执业中药师专业知识二中药鉴定辅导：黄酮类化合物的提取分离
中药中黄酮提取
中药中的黄酮提取是一种具有广泛应用价值的天然药物提取技术。
黄酮类化合物是一类存在于植物中的天然化合物，具有多种生物活性，如抗氧化、抗炎、抗肿瘤等。
因此，从中药中提取黄酮类化合物对于医药、食品等领域具有重要意义。
一、中药中黄酮的种类和分布中药中的黄酮类化合物主要包括黄酮、黄酮醇、异黄酮等。
这些化合物主要分布在植物的根、茎、叶、花和果实中。
一些常见的中药，如甘草、黄芪、柴胡等，都含有丰富的黄酮类化合物。
二、黄酮提取的方法1. 溶剂提取法：溶剂提取法是黄酮提取中最常用的方法之一。
该方法主要是利用黄酮类化合物易溶于有机溶剂的性质，采用乙醇、甲醇等有机溶剂进行提取。
其中，乙醇提取法应用最为广泛，因为乙醇对黄酮类化合物的溶解度较大，同时又具有较为良好的安全性。
2. 超声波辅助提取法：超声波辅助提取法是一种利用超声波破碎植物细胞，加速黄酮类化合物释放的方法。
该方法具有操作简便、提取效率高等优点，但需要使用大量的有机溶剂。
3. 微波辅助提取法：微波辅助提取法是一种利用微波能加速黄酮类化合物提取的方法。
该方法具有提取时间短、提取效率高等优点，但需要使用较为昂贵的设备。
4. 酶解法：酶解法是一种利用酶分解植物细胞壁，加速黄酮类化合物释放的方法。
该方法具有操作条件温和、提取效率高等优点，但需要使用较为昂贵的酶制剂。
三、黄酮提取的应用中药中黄酮的提取技术在医药、食品等领域具有广泛的应用价值。
例如，从银杏叶中提取的黄酮类化合物可以用于治疗心血管疾病；从甘草中提取的黄酮类化合物可以用于治疗肝炎、糖尿病等疾病；从黑芝麻中提取的异黄酮类化合物可以用于治疗骨质疏松等疾病。
此外，黄酮类化合物还具有抗氧化、抗炎等作用，可以作为保健食品的添加剂。
总之，中药中黄酮的提取技术对于医药、食品等领域具有重要意义。
随着科学技术的不断发展，相信未来还会有更多的黄酮类化合物被发现和应用。
黄酮类化合物的提取
一、溶剂提取法：国内外使用最广泛的方法，步骤多、周期长、产率低、产品中有机溶剂易残留。
溶剂系统主要有乙醇，水溶液、丙酮-水溶液、NaOH-水溶液、NaOH-乙醇等。
精提物常在粗提物制备基础上精制，常用液-液提取法、沉淀法和吸附．洗脱法。
以60％丙酮为起始溶剂粗提取，再脱脂、去银杏酚酸等15道工艺制成提取物。
NaOH-水溶液提取效果最好，NaOH-乙醇溶液次之，正丁醇萃取水溶液中银杏黄酮苷，获得最佳萃取条件为萃取5 min温度60℃4次，萃取物中黄酮苷含量为57％。
V水：V正丙醇=1:25最佳。
银杏叶精提物树脂吸附纯化法以石油醚回流提取，再以80％乙醇回流提取，减压浓缩，新型澄清剂沉降，树脂分级吸附，pH值为3—4酸水和酸性25％乙醇洗涤，75％乙醇洗脱，喷雾干燥将银杏叶洗净，于60℃烘干至恒重，粉碎，过50目筛。
称取粉末25 g，置于索氏提取器中恒重，粉碎，过50目筛。
称取粉末25 g，置于索氏提取器中加入60％乙醇至250．0 ml，80℃下回流提取3．0 h，蒸馏回收乙醇，并用活性炭脱色，得银杏叶黄酮提取物。
乙醇浓度为50％一70％时,提取率随浓度增加提高，当浓度70％时提取率达最大。
随水浴温度升高总黄酮提取率快速增加。
当温度80℃时提取率达最大。
提取时间为三小时为佳。
黄酮类化合物（英语：Flavonoid，又称类黄酮[1]）是指基本母核为2-苯基色原酮类化合物，现在则泛指两个具有酚羟基的苯环通过中央三碳原子相互连接的一系列化合物。
他们来自于水果、蔬菜、茶、葡萄酒、种子或是植物根。
虽然他们不被认为是维生素，但是在生物体内的反应里，被认为有营养功能，曾被称为“维生素P”：黄酮类（英语：Flavones）是一类基于2-苯基色原酮-4-酮（2-苯基-1-苯并吡喃-4-酮）骨架的黄酮类化合物，如右图所示。
银杏叶黄酮的研究程序溶剂提取法：国内外使用最广泛的方法，步骤多、周期长、产率低、产品中有机溶剂易残留。
中药提取物中黄酮类化合物的提取方法
中药提取物中黄酮类化合物的提取方法
中药提取物的黄酮类物质虽然交叉共轭系统和苷上糖链的存在有一定的极性，但在水
中较难溶解，而大多具有酚羟基，因此可以用碱性水或碱性稀醇浸出，经酸化后得到黄酮类物质。
常用的碱性溶液是稀氢氧化钠和石灰水。
氢氧化钠水溶液的浸出能力高，但杂质较多，纯化不便。
石灰水可以使一些鞣质或水溶性杂质淀生成钙盐沉淀，有利于浸液纯化，但是浸出效果不如氢氧化钠水溶液效果好，同时有些黄酮类化合物能与钙结合成不溶性物质，不被溶出。
因此，西安富高中药提取物生产厂家一般根据提取物的性质选择不同的碱性溶液。
此外，在应用中药提取碱提酸析法提出黄酮类化合物时，温度和碱度不宜过高，以免黄酮类化合物母核发生裂解。
酸化时调节pH 2—3即可，如酸度过高，黄酮类化合物会与酸生成烊盐而溶解。
花青素的提取
花青素及其苷因以离子形式存在而具有盐的通性，亲水性较大，水溶性较强，故提
取时一般用水、稀酸来提取。
在此过程中，大量的无机盐蛋白质糖类化合物及其他水溶性成分也一起被提取出来，去除这些杂质成为必要。
一般用大孔树脂将杂质去除，即可得到总花青素。
中药执业药师中药学专业知识(二)25
[模拟] 中药执业药师中药学专业知识(二)25最佳选择题 (每题的备选答案中只有一个最佳答案。
)第1题：利用物质在两相溶剂中的分配比不同进行分离的方法是A.结晶或重结晶B.溶剂沉淀法C.液—液萃取D.盐析法E.透析法参考答案：C本题考查中药有效成分的分离方法。
利用物质在两相溶剂中的分配比不同进行分离的方法是液—液萃取法。
结晶或重结晶是利用温度不同引起溶解度的改变进行分离；溶剂沉淀法和盐析法是利用溶解度或溶剂极性的改变进行分离；透析法是利用分子大小的差异进行分离的方法。
故正确答案为C。
第2题：根据苷键原子的不同，苷类酸水解的先后顺序的是A.N-苷＞C-苷＞S-苷＞O-苷B.C-苷＞O-苷＞S-苷＞N-苷C.N-苷＞O-苷＞S-苷＞C-苷D.S-苷＞O-苷＞N-苷＞C-苷E.O-苷＞S-苷＞N-苷＞C-苷参考答案：C本题考查苷的酸水解规律。
按照苷键原子的不同，酸水解的难易顺序为：N-苷＞O-苷＞S-苷＞C-苷，即最容易水解的为N-苷，最难水解的为C-苷。
故正确答案为C。
第3题：可与异羟肟酸铁反应生成红色的是A.羟基蒽醌类B.查耳酮类C.香豆素类D.生物碱E.黄酮类参考答案：C本题考查香豆素的显色反应。
香豆素因具有内酯环可以与异羟肟酸铁反应，结果生成红色络合物。
故正确答案为C。
第4题：一般不发生盐酸—镁粉反应的是A.二氢黄酮醇B.异黄酮C.黄酮醇D.二氢黄酮E.黄酮参考答案：B本题考查黄酮的显色反应。
盐酸—镁粉反应可以用来鉴别黄酮、黄酮醇、二氢黄酮、二氢黄酮醇，反应后溶液呈橙红至紫红色。
但查尔酮、橙酮、儿茶素类则无该显色反应。
异黄酮类除少数例外，也不显色。
故正确答案为B。
第5题：生物碱薄层色谱常用显色剂是A.Molish试剂B.硅钨酸试剂C.改良碘化铋钾D.雷氏铵盐E.饱和苦味酸试剂参考答案：C本题考查生物碱的色谱检识。
生物碱类薄层色谱最常用的显色剂是改良碘化铋钾，阳性反应为橘红色斑点。
故正确答案为C。
黄酮类化合物的提取与分离工艺研究
黄酮类化合物的提取与分离工艺研究黄酮类化合物是一类具有丰富生物活性的植物次生代谢产物，被广泛应用于医药、食品和化妆品等领域。
本文将围绕黄酮类化合物的提取与分离工艺展开探讨。
一、黄酮类化合物的概述黄酮类化合物是一类含有两个苯环的多羟基化合物，具有较强的抗氧化作用和抗炎作用。
它们被广泛存在于许多植物中，如花朵、果实、根茎等部位。
由于其生物活性的独特性，研究人员对黄酮类化合物的提取与分离工艺进行了深入研究。
二、提取工艺的研究1. 溶剂提取法溶剂提取法是目前较为常用的提取黄酮类化合物的方法之一。
该方法利用溶剂对植物样品进行浸提，使黄酮类化合物溶于溶剂中，然后通过浓缩和干燥等步骤得到目标产物。
常用的溶剂有乙酸乙酯、甲醇等。
此方法对设备要求较低，但可能导致有机溶剂残留和产物的破坏。
2. 超声波辅助提取法超声波辅助提取法是一种改进的提取方法，通过超声波的作用，可以增加植物样品与提取溶剂的接触面积和渗透速度，加速黄酮类化合物的溶解和迁移。
该方法提取效果较好，但对设备要求较高，操作难度也较大。
三、分离工艺的研究1. 柱层析法柱层析法是一种常用的分离黄酮类化合物的方法。
该方法利用固定相和流动相之间的相互作用，根据黄酮类化合物的不同物理化学性质进行分离。
常用的固定相有硅胶柱、C18柱等。
该方法分离效果较好，但操作较为繁琐。
2. 薄层层析法薄层层析法是一种简便、快速的分离方法。
该方法将样品溶液涂布在薄层层析板上，通过固定相对黄酮类化合物进行分离，然后用显色剂喷洒在薄层层析板上，可通过色谱带的出现判断黄酮类化合物的位置。
该方法缺点是分离效果较差，但操作简便。
四、工艺优化与产物应用在黄酮类化合物的提取与分离工艺研究中，工艺的优化是十分重要的。
通过对溶剂种类、提取温度、提取时间等参数的不断调整，可以提高黄酮类化合物的提取率和纯度。
此外，对于产物的应用也是研究的重点，黄酮类化合物广泛应用于医药领域的抗炎药物、抗氧化剂和化妆品中的护肤成分等方面。
黄酮类化合物的提取与分离
滤液 浓缩至小体积， 冰箱放置 黄色结晶 乙醇重结晶
沉淀(PbS)
同铅盐(A)法进行复分解 晶块 溶于少量乙醇中，放置 黄色结晶 乙醇重结晶 浅黄色针晶(graveobioside B) (II)
浅黄色蔟状结晶(graveobioside A)(I)
有邻二酚羟基的黄酮可与硼酸络合，
生成物易溶于水，可与不具上述结 构的黄酮类化合物相互分离。
举例：从芹菜［Apium graveolens L.］种子 中分离芹菜双糖苷（graveobiodide） A及B
OH RO O OH RO O OH OCH3
OH
O
R=芹菜糖
OH
O
I（具有邻二酚羟基）
II（无邻二酚羟基）
原料（种子） 石油醚浸泡脱脂 脱脂药料 乙醇提取 提取液 减压浓缩后，用醚处理杂质 醚不溶物 溶于热水中，煮沸，逐滴加入中性醋酸铅的热水溶液， 直至不再析出沉淀为止，乘热过滤
棕色沉淀(A) 悬浮乙醇中，通H2S，过滤
滤液 加入碱式醋酸铅的热水溶液至沉淀完全，过滤 黄色铅盐沉淀(B)
第三节 黄酮类化合物的提取与分离
一、提取 黄酮苷类以及极性稍大的苷元（如 羟基黄酮、双黄酮等），一般可用 丙酮、醋酸乙酯、乙醇提取。一些 多糖苷类可用沸水提取。在提取花 青素类化合物时，可加入少量酸 （0.1%盐酸，如果是黄酮苷应当慎 用，避免苷键发生水解）。
大多数黄酮苷元宜用用氯仿、乙醚、
醋酸乙酯等中极性溶剂提取，而对 多甲氧基黄酮类游离苷元，甚至可 用苯等低极性溶剂进行提取。
酸 性 :7 ， 4- 二 OH 溶 于 5%NaHCO3 液 ) 7-或4-OH （5%Na2CO3液） 一般OH（0.2%NaOH） 5-OH （4% NaOH液）
34532黄酮类化合物的分离
O
OCH3
＞
OH O
OH O
橙皮查耳酮
橙皮素
OH OCH3
黄酮类化合物的提取分离
4）不同类型的黄酮类化合物，先后出柱顺序： 异黄酮＞二氢黄酮醇＞黄酮＞黄酮醇
5）各种溶剂在聚酰胺柱上的洗脱能力由弱至强的顺序： 水＜甲醇或乙醇＜丙酮＜稀氢氧化钠水溶液＜甲酰胺＜二甲基甲酰胺
聚酰胺色谱法总结
吸附规律：与酚羟基的数目、位置及溶剂介质有关。 与溶剂介质的关系： 吸附力：水﹥甲醇乙醇（浓度由低到高）﹥碱性溶剂 洗脱规律： 与吸附规律正好相反，即吸附力越强，越难洗脱
例：
HO
O
OH
HO
OH O
OH
OH OH O
OH OH O
山柰酚
桑色素
黄酮类化合物的提取分离
2）当分子中羟基数目相同时，吸附力与形成氢键的位置有关。 例：
HO
O
HO
O
OH O
A
OHOΒιβλιοθήκη OHBO H
O CH3
黄酮类化合物的提取分离
3）分子内芳香化程度越高，共轭双键越多，则吸附越强。
例：
OH
HO
OH
HO
1 pH梯度萃取法
总游离黄酮的乙醚液
依次以5%NaHCO3 、5%NaCO3、 0.2%NaOH、4%NaOH
5%NaHCO3 酸化
7，4`-二OH
5%NaCO3 酸化
7-或4`-OH
0.2%NaOH 酸化
一般酚OH
4%NaOH 酸化
5-OH
2 聚酰胺柱色谱（分离黄酮最理想的吸附剂）
分离原理：氢键吸附
黄酮类化合物的提取分离
二、 黄酮类化合物的分离
黄酮类化合物提取分离.
➢乙醇或甲醇 ➢高浓度 苷元 ➢60％ 苷类。 ➢提取的次数： 2～4次。 ➢提取方法：加热 回流法或冷浸法。
➢仅用于提取苷类 ➢成本低，无污染， 适合工业化生产 ➢提取出的杂质较 多
➢用极性由小到大 的溶剂依次将同样 极性顺序的黄酮类 分别提取出来
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分离——pH梯度萃取法
原理
利用黄酮苷元中酚OH数目及位置不同, 其酸性强弱不 同的性质来分离。
酸性
7, 4'-OH > 7-或4'-OH > 一般酚OH > 3-OH, 5-OH
溶于5%NaHCO3 溶于5%Na2CO3 溶于不同浓度的NaOH中
方法
总黄酮溶于Et2O，再用5%NaHCO3, 5%Na2CO3, 0.2% NaOH, 4%NaOH依次萃取(碱性由弱强)，达到分离目的。 Page 4
黄酮类化合物 提取分离
Page 1
提取——碱溶酸沉法
➢可用碱性水溶液（如碳酸钠、氢氧化钠、氢氧化 钙等水溶液）或碱性稀醇溶液（如50％乙醇）浸出。 ➢用碱性溶剂提取时，所用的碱浓度不宜过高，以 免在强碱下加热时破坏黄酮类化合物结构。 ➢ 当有邻二酚羟基存在时，应加硼酸保护。
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提取——溶剂提取法
例： 查耳酮 > 二氢黄酮
➢当苷元相同时，被吸附的强弱顺序为： 苷元>单糖苷 >二糖苷 >三糖苷
例：在聚酰胺薄层上，吸附力 槲皮素>芸香苷（芦丁）
➢ 与介质的关系：吸附力 水（中）> 甲醇、乙醇（浓度由 低到高）> 碱性溶剂
相反，溶剂在聚酰胺柱上对黄酮类化合物洗脱能力顺序为：水（中） ＜甲醇、乙醇（浓度由低到高）＜碱性溶剂
【执业药师考试】黄酮的提取与分离、含黄酮类化合物的中药实例、鉴别与结构鉴定
【score:1 分】 【A】 【此项为本题正确答案】 【B】 【C】 【D】 【E】
本题思路： 19.从下列中药中分离黄酮类成分，可采用氧化铝吸 附柱层析的是 A．黄芩 B．银杏叶 C．葛根 D．槐米 E．陈皮
本题思路： 2.用碱溶酸沉法从花、果实类药材中提取黄酮类化合 物，碱液宜选用 A．5%NaHCO3 B．5%Na2CO3 C．5%NaOH D．10%NaOH E．饱和石灰水
【score:1 分】 【A】 【B】 【C】 【D】 【E】 【此项为本题正确答案】
本题思路： 3.从黄芩中提取黄芩苷多采用的提取方法是 A．水浸泡酸沉淀 B．碱水提取酸沉淀 C．甲醇提取 酸沉淀 D．乙醇提取酸沉淀 E．丙酮提取酸沉淀
黄酮的提取与分离、含黄酮类化合物的中药实例、鉴 别与结构鉴定
(总分：111 分，做题时间：90 分钟) 一、最佳选择题(总题数：63，score:63 分) 1.黄酮苷类化合物不能采用的提取方法是 A．酸提碱沉 B．碱提酸沉 C．沸水提取 D．乙醇提取 E．甲醇提取
【score:1 分】 【A】 【此项为本题正确答案】 【B】 【C】 【D】 【E】
【score:1 分】 【A】 【B】 【C】 【D】 【E】 【此项为本题正确答案】
本题思路： 12.若仅需提取黄酮多糖苷，最常用的提取溶剂是 A．沸水 B．酸水 C．乙醇 D．醋酸乙酯 E．氯仿
【score:1 分】 【A】 【此项为本题正确答案】 【B】 【C】 【D】 【E】
本题思路：
13.从总黄酮乙醇浸膏中萃取黄酮单糖苷，用 A．石油醚 B．醋酸乙酯 C．氯仿 D．乙醚 E．苯
黄酮类化合物的提取分离方法
抽滤，少量水洗涤沉淀
滤液沉淀（粗品芦丁）
（4）大孔吸附树脂分离法：川草乌、三七总皂甙
二.槐米中芸香苷（芦丁）的提取方法有哪些？（设计）
方法：渗漉法、煎煮法、回流提取法
（1）槐米粗粉20g
加约120ml的0.4%硼砂水溶液，
搅拌下加入石灰乳至pH8-9，
并保持该pH值煮沸20分钟，四层纱布趁热滤过，反复2次
提取液药渣
浓盐酸调pH2~3
搅拌，静置放冷，滤过。
一.黄酮类化合物的提取分离方法
1.1 按所用溶剂不同分类
(1)热水提取法(以水作溶剂)---------- 灵芝多糖热水提取
(2)有机溶剂萃取法-----------生产茶多酚工业试验、乳酸
(3)碱提取酸沉淀法.---------- 橙皮苷、黄芩苷、芦丁等都可用此法提取.
2.按提取条件不同分类
(1)回流提取法----------从苦楝树皮中提取苦楝素
滤液沉淀
热水或乙醇重结晶
芸香苷结晶
碱溶酸沉法提取分离槐米中芸香苷的流程图
（2）取30g槐花米，置于250mL烧杯中，加入0.4%硼砂沸水200ml，在搅拌下缓缓加入石灰乳调节pH=8渣再加水，同上法再煎一次，趁热抽滤。合并滤液，在60～70℃下用浓盐酸调至pH=4—5，静置。
(2)索式提取法----------柑橘属类黄酮
(3)微波辅助提取法----------采用微波辅助法从黎蒿中提取黄酮类化合物
(4)超声提取法----------提取山楂中黄酮类物质
(5)超滤法----------黄岑甙
(6)酶提取法----------采用纤维素酶对红景天进行酶解处理,可提高黄酮类物质的浸出率
(7)超临界流体提取法----------竹叶黄酮、从干姜片中提取挥发油
黄酮类化合物的分离方法
黄酮类化合物的分离方法黄酮类化合物是植物体中的重要类群，其具有多种生理活性，在人类健康等方面具有重要的作用。
黄酮类化合物的分离方法在药物的合成和有效药物的研究中起着重要的作用。
本文重点介绍了黄酮类化合物的分离方法，包括色谱法、抽提法、萃取法、离子交换法、沉淀法和凝胶离心法等。
色谱法是分离黄酮类化合物的常用方法，其基本原理为在形成有机混合物的情况下，根据各组分在特定介质中移动的速度不同而实现分离。
通常采用液相色谱法，其常用介质为甲醇-水混合溶液，也可以使用丙酮-水混合溶液、乙醇-水混合溶液等。
黄酮类化合物可以通过梯度或回收色谱等方法分离分析，并可以采用多种检测方法，包括可见分光光度法、紫外分光光度法、荧光分光光度法和电化学还原法等。
抽提法是指采用溶剂抽取的方法来分离黄酮类物质，其核心是溶剂对黄酮类物质的溶解度的选择。
一般来说，酸性的黄酮类物质更容易被溴溶液、有机碱溶液抽出，碱性黄酮类物质则更容易被醇类溶剂抽出。
除此之外，使用硅胶纤维色谱也是一种抽取法，即把黄酮类物质从溶液中抽出，然后使用硅胶纤维柱进行纯化。
萃取法是一种多相技术，即在混合溶液中形成两种以上不相容的液相，利用其互相排斥的特性来分离组分。
和抽提法一样，酸性黄酮类物质更容易被碱性溶剂抽取，碱性黄酮类物质更容易被酸性溶剂抽取。
离子交换法是分离和纯化黄酮类物质的一种有效方法，其基本原理是利用有机固定相和离子交换剂上的活性基团之间的匹配作用，将黄酮类物质从混合物中分离出来。
常见的离子交换剂有苯甲醇、乙酸乙酯、甲醇等，活性基团有羧基、酰胺基、氨基和木酚等。
沉淀法是一种基于物质的溶解度差异的方法，可以通过调节溶液的pH值和温度，使黄酮类物质以沉淀形式从混合溶液中分离出来。
一般来说，碱性黄酮类物质在酸性溶液中沉淀，酸性黄酮类物质在碱性溶液中沉淀。
凝胶离心法是一种常用的分离黄酮类物质的有效方法，即在分子量较小的情况下使用凝胶离心柱，将黄酮类物质从混合溶液中分离出来。
黄酮类化合物的分离方法
黄酮类化合物的分离方法黄酮类化合物是植物中丰富的一类复合物，参与着植物的成长和繁殖，对人体有重要的作用和意义。
因其多种作用而深受人们的重视，尤其是在医药、轻工、农业和烹饪等领域。
提取和分离黄酮类化合物是研究它们分子特性和生理活性的重要基础。
为此，提出了层析分离、液相色谱分离、分子膜分离及无机装配剂等分离方法。
下面将对这些黄酮类化合物的分离方法进行简要分析。
一、层析分离通过将溶液中的复合物用各种不同的溶剂溶解，然后将溶解的调和液分成各个层，并在每一层中有不同的溶剂分离，这些溶剂可以使复合物分离出来，就叫层析分离。
它以底物组分（溶解液）、溶剂介质（萃取液）和量等有机溶剂进行组分，以及通过水合溶液的循环组合成不同层析液，然后经沉淀和析出的步骤，从而获得不同的化合物。
二、液相色谱液相色谱法分离是一种常用的分子结构非常精确的分离方法，它具有效率高、分离比武高的优点。
它的原理是利用液相色谱仪将物质加入到色谱柱，然后利用沿色谱柱流动，并在相应位置发生吸附现象，根据靶物发生吸附驻留时间的不同快速分离，从而获得不同的黄酮类化合物。
它具有灵敏度高、分辨率高、时间短等优点，是黄酮类化合物分离与研究的常用方法。
三、分子膜分离分子膜分离是实践中最经久耐用的一种分离方法，它可以精确的将靶黄酮类化合物从混合溶液中分离出来，包括气体、液体、固体等不同形式的物质。
它利用了膜的分子筛选特性，根据物质的分子大小和性质，通过穿膜、吸附、屏蔽的不同物理作用和化学作用，只选择某些目标分子通过膜进入新的空间，从而对靶黄酮类化合物进行准确的分离。
选择分子膜分离法可以降低分离操作温度，避免化合物被破坏，以较高的精度获得分离产物。
四、无机装配剂无机装配剂是一种新型的分离抽提技术，在研究黄酮类化合物的分离与提取方面具有较强的分离效能。
通过利用装配剂对黄酮类化合物进行抽提，使成份与其无关的杂质从系统中分离出来，精确达到分离提取的目的。
装配剂分离黄酮类化合物时，抽提产物具有清晰的化学性质，释放产物不受微量有机物影响，可提高设备使用率，降低运输量，有利于保护环境。
黄酮的提取与分离
四、含黄酮类化合物中药实例
1.黄芩 ① 黄芩苷是黄芩的主要有效成分,具有抗菌、 消炎作用。尚有降转氨酶的作用。 ② 黄芩变绿过程
RO HO HO O O HO HO HO O O [O] O O H O O O
黄芩苷
黄芩素（黄色）
绿色
2. 槐花米
① 芦丁是槐花米的有效成分； ② 芦丁分子中含有较多酚羟基，显示酸性而
1、应用范围：适合于检识各种类型黄酮类化合
物，包括苷与苷元。
2、双向纸色谱是检识植物粗提物中黄酮类化合
物存在的最好方法之一。
① 第一向通常采用一种“醇性”溶剂展开，
如n-BuOH-HOAc-H2O(4:1:5 上层 BAW)、
n-BuOH-HOAc-H2O(3:1:1 ，TBA)与水饱和
的n-BuOH等；
3、异黄酮、二氢黄酮及二氢黄酮醇
① 这三类化合物中，除有由A-环苯甲酰系统 引起的带Ⅱ吸收外，因B环不与吡喃酮环上的 羰基共轭（或共轭很弱），故带Ⅰ很弱，常在 主峰的长波方向处有一肩峰。 ② 根据主峰的位置，可以区别异黄酮与二氢黄
酮及二氢黄酮醇类，前者在245～270 nm ，
后两者在270～295nm 。
⑤ 水层中含有较纯的黄酮苷类。
（四）聚酰胺吸附法
1、 聚酰胺对于黄酮类化合物是比较理想的 吸附剂
2、洗脱剂：不同浓度的乙醇、丙酮以及碱水
3、分离效果：粗分
例如：银杏叶黄酮的提取
（五）超临界流体萃取法
1、以CO2为单一流体萃取极性较低的游离黄酮
或黄酮的碳苷类；
2、在CO2中加入水、乙醇等作为夹带剂，萃取
酸性 7，4′-二OH 7-或4′-OH 一般OH 5-OH 溶解性 5%NaHCO3液 5%Na2CO3液 0.2%NaOH液 4%NaOH液
中药化学3.2 黄酮类化学成分的提取分离技术
二、分离
分离依据：极性差异、酸性强弱、 分子大小和特殊结构。 （一）系统溶剂萃取法： 总浸膏加水分散先用乙醚萃取苷元， 再用乙酸乙酯萃取苷，最后用正丁醇萃 取极性较大的苷。
（二）PH梯度萃取法： 用不同强度的碱萃取分离（ NaHCO3; Na2CO3; NaOH）。
（三）柱层析法
1、聚酰胺柱层析 （1）吸附原理： 聚酰胺分子中酰胺基与黄酮类化合物分 子上的酚羟基形成氢键缔合而产生吸附作用。
大豆苷 R=glc
四、查尔酮和二氢查尔酮
4
,
3
,
2 1
2
3 4
,
OH
1 6 5
查尔酮
5
,
6
,
, O
HO
OH OH
HO
OH OH
HO glc O O glc O O
红花苷
梨根苷
HO
O OH HO OH OH
O O
补骨脂甲素
补骨脂乙素
查尔酮为苯甲醛缩苯乙酮类化合物， 2,- 羟基查尔酮是二氢黄酮的异构体，二者 可以相互转化。 例如：红花在不同时期花的颜色不同，原因 是所含主要成分不同： 初期：新红花苷及微量的红花苷（淡黄色） 中期：红花苷（深黄色） 后期：醌式红花苷（红色或深红色）
二、黄酮的检识
（一）理化检识
HCl-Mg：黄酮（醇）、二氢黄酮（醇）---红色
四氢硼钠：二氢黄酮（醇）---红~紫红色
醋酸镁：二氢黄酮（醇） ---天蓝色荧光
锆盐-枸橼酸：区别3-OH、5-OH黄酮 ---黄色减退
氨性氯化锶：邻二酚羟基黄酮 ---绿~棕~黑色
碱性试剂：查尔酮 、橙酮 ---红~紫红色
原因： • 平面型：分子中存在着交叉共轭体系，包括 黄酮醇、黄酮、查尔酮。分子排列紧密、分 子间引力较大，不利于水分子进入。 • 非平面型：二氢黄酮、二氢黄酮醇（分子中 吡喃环已被氢化，成为半椅式结构） 、异黄 酮（ B环受 4位羰基的立体阻碍）。分子排列 不紧密、分子间引力降低，有利于水分子进 入。 • 离子型：花色素类虽然是平面型结构，但以 离子形式存在，具有盐的通性，因此水溶性 好。
2017年执业药师中药师复习：黄酮类化合物的提取分离
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一、提取黄酮苷和极性较大的苷元：甲醇，乙醇，甲醇-水(1：1)，丙酮，乙酸乙酯。
多糖苷：沸水花色苷：0.1%盐酸进行提取。
苷元：氯仿，乙醚，乙酸乙酯。
注意：苷类提取防止酶解。
(一)溶剂萃取法：自浸膏中先用乙醚萃取苷元，再用乙酸乙酯反复萃取苷，最后用正丁醇萃取极性较大的苷。
(二)碱提酸沉法(1) 常用碱水：石灰水，Na2CO3，稀NaOH，碱性稀醇。
酸沉：盐酸注意：酸碱浓度不宜过高。
碱性过强，破坏黄酮母核;酸性过强，生成佯盐，影响产率。
石灰水：可除去鞣质，果胶，粘液质，有利于纯化。
但浸出效果不及NaOH ，且有些黄酮可与钙结合成不溶性沉淀。
稀NaOH：浸出效率高，但杂质多。
二、分离方法分离的基本依据：极性差异、酸性强弱、分子大小和特殊结构。
(一)柱色谱法1、硅胶柱色谱法适于分离异黄酮，二氢黄酮(醇)和高度甲基化或乙酰化的黄酮及黄酮醇类。
分离苷元时：氯仿-甲醇混合溶剂洗脱。
分离苷时：氯仿-甲醇-水或乙酸乙酯-丙酮-水2、聚酰胺柱色谱适于黄酮类化合物的分离。
规律：A：苷元相同时，以含水移动相洗脱，被吸附的强弱顺序为：苷元>单糖苷>双糖苷>双糖键苷。
B：与酚羟基的数目有关，数目越多，吸附力越强。
与酚羟基的位置有关，如果酚羟基所处的位置易形成分子内氢键，则吸附力减弱。
查耳酮>二氢黄酮，黄酮>二氢黄酮C：不同类型黄酮类化合物，被吸附的强弱顺序为：黄酮醇>黄酮>二氢黄酮>异黄酮。
D：分子内芳香化程度越高，共轭双键越多，则吸附力越强。
3、葡聚糖凝胶色谱法凝胶类型：Ssephadex LH-20和Sephadex G两种类型的凝胶。
分离苷元时：利用吸附作用，游离酚羟基数目越多，则吸附力越强，越难洗脱。
分离苷时：主要靠分子筛，洗脱时按苷分子量由大到小的顺序依次被洗脱出柱体。
黄酮类化合物的提取分离
2． 碱水提酸沉淀法
适用于含酚羟基的化合物，如槐米中芦丁的提取。 注意事项： ①酸碱度不宜过大
②邻二酚羟基的保护：碱性条件下，邻二酚羟基易 被氧化，加硼砂保护
③石灰乳的加入可除去果胶、粘液等水溶性酸性杂 质
3． 炭粉吸附法
• 适用于苷类的精制工作。
• 植物的甲醇提取液加活性炭至吸附完全，过滤 得吸附苷的活性炭粉末。
２）硅胶层析
①对酚羟基多的黄酮类，如多羟基黄酮及 其苷类，硅胶减活性使用
②对酚羟基少的黄酮类，如甲基化、乙酰 化黄酮及二氢黄酮、异黄酮，则无须减 活性。
2. 利用分子大小不同，用葡聚糖凝 子筛分离
胶分
主要用两种型号的凝胶 Sephadex-G和Sephadex-LH20 分离游离黄酮主要是吸附作用，极性小大洗脱。 分离黄酮苷类，主要是分子筛作用，分子大小洗脱。 总的洗脱顺序：糖多的苷 糖少的苷 游离苷元（极性 小大） 常用洗脱剂：①碱性水溶液，含盐水溶液 ②醇及含水醇 ③含水丙酮，甲醇－氯仿
三、分离
1. 极性大小不同，利用吸附或分配原理进行分离
常用吸附剂有聚酰胺、硅胶、纤维素粉。 １）聚酰胺层析：主要有聚己内酰胺型 (Perlon)、六次甲基 二胺已二酸盐(Nylon)型、聚乙烯吡咯烷酮(Polyclar)型三种。 其原理是酰胺羰基与黄酮酚羟基形成氢键缔合而吸附，吸 附能力与酚羟基多少、位置及氢键缔合力大小有关。
各种溶剂在聚酰胺柱上洗脱能力由弱至强依次为：
水，甲醇，丙酮，氢氧化钠水溶液，甲酰胺，二甲基甲酰 胺，脲素水溶液。
黄酮类化合物从聚酰胺柱洗脱时有下列规律：
①苷元相同，洗脱先后顺序一般为： 三糖苷双糖苷单糖苷苷元 ②母核上增加羟基，洗脱速度相应减慢 羟基位置的影响：具有邻位羟基黄酮 具有对 位（或间位）羟基黄酮 ③不同类型的黄酮类化合物，先后流出顺序一般 是： 异黄酮二氢黄酮醇黄酮黄酮醇 ④分子中芳香核、共轭双键多者吸附力强，故查 耳酮往往较相应的二氢黄酮难于洗脱。
黄酮类化合物的提取和分离
黄色铅盐沉淀
加20g NaHCO3 饱和水溶液,搅拌1hr,静置,过滤
滤液
生成 PbCO3
6mol/LHCl调pH 5.3
n-BuOH提取(500ml×5)
目的： 除去Pb，生成
n-BuOH提取物
水层
凝胶色谱法
(4.26g, 粗黄酮类)
凝胶层析
凝胶过滤(T SKgel-HW-40)
PbCO3
Fr. A-H
水提液
聚酰胺层析 1)水洗 2)Et O H 洗
目的:去除鞣质等,减少杂质
混合成分可增溶:增去加除不鞣溶质于等 水的成分在水中的溶 减解少度杂质
水洗液 (无机盐)
Et O H 液 回收Et O H
总黄酮 Et2O回流
Et2O液 放置,析晶
混合物
溶于Et O A c中 用饱和硼酸 水溶液振摇
硼酸水层
HCl 沉淀
极性大吸附能力强 e g ： A 苷元 B 二糖苷 C 单糖苷
Rf：A > C > B
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黄酮类化合物的提取和分离 聚酰胺柱色谱
原理：氢键吸附（作用） 洗脱规律：（先—后）
母核上羟基增加，洗脱顺序递减 羟基数目相同时，有缔合羟基 > 无缔合羟基 苷元相同：三糖苷 > 双糖苷 > 单糖苷 > 苷元 不同类型黄酮类化合物的洗脱先后顺序为：
提取：
苷元：极性小的溶剂，如氯仿、乙醚、乙酸乙酯等
回流提取
苷及极性大的苷元：
用丙酮、乙酸乙酯、乙醇、甲醇、醇-水加热提取 极性稍大的甙元一般指：羟基黄酮、双黄酮、 橙酮、查
尔酮
多糖苷类：一般用沸水提取
3
黄酮类化合物的提取和分离
粗分
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黄酮苷和极性较大的苷元：甲醇，乙醇，甲醇-水(1：1)，丙酮，乙酸乙酯。
多糖苷：沸水
花色苷：0.1%盐酸进行提取。
苷元：氯仿，乙醚，乙酸乙酯。
注意：苷类提取防止酶解。
(一)溶剂萃取法：自浸膏中先用乙醚萃取苷元，再用乙酸乙酯反复萃取苷，最后用正丁醇萃取极性较大的苷。
(二)碱提酸沉法
(1) 常用碱水：石灰水，Na2CO3，稀NaOH，碱性稀醇。
酸沉：盐酸
注意：酸碱浓度不宜过高。
碱性过强，破坏黄酮母核;酸性过强，生成佯盐，影响产率。
石灰水：可除去鞣质，果胶，粘液质，有利于纯化。
但浸出效果不及NaOH ，且有些黄酮可与钙结合成不溶性沉淀。
稀NaOH：浸出效率高，但杂质多。
二、分离方法
分离的基本依据：
极性差异、酸性强弱、分子大小和特殊结构。
(一)柱色谱法
1、硅胶柱色谱法
适于分离异黄酮，二氢黄酮(醇)和高度甲基化或乙酰化的黄酮及黄酮醇类。
分离苷元时：氯仿-甲醇混合溶剂洗脱。
分离苷时：氯仿-甲醇-水或乙酸乙酯-丙酮-水
2、聚酰胺柱色谱
适于黄酮类化合物的分离。
规律： 1 2 下页。