (内毒素是其细胞壁的成分，化学成分为脂多糖，当细菌死 亡分裂时会释放到环境中。)
必须由口进入人体 伤寒杆菌 小肠淋巴结上繁殖 进入血液和各种脏器
细菌死亡时，内毒素进入血液循环 出热原性物质进入大脑
破化白血球，使白血球释放
热原性物质破化大脑的体温调节机制