GB 4789.4-2010食品微生物学检验 沙门氏菌检验
沙门氏菌检验详细流程图
沙门菌种和亚种的鉴别
肠道沙门菌
项目
Ⅰ
Ⅱ
Ⅲ
Ⅳ
卫矛醇
+
+
-
-
山梨醇
+
+
+
+
水杨苷
-
-
-
+
ONPG
-
-
+
-
丙二酸盐
-
+
+
-
KCN
-
-
-
+
注:+为阳性 - 为阴性
邦戈尔沙门菌
Ⅵ
Ⅴ
-
+
-
+
-
-
-
+
-
ห้องสมุดไป่ตู้
-
-
+
沙门氏菌的血清分型
迄今为止沙门氏菌有
57个O抗原 116个H抗原 Vi抗原
1 mL+SC10 mL 36 ℃±1 ℃,18 h~24 h
BS
XLD(或HE、科玛嘉显色培养基)
36 ℃±1 ℃,40 h~48 h
36 ℃±1 ℃,18 h~24 h
挑取可疑菌落
TSI,赖氨酸,NA, 靛基质, 尿素 (pH 7.2), KCN
商 品 化 生 化 H2S+靛基质- 尿素- H2S+靛基质+ 尿 H2S-靛基质-尿素 反应结果与左
沙门氏菌检验
初步鉴定——赖氨酸
v 赖氨酸脱羧酶试验培养基:
§ 制备时在试管上部加入液体 石蜡封盖,阻止空气的氧化 作用
§ 阳性反应使氨基酸脱羧产碱 显示为紫色,培养基不改变 颜色,而阴性发酵葡萄糖产 酸培养基呈黄色
§ 沙门氏菌多数为(+)
空白;阳性(紫色);阴性(黄色)
v 需氧或兼性厌氧 v 在10℃~43℃内均能生长,35℃~43℃最适,一般沙门氏
菌在40℃~43℃培养能提高阳性检出率,而伤寒沙门氏菌 在37℃培养阳性检出率最高 v 最适pH6.8~7.8
生化特性
v 沙门氏菌生化特性比较复杂 v 常见的沙门氏菌均属于第I亚属 v 常见的典型特性如下
§ 不分解乳糖(亚利桑那菌除外) § 分解葡萄糖产酸产气(伤寒沙门氏菌产酸不产气) § 多数产H2S,能利用枸橼酸盐,能还原硝酸盐为亚硝酸盐 § 多数不产生靛基质(吲哚),不液化明胶,不分解尿素,不
v 亚利桑那菌因发酵乳糖而 呈黄色,带或不带黑色中 心
平板分离——科玛嘉显色平板
初步鉴定——三糖铁(TSI)
v TSI原理:
§ 部分细菌可分解含硫氨基酸(胱氨酸、半胱氨酸等)或其它 含硫组分而生成H2S,H2S遇铁盐或铅盐生成黑色沉淀(如 FeS)。但氧气含量大时则不产H2S,故使用穿刺培养法,中 间部分可产H2S变黑。
4789.4沙门菌检验资料
检样 25g(mL)样品+225 mLBPW 36 ℃±1 ℃,8 h~18h 1 mL+TTB 10 mL 42 ℃±1 ℃,18 h~24 h BS 36 ℃±1 ℃,40 h~48 h 1 mL+SC10 mL
沙门氏菌检验程序
36 ℃±1 ℃,18 h~24 h XLD(或HE、科玛嘉显色培养基) 36 ℃±1 ℃,18 h~24 h
沙门氏菌属的三糖铁和赖氨酸脱羧酶试验结果
三糖铁琼脂 斜面 底层 产气 硫化氢 赖氨酸脱羧酶试验培养基 初步判断
进口-SS Leabharlann Baidu口-SS
65.3 81.0
国产-SS
进口-HE 国产-HE 进口-XLD 国产-XLD
52.0
83.2 80.0 83.0 86.2
进口-BS
国产-BS CHRO显色 国产-DHL 国产-WS TSA(对照)
106.6
77.7 68.4 98.4 71.6 100.0
国产BS
进口BS
穿刺TSI方法
接种三糖铁琼脂和赖氨酸脱羧酶试验培养 基的同时,可直接接种蛋白胨水 (供做靛 基质试验)、尿素琼脂 (pH7.2)、氰化钾 (KCN) 培养基,也可在初步判断结果后从 营养琼脂平板上挑取可疑菌落接种。于36 ℃±1 ℃培养18 h~24 h, 必要时可延长 至48 h。 将已挑菌落的平板储存于2 ℃~5 ℃或室 温至少保留24 h,以备必要时复查。
2010版沙门氏菌检验
b)多价菌体抗原(O)鉴定
在玻片上划出2 个约 1 cm×2 cm 的区域, 挑取1 环待测菌,各放 1/2 环于玻片上的每一 区域上部,在其中一个区域下部加 1 滴多价菌 体(O)抗血清,在另一区域下部加入1 滴生 理盐水,作为对照。再用无菌的接种环或针分 别将两个区域内的菌落研成乳状液。将玻片倾 斜摇动混合 1 min,并对着黑暗背景进行观察, 任何程度的凝集现象皆为阳性反应。 c)多价鞭毛抗原(H)鉴定 同b)。 d)血清学分型 (选做项目)
范
围
本标准规定了食品中沙门氏菌
(Salmonella )的检验方法。
本标准适用于食品中沙门氏菌
的检验。
设 备 和 材 料
除微生物实验室常规灭菌及培养设备外,其他还有:
★冰箱:2 ℃~5 ℃。 ★恒温培养箱 ★均质器 ★振荡器 ★电子天平:感量0.1g ★无菌锥形瓶:容量 500mL,250 mL ★无菌试管
表4 沙门氏菌属生化反应初步鉴别表
pH7.2 尿素 _ _ + 氰化钾 赖氨酸脱 (KCN ) 羧酶 _ + _ _ + +
判定结果
甲型副伤寒沙门氏菌(要求血 清学鉴定结果) 沙门氏菌Ⅳ或Ⅴ(要求符合本 群生化特性) 沙门氏菌个别变体(要求血清 学鉴定结果)
注:+阳性;-阴性。
返回
Ⅱ 反应序号 A2:补做甘露醇和 山梨醇试验,沙门氏菌靛基 质阳性变体两项试验结果均 为阳性,但需要结合血清学 鉴定结果进行判定。
食品微生物学检验标准汇总
食品微生物学检验标准汇总
食品微生物学检验标准众多,其中有较为通用的也有与具体产品相
关联的。下面是yjbys 小编为大家带来的关于食品微生物学检验标准汇
总的知识,欢迎阅读。
1GB 类
GB 4789.1-2010 食品安全国家标准食品微生物学检验总则
GB 4789.2-2010 食品安全国家标准食品微生物学检验菌落总数测定
GB 4789.3-2010 食品安全国家标准食品微生物学检验大肠菌群计数
GB 4789.4-2010 食品安全国家标准食品微生物学检验沙门氏菌检验
GB 4789.5-2012 食品安全国家标准食品微生物学检验志贺氏菌检验
GB 4789.7-2013 食品安全国家标准食品微生物学检验副溶血性弧菌检验
GB 4789.9-2014 食品安全国家标准食品微生物学检验空肠弯曲菌检验
GB 4789.10-2010 食品安全国家标准食品微生物学检验金黄色葡萄球菌检验
GB 4789.11-2014 食品安全国家标准食品微生物学检验β 型溶血性链球菌检验
GB 4789.13-2012 食品安全国家标准食品微生物学检验产气荚膜梭菌检验
GB 4789.14-2014 食品安全国家标准食品微生物学检验蜡样芽
GB沙门氏菌检验
13
Brilliance Salmonella
肺炎克雷伯菌
Klebsiella pneumoniae ATCC® 11228
弗氏柠檬酸杆菌
Citrobacter freundii NCTC 8581
14
Precis沙门氏菌快速 培养检测法
《GB 4789.4-2010 食品微生物学检验 沙门氏菌检验》-1
Inhibition of cell wall synthesis Specific enzyme hydrolysis
Cell death from lysis
12
Brilliance Salmonella
鼠伤寒沙门氏菌
Salmonella typhimurium ATCC® 140248
大肠埃希氏菌
4-5 天
16
Precis沙门氏菌快速培养检测法
• Day 0 一步增菌:沙门氏菌ONE肉汤,42℃培养18h; • Day 1 平板分离:Brilliance沙门氏菌显色琼脂, 37℃培养24h; • Day 2 确认:沙门氏菌乳胶凝集试剂盒、O.B. I.S 沙门氏菌检测试剂盒、 血清学试剂、生化鉴定试剂盒等(或传统的ISO6579:2002的确认试验)
7
结果观察
• XLD 琼脂 菌落呈粉红色,带或不带 黑色中心,有些菌株可呈现 大的带光泽的黑色中心,或 呈现全部黑色的菌落;有些 菌株为黄色菌落,带或不带 黑色中心。
沙门氏菌检验详细流程
谢谢大家!
精品课件
GB 4789.4-2010 食品安全国家标准 食品微生物学检验 沙门氏菌检验
精品课件
沙门菌概况
沙门菌是1885年由Salmon氏等在猪霍乱流行 时,分离出的猪霍乱沙门菌,由于Salmon氏 对本属细菌的发现贡献卓越,故定名为沙门 菌属。
沙门菌属是肠杆菌科中最重要的病原菌。它 是一群抗原结构、生化特性相似的革兰氏阴 性杆菌。血清型繁多,目前已发现的沙氏菌 有2500多个血清型和变种。我国发现的有250 多个血清型。
其他沙门氏菌均不给专用名,只在亚种数字名后直接 书写抗原式,比如S.Ⅴ 66:z35:-
新的血清型名称的批准必须有巴斯德研究所、德国汉 堡卫生研究所及美国CDC 3个实验室的一致同意。
精品课件
沙门氏菌检验程序
精品课件
前增菌
目的:修复损伤的细菌细胞; 方法:25 g(mL)样品+225 mL BPW的无菌均
质杯中,以8 000 r/min~10 000 r/min均质1 min~2 min,或置于盛有225 mL BPW的无菌均质 袋中,用拍击式均质器拍打1 min~2 min。若样 品为液态, 不需要均质,振荡混匀。 如使用均质袋,可直接 进行培养。于36 ℃±1 ℃ 培养8 h~18h。
精品课件
无菌均质袋
+/-
+/-
-
注:+阳性,-阴性;+(-)多数阳性, 少数阴性;+/-阳性或阴性。
沙门氏菌检验
食品论坛
GB4789.4沙门氏菌的生化检测流
沙门氏菌是一群寄生于人与动物肠道内的革兰氏阴性杆菌,也是常见的食源性肠道致病菌。沙门氏菌污染蛋类、畜禽类、生鲜奶等多数动物食源性食品,也广泛存在于自然环境中,是微生物引起食源性疾病最多的一种致病菌。以下将是在实验中积累的图片,仅供参考。
一、二增菌形态
下图是ATCC14028鼠伤寒沙门在实验过程中二增菌形态
备注:
BPW缓冲蛋白胨水作为前增菌,不含抑制成分,利于沙门的复苏、受损伤细胞复壮。
TTB四硫磺酸钠煌绿增菌液为选择性增菌,可抑制肠道共生菌。其添加剂碘液和煌绿可抑制大肠菌群和其他革兰氏阳性细菌。
SC亚硒酸盐胱氨酸增菌液也为选择性增菌,其中的亚硒酸与蛋白胨中的含硫氨基酸结合,形成亚硒酸和硫的复合物,影响细菌硫代谢,抑制大肠埃希氏、变形杆菌等
二、菌落形态
下图是ATCC14028鼠伤寒沙门在实验过程中的菌落形态
三、生化试验
1.三糖铁琼脂,先划线再穿刺,36℃培养24h,见下图:
2.氧化酶试验:阳性
3.H
2O
2
触酶试验:阳性
4.镜检:革兰氏阴性杆菌
5.API20E 生化鉴定系统
取XLD平板或者沙门显色平板的可疑单独菌落纯化在NA平板上,36℃培养24h,挑取纯化的单独菌落做API20E试验,具体操作按照试剂盒说明书。
备注:
一定要纯化后做API20E ,否则查询系统会出现无意义的生化谱。
沙门显色平板具有选择性,倘若时间紧张,也可从沙门显色平板挑取单菌落做做API20E,效果还可以。
沙门氏菌的检验
沙门氏菌的检验
食品学院14食品质量与安全1班
文敏柳基炜卫杰恒温紫君
5 6 1 2
摘要:本实验采用GB/T4789.4-2010的检测方法测定鸡场中的沙门氏菌。通过本实验学习沙门氏菌的检测方法和技术,了解沙门氏菌的一些生化特性;本实验先用显色培养基找出可疑菌落,再做生化试验找出可疑的典型性的沙门氏菌,再通过血清学试验最终确定是否为沙门氏菌属。
关键词:沙门氏菌接种生化试验血清学鉴定
前言
沙门氏菌病是公共卫生学中具有重要意义的人畜共患病种之一,其病原沙门氏菌属于肠道细菌科。沙门氏菌是一个统称,泛指 2000 多种有紧密连系的细菌,包括引起食物中毒,导致胃肠炎、伤寒和副伤寒的细菌。虽然只有少数人因沙门氏菌而患病,但是,在世界围的细菌性食物中毒事件中,由沙门氏菌引起的占大多数。因此,采用科学、合理的方法检验食品中沙门氏菌,已经成为了人们最关心的问题之一[1]。国标法(GB4789.4-2010)是目前中国规定的食品中沙门氏菌的标准检测方法,也是基层实验室普遍采用的检测方法,它根据沙门氏菌的生长特点和生化特性,采取前增菌、增菌、分离、生化试验和血清学鉴定5个步骤进行[2]。
1材料与方法
1.1实验材料
1.1.1仪器设备
均质器、三角烧瓶、平皿、玻璃棒、接种棒
恒温培养箱:36℃±1℃,42℃±1℃
吸管:1 mL(具 0.01 mL刻度)、10mL(具0.1mL刻度或微量移液器及吸头
电子天平PL602-S,梅特勒-托利多仪器();
手提式不锈钢压力蒸汽灭菌锅SYQ-DSX-280B,申安医疗器械厂
1.1.2试剂药品
食品微生物指标
3
食品沙门氏菌 检验
产酸或产碱
GB 4789.4—2010食品安全国家标 准
食品微生物学检验 沙门氏菌检验
生化实验-血清学鉴 定
菌落直径
血浆凝固 (阳性)
定性检验
金黄色葡萄球菌定性 检验
GB 4789.10— 2010食品安全国
4
食品金黄色葡 萄球菌检验
计数
GB 4789.10— 2010食品安全国 家标准 食品微 生物学检验 金 黄色葡萄球菌检
序号
项目
参数
食品微生物指标检验国家标准
标准
方法
1
食品菌落总数 测定
菌落总数
GB 4789.2—2010食品安全国家标 准
食品微生物学检验 菌落总数测定
培养基培养-平板计 数
2
食品大肠菌群 计数
计数
GB 4789.3—2010食品安全国家标 准
食品微生物学检验 大肠菌群计数
大肠菌群MPN 计数法 大肠菌群平板计数法
菌的鉴定
生化产物特性
培养基培养
17
椰毒假单胞 菌酵米面亚种
检验
培养基产物 特性
GB 4789.29— 2003 椰毒假单 胞菌酵米面亚种
检验
生化产物特性
培养基培养-生化实 验
沙门氏菌、志
GB 4789.31—
18
微生物学检验标准-4789
食品卫生微生物学检验标准-4789
名称
∙12/08GB 4789.9-2014 食品安全国家标准食品微生物学检验空肠弯曲菌检验
∙12/08GB 4789.11-2014 食品安全国家标准食品微生物学检验β型溶血性链球菌检验
∙12/08GB 4789.14-2014 食品安全国家标准食品微生物学检验蜡样芽胞杆菌检验
∙12/13GB 4789.7-2013 食品安全国家标准食品微生物学检验副溶血性弧菌检验
∙12/13GB 4789.26-2013 食品安全国家标准食品微生物学检验商业无菌检验
∙12/13GB 4789.28-2013 食品安全国家标准食品微生物学检验培养基和试剂的质量要求
∙12/13GB 4789.31-2013 食品安全国家标准食品微生物学检验沙门氏菌、志贺氏菌和致泻大肠埃希氏菌的肠杆菌科噬菌体诊断检验
∙12/13GB 4789.39-2013 食品安全国家标准食品微生物学检验粪大肠菌群计数
∙06/12GB 4789.38-2012 食品安全国家标准食品微生物学检验大肠埃希氏菌计数
∙06/12GB 4789.34-2012 食品安全国家标准食品微生物学检验双歧杆菌的鉴定
∙06/12GB 4789.13-2012 食品安全国家标准食品微生物学检验产气荚膜梭菌检验
∙06/12GB 4789.5-2012 食品安全国家标准食品微生物学检验志贺氏菌检验
∙06/11现行有效的4789系列食品微生物学检验标准汇编(2012年7月更新)
∙04/23食品安全国家标准食品微生物学检验标准汇编 GB4789系列(2010版,已根据卫生部2010年5月26日的勘误公告进行更新)
沙门氏菌检测
1.20早在885年沙门氏等在霍乱流行时分离到猪霍乱沙门氏菌,故定名为沙门氏菌属。沙门氏菌属有的专对人类致病,有的只对动物致病,也有对人和动物都致病。沙门氏菌病是指由各种类型沙门氏菌所引起的对人类、家畜以及野生禽兽不同形式的总称。感染沙门氏菌的人或带菌者的粪便污染食品,可使人发生食物中毒。据统计在世界各国的种类细菌性食物中毒中,沙门氏菌引起的食物中毒常列榜首。我国内陆地区也以沙门氏菌为首位。
沙门氏菌检测标准如下:
GB/T28642-2012饲料中沙门氏菌的快速检测方法聚合酶链式反应(PCR)法
GB4789.4-2010食品安全国家标准食品微生物学检验沙门氏菌检验
NY/T550-2002动物和动物产品沙门氏菌检测方法
SN0170-1992出口食品沙门氏菌属包括亚利桑那菌检验方法
SN/T1059.1-2002进出口食品中沙门氏菌滤膜筛选法
SN/T2206.1-2008化妆品微生物检验方法第1部分:沙门氏菌
SN/T2552.5-2010乳及乳制品卫生微生物学检验方法第5部分:沙门氏菌检验10
科标化工以“专心、专业、专注“为宗旨,致力于实现研究和应用的对接,从而推动化工行业的发展。
沙门氏菌的检验
商业生化试剂盒或自动鉴定系统 or 传统生化鉴定
报告结果
AOAC沙门菌检测方法
AOAC Official Method 967.25 Salmonella in Foods Preparation of Culture Media and Reagents AOAC Official Method 967.26 Salmonella in Processed Foods Detection AOAC Official Method 967.27 Salmonella in Foods Identification AOAC Official Method 967.28 Salmonella in Foods Serological Tests
选择性增菌的目的是最大可能的检出沙门氏菌,原则上必须使用两种选择性分离增菌 液,一种是抑制除沙门氏菌以外其肠道菌的生长,一种是在不影响其他肠道菌生长的 情况下促进沙门氏菌的生长。
分离培养基
使用BS、XLD、HE、科玛嘉显色培养基
原国标:BS、DHL(或HE、WS、SS) FDA:BS、XLD、HE AOAC:BS、XLD、HE ISO:phenol red brilliant green琼脂、BS或HE
赖氨酸+
赖氨酸+
赖氨酸+/-
述不符
甘露醇+、山梨醇+
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食品微生物学检验 沙门氏菌检验
GB GB 4789.44789.44789.4-20-20-2010
10北京陆桥技术有限责任北京陆桥技术有限责任公司
公司技术服务电话:010-******** 销售服务电话:010-********
技术部邮箱:luqiaotech@
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北京陆桥技术有限责任公司目 录
�
沙门氏菌简介�
2010版国标主要修订内容�
沙门氏菌的检验步骤及注意事项�
沙门氏菌检验过程中的常见问题
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沙门氏菌简介
�沙门氏菌属
沙门氏菌属:肠杆菌科:肠杆菌科�沙门氏菌能引起胃肠炎、伤寒、败血症等人类疾病,严重时能导致死亡。
�种类繁多,抗原结构复杂,
种类繁多,抗原结构复杂,在在《ANTIGENIC FORMULAE OF THE SALMONELLA SEROVARS FORMULAE OF THE SALMONELLA SEROVARS》
》(2007 9th edition)(2007 9th edition)中已公布了中已公布了2579个血清型个血清型。
。�食物是人类感染沙门氏菌的主要途径。
www. beijinglandbridge .com 北京陆桥技术有限责任公司�形态特征:形态特征:革兰氏阴性革兰氏阴性革兰氏阴性、、两端钝圆短杆菌两端钝圆短杆菌,
,无芽孢无芽孢,,一般无荚膜,除鸡沙门氏菌一般无荚膜,除鸡沙门氏菌和
和雏沙门氏菌外,都有周身鞭毛,运动力强
�培养特性:需氧或兼性厌氧,10℃~42℃都
可生长,最适生长温度为37℃,最适pH 为
6.8~
7.8
�革兰氏阴性、需氧或兼性厌氧无芽孢杆菌
沙门氏菌简介:生物学特征
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�修改了标准的中英文名称
�修改了标准的范围
�修改了培养基和试剂;
�修改了设备和材料;
�修改了附录
修改了附录A A (规范性附录)培养基和试剂2010版国标主要修订内容
www. beijinglandbridge .com 北京陆桥技术有限责任公司——关于培养基和试剂的修订说明
�修改了
修改了HE HE HE琼脂和三糖铁琼脂的配方。琼脂和三糖铁琼脂的配方。�删除了
删除了080808版国标中一些培养基、试剂盒及设备版国标中一些培养基、试剂盒及设备的商品名,如科玛嘉,的商品名,如科玛嘉,VITEK VITEK VITEK等。
等。2010版国标主要修订内容
我们的产品均按
20102010版国标要求的
版国标要求的配方生产
GB 4789.4-2010
检验流程
7
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�称取
称取25g 25g 25g((mL mL)样品于盛有)样品于盛有)样品于盛有225mL BPW 225mL BPW 225mL BPW的无菌均质杯中,以的无菌均质杯中,以80008000~~10000r/min 10000r/min均质均质均质1min 1min 1min~~2min 2min,或置于盛有,或置于盛有,或置于盛有225mLBPW 225mLBPW 225mLBPW的
的无菌均质袋中,用拍击式均质器拍打无菌均质袋中,用拍击式均质器拍打1min 1min 1min~~2min 2min。若样品为
。若样品为液态,不需要均质,振荡混匀即可。
�如需测定如需测定pH pH pH值,用值,用值,用1mol/L 1mol/L 1mol/L无菌无菌无菌NaOH NaOH NaOH或或HCl HCl调调pH pH至至6.86.8±±0.20.2。
。�无菌操作将样品转至无菌操作将样品转至500mL 500mL 500mL锥形瓶中,如使用均质袋,可直接
锥形瓶中,如使用均质袋,可直接培养,培养,363636℃±℃±℃±11℃培养培养8h 8h 8h~~18h 18h。
。检验步骤及注意事项:前增菌
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�任何样品均需进行前增菌。
�缓冲蛋白胨水(
缓冲蛋白胨水(BPW BPW BPW):不含任何抑菌成分,有利于受损):不含任何抑菌成分,有利于受损沙门氏菌的复苏,使受损伤细胞恢复到稳定的生理状态。
�冷冻样品解冻:冷冻样品解冻:454545℃℃以下不超过以下不超过15min 15min 15min,或,或,或22℃-5-5℃
℃不超过18h 18h。
。�建议采用拍击式均质的方式,更为便利,且节省培养空间。
检验步骤及注意事项
:前增菌√
www. beijinglandbridge .com 北京陆桥技术有限责任公司�轻轻摇动培养过的样品混合物,移取轻轻摇动培养过的样品混合物,移取1mL 1mL 1mL,转种于,转种于,转种于10mL
10mL TTB TTB内,于内,于内,于424242℃±℃±℃±11℃培养培养18h 18h 18h~~24h 24h。同时另取。同时另取。同时另取1mL 1mL 1mL转种
转种于10mL SC 10mL SC内,于内,于内,于363636℃±℃±℃±11℃培养培养18h 18h 18h~~24h 24h。
。�TTB
TTB和和SC SC两种选择性增菌肉汤必须同时使用两种选择性增菌肉汤必须同时使用两种选择性增菌肉汤必须同时使用((注意区分增菌培养温度增菌培养温度)。
)。�SC
SC:如果干粉或溶液变红,则不能使用。:如果干粉或溶液变红,则不能使用。:如果干粉或溶液变红,则不能使用。开封后建议用开封后建议用封口膜密封后冷藏保存封口膜密封后冷藏保存,,可延缓变质可延缓变质。
。检验步骤及注意事项:选择性增菌