林麝致病性沙门氏菌的质粒DNA分析开题报告

目录

一、选题依据 (1)

1、论文题目及研究领域 (1)

2、论文研究的理论意义和应用价值 (1)

3、目前研究的概况和发展趋势 (1)

二、论文研究的内容 (1)

1、论文重点解决的问题 (1)

2、论文拟开展的几个大方面 (1)

3、论文拟得出的主要结论 (1)

三、论文拟采用的研究方法 (1)

1、试验准备工作 (1)

1.1菌株 (2)

1.2药品 (2)

1.3仪器 (2)

1.4试剂配制 (2)

2、试验步骤及方法 (3)

2.1菌种的复苏与纯化 (3)

2.2质粒DNA图谱分析 (3)

2.2.1菌液体培养 (3)

2.2.2质粒DNA的提取 (3)

2.2.3质粒DNA的纯化 (3)

2.2.4质粒DNA的保存 (3)

2.2.5琼脂凝胶电泳 (3)

2.2.5.1制胶 (3)

2.2.5.2加样 (3)

2.2.5.3电泳 (3)

2.3质粒DNA酶切图谱分析 (3)

3、论文进度计划 (4)

四、文献查阅及文献综述 (4)

1、麝 (4)

2、麝类疾病 (4)

3、沙门氏菌 (5)

3.1沙门氏菌的形态、生理生化特性 (5)

3.2沙门氏菌病的种类和临床表现 (5)

3.3沙门氏菌病的耐药性 (5)

4、结束语 (5)

参考文献 (6)

林麝致病性沙门氏菌的质粒ＤＮＡ分析

一、选题依据

1、论文题目及研究领域

（1）论文题目：林麝致病性沙门氏菌的质粒ＤＮＡ分析

（2）研究领域：病原微生物

2、论文研究的理论意义和应用价值

林麝致病性沙门氏菌引起林麝患病的情况与家养动物有很大区别，本项目通过对分离菌株进行质粒DNA图谱和HindⅢ、EcoRⅠ及BamHⅠ的酶切图谱分析比较可以判定该细菌是否演化以及演化的速度快慢，为病原分子流行病学调查奠定了基础，也为疾病的防治提供了技术支持。有助于推动人工养麝的产业化发展，更好的保护濒危动物。

3、目前研究的概况和发展趋势

麝是珍贵的药用和香用动物，麝香在国内外市场供不应求，前景十分广阔。然而由于生态环境的破坏及过度的捕杀，野麝濒临灭绝，麝香资源也濒于枯竭。为了麝资源的可持续利用，我国从50年代起就开始了人工养麝，迄今已基本解决了野麝驯化、人工养殖、活体取香等技术，对麝的生理生态、麝香的分泌机理、麝香成分及药理等相关内容也进行了较为详细的研究。并在分子水平上已有许多初步的研究报告，诸如在麝的核型、线粒体DNA、核DNA进行了一些研究。但对麝的饲养、繁殖、疾病防治及如何提高麝香的产量却研究得较少。目前人工养麝已列入《中国21世纪议程》优先项目计划，也列入了《中国中药现代化产业（四川）基地》的首批项目和西部开发项目，作为国家在21世纪重点发展的产业。要实现人工养麝产业化，解决麝的疾病是其中一个关键环节。自1985 年以来, 张道永等(1997)[1]对麝地方流行性肺炎病原分离鉴定得出继发病原为绿脓杆菌、葡萄球菌、链球菌和肺炎双球菌等。1999－2001年，孙霞等(2001)[2]经采取死亡麝的肺、肝等实质器官和脓汁进行病原的分离和鉴定，分离出了3种病原菌，分别为化脓棒状杆菌（Corynebcterium）、淋巴管隐球菌（Cryptococcus farciminosus）和侵肺拟杆菌（Bacteroides pneumosintes），并通过动物试验证明它们均为化脓病的病原。甘肃省兴隆山马麝场

[3]2004年分别从5头发病马麝鼻腔深处采集病料，进行病原菌的接种培养、分离与鉴定，发现有巴氏杆菌、

绿脓杆菌、金黄色葡萄球菌、肺炎链球菌、肺炎双球菌、大肠杆菌、沙门氏菌等。这些研究主要集中在病原分离鉴定等基础性研究，而对病原分子水平上的研究尚未见报道，与家养动物在流行病学、临床症状、病理变化、血清型鉴定、质粒DNA分析等方面的比较研究也尚未见报道。

二、论文研究的内容

1、论文重点解决的问题

（1）麝致病性沙门氏菌质粒ＤＮＡ凝胶电泳图谱与酶切图谱的区别分析

（2）麝致病性沙门氏菌不同菌株之间质粒ＤＮＡ图谱的比较分析

（3）麝致病性沙门氏菌质粒ＤＮＡ凝胶电泳图谱和酶切图谱同家养动物的比较分析

2、论文拟开展的几个大方面

（1）麝致病性沙门氏菌质粒ＤＮＡ提取

（2）麝致病性沙门氏菌质粒ＤＮＡ凝胶电泳图谱和酶切图谱

（3）麝致病性沙门氏菌质粒ＤＮＡ凝胶电泳图谱和酶切图谱的比较、分析

3、论文拟得出的主要结论

林麝致病性沙门氏菌质粒图谱（质粒ＤＮＡ图谱和酶切图谱），林麝致病性沙门氏菌各菌株之间、与家畜沙门氏菌之间在分子水平上的区别

三、论文拟采用的研究方法

1、试验准备工作

1.1菌株

从四川某养麝场病死麝的化脓灶或实质器官中分离，经生理生化试验鉴定为麝致病性沙门氏菌的菌株15株。由四川农业大学都江堰分校微生物实验室保存。

1.2药品

营养琼脂、蛋白胨、酵母抽提物、NaCl、麦康凯、SucRose 、Tris、HCl、溶菌酶、EDTA-Na2、NaOH、Trtionx-100、RNase A、饱和酚、氯仿、Blowest Agarose、入DNA、入DNA/HindIII 、 HindIII、 EocRI、BamHI（购于成都金线科技有限公司）、硼酸、乙醇、Golden view等。

1.3仪器

离心沉淀器（80-2型，江苏中大仪器厂），离心机（Heraeus贺立氏，美国科俊仪器公司），小型漩涡混合器，低温冷冻柜（BD25-5LT型，青岛海尔特种电冰柜有限公司），自动三重纯水蒸馏器（SZ-97型，上海亚荣生化仪器厂），电泳仪（DYY-2C型，北京市六一仪器厂），电子万用炉（DL1型，北京市光明医疗仪器厂），电泳成像仪(BIO-RADLavoratories-Segrate Italy)，双人单面净化工作台（SW-SJ-2FD 型，苏州净化设备有限公司），水浴振荡器（HZS-H型，哈尔滨市东联电子技术开发有限公司），电子天平（FA2004N型），海尔电冰箱（SC-329型），数显恒温水浴锅（HH-2孔型，金坛市正基仪器有限公司），不锈钢双层式电热蒸气压力消毒器（YX-450A型，上海三申医疗器械有限公司），手提式不锈钢蒸气消毒器（YX-280B型，上海三申医疗器械有限公司），电热恒温培养箱（DH3600A型，天津市泰斯特仪器有限公司），电热恒温鼓风干燥箱（DHG-9425A型，上海一恒科技有限公司），不锈钢电热蒸馏水器（DZ.20型，上海三申医疗器械有限公司）。

1.4试剂配制

1.4.1、麦康凯培养基：

麦康凯 50g Total：1000ml

1.4.2、普通培养基：

营养琼脂45g Total：1000ml

1.4.3、LB肉汤：

蛋白胨10g 酵母抽提物 5g NaCl 10g Total：1000ml

1.4.4、1mol Tris-HCl溶液（PH=8.0，PH=7.5）：

Tris 12.11g 用浓HCl调PH Total：100ml

1.4.5、1mol/L NaCl：

NaCl 5.844g Total：100ml

1.4.6、0.25M EDTA(PH=8.0)：

EDTA-Na2 9.3g ddH2O 用NaOH调PH Total：100ml

1.4.7、0.5M EDTA(PH=8.0)：

EDTA-Na2 18.61g ddH2O 用NaOH调PH Total：100ml

1.4.8、LYsis SUCRose：

SucRose 10.0g 1M Tris(PH=8.0) 2.5ml Total：100ml

1.4.9、Lysozyme(PH≥8.0)：

溶菌酶 100mg LYsis SucRose 10.0ml -20℃保存待用 Total：10ml

1.4.10、LYsis Trition：

ddH2O 84.6ml 1M Tris(PH=8.0) 5.0ml

0.25M EDTA 10.0ml Trition-100 0.4ml Total：100ml

1.4.11、RNA酶-A液：

1mol/L NaCl 1.5ml 1mol/L Tris-HCl(PH=7.5) 1ml Total：100ml

1.4.12、RNaseA：

RNaseA 10mg RNA酶-A液 1ml 100℃水浴2min，-20℃保存 Total：1ml

1.4.13、5×TBE：

Tris 54g 硼酸 27.5g 0.5M EDTA(PH=8.0) 20ml Total:1000ml